起始密码子及其5端若干密码子的影响:
90%以AUG为起始密码子,少数UUG、GUG。
AUG右侧的几个密码碱基组成也有影响,不能与 mRNA的5’端非编码区形成茎环结构。
4. 生物体对密码子的偏爱性:
简并密码子使用频率在不同 不
同蛋白质翻译时不同,具有偏
➢外源基因密码子在大肠杆菌细胞中获得
最佳表达:
简单,便于基因操作和分析。
(2)多数细胞内有质粒或噬菌体,便于构建相应
表达载体, 目标基因表达水平高。
(3)代谢途径和基因表达调控机制比较清楚 (4)繁殖迅速、培养简单、操作方便 (5)被美国FDA批准为安全的基因工程受体生物
(三)外源基因在大肠杆菌中表达的原理 启动子 终止子 核糖体结合位点 表达载体的必要元件 密码子 质粒拷贝数
3、控制目的基因的过量表达 使用可控型启动子控制目的基因的定时表达及表达程
度 使用可控型复制子控制质粒的定时增殖或降低质粒的
拷贝数 4、优化基因工程菌的培养工艺 培养基组成:限制培养基比丰富培养基更有利于稳定 培养温度:较低的效表达外源基因? 大肠杆菌作为基因工程受体菌的优缺点是什么? 什么是RBS位点,如何影响基因表达? 什么是包涵体?其形成机理是什么? 融合蛋白、寡聚型异源蛋白 基因工程菌的遗传不稳定性的主要机制是什么?
➢ DNA体内重组的基本原理:同源序列依赖型
染色体DNA的两个同源区之间可发生同源重组, 其频率与细菌种类、同源程度、两个同源区之间 距离有关。
➢同源重组有整合和交换两种形式,前者只
需要一个断裂位点,后者有两个断裂位点。
标记基因
目的基因
同源交换
标记基因
目的基因
三、基因工程菌的遗传不稳定性及其对策