甘露醇的含量测定

重组人粒细胞刺激因子注射液甘露醇含量测定摘要：目的建立重组人粒细胞刺激因子注射液（rhG-CSF）甘露醇含量测定方法，并进行验证。

方法采用比色法测定重组人粒细胞刺激因子注射液(rhG-CSF）中甘露醇含量。

结果重组人粒细胞刺激因子注射液(rhG-CSF）中甘露醇含量与其相应的吸光度呈线性关系，线性范围为30-70μg/ml，回收率为95%-105%，重复性RSD≤5%，中间精密度RSD≤5%，耐用性RSD≤5%。

结论用比色法测定重组人粒细胞刺激因子注射液(rhG-CSF）中的甘露醇含量，简单快捷，回收率高，重现性好及专属性好，耐用性高，可用于测定重组人粒细胞刺激因子注射液(rhG-CSF）中的甘露醇含量。

关键词: 重组人粒细胞刺激因子注射液；甘露醇含量；比色法。

重组人粒细胞刺激因子注射液（rhG-CSF），通用名非格司亭（filgrastim）,是采用基因重组技术生产的重组蛋白质药物，其主要用于因癌症化疗等原因造成的中粒细胞减少症[1]。

《中国药典》2015版中没有规定其甘露醇含量的测定方法，因此为了更好的控制产品质量，按照验证指南的要求[2]-【3】，初步建立了重组人粒细胞刺激因子注射液（rhG-CSF）甘露醇含量测定方法，并对其进行验证。

1 仪器试剂1.1紫外分光光度计（PE Lambda25）1.2 试剂配制1.2.1 0.1mg/ml甘露醇标准溶液：精密称取甘露醇标准品50mg，溶于注射用水中，定容至50ml，得到1mg/ml的甘露醇标准溶液，临用前稀释至0.1mg/ml。

1.2.2 显色剂：0.015mol/L高碘酸钠溶液：称取高碘酸钠3.2g，溶于0.12mol/L 盐酸溶液，定容至1000ml。

1.2.3 0.1%L-鼠李糖溶液：称取1g鼠李糖，溶于注射用水中，定容至1000ml。

1.2.4 Nash试剂：取150g醋酸铵，2ml冰醋酸，2ml乙酰丙酮，用注射用水稀释至1000ml,临用前配制。

质量标准文件编号页码共3页第1页文件名称甘露醇质量标准版次01制定人制定日期审核人审核日期批准人批准日期颁发部门GMP办公室颁发日期执行部门质管部、供应部、生产部、仓储部生效日期分发部门：GMP办公室、质管部、供应部、生产部、仓储部取代：【药品名称】甘露醇【产品代号】【依据】中国药典2015年版二部（P124）、中国药典2015年版四部通则本品为D－甘露糖醇。

按干燥品计算，含C6H14O6应为98.0％～102.0％。

【性状】本品为白色结晶或结晶性粉末；无臭。

本品在水中易溶，在乙醇中略溶，在乙醚中几乎不溶。

熔点本品的熔点（中国药典2015年版四部通则0612）为166～170℃。

比旋度取本品约1g，精密称定，置100ml量瓶中，加钼酸铵溶液（1→10）40ml,再加入0.5mol/L的硫酸溶液20ml,用水稀释至刻度,摇匀,在25℃时依法检查（中国药典2015年版四部通则0621）,比旋度为+1370～+1450。

【鉴别】（1）取本品的饱和水溶液1ml，加三氯化铁试液与氢氧化钠试液各0.5ml，即生成棕黄色沉淀，振摇不消失；滴加过量的氢氧化钠试液，即溶解成棕色溶液。

（2）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集1238图）一致。

【检查】酸度取本品5.0g，加水50ml溶解后，加酚酞指示液3滴与氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）0.30ml，应显粉红色。

溶液的澄清度与颜色取本品1.5g，加水10ml溶解后，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液（中国药典2015年版四部通则0902第一法）比较，不得更浓。

有关物质取本品，加水溶解并稀释制成每1ml中含50mg的溶液，作为供试品溶液；质量标准文件编号页码共3页第2页文件名称甘露醇质量标准版次01精密量取1ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，作为对照溶液；另取甘露醇与山梨醇各0.5g，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，作为系统适用性试验溶液。

甘露醇检测
甘露醇（Mannitol），又称为D-甘露醇、D-甘露糖醇，是山梨糖醇的同分异构体，两种醇类物质的二号碳原子上羟基朝向不同，广泛应用于医药、食品、工业等领域。

迪信泰检测平台采用高效液相色谱(HPLC)和生化法，可高效、精准的检测甘露醇的含量变化。

对于稀有的糖代谢物，如提供标准样品，迪信泰检测平台可提供定制检测。

对于无法用HPLC检测的样品，迪信泰检测平台可提供定制检测或试剂盒代测定服务。

此外，我们还提供其他糖代谢物检测服务，以满足您的不同需求。

样品制备
糖代谢物提取方法（此部分涉及到公司的核心工艺，以下提供常规的提取工艺）
1）称取500 mg的固体样品；
2）加入5 mL去离子水；
3）超声处理30 min；
4）取2 mL，用乙腈定容至10 mL；
5）用HPLC-ELSD检测。

HPLC测定甘露醇样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。

周期：2~3周
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）
2. 相关质谱参数（中英文）
3. 质谱图片
4. 原始数据
5. 甘露醇含量信息
迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。

HPLC糖代谢物测定项目样本报告，点击查看>。

HPLC-ELSD法测定甘露醇注射液中甘露醇的含量张建业;冯向东【摘要】目的建立甘露醇注射液中甘露醇的含量测定方法.方法采用HPLC法,使用氨基柱,流动相为乙腈-水(83:17);ELSD漂移管温度70℃:氮气流速2.0L/min:柱温30℃.【期刊名称】《中国中医药现代远程教育》【年(卷),期】2010(000)018【总页数】2页(P241-242)【关键词】HPLC-ELSD;甘露醇注射液;甘露醇【作者】张建业;冯向东【作者单位】河南省南阳市食品药品检验所,473061;河南省南阳市食品药品检验所,473061【正文语种】中文【中图分类】R9甘露醇注射液是一种常用的渗透性脱水药，因其起效快，作用持久，用后无明显“反跳现象”，为治疗脑水肿的首选药，临床使用量较大。

2005年版《中国药典》收载的该品种含量测定方法是氧化还原滴定法，2010年版中国药典采用示差折光高效液相色谱法测该制剂的含量，色谱柱采用强阳离子交换柱，因示差折光检测器目前还不普及，所以限制了该方法的应用。

本文参考文献[1]，用高效液相色谱法，采用氨基柱，配合蒸发光散射检测器，对甘露醇注射液中甘露醇进行了测定，结果较满意。

Waters 2695高效液相色谱仪，Waters 2424 蒸发光散射检测器；Empower Two色谱管理软件；乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂为分析纯；甘露醇对照品、山梨醇对照品购自中检所（批号100534-200301、100555-200306），甘露醇由市场购得（河南华利药业有限公司规格250ml:50g）。

2.1 色谱条件色谱柱：Thermo 氨基柱（4.6mm×200mm粒径5μm）；流动相为乙腈-水(83:17 )；流速1.0ml/min；柱温30℃；ELSD漂移管温度70℃；氮气流速2.0L/min；进样量15μl，甘露醇峰理论塔板数不低于4000。

2.2 供试品溶液制备精密量取本品1ml，移至100ml容量瓶中，流动相加至刻度，摇匀，精密量取5ml移至50ml容量瓶中，流动相加至刻度，摇匀。