最终方案
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施工扬尘污染防治方案最终版一、背景和目的近年来,城市化进程加快,建筑施工也日益增多,然而施工产生的扬尘污染给环境和人们的健康带来了严重影响。
为了减少施工扬尘对环境的破坏,保护公众的身体健康,特制定本施工扬尘污染防治方案。
二、施工扬尘污染防治措施1.项目前期准备阶段(1)对施工现场进行合理规划,合理布局施工设备和材料堆放区域,尽量减少扬尘产生的机会。
(2)制定详细的扬尘防治施工方案并进行宣讲,确保每个参与的人员都了解扬尘防治的具体措施和要求。
2.施工现场控制措施(1)积极采用湿法施工,尽量减少干扬尘的产生。
如对裸露地面进行湿化处理,使用湿法切割机器等。
(2)对裸露地面、拆除建筑物和运输装置等进行及时湿化处理。
(3)建立完善的施工垃圾清运机制,确保施工现场的清洁。
(4)限制施工时间段,避免在风力较大的天气条件下开展施工。
(5)使用防尘网、挡风板等措施,尽量防止扬尘向周围环境扩散。
3.施工设备的管理措施(1)定期对施工设备进行维护保养,确保设备运行正常,减少故障和泄漏。
(2)采用低排放的机械设备,减少尾气和颗粒物的排放。
(3)使用封闭式设备和管道,减少挥发性有机溶剂的散发。
(4)加装过滤装置或粉尘收集器,减少粉尘的排放。
4.管理和监管措施(1)设立专门的监督和管理机构,负责施工扬尘污染防治工作的监管。
(2)加强对扬尘防治措施的督查和检测,及时发现和处理问题。
(3)对施工单位加强培训和宣传,提高其对扬尘防治工作的重视和执行力度。
(4)设置扬尘监测站点,定期对施工现场进行扬尘浓度的监测和评估。
三、预期效果和成本预算1.预期效果:(1)减少施工现场扬尘对周围环境的影响,降低空气颗粒物浓度。
(2)改善周围居民的生活环境,保障公众的身体健康。
(3)提高施工单位的环保意识和管理水平。
2.成本预算:(1)施工现场扬尘防治设备采购成本。
(2)相关培训和宣传的费用。
(3)扬尘监测站点的建设和维护费用。
(4)监管和管理机构的运营费用。
混凝土养护专项施工方案最终版混凝土养护是混凝土施工中至关重要的一环,直接关系到混凝土的质量和性能。
一个科学合理的养护方案可以有效地保证混凝土的均匀硬化和强度发挥,延长混凝土的使用寿命。
以下是混凝土养护专项施工方案最终版:一、基本原则1.湿润养护:混凝土在养护初期需要不断的湿润以保持水泥水化反应的进行,避免混凝土早期干裂。
2.覆盖保温:在养护初期尤其是低温季节,采取覆盖保温措施可以提高混凝土初期强度,避免冷缩裂缝。
3.适度通风:在高温季节,要根据气温和湿度适度通风,避免混凝土表面过快干燥导致开裂。
二、养护方式1.覆盖保温养护:在混凝土初凝后,应立即进行覆盖保温养护,将塑料布或湿棉被等材料完全覆盖在混凝土表面,确保水汽不易挥发。
2.湿润养护:定期喷水或铺设湿布,保持混凝土表面湿润,特别是高温季节,频率可适当增加。
3.清洁整理:维护混凝土表面洁净,避免杂物积聚阻碍湿气的渗透和混凝土的正常养护。
三、养护管理1.养护记录:定期记录混凝土的养护情况,包括养护时间、养护方式、湿度、气温等,以备查阅。
2.应急措施:如遇天气突变等情况,及时调整养护措施,确保混凝土的正常养护进行。
3.验收标准:养护结束后,应根据验收标准对混凝土进行检查,确认养护效果,保证混凝土质量。
四、养护总结混凝土养护是混凝土施工中不可或缺的环节,只有科学合理的养护方案和严密的管理才能确保混凝土的质量和使用寿命。
本文提出的混凝土养护专项施工方案最终版,旨在为混凝土施工提供参考和指导,希望广大施工人员认真贯彻执行,确保混凝土施工质量。
请根据实际情况灵活调整施工方案,保证施工效果。
大型管道吊装方案最终版一、背景该项目为一座新型化工厂的建设,其中包括了大型管道的安装。
由于管道重量较大,且需要高度精确的安装,因此需要专业的吊装方案。
二、吊装方案1. 预备工作(1)确定吊装点:根据设计图纸,确定管道安装位置及相应的吊装点。
(2)评估现场环境:评估吊装现场周边的环境情况,包括平整程度、土地稳固情况等。
(3)确定使用的吊装设备:根据管道重量和吊装高度,确定使用叉车或起重机等吊装设备。
(4)准备好吊装器材:确认所需的吊装工具和器材都已经准备好,包括吊钩、绳索、钢丝绳、脚手架等。
2. 吊装前的安全措施(1)人员安排:确定吊装区域内的人员,包括吊装工、监工、安全人员等,以确保现场的安全。
(2)安装警示标志:在吊装区域周围设置警示标志,防止无关人员进入吊装区。
(3)防止重心失衡:在吊装管道前,对管道进行检查,确保管道平衡,避免由于重心失衡导致吊装事故。
(4)确保所使用的吊装设备具有合格的安全标准认证。
3. 吊装过程(1)绑扎管道:在吊装管道前,使用绳索、钢丝绳将其绑扎紧,以确保其不会滑落或倾斜。
(2)提升管道:使用叉车或起重机等吊装设备,根据预先确定的吊装点,将管道提升到相应的高度。
(3)安装管道:将管道缓慢降下,确保其在安装过程中保持平衡,避免管道磕碰或损坏。
(4)检查管道安装:完成安装后,对管道进行检查,确认其安装位置、高度等符合设计要求。
4. 吊装后的收尾工作(1)清理现场:将吊装区域内的各种器材、工具、设备清理干净,恢复原状。
(2)记录文件:必须准确记录吊装的过程和数据,详细描述现场有关人员的姓名、工作内容、工作期间所采取的安全措施,以及管道的吊装高度和重量。
(3)安全总结:对此次吊装过程进行总结,分析吊装中出现的问题和应对措施,以完善安全管理制度。
三、结论在制定大型管道吊装方案时,必须考虑到管道的重量、高度、安全性等因素,排除所有安全隐患,遵循安全操作规程,以确保吊装过程安全可靠。
小干岛商务区最终设计方案近年来,随着城市化的推进,商务区的规模与数量也在不断增加。
在众多商务区中,小干岛商务区以其独特的地理位置及丰富的自然资源而备受关注。
小干岛商务区位于一个自然海岛之上,环境宜人,交通便利。
为了更好地利用资源,提供良好的商务环境,并融入可持续发展理念,小干岛商务区最终设计方案应具备以下几个重要特点:生态友好、智能化管理、区域特色和人性化设计。
首先,生态友好是小干岛商务区设计方案的基本考量因素之一。
保护环境与促进经济发展并不矛盾,相反,生态友好的商务区可以为企业和员工提供更好的工作与生活环境。
设计方案应充分考虑资源的合理利用,例如利用自然能源,安装颗粒物净化器,建设绿色屋顶等。
同时,商务区内还可以设置绿地和公园,为员工提供休闲和运动的场所,缓解工作压力。
其次,智能化管理是小干岛商务区设计方案的另一个重要方面。
在信息时代,智慧城市的建设和智能化管理已成为城市规划的热门话题。
小干岛商务区应充分利用先进的技术,建设智能化办公楼、停车场、安防系统等,提高工作效率和安全性。
通过智能化管理,商务区可以实现节能减排和资源共享,进一步提升整个区域的可持续发展能力。
此外,小干岛商务区设计方案还应充分发挥区域特色,寻求与周边环境的融合。
小干岛商务区的优势在于水域资源的利用,设计方案可以充分利用水上交通工具,提供水上巴士、游船等,方便员工的出行,并丰富商务区的交通方式。
商务区周边的水域资源还可以发展水上运动和休闲项目,为居民提供更多的娱乐活动。
最后,人性化设计也是小干岛商务区设计方案的关键要素之一。
商务区设计应注重员工的需求和舒适度,提供良好的工作环境和配套设施。
例如,设计宽敞明亮的办公楼、设立员工休息室、提供健身房、儿童托管等。
此外,商务区还应考虑到不同年龄层次的人群需求,为中小学、医院等公共服务设施提供充足的空间和资源。
综上所述,小干岛商务区最终设计方案应具备生态友好、智能化管理、区域特色和人性化设计等特点。
护岸施工方案(最终版)背景和目标本文档为护岸施工方案的最终版本,旨在确保护岸施工过程安全、高效,并保护环境。
以下是施工方案的详细内容。
施工步骤1. 方案准备阶段:- 确定施工地点和护岸类型。
- 进行现场勘察,评估环境条件和土壤情况。
- 制定施工计划,包括时间表和资源需求。
2. 施工材料准备:- 根据护岸类型选择适当的材料,如混凝土块或石块。
- 检查材料质量,确保符合相关标准和要求。
3. 施工过程:- 设计合适的基础结构,如桩基或混凝土基底。
- 开展挖沟和过渡区域的清理工作。
- 安装护岸材料,确保正确的放置和紧固。
- 检查施工质量,确保护岸结构的稳固和耐久性。
4. 施工结束和清理:- 完成护岸施工后,进行必要的测试和评估。
- 清理施工现场,包括清除废弃材料和恢复环境原貌。
安全措施在进行护岸施工过程中,必须遵守以下安全措施:- 工作人员必须佩戴适当的个人防护装备,包括安全帽、护目镜、手套等。
- 施工现场必须设置合适的警示标志,以确保周围人员能够警觉施工活动。
- 使用合适的机械设备和工具,并确保其处于良好工作状态。
- 配备专业的护岸施工人员,并确保他们具备相关的培训和工作经验。
环境保护措施为保护环境,我们将采取以下措施:- 控制施工过程中的噪音和粉尘污染。
- 在施工现场周围设置防护网,防止土壤和水体污染。
- 妥善处理产生的废弃材料和有害废物。
结论以上是护岸施工方案的最终版本,全面考虑了安全和环境保护因素。
通过遵循这个方案,我们将确保护岸施工的顺利进行,并达到预期的效果。
屋面板施工方案最终版一、工程概况本工程商业大厦屋面板施工工程,总面积约1200平方米。
屋面板选用预制混凝土板,厚度为100mm。
屋面板施工的主要内容包括板材清平、板材铺设、伸缩缝处理、板材防水处理、板材固定等。
二、工程准备1.施工人员的培训和技能证书的落实。
2.编制详细的施工方案以确保施工顺利进行。
3.准备施工所需的材料和设备,包括预制混凝土板、混凝土搅拌机、砼浇筑机、焊接设备、防火涂料等。
4.与施工相关的安全措施,如安装防护栏杆,设立施工警示牌等。
三、施工步骤1. 清平处理:用红砖堆砌调整屋面板的平整度,要保证在正负5mm 的范围内。
2. 板材铺设:将预制混凝土板按照设计要求进行铺设,采用20mm的厚交易砂浆进行垫层,保证板材与基准面的垂直度。
3.伸缩缝处理:根据设计要求,在屋面板上设置伸缩缝,采用弹性材料填充,确保屋面板在温度变化时能够自由伸缩。
4.防水处理:使用聚合物防水涂料对屋面板进行防水处理,保护屋面板免受雨水侵蚀。
5.固定处理:采用焊接方法固定屋面板,确保板材与基准面的牢固连接。
6.检验验收:施工完成后,对屋面板进行检验验收,确保施工质量符合要求。
四、安全措施1.施工现场设置防护栏杆,确保人员和设备的安全。
2.禁止酒后作业,确保施工人员的安全施工。
3.施工期间对设备进行定期维护和检修,确保设备的正常运行。
4.定期组织施工人员进行安全教育和技能培训,增强安全意识。
五、质量控制1.施工前,对预制混凝土板进行检查,检查板材是否有破损、弯曲等问题。
2.施工过程中,严格按照施工方案进行施工,确保每个环节的质量。
3.施工完成后,进行自检与互检,对施工质量进行评估,确保施工质量合格。
4.配合监理工程师进行质量检查和验收工作,确保施工质量达到设计要求。
六、环境保护1.施工过程中,采取噪音、粉尘、废弃物管理措施,减少对周边环境的负面影响。
2.严禁乱倒废水和废弃物,保持工程区域的清洁环境。
3.严禁在施工现场进行焚烧和溶剂使用,减少污染物的排放。
工会成立大会总方案最终版尊敬的各位会员:大家好!欢迎各位来到工会成立大会,今天我们终于迎来了我们成立工会的大日子!在这里,我代表全体工会成员向大家发出倡议:让我们一起成立工会,共同推动企业和员工的发展!一、工会成立的背景和意义工会的存在是为了维护职工的合法权益,改善职工的劳动和生活条件,推动企业的发展。
我们公司是新成立的一家公司,员工数量日益增多,而工作制度和福利待遇等问题也逐渐浮现出来,为了更好地维护职工利益,促进企业的稳定发展,我们决定成立公司工会。
二、工会成立的基本情况1.成立时间:本次会议确定成立工会,成立时间为今天,即×年×月×日。
2.组织机构:工会委员会是工会的最高权力机构,由主席、副主席、秘书长、财务主管等人组成,选举周期三年。
下设组织部、宣传部、文体部、妇女组、工人小组等部门。
3.会员资格:所有公司职工均可加入工会,自愿参加,不分种族、性别和宗教信仰,缴纳每月一定金额的会费,享受工会提供的各种服务和福利。
三、工会的主要任务1.维护职工合法权益:保障职工工作权、劳动权、生活权等合法权益,维护职工的人身安全和健康权益,推动企业内外部环境的优化。
2.改善职工福利待遇:积极争取职工工资待遇、福利水平、培训教育等方面的待遇,为职工创造更好的用户体验。
3.提高职工综合素质:开展各类职工培训和学习,提高职工的工作技能和综合素质,助力职工个人发展和公司转型升级。
4.加强职工沟通和交流:促进职工之间的沟通和交流,建立良好的职工工作和生活交流平台,加强职工之间的互动和交流,加强公司凝聚力和向心力。
五、工会的具体措施1.制定职工培训计划,提高职工的工作技能。
2.建立职工身心健康档案,积极开展健康体检、保健宣传等活动。
3.组织开展职工大会、职工文艺演出、职工体育竞技等活动。
4.开展职工团体福利和个人勋章颁发活动。
5.协调职工和企业的关系,维护职工和企业的和谐稳定。
六、工会成立和维护的保障措施1.公司领导层全力支持工会的成立和发展,提供必要的办公场所、物资和资金支持。
超重、超高模板工程专项施工方案最终版
一、项目概述
超重、超高模板工程是指在施工中对大型建筑结构进行模板支撑的工程。
由于建筑结构体积庞大、高度超过常规建筑,因此在施工过程中需要特别的施工方案。
本文将针对超重、超高模板工程,提出一个专项施工方案,以确保施工顺利进行。
二、施工准备
2.1 场地准备
在进行超重、超高模板工程之前,必须对施工场地进行充分准备。
清理场地碎石、平整地面,确保施工区域无障碍物。
2.2 设备准备
准备好吊装设备、模板支架等必要设备,确保施工中设备完好,能够满足工程需求。
三、施工方案
3.1 模板设计方案
根据建筑结构的具体要求,设计合适的模板支撑方案,确保模板结构稳定、承载能力强。
3.2 安全管理方案
制定安全管理方案,加强施工现场安全监控,保障施工人员和设备的安全。
3.3 进度管理方案
制定施工进度计划,合理安排施工顺序,确保施工按时完成。
四、材料选用
4.1 模板材料
选用高强度、耐用的模板材料,确保模板结构牢固、稳定。
4.2 支撑材料
选择质量可靠的支撑材料,保证支撑结构安全可靠。
五、质量控制
5.1 施工监控
加强现场监控,定期检查模板结构和支撑设备,确保施工质量。
5.2 质量验收
在施工完成后,进行质量验收工作,确保施工符合相关标准和要求。
六、总结
通过本文详细介绍的超重、超高模板工程专项施工方案,可以有效指导施工人
员在施工过程中安全、高效地进行工作。
在实际工程中,应根据具体情况做出调整,确保施工顺利进行,达到预期效果。
水稳施工方案最终一、工程概况与目标本水稳工程位于XX市XX区,旨在建设一条高标准、高质量的道路水稳基层。
工程总长度XX公里,宽度XX米,设计时速为XX公里/小时。
通过本工程的实施,预期实现道路通行能力的显著提升,满足日益增长的交通需求,并确保行车安全、舒适。
二、施工材料要求水泥:选用符合国家标准的普通硅酸盐水泥,标号不低于42.5级。
骨料:选用质地坚硬、颗粒均匀的碎石,最大粒径不超过31.5mm,含泥量不大于1%。
水:使用清洁、无污染的饮用水。
掺合料:可选用矿粉或粉煤灰,其质量应符合相关规定。
三、施工机械设备为确保施工质量和效率,本工程将使用以下机械设备:搅拌站:用于制备水稳混合料。
运输车辆:用于将混合料运输至施工现场。
摊铺机:用于实现混合料的均匀摊铺。
压路机:用于压实水稳层,确保密实度达标。
洒水车:用于在摊铺后及时洒水养护。
四、施工工艺流程施工准备:清理现场,测量放样,标定控制点。
搅拌制备:按照设计配合比,在搅拌站制备水稳混合料。
运输:使用专用运输车辆将混合料运至施工现场。
摊铺:使用摊铺机将混合料均匀摊铺在路基上。
压实:使用压路机对水稳层进行压实,确保密实度符合要求。
养护:在压实完成后,及时洒水养护,确保水稳层强度发展。
五、质量控制措施严格控制材料质量,确保使用的材料符合设计要求。
对施工过程中的关键环节进行监控,如搅拌、运输、摊铺、压实等。
定期对施工现场进行质量检查,确保施工质量符合规范要求。
建立健全质量管理体系,明确各级人员职责,确保质量控制措施得到有效执行。
六、安全环保管理加强施工现场安全管理,设置安全警示标志,确保施工人员和过往行人的安全。
定期对施工机械设备进行检查和维护,确保其安全可靠运行。
遵守环保法规,减少施工过程中的噪声、粉尘和废水排放。
合理利用资源,减少浪费,推广绿色施工技术。
七、工期与进度安排本工程计划总工期为XX个月。
具体进度安排如下:施工准备阶段:XX个月。
施工阶段:XX个月。
最终确定方案叫什么在进行项目开发或解决问题的过程中,经常需要经历多个阶段,经过多次讨论和评估之后,最终确定一个解决方案。
确定一个好的方案对于项目的成功和问题的解决至关重要。
而一个好的方案应该能够全面考虑各种因素,并且能够充分满足需求和解决问题。
方案确定的重要性在项目开发中,方案的确定是一个关键步骤。
一个好的方案可以帮助团队明确目标、规划工作、分配任务,并且能够提供统一的指导原则,确保团队的合作顺利进行。
而在解决问题的过程中,方案的确定可以帮助我们更好地定位和分析问题的根源,并且提供可操作的解决方案,使问题能够得到有效解决。
方案确定的流程方案的确定需要经过一系列的步骤,下面是一个常用的方案确定流程:1.需求调研和分析:在确定方案之前,首先需要对问题或项目的需求进行调研和分析。
通过与相关人员沟通和讨论,明确问题的背景、目标和约束条件等。
2.问题定义:在明确了需求之后,需要准确定义问题,包括问题的性质、影响范围和紧急程度等。
只有明确定义了问题,才能更好地寻找解决方案。
3.解决方案生成:在明确了问题之后,可以开始生成可能的解决方案。
可以通过头脑风暴、借鉴其他成功案例、或者运用专业工具等方式生成多种解决方案。
4.方案评估和筛选:在生成了多种解决方案之后,需要对这些方案进行评估和筛选,选择出最具可行性和可行性的方案。
可以根据技术难度、资源投入、可行性分析等因素进行综合评估。
5.方案调整和优化:在筛选出最优方案之后,可能还需要进行一些调整和优化,以进一步提高方案的效果和可行性。
6.方案的最终确定:在经过多次评估和优化之后,可以确定一个最终的解决方案。
这个方案应该能够全面满足需求和解决问题,并且能够被团队广泛接受和理解。
最终确定方案的重要性最终确定方案之后,它将成为项目或问题解决的指导方针。
一个好的方案可以帮助团队在后续的工作中更好地进行规划和执行,并且能够提供统一的标准和原则,使得团队成员在工作中能够更加有效地协作。
黑石顶实验方案(一)抗氧化酶(SOD、CAT、POD)、MDA、可溶性蛋白、测定方法酶液制备剪取一定量苔藓洗干净,用吸水纸擦干之后称取0.5g ,加少量石英砂液氮浴迅速研磨至粉末状,加入4 ml预冷的提取缓冲液继续低温研磨,3ml润洗,12000转,4℃离心5 min,取上清液冰水浴保存待测。
(酶液总量5ml = 0.1ml SOD +2.2ml MDA +0.1ml CAT +0.1ml 可溶性蛋白+ 0.4ml POD)样品提取液取0.017 g EDTA-Na2,25 ml甘油以PBS(pH7.8)溶解并定容至500 ml。
实验一SOD活性测定1 实验试剂准备(SOD反应液)(1):称取1.17 g Met溶解于540 ml PBS(pH7.8)中,棕瓶低温保存。
(2):准确称取0.028 g NBT加入14 ml PBS(pH7.8)中溶解,低温遮光保存,有效期1周。
(3):准确称取0.0025 g核黄素溶解于100 ml PBS(pH7.8)中,低温遮光保存,有效期2周。
(4):准确称取0.012 g EDTA-Na2溶解于100 ml PBS(pH7.8)中。
(5):母液:0.2M 磷酸氢二钾:三水合45.64 g/L0.2M 磷酸二氢钠:一水合27.60g/L;二水合31.21g/L0.1M PBS(pH7.8): 磷酸氢二钾457.5 ml 磷酸二氢钠42.5 ml 加蒸馏水至1000 ml临用前,取A液54 ml加入B、C、D液各2 ml,置于棕色瓶中混匀,25℃预温,此液现用现配,不可保存。
2 显色反应样品管(每个样品1管):3 ml预温的SOD反应液中加入0.1 ml提取液,混匀后迅速于560 nm波长下比色,然后放于光照培养箱中25℃、4000 lux照光反应20 min,取出后遮光,再迅速于560 nm波长下比色,以不照光的对照管做空白,纪录数值。
最大光还原管(2管,取平均):3 ml预温的SOD反应液中加入0.1 ml PBS(pH7.8),而后与样品管处理相同,560 nm比色,纪录数值。
3 结果计算已知SOD活性单位以抑制NBT光化还原的50%为一个酶活性单位(U)表示,按下式计算SOD活性。
SOD活性(U/g)= ( A ck-A E)×V/0.5×A ck×W×V tSOD活性以每克样品鲜质量的的每单位表示(U/g);A ck为照光对照管的吸收度;A E为样品管的吸光度;V为样品液总体积(ml);V t为测定时样品用量(ml);W为样品鲜质量。
实验二过氧化氢酶(CAT)活性测定(紫外吸收法)1 原理:过氧化氢在240nm下有强烈吸收,过氧化氢酶能分解过氧化氢,是反应液吸光度在A240 nm随反应时间而降低。
根据测定吸光度的变化速度即可测出过氧化氢的活性。
2 实验试剂准备(1)0.1 mol/ L pH 7.8的磷酸缓冲液母液:0.2M 磷酸氢二钾:三水合45.64 g/L0.2M 磷酸二氢钠:一水合27.60g/L;二水合31.21g/LpH 7.8的磷酸缓冲液: 磷酸氢二钾457.5 ml 磷酸二氢钠42.5 ml(2)0.1 mol/ L H2O2 10.3ml 30% 过氧化氢加水定容至100ml3 显色反应样品管:0.1ml 提取酶液加入2.5ml CAT反应液(0.1 mol/ L pH 7.8的磷酸缓冲液2.5 mL),25摄氏度下预热,再加入0.1 mol/ L H2O2溶液0.1 mL,加完立即倒入比色皿中,在240nm 下测定吸光值,每间隔 30S 读数一次,共测 4 min。
对照管:0.1ml 提取酶液加入2.5ml CAT反应液,在沸水浴中杀死酶液,冷却,25摄氏度下预热加入0.1 mol/ L H2O2溶液0.5 mL后,作为对照A s0。
4 计算以每30S A240减少0.1的酶量为一个酶活性单位(U)。
过氧化氢酶(CAT)活性[U/(g·min)]=△A240×V T/0.1×∨s×t×W 其中△A240 =A s0-A s1A s0 为加入煮死酶液的对照管的吸光度A s1V T为提取酶液的总体积(ml)∨s 为测定时所用的酶液体积(ml)W为样品鲜质量(g)t为从加过氧化氢开始到最后一次读数的时间(min)0.1为A240 下降0.1时的一个酶活性单位(U)。
实验三丙二醛含量测定1 原理:MDA在高温酸性条件下与TBA反应,形成532nm波长处有最大吸收的有色三甲基复合物,在600nm处有最小光吸收。
为消除糖类物质对其反应的干扰作用,用以下公式可得出MDA的浓度。
C(µmol/L)=6.45(A532-A600)0.56A4502 实验试剂(1)0.67% TBA显色液: 称取0.67 g硫代巴比妥酸,加入100 ml 70% 醋酸溶液溶解,溶解后置于棕色瓶中常温保存。
(2)30% (m/v)三氯乙酸3 显色反应吸取2 ml上述提取液加入1 ml 30% (m/v)三氯乙酸溶液充分振荡混匀,于12000 rpm离心2 min,取上清液2 ml加入0.67% 硫代巴比妥酸显色液(m/v,以70%醋酸溶液溶解)2 ml,沸水浴15 min,迅速冷却后分别测定上清液在450 nm,532 nm,600 nm处的吸光值。
4 计算C(µmol/L)=6.45(A532-A600)-0.56A450 得出MDA浓度。
实验四可溶性蛋白含量测定1 实验试剂(1)考马斯亮蓝G-250显色液:取100mg考马斯亮蓝G-250,溶于50ml 95%的乙醇中,加入100ml 85%(w/v)的磷酸,最后加蒸馏水到1000ml,过滤至棕色瓶中保存。
(常温下可保存一个月)3 显色反应0.1 ml酶提取液加入3.9 ml考马斯亮蓝G250试剂,5 min后595nm比色以0.1 ml 1 mg/ml BSA溶液按相同方法测定OD值,计算摩尔消光系数。
4 计算样品中蛋白质的含量=C×V T/(Vs ×W F×1000) (mg/g)C为查标准曲线值,µg;V T 为提取液体积,ml;W F为样品鲜重,g;;Vs为测定时加样量,ml。
实验五过氧化物酶(POD)活性测定(愈创木酚法)1原理在过氧化物酶的催化下, H2O2将愈创木酚氧化成茶褐色产物,此产物在470nm 有最大吸收光,通过测470nm下的吸收光的变化就可以测定过氧化物酶的活性。
2 实验试剂准备(1)0.1mol/L pH 6.0的磷酸缓冲液母液:0.2M 磷酸氢二钾:三水合45.64 g/L0.2M 磷酸二氢钠:一水合27.60g/L;二水合31.21g/L0.1mol/L pH 6.0的磷酸缓冲液12.3ml磷酸氢二钾87.7ml磷酸二氢钠稀释至200ml(2 愈创木酚(3)30%H2O23 显色反应样品管:每个样一管,0.4ml酶液加入30ml POD反应液,再加愈创木酚1.4µl,30%H2O2 0.85µl,用加热煮沸5min 的酶液作为对照,在470nm下每隔30s读取吸光值增加数。
以每30S A470变化0.01的酶量为一个过氧化物酶活性单位(U)。
过氧化物酶(POD)活性[U/(g·min)]=△A470×V T/0.01×∨s×t×WA s0 为加入煮死酶液的对照管的吸光度VT为提取酶液的总体积(ml)Vs 为测定时所用的酶液体积(ml)W为样品鲜质量(g)t为测定吸光值得总时间(min)在植物逆境生理研究中,POD、SOD( 超氧化物歧化酶)、MDA( 丙二醛) 等指标测定时,其样品提取缓冲液都要求用磷酸缓冲液,但pH 不同,由于pH 在5. 7~7. 0 POD 活性有一致的变化趋势,所以当实验材料较少时可以考虑将POD 与SOD、MDA 等指标用同一个提取液测定。
(二)可溶性糖、淀粉及非蛋白氮测定实验一蒽酮比色法测定可溶性糖、淀粉1 原理糖在浓硫酸作用下,可经脱水反应生成糖醛或者羟甲基糖醛,生成的糖醛或者羟甲基糖醛可与蒽酮反应上生成蓝绿色糖醛衍生物,在一定范围内,颜色的深浅与糖的含量成正比,在可见光的吸收峰为630nm,可在此波长下进行比色。
2 提取液的制取称取约0.3 g苔藓,加入少量石英砂以及80%乙醇(分三次加入,总量20 ml),充分研磨3-5 min将浆状物倒入100 ml三角瓶中,用15 ml蒸馏水润洗研钵,80℃水浴提取30 min,冷却后,抽滤(沉淀用于淀粉提取),将滤液倒入50 ml容量瓶中,再加入0.5 ml饱和碱式醋酸铅溶液,摇匀以沉淀蛋白质等杂质,加入0.2 g 草酸钠以除去过量的铅离子,吸取4ml离心测定可溶性糖,其他放入50ml离心管静置,测定非蛋白氮(抽滤取滤液25ml)。
取此提取液0.5 ml,加入0.5 ml 80%乙醇和5 ml蒽酮试剂,沸水浴2 min,630 nm比色(中国科学院上海植物生理研究所, 1999)3 实验试剂准备(1)蒽酮试剂称取2g蒽酮溶解于1000ml稀硫酸溶液中即可。
稀硫酸溶液由760ml浓硫酸稀释至1000ml而成(必须新鲜配置,不宜贮存过久)先放冰箱冷却,再溶解蒽酮。
(2)9.2 mol/L HClO470%-72%的HClO4 80ml,用蒸馏水稀释至100ml(3) 标准淀粉溶液准确称取100mg纯淀粉,放入100ml容量瓶中,加入70ml热蒸馏水,沸水浴煮沸0.5h,冷却后加入蒸馏水稀释至刻度,吸取此溶液5ml至另一50ml容量瓶中,加热蒸馏水15ml,再加入9.2M HClO4 2ml水解处理20min,后加入10ml 80%乙醇,并用蒸馏水稀释至50ml,即成每毫升含淀粉100μg的标准溶液。
(4)标准蔗糖溶液将AR级蔗糖80℃烘至恒重。
准确称取1 g,用少量蒸馏水溶解后,移入100 ml容量瓶中,加入1 ml浓硫酸,用蒸馏水定容。
再吸取1 ml此溶液到另一100 ml容量瓶中,加入20 ml 80%乙醇,再加水定容即可。
即得每毫升溶液含糖量100 μg的标准蔗糖液。
(5)饱和碱式醋酸铅溶液(6)4 显色反应(1)标准曲线的制作可溶性糖与淀粉标准曲线制作(检出上限:标准糖含量100μg/ml):管号(50ml容量瓶)0 1-2 3-4 5-6 7-8 9-10 11-12 13-14 标准蔗糖/淀粉溶液(ml)0 0.4 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 2.0 80%乙醇(ml) 2.0 1.6 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 0 标准蔗糖/淀粉含量(μg/ml)0 20 40 50 60 70 80 100 向每个容量瓶中各加入10ml蒽酮试剂,充分震荡,沸水浴1-2min,取出自然冷却,630nm 比色。