中药化学实验指导—实验十二 中药化学成分预试验

实验一大黄中游离蒽醌的提取分离与检识（一）目的要求学习羟基蒽醌类化合物的提取分离和检识，通过实验要求：1.掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法。

2.掌握用pH梯度萃取法分离不同酸性的羟基蒽醌类化合物。

3.掌握蒽醌类化合物的主要检识方法。

4.熟悉蒽醌类化合物的色谱检识方法。

5.了解用柱色谱法分离蒽醌类成分。

（二）主要化学成分的结构及性质大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄Rheum tanguticum Maxim. ex Reg.和药用大黄Rheum officinale Baill.的干燥根及根茎。

大黄中含有大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚及其苷，总含量约3％～5％。

1．大黄酸(rhein) 分子式C15H8O6，分子量284.21。

黄色针状结晶（升华法），mp.321～322℃，330℃分解。

能溶于碱水、吡啶，略溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚，几不溶于水。

2．大黄素(emodin) 分子式C15H10O5，分子量270.23。

橙色针状结晶(乙醇)，mp.256～257℃，能升华。

易溶于乙醇、碱水，微溶于乙醚、氯仿，几不溶于水。

3．芦荟大黄素(aloe-emodin) 分子式C16H10O5，分子量270.23。

橙色针状结晶（甲苯），mp.223～224℃。

易溶于热乙醇，可溶于乙醚和苯，并呈黄色；溶于碱液呈红色；氨水及硫酸中呈绯红色。

4．大黄酚(chrysophanol) 分子式C15H10O4，分子量254.23。

橙黄色六方形或单斜结晶（乙醇或苯），mp.196～197℃，能升华。

易溶于沸乙醇，可溶于丙酮、氯仿、苯、乙醚和冰醋酸，极微溶于石油醚、冷乙醇，几不溶于水。

5．大黄素甲醚(physcion) 分子式C 16H 12O 5，分子量284.26。

砖红色单斜针状结晶，mp.203～207℃，溶于苯、氯仿、吡啶及甲苯，微溶于醋酸及醋酸乙酯，不溶于甲醇、乙醇、乙醚和丙酮。

中药化学实验指导书中药教学部重庆邮电学院生物信息学院2005年02月前言中药化学是一门运用现代化学理论和方法研究中药化学成分的学科，近年来发展迅速，逐步渗透到中药鉴定、中药制剂、中药炮制等学科中，在药物的研制、中药资源的开发、药品检验、中药生产过程中有广泛的应用。

另一方面，中药化学是中药的基础研究，是中药现代化工作中十分重要的组成部分。

同时，中药化学是中药专业的专业课程，其基本实验技能的培养是本课程的重要组成部分，通过中药化学实验，培养学生的动手操作能力，为学生在中药鉴定、中药分析、制剂分析等专业课上打下坚实的专业基础。

为此，我们根据本课程教学大纲的要求，组织编写了本实验讲义。

生物信息学院中药学教学部高运玲潘正编著二OO五年二月目录第一节实验注意事项 (01)第二节试剂的使用 (04)第三节实验部分 (06)实验一层析练习 (06)实验二大黄中游离蒽醌的提取、分离与检识 (10)实验三秦皮中七叶苷、七叶内酯的提取、分离和鉴定 (13)实验四芦丁的提取和鉴定 (15)实验五葛根中黄酮类化合物的提取、分离及鉴定 (20)实验六茴香醚的提取分离和检识 (23)实验七三七总皂甙的提取和精制 (25)实验八薯蓣皂甙元的提取分离与鉴定 (27)实验九盐酸小檗碱的提取、精制及检识 (30)实验十掌叶防已碱的提取分离及延胡索乙素的制备 (34)实验十一苦参生物碱的提取、分离与鉴定 (39)实验十二中药化学成分的系统预试验 (43)附录 (53)第一节实验注意事项一、教学目的通过《中药化学》的实验教学，要求学生能够：1、掌握化学实验中常用的煎煮法、渗漉法、回流法、液－液萃取法等中药提取法的操作技术。

2、掌握薄层层析、纸层析的基本操作，熟悉它们在中药化学成分鉴定、提取、分离和检识中的应用。

3、训练常量、半微量成分的分离，精制及检识方法，并了解有关中药成分研究中的文献检索和工具书查阅的基本方法。

4、初步形成方法自我设计中药中主要有效成分提取的能力，培养独立分析问题、解决问题的能力。

系统预试法——应用一些简单的定性试验，对中药中所含各类化学成分作全面检查。

单项预试法——根据需要，有重点的检查某类成分或某药效成分。

方法：试管反应+薄层层析检查中草药主要来源于植物。

植物的化学成分较复杂，有些成分是植物所共有的，如纤维素、蛋白质、油脂、淀粉、糖类、色素等。

有些成分仅是某些植物所特有的，如生物碱类、甙类、挥发油、有机酸、鞣质等。

各类化学成分均具有一定的特性，一般可由药材的外观、色、嗅、味等作为初步检查判断的手段之一。

如药材样品折断后，断面不油点或挤压后有油迹者，多含油脂或挥发油；有粉层的多含淀粉、糖类；嗅之有特殊气味者，大多含有挥发油、香豆精、内酯；有甜奈者多含糖类；味若者大多含生物碱、甙类、苦味质；味酸者含有有机酸；味涩者多含有鞣质等等。

中草药所含化学成分均为多类的混合物，分析时常常互相干扰，不易得到正确结果。

因此需根据中草药所含各种化学成分的溶解度、酸碱度、极性等理化性质，再用各类成分的鉴别反应加以鉴别。

一、预试溶液的制备1、水提取液——糖、多糖、有机酸、皂苷、酚类、鞣质、氨基酸、多肽、蛋白质……2、乙醇提取液——酚类、鞣质、有机酸、香豆素、强心苷、黄酮、蒽醌、甾体……3、5%HCl-乙醇提取液——生物碱4、石油醚提取液——甾体、萜类、脂肪油……（一）鉴别注意事项1．根据各灰成分不同性质，选用适宜的溶剂提取，以保证等成分能被提取出来。

2．检品提取液的浓度应足以达到各该反应的灵敏度。

3．检品提取液的酸碱度（pH）值应不致影响鉴别反应中所需要的pH值。

相差甚大时应事先调节。

4．提取液较深时，常易影响观察鉴别反应的效果，此时可适当稀释，或进一步提纯。

5．鉴别反应时应注意防止多类成分的相互干扰，以免出现假阳性，或颜色不正等情况。

最好在化学鉴别的同时，做空白试验和对照试验（用已知含某类成分的中草药或纯品做阳性对照）。

6．在鉴别试验中，如果某一类成分的几个鉴别反应结果不一致时（即有的呈阳性反应，有的呈阴性）则应进行全面分析。

第三章综合实验项目实验一中药化学成份的系统预试验操作在研究一未知样品时，多采用中药化学成分的系统预实验。

先根据各化学成分的溶解性不同，选用适当的溶剂，极性梯变，顺次将各类溶解性相近的成分提出。

例如：石油醚、汽油、苯可溶解油脂、挥发油、植物甾醇、某些生物碱、亲脂性强的香豆素等亲脂性化合物；乙醚可提取出树脂、内酯、黄酮等化合物；氯仿可提取有利生物碱；丙酮、乙醇、甲醇则可提取出一些生物碱及其盐，有机酸及其盐、苷类、鞣制、无机盐类等化合物。

通过制备预实验的溶液，可减少各成分间的相互影响，提高预试的效果。

一般工作中常根据水能提取极性物质，石油醚可提取非极性物质，醇能提取大多数成分等特点，采用石油醚、95%乙醇和水为溶剂对样品进行分别提取。

预实验的结果仅能作为进一步提取分离有效成分的初步线索。

由于植物中各成分的复杂性和相互干扰，各定性反应常有例外，例如：碘化铋钾试剂，不仅对生物碱发生反应，对碱性氨基，生物胺等同样也发生反应。

生物碱沉淀反应作为预实验阴性结果可做出无生物碱存在的结论，阳性结果实际意义不大，须进一步配合其他反应或配合TLC及PC进行。

因此，决不能只跟据预试结果武断作出某种成分存在与否的结论。

为进一步了解所含成分单体的个数和情况可配合TLC 和PC。

一、实验目的掌握中药成分的预试验方法，总结中药中各主要化学类型成分的理化性质。

二、实验原理根据中药化学成分溶解度不同进行溶剂系统提取分离，达到分类，再利用各种沉淀试剂和显色剂进行预试，并配合TLC及PC，初步判断和了解各部分中可能含有的化学成分。

三、溶剂及试剂95%乙醇150ml，石油醚150ml，1%HCl 30ml，氯仿40ml，氨水适量。

四、实验操作（一）与实验溶液的制备1．水提取液样品粉末10g(过20目筛)10倍量水，室温浸泡过夜过滤（滤取一半量）滤液（检液A）部分浸液及药渣60℃水浴加热10min-1h过滤滤液（检液B）滤渣此滤液供糖、多糖、有机酸、皂苷、苷类、酚类、鞣质、氨基酸、生物碱等项的预试。

中药化学成分预实验实验报告
一、实验目的
通过对中药化学成分的预实验，初步了解中药中所含有的化学成分，为后续的分离和鉴定工作提供依据。

二、实验材料
1. 中药样品（例如：丹参、黄连、甘草等）
2. 实验试剂：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、甲醇、氯仿等
3. 实验仪器：索氏提取器、薄层色谱板、紫外灯、试管、滴管等
三、实验步骤与观察
1. 索氏提取法：采用索氏提取器，以乙醇作为溶剂，提取中药样品中的脂溶性成分。

观察提取液的颜色和质地，记录提取液中可能存在的成分。

2. 溶剂萃取法：将中药样品分别用石油醚、乙酸乙酯、氯仿进行萃取，观察不同溶剂萃取后得到的萃取液的颜色和质地，初步判断各萃取液中所含有的化学成分。

3. 薄层色谱法：将中药样品进行薄层色谱分离，在紫外灯下观察斑点的颜色和位置，初步确定样品中可能存在的化合物。

四、实验结果与讨论
根据实验观察和记录，初步确定中药样品中可能含有的化学成分。

例如，丹参可能含有丹参酮类化合物，黄连可能含有小檗碱类化合物，甘草可能含有甘草甜素等。

讨论这些成分的生理活性及其在中药中的作用。

五、实验结论
通过本次预实验，初步了解了中药中所含有的化学成分，为后续的分离和鉴定工作提供了依据。

在实验过程中，应进一步优化实验条件和方法，提高分离和鉴定的准确性和可靠性。

中药化学成分预试验大全系统预试法——应用一些简单的定性试验，对中药中所含各类化学成分作全面检查。

单项预试法——根据需要，有重点的检查某类成分或某药效成分。

方法：试管反应+薄层层析检查中草药主要来源于植物。

植物的化学成分较复杂，有些成分是植物所共有的，如纤维素、蛋白质、油脂、淀粉、糖类、色素等。

有些成分仅是某些植物所特有的，如生物碱类、甙类、挥发油、有机酸、鞣质等。

各类化学成分均具有一定的特性，一般可由药材的外观、色、嗅、味等作为初步检查判断的手段之一。

如药材样品折断后，断面不油点或挤压后有油迹者，多含油脂或挥发油；有粉层的多含淀粉、糖类；嗅之有特殊气味者，大多含有挥发油、香豆精、内酯；有甜奈者多含糖类；味若者大多含生物碱、甙类、苦味质；味酸者含有有机酸；味涩者多含有鞣质等等。

中草药所含化学成分均为多类的混合物，分析时常常互相干扰，不易得到正确结果。

因此需根据中草药所含各种化学成分的溶解度、酸碱度、极性等理化性质，再用各类成分的鉴别反应加以鉴别。

一、预试溶液的制备1、水提取液——糖、多糖、有机酸、皂苷、酚类、鞣质、氨基酸、多肽、蛋白质……2、乙醇提取液——酚类、鞣质、有机酸、香豆素、强心苷、黄酮、蒽醌、甾体……3、5%HCl-乙醇提取液——生物碱4、石油醚提取液——甾体、萜类、脂肪油……（一）鉴别注意事项1．根据各灰成分不同性质，选用适宜的溶剂提取，以保证等成分能被提取出来。

2．检品提取液的浓度应足以达到各该反应的灵敏度。

3．检品提取液的酸碱度（pH）值应不致影响鉴别反应中所需要的pH值。

相差甚大时应事先调节。

4．提取液较深时，常易影响观察鉴别反应的效果，此时可适当稀释，或进一步提纯。

5．鉴别反应时应注意防止多类成分的相互干扰，以免出现假阳性，或颜色不正等情况。

最好在化学鉴别的同时，做空白试验和对照试验（用已知含某类成分的中草药或纯品做阳性对照）。

6．在鉴别试验中，如果某一类成分的几个鉴别反应结果不一致时（即有的呈阳性反应，有的呈阴性）则应进行全面分析。

中药化学成分的预试验系统预试法——应用一些简单的定性试验，对中药中所含各类化学成分作全面检查。

单项预试法——根据需要，有重点的检查某类成分或某药效成分。

方法：试管反应+薄层层析检查中草药主要来源于植物。

植物的化学成分较复杂，有些成分是植物所共有的，如纤维素、蛋白质、油脂、淀粉、糖类、色素等。

有些成分仅是某些植物所特有的，如生物碱类、甙类、挥发油、有机酸、鞣质等。

各类化学成分均具有一定的特性，一般可由药材的外观、色、嗅、味等作为初步检查判断的手段之一。

如药材样品折断后，断面不油点或挤压后有油迹者，多含油脂或挥发油；有粉层的多含淀粉、糖类；嗅之有特殊气味者，大多含有挥发油、香豆精、内酯；有甜奈者多含糖类；味苦者大多含生物碱、甙类、苦味质；味酸者含有有机酸；味涩者多含有鞣质等等。

中草药所含化学成分均为多类的混合物，分析时常常互相干扰，不易得到正确结果。

因此需根据中草药所含各种化学成分的溶解度、酸碱度、极性等理化性质，再用各类成分的鉴别反应加以鉴别。

一、预试溶液的制备1、水提取液——糖、多糖、有机酸、皂苷、酚类、鞣质、氨基酸、多肽、蛋白质……2、乙醇提取液——酚类、鞣质、有机酸、香豆素、强心苷、黄酮、蒽醌、甾体……3、5%HCl-乙醇提取液——生物碱4、石油醚提取液——甾体、萜类、脂肪油……（一）鉴别注意事项1．根据各灰成分不同性质，选用适宜的溶剂提取，以保证等成分能被提取出来。

2．检品提取液的浓度应足以达到各该反应的灵敏度。

3．检品提取液的酸碱度（pH）值应不致影响鉴别反应中所需要的pH值。

相差甚大时应事先调节。

4．提取液较深时，常易影响观察鉴别反应的效果，此时可适当稀释，或进一步提纯。

5．鉴别反应时应注意防止多类成分的相互干扰，以免出现假阳性，或颜色不正等情况。

最好在化学鉴别的同时，做空白试验和对照试验（用已知含某类成分的中草药或纯品做阳性对照）。

6．在鉴别试验中，如果某一类成分的几个鉴别反应结果不一致时（即有的呈阳性反应，有的呈阴性）则应进行全面分析。

中药化学试验技术1第一章绪论第一节中药化学研究成果及应用第二节中药化学成分的预试验系统预试法——应用一些简单的定性试验，对中药中所含各类化学成分作全面检查。

单项预试法——根据需要，有重点的检查某类成分或某药效成分。

方法：试管反应+薄层层析检查一、预试溶液的制备1、水提取液——糖、多糖、有机酸、皂苷、酚类、鞣质、氨基酸、多肽、蛋白质……2、乙醇提取液——酚类、鞣质、有机酸、香豆素、强心苷、黄酮、蒽醌、甾体……3、5%HCl-乙醇提取液——生物碱4、石油醚提取液——甾体、萜类、脂肪油……二、各类成分的检查1、生物碱（1）沉淀反应——碘化汞钾试剂→白色或浅黄色沉淀碘化铋钾试剂→橘红色沉淀碘—碘化钾试剂→浅棕或暗棕色沉淀硅钨酸试剂→浅黄或黄棕色沉淀磷钨酸试剂→浅黄色沉淀磷钼酸试剂→白色或淡黄色沉淀苦味酸试剂→黄色结晶或非结晶形沉淀鞣酸试剂→棕黄色沉淀氯化金试剂→黄色结晶氯化铂试剂→白色结晶雷氏铵盐→红色无定形沉淀（2）薄层层析检查：吸附剂——碱性氧化铝（Ⅲ级，干法铺板）硅胶G（稀碱湿法铺板）展开剂——氯仿：甲醇显色——UV；碘化铋钾2、氨基酸、多肽、蛋白质（1）加热沉淀试验：加热煮沸→混浊或沉淀（蛋白质）+5%H2SO4（不加热）→混浊或沉淀（2）双缩脲反应：+40%NaOH，1%CuSO4→紫色、红色或紫红色（多肽、蛋白质）（3）茚三酮反应：+0.2%茚三酮试液→蓝或蓝紫色（氨基酸、多肽、蛋白质）（4）吲哚醌反应：+吲哚醌试液→各种颜色（氨基酸）（5）Millon反应：+Hg，H2NO2→红色（蛋白质分子中有酪氨酸组成）（6）Hopkins-Cole反应：+乙醛酸，浓硫酸→各色（蛋白质分子中有色氨酸组成）（7）氨基酸的薄层层析检查：吸附剂——硅胶G展开剂—— n-BuOH，n-BuOH：HAc：H2O显色剂——0.25%茚三酮试液→紫红色斑点3、有机酸（1）PH试纸检查（2）溴酚兰试液：喷洒→蓝色背景黄色斑点（3）薄层层析检查：吸附剂——硅胶G或酸性氧化铝展开剂—— C6H6：EtOH显色剂——0.1%溴酚兰试液→黄色4、酚类和鞣质（1）FeCl3试剂：+1%FeCl3试液→蓝、暗绿或蓝紫色（2）三氯化铁-铁氰化钾试剂：喷洒→蓝色斑点（3）香草醛-盐酸试剂：喷洒→红色（间苯二酚、间苯三酚）（4）重氮盐试剂：+对硝基苯胺、亚硝酸钠→红色（5）薄层层析检查：吸附剂——硅胶G或纤维素展开剂—— n-BuOH：HAc：H2O；15%HAc显色剂——1% FeCl3试液1%三氯化铁-1%铁氰化钾试液→蓝、绿或黑色鞣质与酚类的区别：+明胶——沉淀上清液 +1%FeCl3试液→蓝、暗绿或蓝紫色5、糖和苷（1）斐林试剂：+硫酸铜、酒石酸钾钠——砖红色沉淀（还原糖）（—）+1%HCl +NaOH 沉淀（苷元）△30min 上清液（+）（多糖、苷）（2）Molish反应：+α-萘酚-浓硫酸→紫红色环（3）银镜反应：+0.1N硝酸银、5N氨水→银褐色（还原糖）（4）薄层层析检查：：吸附剂——硅胶G或纤维素展开剂—— n-BuOH：Pd：H2O；15%HAc显色剂——苯胺-邻苯二甲酸6、皂苷（1）泡末试验：振摇→大量持续性泡末+0.1M HCl 二管泡末高度相同（三萜皂苷）+0.1M NaOH 碱管高于酸管（甾体皂苷）（2）溶血试验：+2%红血球悬浮液→溶血（3）Lieberman—Burchard反应：+醋酐-浓硫酸——紫红色（三萜皂苷）黄-红-紫-污绿（甾体皂苷）7、甾体（1）Lieberman—Burchard反应：+醋酐-浓硫酸→黄-红-紫-污绿（2）氯仿-浓硫酸反应：+氯仿-浓硫酸氯仿层→红或青色硫酸层→绿色荧光（3）五氯化锑或三氯化锑反应：+SbCl3或SbCl5→红色（4）薄层层析检查：吸附剂——中性氧化铝或硅胶G展开剂—— C6H6-MeOH；CHCl3-MeOH显色剂—— 10%磷钼酸→蓝-蓝紫色5%三氯化锑试液→红、棕红或绿色8、黄酮（1）盐酸-镁粉反应：+HCl-Mg →红色（2）三氯化铝反应：+AlCl3→黄色（3）浓氨水反应：+NH3→亮黄或橙色（4）薄层层析检查：吸附剂——聚酰胺或硅胶G展开剂—— MeOH-H2O；EtOH-H2O显色剂—— UV→亮黄或黄绿色荧光1%三氯化铝试液→亮黄色9、香豆素、内酯（1）开闭环反应：+1%NaOH→澄清 +2%HCl→混浊（2）异羟污酸铁反应：+7%盐酸羟胺、10%KOH △ +稀HCl、1%FeCl3→红色（3）重氮盐试剂：+对硝基苯胺、亚硝酸钠→红色（4）薄层层析检查：吸附剂——酸性硅胶G或硅胶G 或酸性氧化铝展开剂——甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5：4：1）显色剂—— UV→蓝色荧光异羟污酸铁试液→红色10、强心苷（1）Kedde试剂：+3，5-二硝基苯甲酸试液→紫红色（2）Baljet试剂：+碱性苦味酸试液→橙或橙红色（3）Legal试剂：+亚硝酰铁氰化钠试液→紫红色（4）K-K反应：+FeCl3/冰HAc、浓H2SO4→上层绿~蓝色（2-去氧糖）界面红棕色（5）薄层层析检查：吸附剂——硅胶G 或中性氧化铝展开剂—— n-BuOH：HAc：H2O（4：1：5）显色剂——碱性3，5-二硝基苯甲酸试液→紫红色碱性苦味酸试液→橙红色11、蒽醌（1）碱液反应：+10%NaOH →红色 +H2O2→红色不褪 +H+→红色褪去（2）醋酸镁反应：+1%MgAc2→红色（3）薄层层析检查：吸附剂——硅胶G展开剂——Pet：EtOAc显色剂—— UV→黄色荧光5%NaOH →红色12、挥发油、油脂（1）油斑检查：油斑挥发→挥发油；油斑不消失→油脂或类脂（2）磷钼酸反应：喷洒5%磷钼酸试液→蓝色（油脂、三萜、甾醇）第二章化合物结构与溶解性中药中的化学成分十分复杂，一味中药中有少则几十种，多则几百种成分。

中药化学成分的系统预试验中药中所含的化学成分比较复杂，在研究某中药的化学成分之前，一般应先进行预试验，初步了解其中可能含有哪些类型的成份，以便对提取、分离工作提供有益的参考，预试验一般可分为两大类：一类是单项预试验，即可根据需要，重点检查某类化学成分的存在与否；另一类是系统预试验，即选用定性试验及薄层层析等方法，对中药中各类化学成分进行比较全面的检查，然后进行综合分析，初步判断有或无那些成分存在。

预试验的结果一般只能作为参考，这是由于有些定性试验不是某类化学成分的特效、专一反应，同时在进行试验时，几种化学成分之间会发生相互干扰，使反应结果呈假阳性，故常须对某些类型化学成分进一步做层析法（TLC或PC）检查，才能进一步作出较恰当的判断。

一、实验目的1、学习中药化学成分的系统预试验原理及方法。

2、掌握中药化学成分的系统预试验程序及结果判断。

二、实验原理根据中药中所含各类化学成分在不同极性的溶剂中溶解度不同。

先选用不同极性的溶剂把溶解度相近的成分提取出来，分成极性不同的几个部分，即供试液；然后再选用各类成分的定性反应（包括沉淀反应和显色反应等）及层析法（TLC、PC等）检查，最后进行分析判断，初步确定有无哪几类化学成分。

三、实验内容（一）预试验溶液的制备1、水提取液(1) 冷水浸液：称取样品粗粉5g，置于l00ml的三角烧瓶中，加蒸馏水50-60ml室温浸泡过夜。

过滤出约20ml滤液供检查氨基酸、多肽、蛋白质用。

(2) 热水提取液：将上述剩余的冷水浸泡液连同滤渣于水浴上60℃左右热浸半小时，趁热过滤，滤液供检查糖、多糖、有机酸、皂甙、甙类、酚类、鞣质等成分用。

2、乙醇提取液另称取样品粗粉10g，置于250ml圆底烧瓶中，加95%乙醇100ml，于水浴上加热回流一小时，稍冷后加入蒸馏水使其含醇量为70%，冷至室温，过滤，滤液转移至分液漏斗中；用100ml 石油醚（60-90℃）分两次萃取，每次用石油醚50m1，以除去叶绿素等，分出下层乙醇提取液，浓缩至40-50ml，加95%乙醇50ml溶解后过滤，滤液供检查黄酮、蒽醌、香豆素、萜类、甾体化合物、内酯化合物、强心甙、有机酸、酚类、鞣质等成分用。

中药化学成分的预试验大全系统预试法——应用一些简单的定性试验,对中药中所含各类化学成分作全面检查.单项预试法——根据需要,有重点的检查某类成分或某药效成分.方法：试管反应+薄层层析检查中草药主要来源于植物.植物的化学成分较复杂,有些成分是植物所共有的,如纤维素、蛋白质、油脂、淀粉、糖类、色素等.有些成分仅是某些植物所特有的,如生物碱类、甙类、挥发油、有机酸、鞣质等.各类化学成分均具有一定的特性,一般可由药材的外观、色、嗅、味等作为初步检查判断的手段之一.如药材样品折断后,断面不油点或挤压后有油迹者,多含油脂或挥发油；有粉层的多含淀粉、糖类；嗅之有特殊气味者,大多含有挥发油、香豆精、内酯；有甜奈者多含糖类；味若者大多含生物碱、甙类、苦味质；味酸者含有有机酸；味涩者多含有鞣质等等.中草药所含化学成分均为多类的混合物,分析时常常互相干扰,不易得到正确结果.因此需根据中草药所含各种化学成分的溶解度、酸碱度、极性等理化性质,再用各类成分的鉴别反应加以鉴别.一、预试溶液的制备1、水提取液——糖、多糖、有机酸、皂苷、酚类、鞣质、氨基酸、多肽、蛋白质……2、乙醇提取液——酚类、鞣质、有机酸、香豆素、强心苷、黄酮、蒽醌、甾体……3、 5%HCl-乙醇提取液——生物碱4、石油醚提取液——甾体、萜类、脂肪油……一鉴别注意事项1．根据各灰成分不同性质,选用适宜的溶剂提取,以保证等成分能被提取出来. 2．检品提取液的浓度应足以达到各该反应的灵敏度.3．检品提取液的酸碱度pH值应不致影响鉴别反应中所需要的pH值.相差甚大时应事先调节.4．提取液较深时,常易影响观察鉴别反应的效果,此时可适当稀释,或进一步提纯.5．鉴别反应时应注意防止多类成分的相互干扰,以免出现假阳性,或颜色不正等情况.最好在化学鉴别的同时,做空白试验和对照试验用已知含某类成分的中草药或纯品做阳性对照.6．在鉴别试验中,如果某一类成分的几个鉴别反应结果不一致时即有的呈阳性反应,有的呈阴性则应进行全面分析.首先应注意呈阳性反应的试验是否属于该类成分的专一反应,否则应检查其他类成分能否产生该反应,从多方面加以判断.但也应注意,某些反应只能对某一类成分中的某个化学基团呈性反应,如检查黄酮类的盐酸――镁粉试验,它只对黄酮类中的羟基黄酮类黄酮醇类反应明显,其余类的黄酮类则不甚明显,但也不能轻易否定不是黄酮类,为了避免孤立和片面的下结论,一定要全面考虑综合分析.中草药化学成分一般鉴别试验屯只是一个初步判断,最后确证尚需进一步提纯,以鉴定后才能予以肯定.二鉴别方法1、氨基酸、多肽、蛋白质1加热沉淀试验：加热煮沸→混浊或沉淀蛋白质+5%H2SO4不加热→混浊或沉淀2双缩脲反应：+40%NaOH,1%CuSO4 →紫色、红色或紫红色多肽、蛋白质3茚三酮反应：+0.2%茚三酮试液→蓝或蓝紫色氨基酸、多肽、蛋白质4吲哚醌反应：+吲哚醌试液→各种颜色氨基酸5Millon反应：+Hg,H2NO2 →红色蛋白质分子中有酪氨酸组成6Hopkins-Cole反应：+乙醛酸,浓硫酸→各色蛋白质分子中有色氨酸组成7氨基酸的薄层层析检查：吸附剂——硅胶G展开剂—— n-BuOH,n-BuOH：HAc：H2O显色剂——0.25%茚三酮试液→紫红色斑点1加热或矿酸试验：取检品的水溶液1ml于试管中,加热至沸或加5％盐酸,如发生混浊或有沉淀示含有水溶性蛋白质.2缩二脲试验：取检品的水溶液1ml,加10％氧化钠溶液2滴,充分摇匀,逐渐加入硫酸铜试液,随加摇匀,注意观察,如呈现紫色或紫红色示可能含有蛋白质和氨基酸.凡蛋白质结构中含有两个或两个以上肽键－CONH－者均有此反应,能在碱性溶液中与Cu2+生成仙络合物,呈现一系列的颜色反应,二肽呈蓝色,三肽呈紫色,加肽以上呈红色,肽键越多颜色越红.3茚三酮试验,取检品的水溶液1ml,加入茚三酮试液2－3滴,加热煮沸4－5分钟,待其冷却,呈现红色棕色或蓝紫色蛋白质、胨类、肽类及氨基酸.氨基酸与茚三酮的水合作物作用,氨其酸氧化成醛、氨和二氧化碳,而茚三酮被还原成仲醇,与所后成的氨及另一分子茚三酮缩合生成有蓝紫色的化合物.注①茚三酮试剂主要是多肽和氨基酸的显色剂,反应在1小时内稳定.试剂溶液pH值以5－7为宜,必要时可加吡啶数滴或醋酸钠调整. ②此反应非常灵敏,但有个别氨基酸不能呈紫色,而呈黄色,如脯氨酸.4氨基酸薄层层析检出反应：①吸附剂：硅胶G.②展开剂：1正丁醇：水1：12正丁醇：醋酸：水4：1：5③显色剂：0.5％茚三酮丙酮溶液,喷雾后于1100烘箱放置5分钟,显蓝紫允或紫色.2、皂苷1泡末试验：振摇→大量持续性泡末+0.1M HCl 二管泡末高度相同三萜皂苷+0.1M NaOH 碱管高于酸管甾体皂苷2溶血试验：+2%红血球悬浮液→溶血3Lieberman—Burchard反应：+醋酐-浓硫酸——紫红色三萜皂苷黄-红-紫-污绿甾体皂苷1泡沫试验：取检品的水溶液2ml于带塞试管中,用力振摇3分钟,即产生持久性蜂窝状泡沫维持10分钟以上,且泡沫量不少于液体体积的1／3.注常用的增溶剂吐温、司盘,振摇时均能产生持久性泡沫,要注意区别.2溶血试验：取试管4支,分别加入滤液0.25、0.5、0.75 ml,然后依次分别加入生理盐水2.25、2.0、1.75、1.5 ml,使每一个试管中的溶液都成为2.5ml, 再将各试管加入2％的血细胞悬液2.5ml,振摇均匀后,同置于370水浴或25－270的室温中注意观察溶血情况,一般观察3小时即可,或先滴红细胞于显微镜下,然后滴加检液看血细胞是否消失.如有溶血现象示正反应.注①鞣质对血红细胞有凝集作用,干扰溶血试验的观察,应事先除去可用取胜酰胺粉吸附或用明胶沉淀. ②检液应为中性溶液.3醋酐浓硫酸试验Liebrmann Burchard反应取检品的水溶液置蒸发皿中,于水浴上蒸干,残渣加入少量冰醋酸使溶解,再加入醋酐浓硫酸19：1试液,呈现红紫色并变成污色绿色甾类、三萜类成分或皂甙4区别甾体皂甙和三萜皂甙：取带塞试管两支,各盛检品的水溶解1 ml,1支加0.1N盐酸溶液2ml,另一支加0.1N氢氧化钠溶液2ml用力振摇1分钟需左右手交替振摇各半分钟,观察两管泡沫的多少,若两管泡沫体积相同或酸管多,示含三萜式皂甙；若加碱管泡沫多于加酸管示含甾示含甾体皂甙.三萜皂甙为酸性皂甙在酸性水溶液中形成较稳定的泡沫；甾体皂甙为中性皂甙在碱笥溶液中能形成较稳定的泡沫.浓硫酸、高氯酸、高氯酸-香草醛、浓硫酸-香草醛等的显色原理主要是使羧基脱水,增加双键结构,再经双键位移,双分子缩合等反应生成共轭双键系统,又在酸作用下形成阳碳离子盐而显色.3、糖和苷1斐林试剂：+硫酸铜、酒石酸钾钠——砖红色沉淀还原糖—+1%HCl +NaOH 沉淀苷元△30min 上清液+多糖、苷2Molish反应：+α-萘酚-浓硫酸→紫红色环3银镜反应：+0.1N硝酸银、5N氨水→银褐色还原糖4薄层层析检查：：吸附剂——硅胶G或纤维素展开剂—— n-BuOH：Pd：H2O；15%HAc显色剂——苯胺-邻苯二甲酸1碱性酒石酸铜试液：取检品的水溶液1－2ml如为醇溶液须将醇蒸发除去,加入碱笥酒石酸铜试液1ml,于沸水浴上加热5分钟,产生棕红色或砖红色氧化亚铜沉淀,示有还原糖.还原糖能使二价铜盐蓝色还原成氧化亚铜,醛糖的醛基氧化成羧基：注①如检液呈酸性,应先碱化. ②此反应所产生的沉淀由于条件不同,其颜色也不同,质点上的呈黄色,质点大的呈红色.有保持性胶体存在时,也常产生黄色沉淀. ③职样品中含有其他醛、酮及还原较强的其他成分,或中划药制剂中附加的抗氧剂、；葡萄糖等均可显阳性反应.2α萘酚试验Molisch紫环反应：取检品的水溶液1ml,加5％萘酚试液数滴振摇后,沿管壁滴入5－6滴浓硫酸,使成两液层,待2－3分钟后,两层液面出现紫红色环糖、多糖或甙类.多糖类遇浓硫酸被水解成单糖,单糖被浓硫酸脱水闭环,形成糠醛类化合物,在浓硫酸存在下与α萘酚发生酚醛缩合反应,生成紫红色缩合物.注①甙的分子结构中含有糖基,一般属于单糖类,如葡萄糖,鼠李糖、半乳糖,但也有含二分子糖双糖或多分子糖多糖.在上述反应条件下,甙被水解成单糖,因此甙萘酚试验,系分子中糖部分的反应. ②由于此反应较为灵敏,如有微量滤纸纤维或中草药粉末存在于溶液中,都能产生上述反应.故滤过时应加注意.3多糖的确证试验：取检品的水溶液5ml于水蒸发至干,加入1ml蒸馏水,再加入乙醇5ml,如出现沉淀,滤过收集后用少量热乙醇洗涤,再将沉淀物溶于3ml蒸馏水中,做下例试验.①碘试验：取检品的不溶液1ml,加碘试液1滴,观察颜色变化,如呈蓝黑色为地衣糖；紫黑色为糊精；蓝色加热消失,冷后蓝色再现为淀粉.②多糖水解：取检品的水溶液1ml,加入稀盐酸5滴,置沸水浴中加热10－15分钟,然后用10％氢氧化钠液中和至中性,再加新配制的碱性酒石酸铜试淮4滴,另取检液1ml,不加酸水解直接加入上述试液4滴,两管同置水浴上煮沸5－6分钟.如果水解后生成棕红色常常物的量比未经水解的多,则示有多糖.多糖水解后产生单糖,利用单糖的还原性,使铜离子还原成氧化亚铜.4、酚类和鞣质1FeCl3试剂：+1%FeCl3试液→蓝、暗绿或蓝紫色2三氯化铁-铁氰化钾试剂：喷洒→蓝色斑点3香草醛-盐酸试剂：喷洒→红色间苯二酚、间苯三酚4重氮盐试剂：+对硝基苯胺、亚硝酸钠→红色5薄层层析检查：吸附剂——硅胶G或纤维素展开剂—— n-BuOH：HAc：H2O；15%HAc显色剂——1% FeCl3试液1%三氯化铁-1%铁氰化钾试液→蓝、绿或黑色鞣质与酚类的区别：+明胶——沉淀上清液 +1%FeCl3试液→蓝、暗绿或蓝紫色1三氯化铁试验：取检品的水溶液1ml,加三氯化铁试液1－2滴,呈现绿色、污绿色、蓝黑色或暗紫色可水解鞣质显蓝一蓝黑色,缩合鞣显绿色一污绿色.鞣质均是多羟基酚的衍生物,即多元酚,能和三价铁离子发生颜色反应生成复杂的络盐.注此反应如遇有矿酸或有机酸、醋酸盐等存在,能阻碍颜色的生成.硝基酚类对三氯化铁试剂无明显反应.2明胶试验：取检品的水溶液1ml,加氯化钠明溶液2－3滴,即生成白色沉淀物. 鞣质有凝固蛋白的性能.3溴试验：取检品的水溶液1ml,加溴试液1－2滴,生成白色或沉淀物,示可能含有酚或儿茶酚鞣质.注过多的溴会阻碍鞣质的沉淀,因此溴水不宜多加.4香草醛一酸试验：取检品的水溶液点于滤纸片上,干后,喷雾或滴加香草醛一盐酸试液,呈现红色斑点多元酚类物质.5鞣质、酚类薄层层析检出反应：①吸附剂：聚酰胺；硅胶；硅胶；石膏：水5：1：7调成状,涂成薄板,1050烘干45分钟.②展开剂：乙醇：醋酸100：2；正丁醇：乙酸乙酯：水5：4：1；苯：甲醇95：5.③显色剂：10％三氯化铁溶液；1％三氯化铁乙醇溶液与1％铁氰化钾水溶液1：1显蓝一紫色斑点.5．黄酮及其甙类1盐酸-镁粉反应：+HCl-Mg →红色2三氯化铝反应：+AlCl3 →黄色3浓氨水反应：+NH3 →亮黄或橙色4薄层层析检查：吸附剂——聚酰胺或硅胶G1盐酸一镁或锌粉试验：取检品的乙醇溶液1ml,加放少量镁粉或锌粉,然后加浓盐酸4－5滴,置沸水浴中加热2－3分钟,如出现红色示有游离黄酮类或黄酮甙以同法不加镁或粉做一对照,如两管都显红色则有花色素存在.如继续加碳酸试液使成碱笥即变成紫色双转变为蓝色,即证明含花色素.黄酮类的乙醇溶液,在盐酸存在的情况下,能被镁粉还原,生成花色甙元而呈现红色或紫色反应个别为淡黄色、橙色、紫色或蓝色.这是由于酮类化合物分子中含有一个碱性氧原子,致能溶于稀酸中被还原成带四价的氧原子即锌盐.本法是鉴别黄酮类的一个反应.但花色素本身在酸性下不需加镁粉呈红色,应加以区别.注①此反庆仅在化学结构中,第三位上带羟基的酮醇类显色较明显,而其它黄酮烷酮类均不甚明显.因此试验呈阴性反庆是不能做出否定的结论,尚需结合其他实验再做结论. ②试验应在醇中进行,水分多会影响颜色的生成.此反庆较慢,有时需置水浴上加热,以促使反应的进行.2荧光试验：①三氯化铝试验：取检品的乙醇溶液点于滤纸片上干后再点1次,使其浓度庥中,干后,喷雾1％三氯化铝乙醇试液,在紫外光灯下观察,呈现黄色、绿色、橙色等荧光为黄酮类；呈现天蓝色或黄绿色；荧光,则为二氢黄酮类.这是区别二氢黄酮类化合物的一种鉴别反应.②硼酸丙酮枸橼酸丙酮试验：取检品的乙醇溶液1ml,在沸水浴上蒸干加入饱和硼酸丙酮溶液及10％枸橼酸丙酮溶液各0.5ml,蒸去丙酮后,在紫外光灯下观察,管内呈现强烈的绿色荧光黄酮或其甙类.3碱液试验：取检品的乙醇溶液点于滤纸片上干后,再点一次,使其溶液集中,干后,喷1％碳酸钠溶液或在氨蒸气中熏几分钟,呈现亮黄、绿或橙黄色.如将氨气熏过的滤纸露置空气中,颜色逐渐裉去而变为原有的颜色黄酮或其甙类.6、生物碱1沉淀反应——碘化汞钾试剂→白色或浅黄色沉淀碘化铋钾试剂→橘红色沉淀碘—碘化钾试剂→浅棕或暗棕色沉淀硅钨酸试剂→浅黄或黄棕色沉淀磷钨酸试剂→浅黄色沉淀磷钼酸试剂→白色或淡黄色沉淀苦味酸试剂→黄色结晶或非结晶形沉淀鞣酸试剂→棕黄色沉淀氯化金试剂→黄色结晶氯化铂试剂→白色结晶雷氏铵盐→红色无定形沉淀2薄层层析检查：吸附剂——碱性氧化铝Ⅲ级,干法铺板硅胶G稀碱湿法铺板展开剂——氯仿：甲醇显色——UV；碘化铋钾7、有机酸1PH试纸检查2溴酚兰试液：喷洒→蓝色背景黄色斑点3薄层层析检查：吸附剂——硅胶G或酸性氧化铝展开剂—— C6H6：EtOH显色剂——0.1%溴酚兰试液→黄色8、甾体1Lieberman—Burchard反应：+醋酐-浓硫酸→黄-红-紫-污绿2氯仿-浓硫酸反应：+氯仿-浓硫酸氯仿层→红或青色硫酸层→绿色荧光3五氯化锑或三氯化锑反应：+SbCl3或SbCl5 →红色4薄层层析检查：吸附剂——中性氧化铝或硅胶G展开剂—— C6H6-MeOH；CHCl3-MeOH显色剂—— 10%磷钼酸→蓝-蓝紫色5%三氯化锑试液→红、棕红或绿色9、香豆素、内酯1开闭环反应：+1%NaOH→澄清+2%HCl→混浊2异羟污酸铁反应：+7%盐酸羟胺、10%KOH △ +稀HCl、1%FeCl3 →红色3重氮盐试剂：+对硝基苯胺、亚硝酸钠→红色4薄层层析检查：吸附剂——酸性硅胶G或硅胶G 或酸性氧化铝展开剂——甲苯-乙酸乙酯-甲酸5：4：1显色剂——UV→蓝色荧光异羟污酸铁试液→红色10、强心苷1Kedde试剂：+3,5-二硝基苯甲酸试液→紫红色2Baljet试剂：+碱性苦味酸试液→橙或橙红色3Legal试剂：+亚硝酰铁氰化钠试液→紫红色4K-K反应：+FeCl3/冰HAc、浓H2SO4→ 上层绿~蓝色 2-去氧糖界面红棕色5薄层层析检查：吸附剂——硅胶G 或中性氧化铝展开剂—— n-BuOH：HAc：H2O4：1：5显色剂——碱性3,5-二硝基苯甲酸试液→紫红色碱性苦味酸试液→橙红色11、蒽醌1碱液反应：+10%NaOH →红色+H2O2 →红色不褪+H+ →红色褪去2醋酸镁反应：+1%MgAc2 →红色3薄层层析检查：吸附剂——硅胶G展开剂——Pet：EtOAc显色剂——UV→黄色荧光5%NaOH →红色12、挥发油、油脂1油斑检查：油斑挥发→挥发油；油斑不消失→油脂或类脂2磷钼酸反应：喷洒5%磷钼酸试液→蓝色油脂、三萜、甾醇最后重点提醒：以上各试剂的配制方法最好参照药典来配制,原因一是上面写得很详细,二是药典中有个规定,药典上配制的溶液要是要用到乙醇的,如果没有指定用无水乙醇,一般是要用95%的乙醇的.另外附一个试剂的配法：氯化钠明胶试剂：两者都是固体,刚开始我还真不知道怎样配,后来在药典才发现配方2g氯化钠和1g明胶,再加上100g水,要求是现配的。