月季组织培养

月季或雏菊的组培快繁实验报告月季组培月季植物组织培养实验报告姓名：张恒玉（天津师范大学 10生乙）摘要：月季（Floribunda roses）为蔷薇科蔷薇属木本植物, 其花姿优美，花型丰富，花色齐备, 树型易修剪，栽培难度小;其花型大，美丽，幽雅，高贵。

在鲜花应用中，月季花的地位和比重与日俱增,是世界上著名的四大切花之一。

植物组织培养主要以绿色植物细胞或组织块为研究主要对象，把植物体上的生活器官、组织块活细胞从整体上离体下来进行人工培养。

以细胞全能性为理论基础对最适月季培养的培养基、激素、培养基质进行筛选，使离体组织经过脱分化和再分化而发育成新的植物个体。

为月季的快繁和新品种的选育提供了新的途径，在月季的改良上显示了很大的应用潜力。

关键词：月季组织培养Rose Plant Tissue Culture Lab ReportName: ZhangHengyu（Tianjin Normal University college of Life Science, Biological Sciences ）Abstract: Rose (Floribunda roses) for the woody Rosaceae Rosa, the beautiful flower position, abundant flowers, colors ailable, easy to trim the tree, planting all difficulty; its flowers large, beautiful, elegant, noble. Applications in the flowers, the status and the proportion rose growing is the world's leading one of the four cut flowers. Plant Tissue Culture main object of the green plant cells or tissue blocks for research, Of life on the plant organ, tissue block living cells isolated from the whole down the artificial culture, Cell totipotency theory based on the optimum rose culture medium, hormones, culture media filter, Isolated tissue and develop into new individual plants after dedifferentiation and redifferentiation. breeding of new varieties offer a new way, in the rose show a significant improvement potential applications.Keywords: Rose tissue culture1 月季介绍第1页下一页。

月季的组培实践1.1 实验材料月季。

1.2 材料处理月季枝条在自来水下冲洗干净, 用75%乙醇表面消毒30–40秒, 再用0.1%HgCl 2溶液灭菌2–6分钟, 无菌水冲洗3–5次。

在无菌条件下将叶片、叶柄和茎段剪成0.5 cm见方的小块或1 cm的小段, 并露出新鲜伤口。

培养瓶开口于酒精灯火焰处，接种于诱导愈伤组织培养基上2 培养基成分与培养条件2.1 培养基及培养条件(1) 诱导愈伤组织和不定芽均以MS培养基为基础.培养基诱导愈伤组织的最佳培养基配比为1.0 mg·L–16-BA+3.0 mg·L–12,4-D(2) 诱导不定芽产生的植物生长调节剂配比1.0 mg²L–1 6-BA+0.1 mg·L–1NAA+0.02 mg·L–1TDZ(3) 1/4MS+0.1 mg·L–1NAA为生根培养基.(含30 g²L–1蔗糖和7.0 g²L–1琼脂, pH 5.8–6.2), 并于121°C高压蒸汽灭菌25分钟。

培养条件为(25±2)°C, 每天16小时光照, 光照强度为40 μmol²m–2²s–1。

2.2 愈伤组织诱导选取经处理的外植体接种于不同激素配比(表1)的MS培养基上进行愈伤组织诱导。

定期观察, 3–4周继代1次。

2.3 不定芽的诱导和增殖外植体在愈伤组织诱导培养基上培养30天后, 挑选长势良好的愈伤组织, 接种yu配比植物生长调节剂的培养基中进行不定芽诱导.2.4 生根诱导将长势良好的再生苗移植到生根培养基上诱导生根.2.5 移栽炼苗将再生根生长状况良好的微型月季幼苗取出, 用流水缓慢地将根部残留的培养基冲洗干净(注意不要伤及根部), 移栽至土壤中炼苗1–7天。

目录摘要 (4)前言 (4)综述 (5)1．外植体 (5)1.1取材部位1.2取材时间1.3取材大小2. 消毒 (8)3. 接种方式 (8)4.培养基 (9)4.1基本培养基4.2激素4.2.1不同激素对诱导愈伤组织的影响4.2.2不同激素对继代培养的影响4.2.3不同激素对生根培养的影响4.3糖浓度的影响4.4无机盐4.5琼脂5.培养基的配置 (13)6.培养条件 (14)7．防褐化 (14)技术路线与实验设计 (15)参考文献 (17)摘要：为了进行月季组织培养实验，我们查阅了相关文献，从多个方面了解影响月季组织培养的因素，如外植体的取材部位、时间、大小、消毒、接种方式、不同阶段激素的配比、培养基成分、培养条件等，以期在实验中调控月季组培的环境，确保实验顺利进行。

基于我们想探究激素对组织培养中细胞的脱分化和再分化的作用这一想法，我们的设计了以ＮＡＡ浓度、６ＢＡ浓度、外植体部位为影响因素的正交实验（L9（3４）），并考察NAA与6BA的交互作用。

同时，我们还以接种方式作为单因素考察其对愈伤组织诱导的影响。

关键词：组织培养、影响因素、正交前言在阅读了植物组织培养的相关文献资料后，我们设计了此次组织培养实验方案，考察细胞分裂素浓度、生长素浓度、接种方式、取材部位因素对愈伤组织的形成有何影响，期望寻找出诱导月季愈伤组织的最佳条件；同时探究由愈伤组织诱导出芽及生根所需的最佳浓度配比。

并在月季组织培养过程中，掌握外植体消毒方面要注意的事项，整个培养过程中培养条件的选取与控制，实验过程中出现的现象的观察记录以及分析，在这个过程中不断加强理论与实践的联系，深化对理论知识的理解。

对于外植体选择，我们采用了以往研究者的做法，即选用带腋芽的枝条。

但是，我们的不同之处在于，我们还保留了一部分刚好能包裹住腋芽的叶柄。

这样做的目的是为了在消毒时避免芽受到太大损伤。

参考论文中防褐化多用抗氧化剂和其他抑制剂，减轻外植体在组培中的酶促褐变，我们根据生理生化原理，考虑到酶活性与温度有关、以及外植体内的酚类物质含量有关，因此需对外植体做如下处理：接种前先将外植体用低温水流冲洗24小时；选择晴朗天气采摘外植体。

月季组织培养分组：12级生技2班3组指导老师：韩文军成员：成晨，江应龙，牟思斯，盛威摘要了解月季组织培养的研究概况，以及组织培养中遇到的相关问题的研究。

外植体的选择为月季枝条，灭菌用75%酒精和10%次氯酸钠，初代培养基为MS+BA 1mg/L，继代培养基为MS+BA1.5mg/L 十N A A 0.05m g/ L。

引言月季是中国十大名花之一，被誉为“花中皇后”，具有极高的观赏价值和商业价值①它是蔷薇科蔷薇属多年生落叶或常绿灌木②，被广泛运用于园林绿化，具有很高的观赏价值和经济价值。

目前月季的繁殖手段除了传统的扦插、嫁接、压条之外，还有月季的组织培养技术，相对前面几种方法来说，月季的组织培养技术能大幅地提高获得月季植株的速度和质量，正越来越被广泛地运用到实际生产中。

一方面，组织培养可有效地保持母株的优良性状；另一方面，它对植物品种改良和选育新品种也有重要意义③。

0实验流程外植体处理→初代培养→继代培养→生根培养→壮苗炼苗→移栽1外植体的选择和灭菌1.1外植体的选择月季组培外植体通常采用带芽茎段。

同一枝条上不同部位的腋芽诱导效果不同。

取枝条中部的腋芽效果最好，这可能与月季枝条不同部位的腋芽成熟程度及休眠状态不同等因素有关。

很多研究都证明枝条中部的腋芽萌发较顶部和基部时间早，且中部的腋芽长势好，增殖系数高，其次是基部，再次是顶部④-⑥。

另外，取材时也注意天气的选择，根据几次初代培养的结果来看，天气晴好时取材初代培养的成功率要比阴雨天要高，具体原因可能是阴雨天植物的外植体带菌比较多，杀菌不彻底从而使培养失败。

此外，外植体的休眠状态对芽的萌发也有影响，李青等⑦采用1 年生枝条的冬芽和当年生枝条的腋芽为外植体进行比较，发现越冬芽较嫩枝条的芽成活率高，且萌动所需时间较短，主要原因是芽内积累了丰富的营养物质，在适宜的条件下很快萌发生长；而春季嫩枝上的芽，由于刚刚形成且未经休眠，所以本身较弱，但越冬芽污染率高于嫩枝芽。

月季组织培养培养基配方1. 介绍月季是一种常见的花卉植物，广泛应用于观赏园艺领域。

在月季繁殖和培养过程中，培养基配方起着至关重要的作用。

本文将深入探讨月季组织培养培养基配方的要点和方法。

2. 月季组织培养的意义月季组织培养是繁殖月季的一种重要方法。

通过无菌培养、组织再生和快速繁殖，可以大量繁殖优良品种，并用于育种和病毒检测等研究。

因此，合理的培养基配方对月季组织培养的成功至关重要。

3. 月季组织培养培养基的成分月季组织培养培养基的成分包括植物激素、糖类、无机盐和其他添加剂。

3.1 植物激素植物激素在月季组织培养中起到调节生长和分化的作用。

常用的激素包括生长素、细胞分裂素和愈伤组织激素。

它们的浓度和比例对培养基的效果有着重要影响。

3.2 糖类糖类是提供能量和碳源的重要成分。

常用的糖类包括蔗糖、葡萄糖和半乳糖。

不同的月季品种和培养阶段对糖类的需求不同，需要根据具体情况进行调整。

3.3 无机盐无机盐是提供植物所需微量元素的重要来源。

常用的无机盐包括氮、磷、钾等。

它们的浓度和比例需要根据培养阶段的需求进行合理调整。

3.4 其他添加剂除了植物激素、糖类和无机盐外，还可以添加一些其他的添加剂来增强培养基的效果，例如维生素、抗生素、染料等。

这些添加剂的使用需要根据具体实验目的和需求来决定。

4. 月季组织培养培养基配方的优化方法优化月季组织培养培养基配方可以提高培养成功率和培养体系的稳定性。

4.1 脱菌方法月季组织培养需要在无菌条件下进行，因此脱菌方法是非常重要的。

常用的脱菌方法包括酒精消毒、高压蒸汽灭菌和紫外线照射等。

不同的方法有各自的特点和适用范围，需要根据实际情况选择合适的脱菌方法。

4.2 成分优化成分优化是指根据具体需求对培养基的成分进行调整和优化。

通过改变植物激素、糖类和无机盐的浓度和比例，可以提高培养基的适用性和培养效果。

4.3 pH值调节月季对培养基的pH值敏感，过高或过低的pH值都会影响生长和分化。

月季组织培养培养基配方月季组织培养是一种无性繁殖技术，可以通过组织培养的方式获得大量的相同基因型的植株。

而培养基则是月季组织培养中不可或缺的一部分，它提供了植物生长所需的营养和生长因子。

本文将介绍月季组织培养中常用的培养基配方。

一、基础培养基1. MS 培养基MS 培养基是由 Murashige 和 Skoog 在 1962 年开发出来的一种广泛使用的无机盐类和生长因子混合物。

这种培养基含有氮、磷、钾等元素以及多种微量元素和生长因子，可以促进植物体外生长。

对于月季来说，MS 培养基是最常用的一种。

2. B5 培养基B5 培养基是 Gamborg 等人在 1968 年开发出来的另一种无机盐类和生长因子混合物。

与 MS 培养基相比，B5 培养基中含有更高浓度的硝酸盐和钙离子，适合于某些需要高硝酸盐和钙离子的植物生长。

二、添加剂1. 植物生长素植物生长素是一种植物内源性激素，可以促进细胞分裂和伸展。

在月季组织培养中，常用的植物生长素包括吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）和半胱氨酸（2,4-D）等。

它们可以促进月季愈伤组织的形成和分化。

2. 细胞分裂素细胞分裂素是一种植物内源性激素，可以促进细胞分裂。

在月季组织培养中，常用的细胞分裂素包括腺苷酸（BA）、基因催化剂（KT）等。

它们可以促进月季愈伤组织的增殖。

3. 抗生素抗生素是一种可以抑制或杀死微生物的化合物。

在月季组织培养中，常用的抗生素包括青霉素、链霉素、卡那霉素等。

它们可以防止由于污染而引起的愈伤组织感染。

三、常用的月季组织培养基配方1. MS 培养基配方成分每升MS 盐类 4.43 g蔗糖 30 g吲哚乙酸（IAA） 0.1 mg腺苷酸（BA） 0.5 mg琼脂 7 gpH 值 5.82. B5 培养基配方成分每升B5 盐类 4.3 g蔗糖 30 g吲哚乙酸（IAA） 0.1 mg腺苷酸（BA） 0.5 mg琼脂 7 gpH 值 5.8以上两种培养基配方仅供参考，不同的月季品种和不同的实验目的需要不同的培养基配方。

月季如何组织培养月季属蔷薇科蔷薇属多年生草本植物，每年多次开花，而且香味怡人，在观赏植物中地位很高，分布极广，适应性强，栽培容易，使得月季无愧于“花中皇后”之美誉，随着组织培养技术的应用，成功培育了大量优质月季组培苗，那月季如何组织培养呢?以下是小编为你整理的月季组织培养技术，希望能帮到你。

无菌培养的建立(1)选条从中国一级科研机构引进6个月季优良品种，分别是“红双喜”、“白雪山”、“彩云”、“和平”、“皇冠”、“金丝鸟”。

选取生长健壮的当年生枝条，用饱满而未萌发的侧芽作为外植体。

以枝条中段芽最好，因为接种后，中段芽第5天左右就能萌发，而基部和梢部的芽往往迟至15天才萌发。

(2)培养基的配制整个培养过程都可用MS培养基，诱导芽萌发所加的植物激素只需要BA一种即可，每升用0.3～1.Omg，6个品种均适用，只是萌发迟早有些差别。

(3)清洗外植体采回的枝条切去叶，再剥去附在茎上的叶柄及皮刺，先整段用洗手刷沾浓洗衣粉水仔细刷洗，再用自来水冲洗，毛巾擦干，放置在小木板上，用利刀切成2～3厘米一段，每段至少一个侧芽，装入消毒过的培养皿，放在超净工作台上，打开紫外灯，做表面灭菌30分钟。

(4)消毒与接种在超净工作台上，用饱和漂白粉上清液作表面灭菌25～30分钟，灭菌时间快到时，即倾去灭菌溶液，用无菌水涮洗数次，无菌纱布吸干茎段外表水分，按无菌操作要求，接种到小试管里，从芽萌发到芽长到1厘米左右需要2～3周。

(5)培养培养温度21℃最好，最高不超过25℃，有昼夜温差，光照10～12小时/天，光强800～1200LX。

继代增殖(1)将上述无菌芽从原茎段上切下，转接到MS+BA1-2+1AA0.1-0.3或MS+BA1-2+NAA0.01-0.1的培养基上，促使嫩茎长出更多的侧芽，原茎段弃去。

继代增殖培养基每升用蔗糖30克。

(2)5周后，“红双喜”增殖了3.5倍，“白雪山”4.1倍，“和平”、“彩云”5～6倍，“皇冠”、“金丝鸟”达15倍。

月季植物组培方案月季是一种常见的观赏花卉，其花朵色彩丰富，花期长，是花坛、花境、花笼和花圃中常见的植物。

然而，传统的繁育方法存在效率低下、时间长、容易受到病害感染等问题。

因此，利用组织培养技术进行月季植物的繁育具有十分重要的意义。

一、材料准备1.可供选择的月季植株，选择健康无病害的茎干作为外植体。

2.组培基质：可以选择MS培养基，配制麦芽糖浓度为30g/L，琼脂浓度为7g/L。

3.消毒液：例如75%酒精、10%双氧水、0.1%漂白粉。

4.无菌器皿：例如培养瓶、试管、平皿等。

5.显微镜及显微镜片：用于观察、检验组培过程中的细胞分裂情况。

6.整枝针和剪刀：用于取样。

二、外植体消毒处理1.将外植体的茎干从月季植株上剪下。

2.将茎干进行无菌处理，先用70%酒精擦拭，再浸泡于10%双氧水中10-15分钟，最后用无菌水洗净。

3. 将处理后的茎干切成0.5-1.0cm长的段，并观察切割的部位是否出现霉变，如有则再次进行消毒处理。

三、组培基质配制1.取适量MS培养基粉末，按照说明书配制，加入适量麦芽糖并充分溶解。

2.将溶解的培养基过滤灭菌，滤液加热至煮沸并充分搅拌，再加入适量琼脂并搅拌均匀。

3.将配制好的培养基灌装到无菌器皿中，如培养瓶、试管或平皿。

四、组培过程1.将处理好的茎段放置于准备好的无菌器皿中，使其埋入培养基中。

2.将无菌器皿密封，并放入无菌环境，通常应保持在25-28℃、光周期为16/8小时（光照/黑暗）的条件下，以促进茎段的快速生长。

3.在培养过程中，应定期观察外植体的生长情况，如出现异常或病害感染，应及时更换培养基或采取其他措施进行处理。

4.经过3-4周后，可观察到茎段的侧芽开始发生增殖，此时外植体可进行移植。

五、移植1.在移植之前，应先准备好新的无菌器皿和培养基。

2.将茎段取出，用消毒液进行消毒处理，然后将其移植到新的培养基中。

3.将培养皿重新密封，并放回无菌环境中继续培养。

4.经过数周后，可将外植体移植到普通培养基中，进行生根和生长。

月季的植物组织培养一．实验目的1．掌握蔷薇科月季的组织培养技术2．熟悉、巩固无菌操作技术二．实验器皿及试剂1.仪器及用品：超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、电子天平、电热炉酒精灯、镊子、解剖刀、解剖剪、烧杯、三角瓶、培养皿、滤纸、封口膜2.试剂：MS+6BA1+NAA1（诱导）培养基、MS+6BA2+NAA2（继代）培养基、70%酒精、3%次氯酸钠、无菌水3.材料：月季茎段、幼嫩叶片、花萼片、花瓣及花药。

三．实验步骤配制诱导培养基：MS+6BA1+NAA1，1升，灭菌后分装到35个培养1.皿中。

2.取材：将采集的月季茎段、幼嫩叶片、花萼片、花瓣及花药冲洗干净，按不同部位分装到3个500烧杯中，放入超净工作台；先用70%酒精浸没并轻摇10秒进行预消毒；倒出酒精，加入3%次氯酸钠浸没，轻摇11分钟；倒净次氯酸钠，用无菌水冲洗5遍以上，倒出无菌水。

3.将消毒后的外植体放入带有滤纸的无菌平皿中，用解剖剪和解剖刀将嫩叶剪成5mm2大小、茎段长2—3cm每段至少有1 个侧芽、将花苞打开取花药，分别接种到带有培养基的平皿中并封口（每皿3—5个）。

4.标记好后，放入培养室中培养（2周左右）。

5.配制分化培养基：MS+6BA2+NAA2培养基，配制1升，灭菌后分装到35个100ml的三角瓶中。

6.挑选长有愈伤组织的外植体，将其转移到分化培养基中。

在超净工作台中，将培养皿封口膜在酒精灯旁打开，将长有愈伤组织的外植体用灭菌的镊子从平皿中取出，转移到带有分化培养基三角瓶中（每瓶最多）并封口。

7.标记好后，放入培养室培养。

继续观察愈伤组织的生长情况。

四．实验结果茎段出愈率=25根出愈/总接种40根*100%=63%叶片出愈率=5片出愈／总接种30片*100%=17%花药及萼片出愈率=1片出愈/总接种20片*100%=5%通过实验得出月季茎段的出愈率最高，其次是叶片及花药。

接种过程中有三个平皿出现污染现象。

五．问题分析及解决1.三个污染的外植体，两个是叶片内延至周围。