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纤维素酶的制备及其应用研究纤维素酶是一种能够降解纤维素的酶类酶，具有重要的应用潜力。
纤维素是存在于植物细胞壁中的一种复杂多糖，由纤维素主链和纤维素外露的副产物组成。
然而，纤维素的结构特殊，不易降解，因而使得纤维素资源不能充分利用。
纤维素酶的制备及其应用研究成为了当前的热门领域。
纤维素酶的制备可以采用两种方法：微生物发酵和重组DNA技术。
常见的微生物发酵法包括固体发酵和液体发酵。
固体发酵主要指利用固体底物如纤维素为碳源进行发酵，如用木霉菌、曲霉菌等发酵制备纤维素酶。
液体发酵则是将纤维素酶产生菌参与发酵系统中，培养基以纤维素为唯一碳源，以菌株培养活跃度为指标。
利用液体发酵法制备纤维素酶的优点在于操作简单方便，易于大规模生产。
重组DNA技术制备纤维素酶的方法，是将纤维素酶基因导入在相对于宿主来说载体基因较大的质粒或者经过改造的真核表达质粒中。
1.酒精生产：纤维素酶在酿酒工业中的应用首先被人们广泛关注。
利用纤维素酶将植物细胞壁水解产生的纤维素与酵母菌一起发酵，可以达到大大提高酿酒产量的目的。
2.生物柴油生产：生物柴油是一种绿色替代能源，而纤维素作为世界上最丰富的可再生资源之一，在生物柴油生产中有着广阔的应用前景。
纤维素酶可以将纤维素有效地水解成可发酵的糖，然后通过微生物发酵将糖转化为生物柴油。
3.奶牛饲养：纤维素是奶牛常见饲料的主要成分之一，但是奶牛的消化系统对纤维素的降解能力有限。
因此，添加纤维素酶可以有效地提高乳牛对纤维素的消化率，提高饲料的利用效率，从而提高乳牛的生产性能。
4.饲料添加剂：纤维素酶也可以作为一种饲料添加剂，降低饲料中纤维素的含量，提高饲料的可利用性，减少饲料浪费。
虽然纤维素酶的制备和应用研究已经取得了很大的进展，但是仍然存在一些挑战和问题。
例如，酶的稳定性、活性和选择性等方面的改进仍然是当前研究的热点。
此外，酶制备的成本和规模化生产等问题也需要进一步解决。
通过不断的研究和创新，相信纤维素酶在未来会有更广泛的应用。
里氏木霉产纤维素酶分离纯化工艺研究发布时间：2021-11-11T06:46:02.936Z 来源：《中国科技人才》2021年第22期作者：侯龙龙谢军任晓辉白冠章[导读] 目前，世界各国都在积极研究利用非粮发酵手段生产生物燃料，用以解决日益严重的能源危机、气候问题以及粮食短缺问题。
义马煤业集团煤生化高科技工程有限公司河南省三门峡市 472300摘要：目前，世界各国都在积极研究利用非粮发酵手段生产生物燃料，用以解决日益严重的能源危机、气候问题以及粮食短缺问题。
木质纤维素作为地球上储量最丰富的多糖类物质，利用其生产燃料乙醇已成为各国研究的热点领域。
但由于木质纤维素结构致密复杂，大多数微生物并不能将其作为直接碳源来生产乙醇，只有将其水解成可发酵单糖类物质后，才能被微生物利用。
酶解法由于其反应条件温和、效率高、能耗低、选择性强以及环保效果好等优点，被广泛应用于纤维素水解过程中。
但由于纤维素酶的酶组分多体系，底物结构较为复杂，加大了从发酵液中分离提取较高纯度的纤维素酶的难度，目前文献报道的纤维素酶提取工艺大多是为了获得纯纤维素酶组分并进行酶学性质的研究，其工艺很难在工业中进行应用。
关键词：纤维素酶；分离提取工艺；盐析；膜分离；色谱层析前言：在传统的酶粗提方法中，盐析法过程温和，不会使酶分子发生变性，硫酸铵由于其具有较强的盐析能力、较高的水溶性以及较低的温度系数，因此在蛋白质及酶的盐析过程中常被使用。
陈红漫等在芽孢杆菌-葡萄糖苷酶的分离纯化及特性的研究中采用硫酸铵分级沉淀法对粗酶液分离纯化，结果显示在硫酸铵饱和度区间为20%-60%时，经硫酸铵沉淀后，酶纯化倍数为1.42,回收率为11.41 %。
但盐析过程适合小规模酶的分离提取过程，而当生产规模较大时，由于需要大量的无机盐，会对后续环保处理带来较大压力；而膜分离过程不需要添加化学试剂，而且整个过程温和，不会造成酶分子的变性失活，当然，膜分离过程也存在投资成本偏高，膜易堵塞等问题。
纤维素菌分离和鉴定的方法一、概述纤维素由于其特殊的生化性质，一直是微生物学和食品工业研究的关注焦点。
特别是纤维素的分解，除了传统的化学方法，生物法也是目前广泛采用的技术之一。
对纤维素酶活性和产酶微生物的分离和鉴定，是纤维素生物技术研究的重要内容。
纤维素分解酶是产生于微生物体内的一类酶，广泛存在于真菌和细菌中，可划分为纤维素酶和半纤维素酶两大类，规律的利用这些微生物菌种，开发新型的纤维素分解酶。
纤维素的微生物分解菌种较多，其中许多菌种能分泌出多种细胞外酶，如单糖的转化酶、纤维素酶、半纤维素酶、葡萄糖氧化酶、木糖酶、果糖酶和葡聚糖酶等。
多种新型有机物的产生依赖于工业生产中微生物的应用技术，目前各国纤维素降解的菌株和发酵产物分离和鉴定方法越来越多。
纤维素菌的分离可采用筛选、稀释和富集等方法。
实际应用中，常用的分离方法有：（一）厌氧富集法：根据纤维素菌能够在厌氧条件下进行生长和代谢的特点，采用富集培养方法，利用耐氧性微生物限制氧气的供应，引起产生厌氧性纤维素分解菌类，然后推广领域固定化、发酵和应用。
可根据繁殖时间将厌氧富集法分为短时间富集法和长时间富集法。
（二）筛选法：在纤维素富含的自然环境或人工培养环境中进行筛选。
先用一些微生物菌株做为预培养菌种，加入富含纤维素的培养基，通过短期采取接种、稀释、摇动等处理方式，寻找纤维素分解酶活力最高的培养物，然后进行分离纯化、性质鉴定。
（三）稀释法：将样品依一定比例进行稀释，将稀释后的液体均匀地均匀的加入纤维素培养基中，用深层培养的方式进行发酵，进行分离鉴定纯化。
稀释法适用于富含纤维素且菌株较多的培养基的菌群筛选。
（一）形态学特征鉴定法：根据菌株的形态学特征进行鉴定。
此方法是最基本也是最重要的鉴定方法之一。
菌株的形态学特征包括形状、结构、颜色和大小等，进一步对分离的菌株进行正确定义。
常用的形态学特征包括：形态特征、结构特征、色素特征和大肠杆菌。
（二）生理生化特征鉴定法：通过菌株的生长特性在不同培养基中的表现，或菌体在不同生长条件下表现的生化过程，如碳源利用情况，氮源利用情况，温度和pH值的影响等，进行鉴定。
纤维素酶的生产工艺及分离提纯：朱帅帅学号：4 四院三连通信工程摘要：纤维素酶是一种重要的酶产品，是一种复合酶，主要由外切β-葡聚糖酶、切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等组成，还有很高活力的木聚糖酶。
由于纤维素酶在饲料、酒精、纺织和食品等领域具有巨大的市场潜力，已被国外业人士看好，将是继糖化酶、淀粉酶和蛋白酶之后的第四大工业酶种，甚至在中国完全有可能成为第一大酶种，因此纤维素酶是酶制剂工业中的一个新的增长点。
是可以将纤维素分解成寡糖或单糖的蛋白质。
关键词：发酵法；盐析法；凝胶过滤；离子交换层析；电泳Abstract：Cellulase is an important enzyme products, a plex enzyme, mainly by the exo-β-glucanase, endo-β-glucanase and β-glucosidase and other ponents, there are very high energy Xylanase. Because cellulase has great market potential in the fields of feed, alcohol, textile and food, it has been regarded as the fourth largest industrial enzyme after saccharifying enzyme, amylase and protease, even in China it is entirely possible to bee the largest enzyme species, so the enzyme enzyme industry is a new growth point. Is a protein that can depose cellulose into oligosaccharides or monosaccharides.Keywords:Fermentation, Salting out, Gel filtration, Ion exchange chromatography, Electrophoresis.一、纤维素酶的概述纤维素酶是一种对纤维素大分子的水解具有特殊催化作用的活性蛋白质，它是一组酶的总称，不是单成分酶，而是由多个酶起协同作用的多酶体系。
纤维素酶的三种活力测定方法纤维素酶是一种广泛存在于自然界中的酶类，具有重要的降解纤维素的功能。
对于工业生产、环境保护及生物能源等领域都有着极为广泛的应用。
因此，纤维素酶的测定方法也越来越受到研究者的关注。
本文将针对纤维素酶的三种活力测定方法进行详细介绍。
一、滴定法滴定法是最为简单、传统的纤维素酶活力测定方法。
其操作步骤相对较简单，但由于其受试物中的葡萄糖数量较小，因此准确度不如其他测定方法。
滴定法的具体操作步骤如下：1.采用苯酚褐或者硫酸铜-硫氰化钾将葡萄糖转化为光滑葡萄糖2.使用离子交换树脂净化试样3.通过酸水解，将可分离出的光滑葡萄糖转化为葡萄糖4.通过NaOH溶液中添加试样，测定试样所需要的NaOH溶液的体积二、反向相色谱法反向相色谱法是一种基于色谱技术的测定方法。
比滴定法更加准确且可靠。
反向相色谱法可以通过改变样品与固相载体的交互时间，实现对样品组分的分离。
其操作步骤如下：1.使用有机溶剂混合纤维素样品2.净化溶液，分离部分有机溶剂和水3.试样在反向相色谱柱上，随柱子流动4.通过检测器检测滴量，确定样品的浓度三、淀粉-纤维素显色法淀粉-纤维素显色法是一种基于酶法和化学显色技术结合的测定方法。
其同时测定酶反应的数量和反应的速率，可以获得相对准确的数据。
具体操作过程如下：1.样品中的淀粉与纤维素同时与碘反应2.通过求字头光度的变化及测试时间的变化，测定酶的活力3.以酶动力学为基础，通过数据分析得到相应的酶反应速率总结起来，以上三种方法均可用于纤维素酶的活力测定。
针对不同的需求，可以选择适当的方法进行测定。
其中，受试物的纯度和净化程度是影响精度的关键因素，因此在测定前要进行适当的纯化。
在生产过程中，可以选择淀粉-纤维素显色法作为主要测定方法，以保证产物质量的稳定性和可控性。
纤维素酶产生菌的分离和筛选方案目标：从自然界采用选择性分离的方法，获得纤维素酶的高产菌株。
意义：把含纤维的自然资源及纤维废料加以充分利用，转化成糖类作为食品工业和发酵工业的原料或制成优质饲料，具有深远的现实意义。
1.材料与方法1.1材料与仪器1.1.1原辅料土壤品来自南阳理工学院以下各处离地表3-8cm深处泥土装入塑料瓶中，带回实验室处理。
（1）新校区竹林腐叶下的土壤（2）校门口东边的松树林腐叶子下的土壤（3）青年公寓外小树林（4）2号教学楼后面花园的土壤1.1.2试剂羧甲基纤维素CMC、NaCl、MgS04·7H20、KH2P04、酵母浸粉、蛋白胨、蒸馏水、琼脂、Na2HP04、酵母膏、刚果红试剂。
1.1.3仪器小铁铲和无菌纸或袋（可省）、小烧杯、100ml量筒、滤纸、漏斗、棕色试剂瓶、1000ml三角烧瓶1个、500ml三角烧瓶1个、试管24个、高压蒸汽灭菌锅、培养皿24个、36支1mm无菌吸管、无菌玻璃涂棒12支、显微镜、无菌水。
1.2培养基及试剂的配制1.2.1培养基配制初筛培养基A：羧甲基纤维素CMC 20g、NaCl 5．0g、MgS04·7H20 0．2g、KH2P041．0g、酵母浸粉 5.0g、蛋白胨10g、蒸馏水1000mL、琼脂20g，pH自然，121℃湿热灭菌20min。
复筛培养基B：CMC 10g、Na2HP04 1.25g、KH2P040.75g、MgSO4·7H2O 0.1g、蛋白胨1.25g、酵母膏O.25g、蒸馏水500mL、琼脂10g，pH自然，121℃灭菌20min。
2.2.2试剂配制1％刚果红试剂：称取刚果红试剂1g于干净的小烧杯中，用量筒量取蒸馏水100ml使之溶解，过滤，贮于棕色试剂瓶中。
2.3方法2.3.1初筛的方法步骤(1)配初筛培养基A，灭菌，倒平板。
(2)用稀释涂平板的方法分离纤维素分解菌。
稀释涂布平板法步骤：A．倒平板将配好的琼脂培养基溶化，待冷至55—600C时，用右手持盛培养基的三角烧瓶，置火焰旁边，左手拿平皿并松动瓶盖，用手掌边缘和小指、无名指夹住拔出，瓶口在火焰上灭菌，然后左手将培养皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基约15ml，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布，平置于桌面上，待冷凝后即成平板。
纤维素酶的生产工艺纤维素酶是一类能够降解纤维素的酶，可以将纤维素聚合物高效地水解为低聚糖和纤维素寡聚体，具有广泛的应用前景，如生物能源、食品酿造、纺织品加工等领域。
纤维素酶的生产工艺主要分为传统液体培养法和固体表面培养法两种方式。
1. 传统液体培养法：传统液体培养法是指利用液体培养基培养酶菌生产。
该工艺的主要步骤如下：（1）菌种培养：通过对纤维素酶产生菌株的定向筛选和培养，得到高效纤维素酶产生菌株作为菌种。
（2）种子培养：将该菌株接种到适当的种子培养基中，进行预培养，使菌株扩大至一定数量。
（3）发酵过程：将预培养培养液转移到发酵罐中，并加入适宜的培养基，控制发酵条件，如温度、pH、氧气、搅拌速度等，进行酶的产生培养。
（4）酶的分离与提纯：通过酶的沉淀、过滤、分离、浓缩等工艺，将发酵液中的酶分离出来，并进行纯化和浓缩，得到纯净的纤维素酶制剂。
2. 固体表面培养法：固体表面培养法是指利用固体基质作为酶菌的培养基进行酶的生产。
该工艺通常采用固体床培养、滤膜固定化培养和生物反应器培养等方式。
以下以固体床培养为例进行说明：（1）底物预处理：将固体底物（如纤维素）进行预处理，如磨碎、脱色、糖化等，使其成为更易于菌株附着和生长的底物。
（2）菌种接种：将菌株接种到预处理后的固体底物表面，使其附着和生长。
（3）固体床培养：控制好培养条件，如温度、湿度、通气速度等，使菌株在固体底物表面繁殖和产酶。
（4）酶的回收：通过洗涤、离心或其他方法将固体底物与酶分离，得到纯净的酶制剂。
与传统液体培养法相比，固体表面培养法具有操作简单、反应过程稳定、培养基和酶制剂的产量较高等优点。
由于纤维素酶的产生需要与固体底物接触，因此固体表面培养法特别适用于利用废弃物纤维素进行纤维素酶生产的工艺。
总之，纤维素酶的生产工艺根据不同的应用需求和底物来源，选择合适的培养方法和操作条件，可通过传统液体培养法或固体表面培养法进行。
随着科技的发展和生物工程技术的进步，纤维素酶的生产工艺也在不断创新和改进，有望实现更高效、更经济的纤维素酶制备。
纤维素酶的生产工艺纤维素酶是一种能够分解纤维素的酶类，具有重要的工业应用价值。
纤维素酶的生产工艺包括菌种选育、发酵及提取纯化等关键步骤，下面将详细介绍纤维素酶的生产工艺。
首先，菌种选育是纤维素酶生产的第一步。
通过筛选和优化培养基，选择出高纤维素酶产量的菌株。
常用的纤维素酶产生菌株有波形菌、木霉菌和酿酒酵母等。
菌种选育的关键是选用适合产酶的菌株，并通过优化培养条件提高其产酶能力。
其次，发酵是纤维素酶生产的核心环节。
在发酵过程中，需要使用适当的培养基和优化的培养条件来促进菌株产酶。
一般来说，纤维素酶的发酵培养基由碳源、氮源、矿盐和调节因子等组成。
常用的碳源有纤维素、纤维素水解物和木质素等。
氮源可以选用蛋白质类物质，如小麦麸、大豆粉等。
矿盐和调节因子的添加能够提供微量元素和调节酵素活性。
发酵过程中，温度、pH值、氧气供应和搅拌速度等因素对纤维素酶产率和品质都有一定的影响。
一般来说，合适的发酵温度可以提高纤维素酶活性，一般控制在30-37摄氏度之间。
pH值的调节能够影响酵素的稳定性和活性，一般来说，纤维素酶的产酶pH值为4.5-6.0。
氧气供应和搅拌速度的调节能够改善酵素产量和分布均匀性。
最后，提取纯化是纤维素酶生产的最后一步。
通过离心、超滤和柱层析等技术，将发酵液中的纤维素酶分离纯化。
离心可以去除菌体和固体颗粒等杂质，超滤可以去除大分子物质和溶液中的杂质。
柱层析则是根据酶的特性和亲和性选择性吸附和洗脱，以获得高纯度的酶制剂。
综上所述，纤维素酶的生产工艺包括菌种选育、发酵及提取纯化三个关键步骤。
这些工艺的优化和提高可以提高纤维素酶的产量和品质，进一步推动纤维素酶的工业应用。
纤维素酶在生物质转化、饲料添加剂和纺织等领域具有广阔的市场前景。
纤维素酶的酶处理工艺探讨纤维素酶处理工艺是一种可以发挥纤维素酶在食品加工中的应用技术。
它主要是利用足够的纤维素酶激活和处理从纤维素材料中提取的多种生物活性成分。
以下是纤维素酶处理工艺的简要介绍：一、纤维素酶前处理：1. 酸提取工艺：使用酸性环境下的特定水溶液（如硫酸），进行纤维素分子的破解和溶解，以得到纤维素分子本身和其他有机物；2. 热液化工艺：在高温和高压环境中应用高压煮沸装置，进行热液化处理，使纤维素分子脱脂，从而可以方便的提取有价值的成分；3. 超声波法：利用超声波仪器在环境下，进行纤维素分子的溶解和分离，分离出的可以用于进一步的分析及分离；4. 其它：如油脂抽出法、醇溶法等，也可以用于纤维素酶前处理。
二、纤维素酶处理蛋白质：1. 酶解工艺：使用特定的淀粉酶（例如酶株A）和蛋白酶（例如蛋白酶株B），分别对植物性纤维素材料和蛋白质进行酶解，以得到多种水溶性蛋白；2. 冷解工艺：将得到的蛋白酶继续使用，进行冷解处理；3. 双重酶处理工艺：同时使用植物多肽酶和蛋白酶，以实现多功能性的酶处理；4. 微波处理：通过微波处理可以更快捷有效的完成蛋白质酶处理；5. 其它：如固相萃取（SPE）技术等，也可以用于酶处理蛋白质。
三、纤维素酶处理糖：1. 酶解处理：使用植物特异性β-葡萄糖苷酶，进行植物性纤维素物质的酶解，以提取多种有价值的糖类物质；2. 生物反应器处理：利用生物反应器的格栅强化纤维素糖的提取，从而可以大大提高糖的提取效率；3. 超声波法：是一种快速有效的纤维素糖溶解方法，迅速分解纤维素成分中的有机物，再利用筛选技术，可以提取出多次高品质的纤维素糖；4. 其它：如解分离酶处理技术等，也可以用于纤维素酶处理糖。
以上是关于纤维素酶处理工艺的介绍。
它是一项非常有用的技术，可以从纤维素萃取中生物活性成分的生产级的技术，为食品加工行业的发展做出了重要的贡献。
纤维素酶的生产工艺及分离提纯姓名：朱帅帅学号：201404015024 四院三连通信工程摘要：纤维素酶是一种重要的酶产品，是一种复合酶，主要由外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等组成，还有很高活力的木聚糖酶。
由于纤维素酶在饲料、酒精、纺织和食品等领域具有巨大的市场潜力，已被国内外业内人士看好，将是继糖化酶、淀粉酶和蛋白酶之后的第四大工业酶种，甚至在中国完全有可能成为第一大酶种，因此纤维素酶是酶制剂工业中的一个新的增长点。
是可以将纤维素分解成寡糖或单糖的蛋白质。
关键词：发酵法；盐析法；凝胶过滤；离子交换层析；电泳Abstract：Cellulase is an important enzyme products, a complex enzyme, mainly by the exo-β-glucanase, endo-β-glucanase and β-glucosidase and other components, there are very high energy Xylanase. Because cellulase has great market potential in the fields of feed, alcohol, textile and food, it has been regarded as the fourth largest industrial enzyme after saccharifying enzyme, amylase and protease, even in China it is entirely possible to become the largest enzyme species, so the enzyme enzyme industry is a new growth point. Is a protein that can decompose cellulose into oligosaccharides or monosaccharides.Keywords:Fermentation, Salting out, Gel filtration, Ion exchange chromatography, Electrophoresis.一、纤维素酶的概述纤维素酶是一种对纤维素大分子的水解具有特殊催化作用的活性蛋白质，它是一组酶的总称，不是单成分酶，而是由多个酶起协同作用的多酶体系。
其外观为灰白色的无定形粉末或液体，最适作用温度为40℃~55℃，反应最适PH值为4.0~6.0，在40℃~70℃以下稳定存在，溶于水，几乎不溶于乙醇、乙醚和氯仿等有机溶剂。
该酶催化效率高，比一般酶高106~107倍。
自1906年Seillere在蜗牛的消化液中发现纤维素酶至今已有一百余年了，现在纤维素酶已被广泛应用于食品、酿酒、饲料加工、纺织、洗衣、农业等多个领域[1]。
食品方面，纤维素酶被应用于果实和蔬菜加工、油料作物加工、茶叶加工、酒精生产、啤酒生产、食醋酿造、酱油酿造等生产工艺。
在饲料工业中，纤维素酶用来制备低纤维饲料、饲料酶制剂、水解植物纤维生产饲料酵母。
在纺织工业中，纤维素酶被用于纤维改性，真丝脱胶，染整的退浆、精炼、整理加工等方面。
纤维素酶还被用于解决“白色污染”问题。
纤维素酶用于造纸工业，利用外切纤维素酶只从末端切断纤维素的作用原理，可以提高纸张的光洁度。
[2]纤维素酶在自然界分布极为广泛，昆虫、软体动物、高等植物、细菌、放线菌和真菌都能产生纤维素酶[3]。
反刍动物的瘤胃以及猪大肠也有分解纤维素的细菌存在。
纤维素酶的来源主要有三方面：植物、动物和微生物。
纤维素酶虽然在植物中广泛存在，且在植物发育的某些阶段发挥着水解细胞壁的作用，如果实成熟、蒂柄脱落等，但从植物中提取纤维素酶比较困难，且含量不高。
很多食木性的动物及食草动物之所以可以以植物为食物来源，主要是因为其体内存在内源性的纤维素酶，但是依靠这类动物来进行工业化大规模生产也比较困难。
工业化纤维素酶的生产主要采用微生物来进行。
据不完全统计，20世纪60年代以来国内外共记录了产纤维素酶的菌株大约有53个属的几千个菌种。
由于放线菌纤维素酶的产量极低，所以研究很少。
细菌纤维素酶产量也不高，主要是葡聚糖内切酶，大多数对结晶纤维素没有降解活性，且所产生的酶是胞内酶或吸附在细胞壁上，不分泌到培养液中，增加了提取纯化的难度，所以工业上很少采用细菌作为生产菌株。
目前用于生产纤维素酶的微生物较多的是丝状真菌，其中酶活力较强的菌种为木霉、曲霉、根霉和青霉，以木霉属菌种居多，较为典型的有里氏木霉、绿色木霉、康氏、木霉。
二、纤维素酶的生产方法1、固体发酵法固体发酵法以玉米、稻草等植物秸秆为主要原料生产纤维素酶。
该法投资少，工艺简单，产品价格低廉。
然而固体发酵法存在着根本上的缺陷——不可能像液体发酵那样随着规模的扩大，大幅度降低成本。
以秸秆为原料的固体发酵法生产的纤维素酶很难提取和精制。
目前生产厂家只能采用直接干燥、粉碎来得到固体酶制剂，或用水浸泡后压滤得到液体酶制剂，产品外观粗糙，质量不稳定，杂质含量高；劳动强度大、生产效率低；易污染杂菌。
国内外对木霉纤维素酶的研究较多，但木霉一方面毒性大，使之应用受到限制；另一方面普遍存在着β-葡萄糖昔酶活力偏低的缺陷，致使纤维二糖积累，影响了酶解效率。
2、液体发酵法液体发酵生产时，将原料送入发酵罐内发酵，同时接入纤维素酶菌种。
发酵过程中，需要从发酵罐底部通入无菌空气对物料进行气流搅拌，发酵完后的物料经过处理可得到纤维素酶产品。
液体发酵法生产纤维素酶，原料利用率高，生产条件易控制、产量高、劳动强度小、产品质量稳定，但动力消耗大，设备要求高。
液体深层发酵的方法具有培养条件容易控制，不易染菌，生产效率高等特点。
因此，目前此方法是大规模生产的可行方法。
其生产工艺过程是将玉米秸秆粉碎至20目以下，进行灭菌处理后，送发酵釜内发酵，同时加入纤维素酶菌种，发酵时间约为70 h，控制温度低于60℃，将净化后的无菌空气从釜底通入，进行物料的气流搅拌，发酵完的物料经压滤机压滤、超滤浓缩、喷雾干燥，制得纤维素酶产品。
三、纤维素酶的分离纯化纤维素酶的组分大多为糖蛋白，工业上用于生产纤维素酶的粗酶制剂常采用硫酸铵沉淀法、酒精沉淀法、丹宁沉淀法和离心喷雾干燥等方法。
但在纤维素酶分析研究上主要采用一系列蛋白质分离纯化技术，如分级沉淀、色谱法、电泳法等。
目前，对粗酶的提取大多采用硫酸桉分级沉淀法；对酶活力的测定国际上一般采用Horikoshi方法；对蛋白质的测定按考马斯亮蓝(Bradford)法；还原糖的测定采用３,５一二硝基水杨酸(DNS)法。
以下介绍一些常用的纯化方法：1.盐析法：盐析法就是在溶液中加入中性盐使各种蛋白质依次分别沉淀的方法。
其原理是根据蛋白质在溶液中由于表面带电的氨基酸残基与溶剂分子(H20)相互作用，所以能保持溶解状态，当加入盐离子时，蛋白质分子周围所带电荷增加，促进了与溶剂分子的相互作用，使溶解度增加，此现象称为盐溶，在盐浓度较低时以这种情形为主；但当盐浓度继续增加达到一限量，大量盐离子使水浓度相对降低，蛋白质的水化作用减弱，相互凝聚而沉淀下来，称为盐析。
选择一定浓度范围的盐(如0～25％饱和度硫酸铵)使杂质蛋白沉淀而有效成分呈盐溶状态，经离心分离得到上清液后，再选择一定浓度范围的盐溶液使有效成分等物质呈盐析状态而另一部分杂质呈盐溶状态，用离心法收集的沉淀物即为初步纯化的有效成分物质。
此法是蛋白质进行分级沉淀时常用操作步骤，常选用的盐是硫酸铵。
2.凝胶过滤：凝胶过滤又叫分子筛层析，是利用分子筛效应分离纯化生物大分子和测定其分子量及样品脱盐的一种色谱方法。
凝胶过滤层析所用的基质是具有立体网状结构、筛孔直径一致的球状颗粒。
这种物质可以完全或部分排阻某些大分子物质，而不能排阻某些小分子化合物。
当样品进入色谱柱时，由于被分离物质的分子质量不同。
较大的分予不能通过孔道进入凝胶颗粒的微孔内部，与流动相一起先流出色谱柱；分子质量小的物质可通过部分孔道，更小的分子可通过任意孔道进入珠体内部。
这样小分子向下流动的速度必然比大分子慢，结果是分子质量大的物质先从柱中流出，分子质量小的则后从柱中流出而达到分离的目的。
凝胶过滤具有设备简单、操作方便、重复性好及样品回收率高等特点，所以该方法除了常用于分离纯化蛋白质，核酸、多糖、激素、氨基酸和抗生素等物质外，还可测定蛋白质的分子量、样品浓缩和脱盐等方面。
3.离子交换层析：离子交换层析是根据物质所带电荷的差别进行分离纯化的方法。
离子交换剂以纤维素、葡聚糖凝胶等不溶性物质为母体，通过酯化、醚化或氧化等化学反应，引入阳性或阴性离子的特殊制剂，可与带相反电荷的化学物质进行交换吸附。
对于呈两性离子的蛋白质、酶类、多肽等物质与离子交换剂的结合力，取决于它们的物理化学性质和特定pH条件下呈现的离子状态。
当pH低于等电点(pI)时，被阳离子交换剂吸附；反之被阴离子交换剂吸附。
对于呈胶体状态的大分子物质一般使用选择性好的弱酸性离子交换剂。
离子交换层析法是常用的层析方法之一，广泛应用于多种生化物质的分析、制备、纯化等。
4.电泳：电泳是带电颗粒在电场作用下，向着与其电荷相反的电极移动的现象。
当把一个带净电荷的颗粒放入电场时，就会受到电场力的作用，带电颗粒在电场中向一定方向泳动，速度与电场强度和带电颗粒的净电荷量成正比，与颗粒半径和黏度成反比。
当颗粒是两性电介质性质的蛋白质分子时，它在一定pH溶液中电荷量是独特的。
由于不同的蛋白质等电点和分子量是不同的，因此经泳动后就形成了泳动度不同的区带。
利用此性质，可以将混合液中不同的蛋白质区分开，同时也可以对其纯度进行测定。
现在电泳法已成为开展生物化学和分子生物学研究的必不可少的常规工具。
参考文献：[1] 高论江，董全《纤维素酶的研究进展及前景展望》2007，4.[2] 顾方媛，陈朝银《纤维素酶的研究进展及发展趋势》2008，28[3] 刘小杰，何国庆《纤维素发酵培养基的优化》2003，37[4]邱雁临主编《纤维素酶的研究和应用前景》，粮食与饲料科技出版，2001[5]宋桂经主编《纤维素科学与技术》，广西人学学报出版，2004[6]俞俊棠主编《生物工艺学》，化学工业出版社，2003[7]肖春玲主编《微生物纤维素酶的应用研究》，微生物学杂志，2002A.内容说明：本文与第四章能量与代谢第二节生物催化剂——酶的内容相关，阐述了纤维素酶的生产工艺及分离提纯。
B.对课程内容和教学方式的意见和建议我觉得课程内容较多，课时又较少，所以上课速度过快，可以选择一些章节让大家自学，然后着重讲解一些关键的章节。
