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㊀核农学报㊀２０２２，３６（１１）：２１５８ ２１６５ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｕｃｌｅａｒＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ收稿日期：２０２１⁃１２⁃０８㊀接受日期：２０２２⁃０３⁃０１基金项目：国家自然科学基金－新疆联合基金（Ｕ１９０３２０６），国家自然科学基金（３１４７１７３２），陕西省重大专项（２０２０ｚｄｚｘ０３０３－０１）作者简介：王帅乐，男，主要从事植物病理学研究㊂Ｅ⁃ｍａｉｌ：６３１３４２７６０＠ｑｑ．ｃｏｍ∗通讯作者：黄丽丽，女，教授，主要从事小麦㊁果树病害的病原学和综合防治研究㊂Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｈｕａｎｇｌｉｌｉ＠ｎｗｓｕａｆ．ｅｄｕ．ｃｎ文章编号：１０００⁃８５５１（２０２２）１１⁃２１５８⁃０８苹果短链脱氢酶基因ＭｄＳＤＲ响应腐烂病菌侵染的功能研究王帅乐㊀肖珂雨㊀王维东㊀黄丽丽∗（西北农林科技大学旱区作物逆境生物学国家重点实验室／植物保护学院，陕西杨凌㊀７１２１００）摘㊀要：短链脱氢／还原酶（ＳＤＲ）是一类ＮＡＤ（Ｐ）（Ｈ）依赖的氧化还原酶，负责催化生物体内各种代谢活动的氧化还原步骤㊂为了探究苹果（Ｍａｌｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃａ）ＳＤＲ（ＭｄＳＤＲ）蛋白的功能，利用农杆菌介导的苹果组培苗瞬时转化技术在苹果叶片中瞬时表达ＭｄＳＤＲ，然后通过刺伤接种法研究过表达ＭｄＳＤＲ对叶片抗病性的影响；利用实时荧光定量ＰＣＲ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）技术检测瞬时表达ＭｄＳＤＲ后苹果中脂肪酸生物合成相关基因的表达水平；利用气相色谱分析技术检测瞬时表达ＭｄＳＤＲ苹果叶片中的脂肪酸含量；利用尼罗红染色检测苹果叶片中的脂滴（ＬＤｓ）积累情况㊂结果表明，瞬时表达ＭｄＳＤＲ显著增强了苹果叶片对腐烂病菌（Ｖａｌｓａｍａｌｉ）的抗病性，试验组叶片病斑直径相比对照组减小约１４ ４６％（Ｐ＜０ ００１）；瞬时表达ＭｄＳＤＲ后苹果叶片中脂肪酸生物合成相关基因的表达显著上调（Ｐ＜０ ００１），其中ＭｄＡＣＣａｓｅ上调４８ ４１倍，ＭｄＫＡＲ上调１２９ ７９倍，ＭｄＥＮＲ上调１６８ ２０倍，ＭｄＨＡＤ上调８ ６７倍，ＭｄβＣＴ㊁ＭｄＫＡＳⅠ和ＭｄＫＡＳⅡ均上调约５倍；然而过表达ＭｄＳＤＲ后苹果叶片中脂肪酸的积累水平无显著变化（Ｐ＞０ ０５）；进一步研究发现，过表达ＭｄＳＤＲ后苹果叶片中调控脂滴合成的基因ＭｄＳＥＩＰＩＮ显著上调表达（Ｐ＜０ ０５），脂滴数量大量增加㊂本研究初步证明ＭｄＳＤＲ能够通过促进脂肪酸的合成，间接提高脂滴的数量，从而提高苹果的抗病性，为苹果抗性品种的研究提供了一定的理论基础㊂关键词：短链脱氢／还原酶（ＳＤＲ）；脂肪酸；脂滴；抗病性ＤＯＩ：１０ １１８６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００⁃８５５１ ２０２２ １１ ２１５８㊀㊀短链脱氢／还原酶（ｓｈｏｒｔ⁃ｃｈａｉｎｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｓ／ｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＳＤＲ）是一类ＮＡＤ（Ｐ）（Ｈ）依赖的氧化还原酶，负责催化生物体内的氧化还原反应［１－３］㊂ＳＤＲ在高等植物中分布广泛［４］，主要参与生物碱㊁萜类㊁酚类物质和激素等多种次级代谢途径，增强了植物对细菌㊁真菌㊁病毒㊁动物和昆虫等生物胁迫以及非生物胁迫的适应能力，并且在植物传粉㊁种子传播和种间竞争中发挥重要作用［１，５－８］㊂同时，ＳＤＲ也参与多种初级代谢，维持植物正常的生长发育㊂例如，在叶绿素的合成途径中，ＳＤＲ家族的原叶绿体氧化还原酶（ｐｒｏｔｏｃｈｌｏｒｏｐｙｌｌｉｄｅｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＰＯＲ）能将原叶绿素转化为叶绿素［９－１０］；在脂肪酸合成途径中，ＳＤＲ家族的β－酮脂酰－ＡＣＰ还原酶（β－ｋｅｔｏａｃｙｌ⁃ＡＣＰｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＫＡＲ）和烯脂酰－ＡＣＰ还原酶（ｅｎｏｙｌ⁃ＡＣＰｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＥＮＲ）能催化还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（ｒｅｄｕｃｅｄｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅａｄｅｎｉｎｅｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ＮＡＤＰＨ）和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（ｒｅｄｕｃｅｄｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅａｄｅｎｉｎｅｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ，ＮＡＤＨ）依赖的两个还原步骤，是植物脂肪酸生物合成的两种关键酶［１１－１２］㊂脂肪酸是细胞膜㊁栓质和角质蜡的关键成分，为植物抵御环境胁迫提供了物理屏障［１３－１４］㊂植物能通过改变不饱和脂肪酸的含量来调节膜的流动性，从而维持适合关键整合蛋白（ｉｎｔｅｇｒａｌｐｒｏｔｅｉｎ）发挥功能的环境［１５－１６］㊂例如，在高温胁迫环境下，野生型烟草叶绿体中的光合蛋白出现热变性和光合效率下降㊂而三元脂肪酸（ｔｒｉｅｎｏｉｃｆａｔｔｙａｃｉｄｓ，ＴＡｓ）表达被抑制的转基因植株中，未检测到光合蛋白热变性，其光合效率降幅较小［１７］㊂另外，脂肪酸也参与病原胁迫响应㊂研究发８５１２㊀１１期苹果短链脱氢酶基因ＭｄＳＤＲ响应腐烂病菌侵染的功能研究现，游离亚麻酸既是一种胁迫信号分子，也是植物氧化脂质（如茉莉酸）生物合成的前体［１８－１９］㊂许多研究也证明，叶绿体油酸（ｏｌｅｉｃａｃｉｄ，ＯＡ）和壬二酸（ａｚｅｌａｉｃａｃｉｄ，ＡＺＡ）水平对拟南芥的生物胁迫响应至关重要，可以引发细胞程序性死亡（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈ，ＰＣＤ）和激发系统获得性抗性（ｓｙｓｔｅｍｉｃａｃｑｕｉｒｅｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＳＡＲ）［２０－２１］㊂另外，植物叶片中脂肪酸的积累能刺激植物脂滴（ｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｓ，ＬＤｓ）的产生㊂而脂滴在植物胁迫应答㊁激素信号途径和植物生长发育中起重要作用［２２－２３］㊂例如，脂滴表面的油体钙蛋白ｃａｌｅｏｓｉｎ和油体固醇蛋白ｓｔｅｒｏｌｅｏｓｉｎ等蛋白具有酶活性，其中ｃａｌｅｏｓｉｎ具有过氧化酶活性，可以将α－亚麻酸衍生物转化为各种氧化脂类植保素；ｓｔｅｒｏｌｅｏｓｉｎ是一种甾醇脱氢酶，可以将甾醇底物转化为油菜素类固醇（ｂｒａｓｓｉｎｏｓｔｅｒｏｉｄｓ，ＢＲｓ），从而调控生长发育和胁迫响应［２４－２５］㊂上述研究结果均表明，脂肪酸在植物抵抗生物胁迫中发挥着重要的作用㊂在苹果（Ｍａｌｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃａ）中，目前关于ＳＤＲ基因功能的研究仍鲜有报道㊂西北农林科技大学果树病害病原生物学及综合防治团队前期以富士苹果ｃＤＮＡ为模板克隆获得ＭｄＳＤＲ基因编码区（ｃｏｄｉｎｇｓｅｑｕｅｎｃｅ，ＣＤＳ）全长序列，并通过预测发现其可能与脂肪酸的合成有关［２６］㊂为了验证ＭｄＳＤＲ蛋白是否参与脂肪酸的合成和调控植物免疫，本研究通过农杆菌介导的瞬时表达技术及实时荧光定量ＰＣＲ（ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅＰＣＲ，ｑＲＴ－ＰＣＲ）技术探究苹果ＭｄＳＤＲ对脂肪酸合成中关键基因表达的影响，揭示ＭｄＳＤＲ在脂肪酸合成中的重要作用，并利用苹果瞬时表达技术探究ＭｄＳＤＲ对苹果树腐烂病菌侵染的影响，初步研究其抗逆功能和作用机理，旨在为苹果抗性品种的研究提供一定的理论基础㊂１㊀材料与方法１ １㊀植物材料嘎啦苹果组培苗（Ｍａｌｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃｃｖ．Ｒｏｙａｌｇａｌａ）由西北农林科技大学园艺学院李明军教授实验室惠赠㊂组织培养植株生长于ＭＳ培养基中，培养基配方为：４ ４３ｇ㊃Ｌ－１ＭＳ＋３０ｇ㊃Ｌ－１蔗糖＋８ｇ㊃Ｌ－１琼脂＋０ ３ｍｇ㊃Ｌ－１６－苄氨基嘌呤＋０ ２ｍｇ㊃Ｌ－１吲哚－３－乙酸，ｐＨ值为５ ８；组培苗置于人工智能气候箱（ＲＸＺ－５００－Ｄ⁃ＰＥＤ，宁波江南仪器厂）内培养，培养条件为：温度２５ħ，光照１６ｈ／黑暗８ｈ，光照度６４００Ｌｘ，相对湿度６０％㊂每１５ｄ更换一次培养基㊂１ ２㊀菌株和质粒载体大肠杆菌ＤＨ５α㊁农杆菌ＧＶ３１０１及载体ｐＣＡＭＢＩＡ１３０２均购自北京擎科新业生物技术有限公司；苹果腐烂病菌０３－８（Ｖａｌｓａｍａｌｉ）保存于西北农林科技大学㊂１ ３㊀植物表达载体的构建以富士苹果ｍＲＮＡ反转录合成的ｃＤＮＡ为模板，利用特异性引物ＭｄＳＤＲ－Ｆ㊁ＭｄＳＤＲ－Ｒ对ＭｄＳＤＲ基因进行ＰＣＲ扩增，采用快捷型琼脂糖凝胶ＤＮＡ回收试剂盒ＩＩ（ＤＰ１７２２，Ｂｉｏｔｅｋｅ，北京）对目的基因条带进行回收㊂将回收产物与线性化载体ｐＣＡＭＢＩＡ１３０２连接构建重组质粒ｐＣＡＭＢＩＡ１３０２－ＭｄＳＤＲ㊂热激法转化大肠杆菌ＤＨ５α，进行卡那霉素抗性筛选及菌落ＰＣＲ验证后提取质粒送至上海生工生物工程股份有限公司测序㊂将测序重组质粒及空载体（对照）分别电击转化至农杆菌ＧＶ３１０１，卡那霉素抗性筛选及菌落ＰＣＲ验证后于－８０ħ冰箱保存备用㊂１ ４㊀农杆菌介导的苹果组培苗瞬时转化用含５０μｇ㊃ｍＬ－１卡那霉素及５０μｇ㊃ｍＬ－１利福平的ＹＥＰ培养基，以２８ħ㊁２００ｒ㊃ｍｉｎ－１的条件培养含有ｐＣＡＭＢＩＡ１３０２－ＭｄＳＤＲ和ｐＣＡＭＢＩＡ１３０２表达载体的农杆菌１６ｈ，６０００ｒ㊃ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ收集菌体，用０ ０１ｍｏｌ㊃Ｌ－１的ＭｇＣｌ２溶液清洗２次，最终用含１００μｍｏｌ㊃Ｌ－１乙酰丁香酮及１０μｍｏｌ㊃Ｌ－１２－吗啉乙磺酸（４－ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｅｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃａｃｉｄ，ＭＥＳ）的ＭｇＣｌ２溶液重悬菌体，使其ＯＤ６００值为１㊂挑选健康㊁长势相近的４周龄组培苗若干，使用真空渗透的方法［２６］对其进行瞬时转化，转化后的组培苗培养条件与１ １中的组培条件相同㊂１ ５㊀苹果总ＲＮＡ提取及ｃＤＮＡ的合成组培苗瞬时表达４８ｈ后随机选取叶片样品进行苹果总ＲＮＡ的提取，提取方法参照快速通用植物ＲＮＡ提取试剂盒说明书（０４１６－５０ｇｋ，北京华越洋生物有限公司），提取完成后对其浓度进行测定，于－８０ħ冰箱保存备用㊂ｃＤＮＡ的合成参照ＨｉｇｈＣａｐａｃｉｔｙｃＤＮＡ反转录试剂盒说明书（４３６８８１３，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，美国）进行，反转录产物于－８０ħ冰箱保存备用㊂１ ６㊀实时荧光定量ＰＣＲ分析在ＮＣＢＩ数据库中找到ＭｄβＣＴ㊁ＭｄＡＣＣａｓｅ㊁ＭｄＫＡＲ㊁ＭｄＫＡＳⅠ㊁ＭｄＫＡＳⅡ㊁ＭｄＨＡＤ㊁ＭｄＥＮＲ等与苹果脂肪酸合成相关的基因序列以及与植物脂滴调控相关基因ＭｄＳＥＩＰＩＮ［２７－２８］，并以ＭｄＥＦ－１α为内参基因［２９］㊂使用Ｐｒｉｍｉｅｒ５软件对上述基因进行引物设计（表１）㊂９５１２核㊀农㊀学㊀报３６卷表１㊀引物序列Ｔａｂｌｅ１㊀Ｐｒｉｍｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅｓ引物名称Ｐｒｉｍｅｒｎａｍｅ引物序列（５ᶄң３ᶄ）Ｐｒｉｍｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅ（５ᶄң３ᶄ）产物大小Ｐｒｏｄｕｃｔｓｉｚｅ／ｂｐＭｄβＣＴ－ＦＡＴＡＴＣＡＴＴＡＴＴＧＣＣＧＡＡＣＣＣＡＡ９１ＭｄβＣＴ－ＲＴＴＴＴＣＧＴＡＡＡＡＴＣＴＣＧＣＣＴＡＣＴＭｄＡＣＣａｓｅ－ＦＧＡＣＣＡＴＧＡＣＣＣＡＴＣＡＡＡＧＴＴＡＡ１５１ＭｄＡＣＣａｓｅ－ＲＣＴＣＣＡＧＡＡＧＣＡＧＧＴＧＡＡＡＧＡＡＧＭｄＫＡＲ－ＦＴＧＧＴＴＧＣＡＧＧＧＴＣＣＴＴＧＴＴ８０ＭｄＫＡＲ－ＲＣＡＣＣＧＡＡＴＧＣＣＴＣＡＡＴＣＴＣＭｄＫＡＳⅠ－ＦＡＴＣＧＴＧＡＴＧＧＴＴＴＣＧＴＴＡＴＧＧＧ９１ＭｄＫＡＳⅠ－ＲＧＣＡＡＴＴＡＴＣＧＧＴＧＣＴＣＣＴＣＴＴＴＭｄＫＡＳⅡ－ＦＣＴＴＡＴＧＣＴＣＴＧＴＧＧＴＧＧＴＴＣＡ１３６ＭｄＫＡＳⅡ－ＲＡＧＣＣＡＴＣＡＣＧＡＴＴＡＣＴＡＴＣＣＣＭｄＥＮＲ－ＦＣＡＡＡＴＧＧＡＣＣＧＧＡＧＧＴＴＧ１１３ＭｄＥＮＲ－ＲＴＧＧＧＡＧＧＡＡＡＴＧＣＴＴＧＡＧＴＡＭｄＨＡＤ－ＦＡＡＡＴＧＣＴＣＣＣＴＣＣＣＧＡＡＴＣ９１ＭｄＨＡＤ－ＲＧＧＴＴＧＡＧＴＴＣＣＴＣＣＴＣＴＴＡＧＴＴＭｄＳＥＩＰＩＮ－ＦＣＴＣＧＧＡＧＴＣＴＴＴＣＡＧＧＴＣＡＧＧ１１２ＭｄＳＥＩＰＩＮ－ＲＡＴＡＧＡＡＧＧＣＧＧＡＴＡＧＧＣＴＣＡＣＭｄＥＦ－１α－ＦＡＴＴＣＡＡＧＴＡＴＧＣＣＴＧＧＧＴＧＣ１８９ＭｄＥＦ－１α－ＲＣＡＧＴＣＡＧＣＣＴＧＴＧＡＴＧＴＴＣＣ㊀㊀利用ＰＣＲ技术检测上述引物的特异性，ＰＣＲ反应体系为２０μＬ：１０μＬ２ˑＴａｑＭａｓｔｅｒＭｉｘ㊁上下游引物各０ ５μＬ㊁１μＬｃＤＮＡ㊁８μＬｄｄＨ２Ｏ㊂反应程序：９５ħ预变性５ｍｉｎ；９５ħ变性３０ｓ，５５ħ退火３０ｓ，７２ħ延伸３０ｓ，３０个循环㊂基因相对表达水平测定：按照２ˑＳＹＢＲ ＧｒｅｅｎＰＣＲＭａｓｔｅｒＭｉｘ（Ａ３１１－１０，北京康润诚业生物科技有限公司）说明书配制ｑＲＴ－ＰＣＲ反应体系，每个样品设３个重复㊂ｑＲＴ－ＰＣＲ反应体系为２０μＬ：１０μＬ２ˑＲｅａｌＳｔａｒＧｒｅｅｎＰｏｗｅｒＭｉｘｔｕｒｅ㊁１０μｍｏｌ㊃Ｌ－１正反向引物各０ ５μＬ㊁１ ５μＬｃＤＮＡ㊁７ ５μＬｄｄＨ２Ｏ㊂使用罗氏ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ９６实时荧光定量ＰＣＲ仪，反应程序：９５ħ预变性５ｍｉｎ；９５ħ变性１０ｓ，５８ħ退火３０ｓ，７２ħ延伸３０ｓ，４５个循环；熔解反应程序为：９５ħ１０ｓ，６５ħ６０ｓ，９７ħ１ｓ㊂１ ７㊀真菌活化与侵染试验将苹果腐烂病菌（Ｖ．ｍａｌｉ）在马铃薯葡萄糖琼脂（ｐｏｔａｔｏｄｅｘｔｒｏｓｅａｇａｒ，ＰＤＡ）培养基上活化，于２５ħ条件下培养３ｄ㊂组培苗瞬时转化４８ｈ后取叶片刺伤接种Ｖ．ｍａｌｉ㊂将叶柄插入水琼脂中保湿，２５ħ共培养３６ｈ左右，拍照并用ＩｍａｇｅＪ软件计算病斑直径，重复３次㊂使用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ９作图并用ＳＰＳＳ２６ ０进行ｔ测验分析㊂为了减少试验误差，每次重复使用至少３０个叶片，取自长势相似的组培苗㊂１ ８㊀苹果叶片脂肪酸含量的测定组培苗瞬时表达４８ｈ后取叶片样品，液氮速冻后用干冰保存运输，送至西安迈维代谢生物科技有限公司进行脂肪酸含量及种类的测定㊂处理组与对照组各做３次重复，使用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ９作图并用ＳＰＳＳ２６ ０进行ｔ测验分析㊂１ ９㊀苹果叶片中脂滴的染色观察尼罗红（ＨＹ⁃Ｄ０７１８，ＭｅｄＣｈｅｍＥｘｐｒｅｓｓ，美国）在缓冲液中稀释至２００ｍｍｏｌ㊃Ｌ－１，ｐＨ值为７㊂将组培苗瞬时表达４８ｈ后取叶片样品，在尼罗红染液中３７ħ避光孵育５ １０ｍｉｎ，洗去染色液后制片㊂用ＦＶ３０００激光共聚焦扫描显微镜（奥林巴斯，日本）观察，由４８８ｎｍ激发，在５００ ５４０ｎｍ光谱下收集信号㊂２㊀结果与分析２ １㊀苹果叶片抗病性检测为了探究ＭｄＳＤＲ蛋白在植物抗生物胁迫中的作用，在苹果组培苗叶片中瞬时表达ＭｄＳＤＲ基因后接种Ｖ．ｍａｌｉ，检测病斑变化情况㊂结果显示，过表达ＭｄＳＤＲ的苹果叶片的病斑明显小于对照（图１－Ａ）㊂平均病斑直径统计结果显示，过表达ＭｄＳＤＲ的苹果叶片的病斑直径显著小于（Ｐ＜０ ００１）对照（约１４ ４６％）（图１－Ｂ），表明过表达ＭｄＳＤＲ提高了苹果叶片对Ｖ．ｍａｌｉ的抗病性㊂注：Ａ：Ｖ．ｍａｉｌ．侵染苹果叶片３６ｈ后的叶片表型；Ｂ：Ｖ．ｍａｉｌ．侵染苹果叶片３６ｈ后的平均病斑直径㊂∗∗∗表示在Ｐ＜０ ００１水平差异显著㊂Ｎｏｔｅ：Ａ：ＲｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅｄｉｓｅａｓｅｓｙｍｐｔｏｍｓｏｆｔｈｅａｐｐｌｅｌｅａｖｅｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｄＳＤＲａｔ３６ｈｏｕｒｓｐｏｓｔ⁃ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ（ｈｐｉ）ｏｆＶ．ｍａｌｉ．Ｂ：ＴｈｅａｖｅｒａｇｅｌｅｓｉｏｎｄｉａｍｅｔｅｒｏｆａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｉｎｗｈｉｃｈＭｄＳＤＲｉｓｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗａｓｅｖａｌｕａｔｅｄａｔ３６ｈｐｉｏｆＶ．ｍａｌｉ．∗∗∗ｉｎｄｉｃａｔｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｔ０ ００１ｌｅｖｅｌ．图１㊀瞬时表达ＭｄＳＤＲ抑制Ｖ．ｍａｌｉ的侵染Ｆｉｇ．１㊀ＯｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭｄＳＤＲｉｎｈｉｂｉｔｓｔｈｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎｏｆＶ．ｍａｌｉ２ ２㊀脂肪酸合成相关关键基因的表达水平检测为了探究ＭｄＳＤＲ对植物脂肪酸合成的影响，对脂０６１２㊀１１期苹果短链脱氢酶基因ＭｄＳＤＲ响应腐烂病菌侵染的功能研究肪酸合成通路关键酶编码基因的表达水平进行了检测㊂与对照相比，瞬时过表达ＭｄＳＤＲ苹果叶片中脂肪酸从头合成通路中的相关基因全部显著上调表达，其中ＭｄＡＣＣａｓｅ㊁ＭｄＫＡＲ和ＭｄＥＮＲ上调幅度较大，ＭｄＡＣＣａｓｅ上调４８ ４１倍，ＭｄＫＡＲ上调１２９ ７９倍，ＭｄＥＮＲ上调１６８ ２０倍㊂ＭｄβＣＴ㊁ＭｄＫＡＳⅠ㊁ＭｄＫＡＳⅡ和ＭｄＨＡＤ均呈现出上调表达的趋势，其中ＭｄβＣＴ㊁ＭｄＫＡＳⅠ和ＭｄＫＡＳⅡ均上调约５倍，ＭｄＨＡＤ上调８ ６７倍（图２）㊂上述结果表明，ＭｄＳＤＲ蛋白参与调控脂肪酸的生物合成㊂注：∗∗∗表示在Ｐ＜０ ００１水平差异显著；∗∗∗∗表示在Ｐ＜０ ０００１水平差异显著㊂Ｎｏｔｅ：∗∗∗ｉｎｄｉｃａｔｅｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｔ０ ００１ｌｅｖｅｌ．∗∗∗∗ｉｎｄｉｃａｔｅｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｔ０ ０００１ｌｅｖｅｌ．图２㊀ＭｄＳＤＲ㊁ＭｄＡＣＣａｓｅ㊁ＭｄＫＡＲ㊁ＭｄＥＮＲ㊁ＭｄβＣＴ㊁ＭｄＫＡＳⅠ㊁ＭｄＫＡＳⅡ和ＭｄＨＡＤ相对表达量Ｆｉｇ．２㊀ＲｅｌａｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭｄＳＤＲ㊁ＭｄＡＣＣａｓｅ㊁ＭｄＫＡＲ㊁ＭｄＥＮＲ㊁ＭｄβＣＴ㊁ＭｄＫＡＳⅠ㊁ＭｄＫＡＳⅡａｎｄＭｄＨＡＤ２ ３㊀苹果叶片脂肪酸含量测定为了探究过表达ＭｄＳＤＲ对植物叶片中脂肪酸积累水平的影响，对苹果叶片中的脂肪酸含量进行了测定㊂通过对试验组与对照组数据进行差异显著性分析，发现过表达ＭｄＳＤＲ的苹果叶片中各种脂肪酸含量未发生显著变化（Ｐ＞０ ０５）（图３）㊂２ ４㊀脂滴合成关键基因的表达水平检测为了验证上述推测，过表达ＭｄＳＤＲ后检测了调控脂滴形成的关键基因ＭｄＳＥＩＰＩＮ的表达水平变化㊂结果显示，瞬时表达ＭｄＳＤＲ后，苹果叶片中ＭｄＳＥＩＰＩＮ基因的表达水平显著提高（图４－Ａ）（Ｐ＜０ ０５），表明瞬时表达ＭｄＳＤＲ促进了脂滴的生物合成㊂ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ结果显示，在瞬时表达ＭｄＳＤＲ基因的苹果组培苗叶片中检测到ＭｄＳＤＲ蛋白（图４－Ｂ），表明通过农杆菌介导瞬时表达技术，ＭｄＳＤＲ蛋白在苹果组培苗叶片中成功表达㊂２ ５㊀苹果叶片中脂滴的染色观察本研究采用尼罗红染色［３０］观察瞬时表达ＭｄＳＤＲ图３㊀脂肪酸相对含量Ｆｉｇ．３㊀Ｒｅｌａｔｉｖｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄ的苹果叶片样品，结果显示，瞬时表达ＭｄＳＤＲ后的苹果叶片出现大量的点状绿色荧光（图５－Ａ），而在对照中并未发现有大量的点状绿色荧光（图５－Ｂ）㊂本试验过表达的ＭｄＳＤＲ蛋白上融合有ＧＦＰ标签，因此为了排除ＧＦＰ荧光给试验带来的干扰，单独表达了ＭｄＳＤＲ⁃ＧＦＰ１６１２核㊀农㊀学㊀报３６卷注：Ａ：ＭｄＳＥＩＰＩＮ相对表达水平；Ｂ：ＭｄＳＤＲ蛋白表达检测㊂∗表示在Ｐ＜０ ０５水平差异显著㊂Ｎｏｔｅ：Ａ：ＲｅｌａｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭｄＳＥＩＰＩＮ．Ｂ：ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｏｆＭｄＳＤＲ．∗ｉｎｄｉｃａｔｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｔ０ ０５ｌｅｖｅｌ．图４㊀ＭｄＳＥＩＰＩＮ相对表达量与ＭｄＳＤＲ蛋白表达检测Ｆｉｇ．４㊀ＲｅｌａｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭｄＳＥＩＰＩＮａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＭｄＳＤＲｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ注：脂滴被尼罗红染色后激发出的荧光呈点分布㊂Ａ：瞬时表达ＭｄＳＤＲ⁃ＧＦＰ后用尼罗红染色的苹果叶片；Ｂ：瞬时表达ＧＦＰ后用尼罗红染色的苹果叶片；Ｃ：瞬时表达ＭｄＳＤＲ⁃ＧＦＰ后未染色的苹㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀果叶片；Ｄ：瞬时表达ＧＦＰ后未染色的苹果叶片㊂Ｎｏｔｅ：ＴｈｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｅｘｃｉｔｅｄｂｙｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｓｓｔａｉｎｅｄｗｉｔｈＮｉｌｅｒｅｄｓｈｏｗｓａｄｏｔｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ．Ａ：ＡｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｓｔａｉｎｅｄｗｉｔｈＮｉｌｅＲｅｄａｆｔｅｒｔｒａｎｓｉｅｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭｄＳＤＲ－ＧＦＰ．Ｂ：ＡｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｓｔａｉｎｅｄｗｉｔｈＮｉｌｅＲｅｄａｆｔｅｒｔｒａｎｓｉｅｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＧＦＰ．Ｃ：ＵｎｓｔａｉｎｅｄａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓａｆｔｅｒｔｒａｎｓｉｅｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭｄＳＤＲ－ＧＦＰ．Ｄ：Ｕｎｓｔａｉｎｅｄａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓ㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀ａｆｔｅｒｔｒａｎｓｉｅｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＧＦＰ．图５㊀ＭｄＳＤＲ瞬时表达增加苹果叶片中脂滴数量Ｆｉｇ．５㊀ＭｄＳＤＲｔｒａｎｓｉｅｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｃｒｅａｓｅｓｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆＬＤｓｉｎａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓ和ＧＦＰ，观察并未发现点状绿色荧光（图５－Ｃ㊁Ｄ）㊂综上所述，瞬时表达ＭｄＳＤＲ促进了脂滴的形成㊂３㊀讨论短链脱氢／还原酶不仅可以参与调控植物初级代谢，如脂肪酸生物合成㊁叶绿素生物合成或降解，还可以参与调控植物的次级代谢，如萜类㊁类固醇㊁酚类和生物碱的生物合成［３１］㊂在脂肪酸生物合成的过程中，乙酰ＣｏＡ的羧化反应是脂肪酸合成通路的限速步骤，故乙酰ＣｏＡ羧化酶（ａｃｅｔｙｌＣｏＡｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ，ＡＣＣａｓｅ）活性控制着脂肪酸的合成速度；在脂肪酸链延伸阶段中，β－酮脂酰⁃ＡＣＰ合酶（β－ｋｅｔｏａｃｙｌ⁃ＡＣＰｓｙｎｔｈａｓｅⅡ，ＫＡＳ）能催化第一步的缩合反应；同时，β－酮脂酰⁃ＡＣＰ还原酶（β⁃ｋｅｔｏａｃｙｌ⁃ＡＣＰｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＫＡＲ）和烯脂酰⁃ＡＣＰ还原酶（ｅｎｏｙｌ⁃ＡＣＰｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＥＮＲ）负责催化其中两步还原反应，即在还原型辅酶ＩＩＮＡＤＰＨ的协助下，ＫＡＲ催化β－酮丁酰基的β－位羰基还原为羟基，ＥＮＲ催化ә２－烯丁酰基的α－双键还原为单键；而β－羟脂酰－ＡＣＰ脱水酶（β⁃ｈｙｄｒｄｏｘｙａｃｙｌ⁃ＡＣＰｄｅｈｙｄｒａｓｅ，ＨＡＤ）则负责催化β－羟丁酰基α㊁β－碳原子间的脱水反应［３２］㊂本研究发现瞬时过表达ＭｄＳＤＲ后，苹果中乙酰ＣｏＡ羧化酶（ＭｄＡＣＣａｓｅ）基因㊁β－酮脂酰－ＡＣＰ合酶（ＭｄＫＡＳ）基因㊁β－酮脂酰－ＡＣＰ还原酶（ＭｄＫＡＲ）基因㊁烯脂酰－ＡＣＰ还原酶（ＭｄＥＮＲ）基因的表达水平显著上调（图２）㊂上述结果表明，ＭｄＳＤＲ能参与调控植物脂肪酸的生物合成过程，这与本实验室前期预测的结果［２６］一致㊂已有研究表明脂肪酸能参与调控植物的免疫反应［１，２１］㊂例如茄子中棕榈油酸的积累提高了植物对白粉病菌的抗病性［３３］；番茄中棕榈油酸的积累增加了植物对黄萎病菌的抗病性［３４］；亚油酸和亚麻酸的积累会显著提升鳄梨对炭疽病菌（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ）和番茄对丁香假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｙｒｉｎｇａｅ）的抗病性［３５－３６］；根际微生物诱导植物对灰霉病菌（Ｂｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａ）的抗病性同样与植物中亚油酸和亚麻酸积累水平密切相关［３７］㊂本研究发现，过表达ＭｄＳＤＲ能够提高苹果对腐烂病菌的抗性（图１），然而苹果叶片中脂肪酸含量无显著变化（图３）（Ｐ＞０ ０５）㊂因此推测ＭｄＳＤＲ参与调控脂肪酸的生物合成，但并未通过增加脂肪酸含量来提高苹果抗性㊂脂肪酸作为初级代谢产物，是生物体内多种中性脂质生物合成的前体㊂然而过高水平的脂肪酸会对细胞造成损伤［３８］㊂因此生物体会通过多种途径将脂肪酸转化成中性脂质，例如脂肪酸能够通过多步反应，最终在ＳＥＩＰＩＮ蛋白调控下形成了成熟的脂滴［２８，３０］，保２６１２㊀１１期苹果短链脱氢酶基因ＭｄＳＤＲ响应腐烂病菌侵染的功能研究持了细胞内的脂肪酸水平的稳态［２２，３９］㊂脂滴是由富含膜蛋白的单层磷脂分子层包裹中性脂类物质组成的细胞器［４０］㊂脂滴一般存在于种子等植物的营养储存器官中，为植物提供能量和参与植物生长发育调控㊂叶片等光合组织中脂滴的数量通常远小于种子和花，但叶片脂滴能参与调控植物的非生物和生物胁迫响应［２３，３９］㊂例如，脂滴相关蛋白（ＬＤ⁃ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ，ＬＤＡＰ）能调控植物脂滴的产生㊂对拟南芥ｌｄａｐ１／ｌｄａｐ３双敲除突变体的研究发现，突变体植物比野生型更容易受到干旱胁迫的影响［４１］㊂而过表达ｌｄａｐ基因的拟南芥显著提高了对干旱胁迫的抗性，这说明脂滴参与调控植物的干旱胁迫响应；另外两种脂滴表面的双加氧酶（ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ）和ｃａｌｅｏｓｉｎ能将α－亚麻酸转化为氧化脂类（ｏｘｙｌｉｐｉｎ）植保素，从而作为一种信号分子触发植物的超敏反应（ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅｒｅｓｐｏｎｓｅ，ＨＲ）［２１，２５］㊂这些研究均表明脂滴参与植物的非生物和生物胁迫响应㊂本研究发现过表达ＭｄＳＤＲ促进了脂滴的产生（图４㊁５），同时也提高了苹果对病原菌的抗性（图１）㊂因此推测ＭｄＳＤＲ蛋白通过调控脂肪酸的生物合成间接提高了脂滴的积累水平，从而提高了苹果对腐烂病菌的抗性，但脂滴提高苹果抗病性的具体调控机制还有待进一步研究㊂４ 结论本研究利用农杆菌介导的瞬时转化体系在苹果组培苗中过表达ＭｄＳＤＲ，检测到苹果叶片中脂滴数量增加，并且对Ｖ．ｍａｌｉ的抗性显著提高㊂初步证明ＭｄＳＤＲ可以通过促进脂肪酸的生物合成，间接提高叶片脂滴的水平，从而增加植物的抗病性㊂该研究为理解植物抵抗病原胁迫的途径提供了新思路㊂参考文献：［１］㊀ＹｕＳＨ，ＳｕｎＱＧ，ＷｕＪＸ，ＺｈａｏＰＣ，ＳｕｎＹＭ，ＧｕｏＺＦ．Ｇｅｎｏｍｅ⁃ｗｉｄｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｓｈｏｒｔ⁃ｃｈａｉｎｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ／ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＳＤＲ）ｇｅｎｅｆａｍｉｌｙｉｎＭｅｄｉｃａｇｏｔｒｕｎｃａｔｕｌａ［Ｊ］．ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＳｃｉｅｎｃｅｓ，２０２１，２２（１７）：９４９８［２］㊀ＫａｌｌｂｅｒｇＹ，ＯｐｐｅｒｍａｎｎＵ，ＪöｒｎｖａｌｌＨ，ＰｅｒｓｓｏｎＢ．Ｓｈｏｒｔ⁃ｃｈａｉｎｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｓ／ｒｅｄｕｃｔａｓｅｓ（ＳＤＲｓ）［Ｊ］．ＥｕｒｏｐｅａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，２６９（１８）：４４０９－４４１７［３］㊀ＭｏＸＨ，ＺｈａｎｇＨ，ＤｕＦＹ，ＹａｎｇＳ．Ｓｈｏｒｔ⁃ｃｈａｉｎｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅＮｃｍＤｉｓｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅｆｏｒｔｈｅＣ－１０ｏｘｉｄａｔｉｏｎｏｆｎｏｃａｍｙｃｉｎＦｉｎｎｏｃａｍｙｃｉｎｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［Ｊ］．ＦｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０２０，１１：６１０８２７［４］㊀ＫａｖａｎａｇｈＫＬ，ＪｏｒｎｖａｌｌＨ，ＰｅｒｓｓｏｎＢ，ＯｐｐｅｒｍａｎｎＵ．ＴｈｅＳＤＲｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ：Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌａｎｄｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｄｉｖｅｒｓｉｔｙｗｉｔｈｉｎａｆａｍｉｌｙｏｆｍｅｔａｂｏｌｉｃａｎｄｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｅｎｚｙｍｅｓ［Ｊ］．ＣｅｌｌｕｌａｒａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，２００８，６５（２４）：３８９５－３９０６［５］㊀ＳｔｏｃｋｉｎｇｅｒＰ，ＲｏｔｈＳ，ＭüｌｌｅｒＭ，ＰｌｅｉｓｓＪ．Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｉｍｉｎｅ⁃ｒｅｄｕｃｉｎｇｅｎｚｙｍｅｓ：Ｃｏｍｍｏｎｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓｉｎｉｍｉｎｅｒｅｄｕｃｔａｓｅｓ，β－ｈｙｄｒｏｘｙａｃｉｄｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｓ，ａｎｄｓｈｏｒｔ⁃ｃｈａｉｎｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｓ／ｒｅｄｕｃｔａｓｅｓ［Ｊ］．ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ，２０２０，２１（１８）：２６８９－２６９５［６］㊀ＦｅｒｒｅｒＪＬ，ＡｕｓｔｉｎＭＢ，ＳｔｅｗａｒｔＣＪｒ，ＮｏｅｌＪＰ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｅｎｚｙｍｅｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｐｈｅｎｙｌｐｒｏｐａｎｏｉｄｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００８，４６（３）：３５６－３７０［７］㊀ＹｕＪ，ＳｕｎＨ，ＺｈａｎｇＪＪ，ＨｏｕＹＹ，ＺｈａｎｇＴＪ，ＫａｎｇＪＭ，ＷａｎｇＺ，ＹａｎｇＱＣ，ＬｏｎｇＲＣ．Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆａｌｄｏ⁃ｋｅｔｏｒｅｄｕｃｔａｓｅｇｅｎｅｆａｍｉｌｙａｎｄｔｈｅｉｒｒｅｓｐｏｎｓｅｓｔｏｓａｌｔ，ｄｒｏｕｇｈｔ，ａｎｄａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄｓｔｒｅｓｓｅｓｉｎＭｅｄｉｃａｇｏｔｒｕｎｃａｔｕｌａ［Ｊ］．ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＳｃｉｅｎｃｅｓ，２０２０，２１（３）：７５４［８］㊀ＣｈｏｉＨＷ，ＬｅｅＢＧ，ＫｉｍＮＨ，ＰａｒｋＹ，ＬｉｍＣＷ，ＳｏｎｇＨＫ，ＨｗａｎｇＢＫ．Ａｒｏｌｅｆｏｒａｍｅｎｔｈｏｎｅｒｅｄｕｃｔａｓｅｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｇａｉｎｓｔｍｉｃｒｏｂｉａｌｐａｔｈｏｇｅｎｓｉｎｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００８，１４８（１）：３８３－４０１［９］㊀ＧａｂｒｕｋＭ，Ｍｙｓｌｉｗａ⁃ＫｕｒｄｚｉｅｌＢ．Ｔｈｅｏｒｉｇｉｎ，ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｎｄｄｉｖｅｒｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅｉｓｏｆｏｒｍｓｏｆｌｉｇｈｔ⁃ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐｒｏｔｏｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌｉｄｅｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＬＰＯＲ）：Ｆｏｃｕｓｏｎａｎｇｉｏｓｐｅｒｍｓ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌ，２０２０，４７７（１２）：２２２１－２２３６［１０］㊀ＶｅｄａｌａｎｋａｒＰ，ＴｒｉｐａｔｈｙＢＣ．Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆｌｉｇｈｔ⁃ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐｒｏｔｏｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌｉｄｅｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ［Ｊ］．Ｐｒｏｔｏｐｌａｓｍａ，２０１９，２５６（２）：２９３－３１２［１１］㊀Ｏ ＨａｒａＰ，ＳｌａｂａｓＡＲ，ＦａｗｃｅｔｔＴ．Ｆａｔｔｙａｃｉｄａｎｄｌｉｐｉｄｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃｇｅｎｅｓａｒｅｅｘｐｒｅｓｓｅｄａｔｃｏｎｓｔａｎｔｍｏｌａｒｒａｔｉｏｓｂｕｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｂｓｏｌｕｔｅｌｅｖｅｌｓｄｕｒｉｎｇｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２００２，１２９（１）：３１０－３２０［１２］㊀ＯｈｌｒｏｇｇｅＪＢ，ＪａｗｏｒｓｋｉＪＧ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［Ｊ］．ＡｎｎｕａｌＲｅｖｉｅｗｏｆＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙａｎｄＰｌａｎｔＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，１９９７，４８：１０９－１３６［１３］㊀ＢｅｉｓｓｏｎＦ，ＬｉＹ，ＢｏｎａｖｅｎｔｕｒｅＧ，ＰｏｌｌａｒｄＭ，ＯｈｌｒｏｇｇｅＪＢ．ＴｈｅａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅＧＰＡＴ５ｉｓｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒｔｈｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｓｕｂｅｒｉｎｉｎｓｅｅｄｃｏａｔａｎｄｒｏｏｔｏｆＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌ，２００７，１９（１）：３５１－３６８［１４］㊀ＬｅｅＳＢ，ＳｕｈＭＣ．Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎｏｆｇｌｙｃｏｓｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ⁃ａｎｃｈｏｒｅｄｌｉｐｉｄｔｒａｎｓｆｅｒｐｒｏｔｅｉｎ１５ａｆｆｅｃｔｓｓｅｅｄｃｏａｔｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＪｏｕｒｎａｌ，２０１８，９６（６）：１２０６－１２１７［１５］㊀ＩｖａｎｏｖａＴＶ，ＶｏｒｏｎｋｏｖＡＳ，ＫｕｚｎｅｔｓｏｖａＥＩ，ＫｕｍａｃｈｏｖａＴＫ，ＺｈｉｒｏｖＶＫ，ＴｓｙｄｅｎｄａｍｂａｅｖＶＤ．ＬｉｐｉｄｆａｔｔｙａｃｉｄｆｒｏｍｔｈｅｐｅｒｉｃａｒｐＣｙｄｏｎｉａｏｂｌｏｎｇａＭｉｌｌ．ａｎｄＭｅｓｐｉｌｕｓｇｅｒｍａｎｉｃａＬ．ｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｐｌａｎｔａｄａｐｔａｔｉｏｎｔｏａｌｔｉｔｕｄｉｎａｌｚｏｎａｌｉｔｙ［Ｊ］．ＤｏｋｌａｄｙＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＢｉｏｐｈｙｓｉｃｓ，２０１９，４８６（１）：２２９－２３３［１６］㊀ＲａｂｅｒｔＣ，ＩｎｏｓｔｒｏｚａＫ，ＢｒａｖｏＳ，ＳｅｐúｌｖｅｄａＮ，ＢｒａｖｏＬＡ．Ｅｘｐｌｏｒａｔｏｒｙｓｔｕｄｙｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄｐｒｏｆｉｌｅｉｎｔｗｏｆｉｌｍｙｆｅｒｎｓｗｉｔｈｃｏｎｔｒａｓｔｉｎｇｄｅｓｉｃｃａｔｉｏｎｔｏｌｅｒａｎｃｅｒｅｖｅａｌｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｖｅｒｙｌｏｎｇｃｈａｉｎｐｏｌｙｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄｏｍｅｇａ－３ｆａｔｔｙａｃｉｄｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔｓ（Ｂａｓｅｌ），２０２０，９（１１）：１４３１［１７］㊀ＩｂａＫ．Ａｃｃｌｉｍａｔｉｖｅｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓｔｒｅｓｓｉｎｈｉｇｈｅｒｐｌａｎｔｓ：Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓｏｆｇｅｎｅｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｆｏｒｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｔｏｌｅｒａｎｃｅ［Ｊ］．３６１２核㊀农㊀学㊀报３６卷ＡｎｎｕａｌＲｅｖｉｅｗｏｆＰｌａｎｔＢｉｏｌｏｇｙ，２００２，５３：２２５－２４５［１８］㊀Ｂｌ ｅＥ．Ｉｍｐａｃｔｏｆｐｈｙｔｏ⁃ｏｘｙｌｉｐｉｎｓｉｎｐｌａｎｔｄｅｆｅｎｓｅ［Ｊ］．ＴｒｅｎｄｓｉｎＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅ，２００２，７（７）：３１５－３２２［１９］㊀ＣｈｒｉｓｔｉｅＷＷ，ＨａｒｗｏｏｄＪＬ．Ｏｘｉｄａｔｉｏｎｏｆｐｏｌｙｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄｆａｔｔｙａｃｉｄｓｔｏｐｒｏｄｕｃｅｌｉｐｉｄｍｅｄｉａｔｏｒｓ［Ｊ］．ＥｓｓａｙｓｉｎＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０２０，６４（３）：４０１－４２１［２０］㊀ＫａｃｈｒｏｏＰ，ＳｈａｎｋｌｉｎＪ，ＳｈａｈＪ，ＷｈｉｔｔｌｅＥＪ，ＫｌｅｓｓｉｇＤＦ．Ａｆａｔｔｙａｃｉｄｄｅｓａｔｕｒａｓｅｍｏｄｕｌａｔｅｓｔｈｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｄｅｆｅｎｓｅｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓｉｎｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓｏｆｔｈｅＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓｏｆＡｍｅｒｉｃａ，２００１，９８（１６）：９４４８－９４５３［２１］㊀ＣｅｃｃｈｉｎｉＮＭ，ＳｐｅｅｄＤＪ，ＲｏｙｃｈｏｕｄｈｒｙＳ，ＧｒｅｅｎｂｅｒｇＪＴ．ＫｉｎａｓｅｓａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｍｏｔｉｆｓｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒＡＺＩ１ｐｌａｓｔｉｄｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇｄｕｒｉｎｇｐｌａｎｔｄｅｆｅｎｓｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＪｏｕｒｎａｌ，２０２１，１０５（６）：１６１５－１６２９［２２］㊀ＨｕａｎｇＡＨＣ．Ｐｌａｎｔｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｓａｎｄｔｈｅｉｒａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｐｏｔｅｎｔｉａｌｆｏｒｒａｐｉｄａｄｖａｎｃｅｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２０１８，１７６（３）：１８９４－１９１８［２３］㊀ＰｙｃＭ，ＣａｉＹＱ，ＧｒｅｅｒＭＳ，ＹｕｒｃｈｅｎｋｏＯ，ＣｈａｐｍａｎＫＤ，ＤｙｅｒＪＭ，ＭｕｌｌｅｎＲＴ．Ｔｕｒｎｉｎｇｏｖｅｒａｎｅｗｌｅａｆｉｎｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｂｉｏｌｏｇｙ［Ｊ］．ＴｒｅｎｄｓｉｎＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅ，２０１７，２２（７）：５９６－６０９［２４］㊀ＬｉａｎｇＴ，ＳｈｉＣ，ＰｅｎｇＹ，ＴａｎＨＪ，ＸｉｎＰＹ，ＹａｎｇＹ，ＷａｎｇＦ，ＬｉＸ，ＣｈｕＪＦ，ＨｕａｎｇＪＲ，ＹｉｎＹＲ，ＬｉｕＨＴ．Ｂｒａｓｓｉｎｏｓｔｅｒｏｉｄ⁃ａｃｔｉｖａｔｅｄＢＲＩ１－ＥＭＳ⁃ＳＵＰＰＲＥＳＳＯＲ１ｉｎｈｉｂｉｔｓｆｌａｖｏｎｏｉｄｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｓｇｒｏｗｔｈａｎｄＵＶ⁃Ｂｓｔｒｅｓｓｒｅｓｐｏｎｓｅｓｉｎｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌ，２０２０，３２（１０）：３２２４－３２３９［２５］㊀ＳｈｉｍａｄａＴＬ，Ｈａｒａ⁃ＮｉｓｈｉｍｕｒａＩ．Ｌｅａｆｏｉｌｂｏｄｉｅｓａｒｅｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒｆａｃｔｏｒｉｅｓｐｒｏｄｕｃｉｎｇａｎｔｉｆｕｎｇａｌｏｘｙｌｉｐｉｎｓ［Ｊ］．ＣｕｒｒｅｎｔＴｏｐｉｃｓｉｎＰｌａｎｔＢｉｏｌｏｇｙ，２０１５，２５：１４５－１５０［２６］㊀龚婉，吕路琼，王维东，黄丽丽．富士苹果ＳＤＲｓ家族基因ＭｄＳＤＲ的克隆及序列分析［Ｊ］．分子植物育种，２０２０，１８（１４）：４５９７－４６０４［２７］㊀ＷａｎｇＷＤ，ＮｉｅＪＪ，ＬｖＬＱ，ＧｏｎｇＷ，ＷａｎｇＳＬ，ＹａｎｇＭＭ，ＸｕＬＳ，ＬｉＭＪ，ＤｕＨＸ，ＨｕａｎｇＬＬ．ＡＶａｌｓａｍａｌｉｅｆｆｅｃｔｏｒｐｒｏｔｅｉｎ１ｔａｒｇｅｔｓａｐｐｌｅ（Ｍａｌｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃａ）ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ⁃ｒｅｌａｔｅｄ１０ｐｒｏｔｅｉｎｔｏｐｒｏｍｏｔｅｖｉｒｕｌｅｎｃｅ［Ｊ］．ＦｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅ，２０２１，１２：７４１３４２［２８］㊀ＧｒｅｅｒＭＳ，ＣａｉＹ，ＧｉｄｄａＳＫ，ＥｓｎａｙＮ，ＫｒｅｔｚｓｃｈｍａｒＦＫ，ＳｅａｙＤ，ＭｃＣｌｉｎｃｈｉｅＥ，ＩｓｃｈｅｂｅｃｋＴ，ＭｕｌｌｅｎＲＴ，ＤｙｅｒＪＭ，ＣｈａｐｍａｎＫＤ．ＳＥＩＰＩＮｉｓｏｆｏｒｍｓｉｎｔｅｒａｃｔｗｉｔｈｔｈｅｍｅｍｂｒａｎｅ⁃ｔｅｔｈｅｒｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎＶＡＰ２７－１ｆｏｒｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｆｏｒｍａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌ，２０２０，３２（９）：２９３２－２９５０［２９］㊀ＹｉｎＺＹ，ＫｅＸＷ，ＫａｎｇＺＳ，ＨｕａｎｇＬＬ．ＡｐｐｌｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｒｅｓｐｏｎｓｅｓａｇａｉｎｓｔＶａｌｓａｍａｌｉｒｅｖｅａｌｅｄｂｙｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｉｃｓａｎａｌｙｓｅｓ［Ｊ］．ＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔＰａｔｈｏｌｏｇｙ，２０１６，９３：８５－９２［３０］㊀ＣａｉＹ，ＧｏｏｄｍａｎＪＭ，ＰｙｃＭ，ＭｕｌｌｅｎＲＴ，ＤｙｅｒＪＭ，ＣｈａｐｍａｎＫＤ．ＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓＳＥＩＰＩＮｐｒｏｔｅｉｎｓｍｏｄｕｌａｔｅｔｒｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎａｎｄｉｎｆｌｕｅｎｃｅｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌ，２０１５，２７（９）：２６１６－２６３６［３１］㊀ＴｏｎｆａｃｋＬＢ，ＭｏｕｍｍｏｕＨ，Ｌａｔｃｈ Ａ，ＹｏｕｍｂｉＥ，ＢｅｎｉｃｈｏｕＭ，ＰｅｃｈＪＣ，ＶａｎＤｅｒＲｅｓｔＢ．ＴｈｅｐｌａｎｔＳＤＲｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ：Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔｉｎｐｒｉｍａｒｙａｎｄｓｅｃｏｎｄａｒｙｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ［Ｊ］．ＣｕｒｒｅｎｔＴｏｐｉｃｓｉｎＰｌａｎｔＢｉｏｌｏｇｙ，２０１１，１２：４１－５３［３２］㊀郭蔼光．基础生物化学第２版［Ｍ］．北京：高等教育出版社，２００９［３３］㊀ＷａｎｇＣ，ＣｈｉｎＣＫ，ＣｈｅｎＡ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｙｅａｓｔｄｅｌｔａ－９ｄｅｓａｔｕｒａｓｅｇｅｎｅｉｎｔｏｍａｔｏｅｎｈａｎｃｅｓｉｔｓｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｐｏｗｄｅｒｙｍｉｌｄｅｗ［Ｊ］．ＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔＰａｔｈｏｌｏｇｙ，１９９８，５２（６）：３７１－３８３［３４］㊀ＸｉｎｇＪＳ，ＣｈｉｎＣＫ．ＭｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄｓｉｎｅｇｇｐｌａｎｔａｆｆｅｃｔｓｉｔｓｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏＶｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍｄａｈｌｉａｅ［Ｊ］．ＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔＰａｔｈｏｌｏｇｙ，２０００，５６（５）：２１７－２２５［３５］㊀ＭａｄｉＬ，ＷａｎｇＸＪ，ＫｏｂｉｌｅｒＡ，ＬｉｃｈｔｅｒＡ，ＰｒｕｓｋｙＤ．Ｓｔｒｅｓｓｏｎａｖｏｃａｄｏｆｒｕｉｔｓｒｅｇｕｌａｔｅｓә９－ｓｔｅａｒｏｙｌＡＣＰｄｅｓａｔｕｒａｓｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｆａｔｔｙａｃｉｄｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ，ａｎｔｉｆｕｎｇａｌｄｉｅｎｅｌｅｖｅｌａｎｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏＣｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓａｔｔａｃｋ［Ｊ］．ＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔＰａｔｈｏｌｏｇｙ，２００３，６２（５）：２７７－２８３［３６］㊀ＹａｅｎｏＴ，ＭａｔｓｕｄａＯ，ＩｂａＫ．Ｒｏｌｅｏｆｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｔｒｉｅｎｏｉｃｆａｔｔｙａｃｉｄｓｉｎｐｌａｎｔｄｉｓｅａｓｅｄｅｆｅｎｓｅｒｅｓｐｏｎｓｅｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＪｏｕｒｎａｌ，２００４，４０（６）：９３１－９４１［３７］㊀ＯｎｇｅｎａＭ，ＤｕｂｙＦ，ＲｏｓｓｉｇｎｏｌＦ，ＦａｕｃｏｎｎｉｅｒＭＬ，ＤｏｍｍｅｓＪ，ＴｈｏｎａｒｔＰ．ＳｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅｐａｔｈｗａｙｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｓｙｓｔｅｍｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｄｕｃｅｄｉｎｂｅａｎｂｙａｎｏｎｐａｔｈｏｇｅｎｉｃＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｔｒａｉｎ［Ｊ］．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔ⁃ＭｉｃｒｏｂｅＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，２００４，１７（９）：１００９－１０１８［３８］㊀ＫｕｎｚＨＨ，ＳｃｈａｒｎｅｗｓｋｉＭ，ＦｅｕｓｓｎｅｒＫ，ＦｅｕｓｓｎｅｒＩ，ＦｌｕｇｇｅＵＩ，ＦｕｌｄａＭ，ＧｉｅｒｔｈＭ．ＴｈｅＡＢＣｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒＰＸＡ１ａｎｄｐｅｒｏｘｉｓｏｍａｌｂｅｔａ⁃ｏｘｉｄａｔｉｏｎａｒｅｖｉｔａｌｆｏｒｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｉｎｍａｔｕｒｅｌｅａｖｅｓｏｆＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｄｕｒｉｎｇｅｘｔｅｎｄｅｄｄａｒｋｎｅｓｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌ，２００９，２１（９）：２７３３－２７４９［３９］㊀ＩｓｃｈｅｂｅｃｋＴ，ＫｒａｗｃｚｙｋＨＥ，ＭｕｌｌｅｎＲＴ，ＤｙｅｒＪＭ，ＣｈａｐｍａｎＫＤ．Ｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｓｉｎｐｌａｎｔｓａｎｄａｌｇａｅ：Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ，ｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ｔｕｒｎｏｖｅｒａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＳｅｍｉｎａｒｓｉｎＣｅｌｌａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌＢｉｏｌｏｇｙ，２０２０，１０８：８２－９３［４０］㊀ＯｎａｌＧ，ＫｕｔｌｕＯ，ＧｏｚｕａｃｉｋＤ，ＤｏｋｍｅｃｉＥｍｒｅＳ．Ｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｓｉｎｈｅａｌｔｈａｎｄｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．ＬｉｐｉｄｓｉｎＨｅａｌｔｈａｎｄＤｉｓｅａｓｅ，２０１７，１６（１）：１２８［４１］㊀ＧｉｄｄａＳＫ，ＰａｒｋＳ，ＰｙｃＭ，ＹｕｒｃｈｅｎｋｏＯ，ＣａｉＹ，ＷｕＰ，ＡｎｄｒｅｗｓＤＷ，ＣｈａｐｍａｎＫＤ，ＤｙｅｒＪＭ，ＭｕｌｌｅｎＲＴ．Ｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔ⁃ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓ（ＬＤＡＰｓ）ａｒｅｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒｔｈｅｄｙｎａｍｉｃｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｎｅｕｔｒａｌｌｉｐｉｄｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｔｉｏｎｉｎｐｌａｎｔｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２０１６，１７０（４）：２０５２－２０７１４６１２ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｕｃｌｅａｒＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ５６１２２０２２，３６（１１）：２１５８ ２１６５ＦｕｎｃｔｉｏｎＥｘｐｌｏｒａｔｉｏｎｏｆＡｐｐｌｅＳｈｏｒｔ⁃ＣｈａｉｎＤｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｓ／ＲｅｄｕｃｔａｓｅｉｎＲｅｓｐｏｎｓｅｔｏＶａｌｓａｍａｌｉＷＡＮＧＳｈｕａｉｌｅ㊀ＸＩＡＯＫｅｙｕ㊀ＷＡＮＧＷｅｉｄｏｎｇ㊀ＨＵＡＮＧＬｉｌｉ∗（ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＣｒｏｐＳｔｒｅｓｓＢｉｏｌｏｇｙｆｏｒＡｒｉｄＡｒｅａｓ／ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＡ＆ＦＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ，Ｓｈａａｎｘｉ㊀７１２１００）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｈｏｒｔｃｈａｉｎｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｓ／ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＳＤＲ）ｉｓａｋｉｎｄｏｆＮＡＤ（Ｐ）（Ｈ）－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ｗｈｉｃｈｉｓｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅｆｏｒｃａｔａｌｙｚｉｎｇｔｈｅｒｅｄｏｘｓｔｅｐｓｏｆｖａｒｉｏｕｓｍｅｔａｂｏｌｉｃａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｉｎｏｒｇａｎｉｓｍｓ．ＩｎｏｒｄｅｒｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆＭｄＳＤＲ，ｔｈｅＭｄＳＤＲｇｅｎｅｓｗｅｒｅｔｒａｎｓｉｅｎｔｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎＭａｌｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃａｃｖ．Ｆｕｊｉｂｙａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ，ａｎｄｔｈｅｎｔｈｅｄｉｓｅａｓｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｗａｓｓｔｕｄｉｅｄｂｙｐｒｉｃｋｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅｓｉｎａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｄＳＤＲｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｗｉｔｈｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）．ＴｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｆａｔｔｙａｃｉｄｓｉｎａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｄＳＤＲｗｅｒｅａｎａｌｙｓｅｄｂｙＧａｓｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＧＣ）ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．ＴｈｅｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｓｉｎａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｄＳＤＲｗｅｒｅｓｔａｉｎｅｄｂｙｎｉｌｅｒｅｄ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅａｐｐｌｅｌｅａｖｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｄＳＤＲｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｅｎｈａｎｃｅｄｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏＶａｌｓａｍａｌｉ．Ｔｈｅｌｅｓｉｏｎｄｉａｍｅｔｅｒｏｆｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐｄｅｃｒｅａｓｅｄｂｙａｂｏｕｔ１４ 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人工气候室价格及参数
中型人工气候室适用于中等规模的科研项目或生产测试。
它通常可以模拟更复杂和丰富的环境条件，如模拟高海拔、高温高湿、低氧等特殊环境。
主要参数包括温度范围、湿度范围、光照强度、气压控制等。
典型的价格范围在十几万到几十万人民币之间。
例如，品牌的中型人工气候室参数为温度范围-70℃~150℃，湿度范围10%~98%RH，光照强度可调节，气压范围可调节，售价大约在20万元左右。
大型人工气候室通常用于大规模的科研项目或工业生产测试。
它具有高度定制化的特点，可以根据用户需求进行设计和制造。
主要参数包括温度范围、湿度范围、光照强度、气体控制、气压控制等。
由于定制化程度高，价格参考仅能根据具体需求进行评估。
一般来说，大型人工气候室的价格在几十万元甚至上百万元不等。
除了价格，人工气候室选择时还需注意一些重要参数。
首先是温度和湿度的控制精度，精度越高对于一些研究项目和生产测试越关键。
其次是光照的稳定性和强度范围，对于模拟自然光照的研究项目尤为重要。
还有气体成分的控制精度和气压范围等。
这些参数的选择应根据具体研究、测试需求以及预算来决定。
总之，人工气候室是一种非常重要和有用的科学研究和测试设备，其价格和参数根据不同规格、不同厂商和不同配置而异。
选择适合自己需求和预算的人工气候室时，应充分了解不同型号的参数及其价格，同时结合自身实际需求进行评估和比较，以找到最合适的机型。
目录1概述 (2)1.1气候补偿产品分类 (2)1.2选型表 (2)2供热气候补偿系统 (4)2.1HY7215B-L4气候补偿系统 (4)2.1.1功能简介 (4)2.1.2工作原理 (5)2.1.3系统组成 (5)2.1.4安装方法 (6)2.1.5成功案例 (6)2.2燃气锅炉气候补偿系统 (7)2.2.1功能简介 (7)2.2.2工作原理 (7)2.2.3系统组成 (7)2.2.4安装方法 (8)2.2.5成功案例 (9)2.3燃煤锅炉气候补偿系统 (9)2.3.1功能简介 (9)2.3.2工作原理 (9)2.3.3系统组成 (9)2.3.4安装方法 (11)2.3.5成功案例 (11)3中央空调气候补偿系统 (11)3.1功能简介 (11)3.2工作原理 (11)3.3系统组成 (11)3.4安装方法 (12)3.5成功案例 (13)4机房气候补偿节能系统 (13)4.1功能简介 (13)4.2工作原理 (13)4.3系统组成 (13)4.4安装方法 (14)4.5成功案例 (15)1 概述1.1 气候补偿产品分类气候补偿是根据室外温度变化情况及用户设定不同时间对室内温度的要求，计算确定出恰当的用户供水温度，并自动控制室外管网热媒流量，实现用户系统供水温度随室外温度自动气候补偿，避免产生室温过高而造成能源浪费。
本公司气候补偿产品分类如下所示：1.2 选型表HY7215 气候补偿产品选型表分时分区阀门调节器集中控制柜(*) 要根据其他嵌入式柜进行设计调整。
L4 : 4行中文液晶显示屏T7：7寸彩色触摸液晶屏T10：10寸彩色触摸液晶屏WM : Wall-Mounted 壁挂式：500*400*200 RM : RackMount 机柜式：2200*1600*800 EM : Embedded 嵌入式：操作台确定2 供热气候补偿系统供热气候补偿系统根据不同的现场分为三类:基本型气候补偿系统，主要应用于简单的换热站和锅炉房；燃气锅炉气候补偿系统，主要应用于燃气锅炉房中；燃煤锅炉气候补偿系统，主要应用于燃煤锅炉房中。
三种稻米在贮藏过程中蒸煮特性变化的比较吴伟;李彤;蔡勇建;林亲录【摘要】分别以新收获籼米、粳米和糯米为原料,采用温度37℃、相对湿度85％条件进行人工加速陈化试验,比较贮藏过程中3种稻米的蒸煮特性和耐贮性.研究结果发现:随着贮藏时间的延长,3种大米RVA特征谱中峰值黏度先上升后下降,回生值和糊化温度逐渐上升;籼米浸渍吸水率增加,粳米和糯米浸渍吸水率先上升后下降;3种大米的加热吸水率、延伸率、膨胀率和米饭浸出液透光率增加,米饭浸出液碘蓝值和pH值减小.表明贮藏过程中籼米、粳米和糯米食用品质下降.通过对比表征大米蒸煮食用品质指标的变化幅度比较3种大米的耐贮性,结果发现糯米的耐贮性最差,籼米耐贮性最好,粳米居中.【期刊名称】《食品与机械》【年(卷),期】2014(030)003【总页数】5页(P122-126)【关键词】贮藏;蒸煮特性;籼米;粳米;糯米【作者】吴伟;李彤;蔡勇建;林亲录【作者单位】中南林业科技大学食品科学与工程学院,湖南长沙410004;中南林业科技大学食品科学与工程学院,湖南长沙410004;中南林业科技大学食品科学与工程学院,湖南长沙410004;中南林业科技大学食品科学与工程学院,湖南长沙410004【正文语种】中文中国60%以上居民以稻米为主食，近年来，随着人民生活水平的逐步提高，人们对稻米的食用品质提出了越来越高的要求。
稻谷按其品种不同，主要可分为籼稻、粳稻和糯稻，由于籽粒形态和化学组成的差异，这三类稻谷的食用品质相差较大。
相关研究［1，2］表明粳米食用品质最好，籼米食用品质较差，糯米居中。
稻米的消费特点决定了稻谷需要经过一定时间的储藏，目前中国的稻谷库存量约占全年稻谷产量的40%，且平均库存时间约16个月［3］。
稻米在储藏过程中会发生陈化现象，稻米的陈化既是生理变化，又是自然衰老现象。
在陈化过程中稻米的物理、化学和生理性质发生一系列变化，导致稻米食用品质下降［4］。
由于结构和化学组成的差异，籼稻、粳稻和糯稻在贮藏过程中食用品质的下降幅度也不尽相同，目前仅有少量文献报道了这方面的研究成果。
㊀山东农业科学㊀２０２３ꎬ５５(１０):７~１４ＳｈａｎｄｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ㊀ＤＯＩ:１０.１４０８３/ｊ.ｉｓｓｎ.１００１－４９４２.２０２３.１０.００２收稿日期:２０２２－１２－１３基金项目:济宁市重点研发计划项目(２０２１ＮＹＮＳ０１６ꎬ２０２０ＮＹＮＳ００４)ꎻ国家水稻产业技术体系济宁试验站项目(ＣＡＲＳ－０１－０８０)ꎻ山东省重点研发计划(乡村振兴科技创新提振行动计划)项目(２０２２ＴＺＸＤ０４０)ꎻ山东省农业良种工程项目(２０１９ＬＺＧＣ００３)ꎻ山东省农业科学院农业科技创新工程项目(ＣＸＧＣ２０２３Ａ０４)作者简介:房文文(１９８８ )ꎬ女ꎬ博士ꎬ助理研究员ꎬ主要研究方向为水稻抗病育种ꎮＥ－ｍａｉｌ:ｆｗｅｎｗｅｎ１９８８＠１６３.ｃｏｍ通信作者:张士永(１９６８ )ꎬ男ꎬ研究员ꎬ主要从事水稻育种研究ꎮＥ－ｍａｉｌ:133****1992＠１６３.ｃｏｍ１２个抗稻瘟病基因在山东省地方水稻品种中的分布房文文ꎬ王海凤ꎬ郭涛ꎬ姜艳芳ꎬ薛芳ꎬ张焕霞ꎬ张士永(山东省农业科学院湿地农业与生态研究所/山东省水稻工程技术研究中心ꎬ山东济南㊀２５０１００)㊀㊀摘要:为进一步明确山东省地方水稻品种中抗稻瘟病基因(以下简称抗瘟基因)的分布情况ꎬ本研究利用Ｐｉｔａ㊁Ｐｉｔａ２㊁Ｐｉａ㊁Ｐｉ９㊁Ｐｉｇｍ㊁Ｐｉｋｍ㊁Ｐｉ５４㊁Ｐｉ５㊁Ｐｉｉ㊁Ｐｉｂ㊁Ｐｉｓｈ和Ｐｉ１１２个抗瘟基因的功能标记ꎬ对７８个山东省地方水稻品种进行了分子检测ꎮ结果表明ꎬＰｉ５４和Ｐｉａ在供试品种中的分布频率高达６７.９５％和５０.００％ꎻ其次是Ｐｉ５㊁Ｐｉｋｍ㊁Ｐｉｂ㊁Ｐｉｉ和Ｐｉ１ꎬ分布频率分别为２９.４９％㊁２１.７９％㊁２０.５１％㊁２０.５１％和１６.６７％ꎻ分布频率较低的是Ｐｉ９㊁Ｐｉｓｈ和Ｐｉｔａ２ꎬ分布频率均为１.２８％ꎻ供试品种中都未检出Ｐｉｔａ和Ｐｉｇｍꎮ在供试品种中ꎬ检出２个抗瘟基因的品种数量最多ꎬ占供试品种总数的３４.６２％ꎻ检出１个抗瘟基因的品种数量次之ꎬ占２４.３６％ꎻ检出３㊁４㊁５㊁６㊁７个抗瘟基因的品种分别有１３㊁７㊁４㊁１㊁２个ꎬ另有５个品种未检出任意一个抗瘟基因ꎮ在遗传相似系数为０.８０时ꎬ可将７８个品种聚为４类ꎬ其中７０个品种聚为一类ꎮ本研究初步明确了７８个山东省水稻品种的抗稻瘟病基因分布情况ꎬ可为进一步利用地方品种中的稻瘟病抗性基因培育广谱抗稻瘟病新品种提供科学依据ꎮ关键词:水稻ꎻ山东省地方品种ꎻ抗稻瘟病基因ꎻ分子标记中图分类号:Ｓ５１１.０３４ꎻＱ７８１㊀㊀文献标识号:Ａ㊀㊀文章编号:１００１－４９４２(２０２３)１０－０００７－０８ＤｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆＴｗｅｌｖｅＲｉｃｅＢｌａｓｔＲｅｓｉｓｔａｎｃｅＧｅｎｅｓｉｎＬｏｃａｌＲｉｃｅＶａｒｉｅｔｉｅｓｉｎＳｈａｎｄｏｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅＦａｎｇＷｅｎｗｅｎꎬＷａｎｇＨａｉｆｅｎｇꎬＧｕｏＴａｏꎬＪｉａｎｇＹａｎｆａｎｇꎬＸｕｅＦａｎｇꎬＺｈａｎｇＨｕａｎｘｉａꎬＺｈａｎｇＳｈｉｙｏｎｇ(ＳｈａｎｄｏｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＷｅｔｌａｎｄＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＥｃｏｌｏｇｙꎬＳｈａｎｄｏｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ/ＳｈａｎｄｏｎｇＲｉｃｅＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒꎬＪｉｎａｎ２５０１００ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ㊀ＩｎｏｒｄｅｒｔｏｃｌａｒｉｆｙｔｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｒｉｃｅｂｌａｓｔｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｓｉｎｌｏｃａｌｒｉｃｅｖａｒｉｅｔｉｅｓｉｎＳｈａｎ￣ｄｏｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅꎬ７８ｌｏｃａｌｒｉｃｅｖａｒｉｅｔｉｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｍａｒｋｅｒｓｏｆＰｉｔａꎬＰｉｔａ２ꎬＰｉａꎬＰｉ９ꎬＰｉｇｍꎬＰｉｋｍꎬＰｉ５４ꎬＰｉ５ꎬＰｉｉꎬＰｉｂꎬＰｉｓｈａｎｄＰｉ１ｇｅｎｅｓ.ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｆｒｅｑｕｅｎｃｙｏｆｔｈｅｔｗｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｓＰｉ５４ａｎｄＰｉａｗｅｒｅｈｉｇｈｅｒａｓ６７.９５％ａｎｄ５０.００％ꎬｆｏｌｌｏｗｅｄｂｙＰｉ５ꎬＰｉｋｍꎬＰｉｂꎬＰｉｉａｎｄＰｉ１ｗｉｔｈｔｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｆｒｅｑｕｅｎｃｙａｓ２９.４９％ꎬ２１.７９％ꎬ２０.５１％ꎬ２０.５１％ａｎｄ１６.６７％ꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙꎻＰｉ９ꎬＰｉｓｈａｎｄＰｉｔａ２ｈａｄｔｈｅｌｏｗｅｓｔｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｆｒｅｑｕｅｎｃｙｏｆ１.２８％.Ａｌｌｔｈｅｓｅｖａｒｉｅｔｉｅｓｄｉｄｎ ｔｃｏｎｔａｉｎＰｉｔａａｎｄＰｉｇｍ.Ｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｌｏｃａｌｖａｒｉｅｔｉｅｓｗｉｔｈ２ｂｌａｓｔｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｓｗａｓｔｈｅｍｏｓｔꎬｗｈｉｃｈａｃ￣ｃｏｕｎｔｅｄｆｏｒ３４.６２％ꎻｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｌｏｃａｌｖａｒｉｅｔｉｅｓｗｉｔｈｏｎｅｂｌａｓｔｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｗａｓｓｅｃｏｎｄａｎｄａｃｃｏｕｎｔｅｄｆｏｒ２４.３６％ꎬｗｈｉｌｅｔｈａｔｗｉｔｈｔｈｒｅｅꎬｆｏｕｒꎬｆｉｖｅꎬｓｉｘａｎｄｓｅｖｅｎｂｌａｓｔｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｓｗｅｒｅ１３ꎬ７ꎬ４ꎬ１ａｎｄ２ꎻｆｉｖｅｖａｒｉｅｔｉｅｓｈａｄｎｏｂｌａｓｔｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｓ.Ｔｈｅ７８ｌｏｃａｌｖａｒｉｅｔｉｅｓｃｏｕｌｄｂｅｃｌｕｓｔｅｒｅｄｉｎｔｏｆｏｕｒｃｌａｓｓｅｓａｔｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｏｆ０.８０ꎬａｍｏｎｇｗｈｉｃｈꎬ７０ｖａｒｉｅｔｉｅｓｗｅｒｅｃｌｕｓｔｅｒｅｄｉｎｔｏｏｎｅｃｌａｓｓ.Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙꎬｔｈｅｄｉｓｔｒｉ￣ｂｕｔｉｏｎｏｆｂｌａｓｔｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｓｉｎｔｈｅ７８ｌｏｃａｌｒｉｃｅｖａｒｉｅｔｉｅｓｏｆＳｈａｎｄｏｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅｗｅｒｅｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙｉｄｅｎｔｉ￣ｆｉｅｄꎬｗｈｉｃｈｃｏｕｌｄｐｒｏｖｉｄｅｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓｆｏｒｂｒｅｅｄｉｎｇｎｅｗｖａｒｉｅｔｉｅｓｗｉｔｈｂｒｏａｄ￣ｓｐｅｃｔｒｕｍｂｌａｓｔｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｂｙｆｕｒｔｈｅｒｕｔｉｌｉｚｉｎｇｔｈｅｂｌａｓｔｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｓｉｎｌｏｃａｌｒｉｃｅｖａｒｉｅｔｉｅｓ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ㊀ＲｉｃｅꎻＬｏｃａｌｖａｒｉｅｔｉｅｓｏｆＳｈａｎｄｏｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅꎻＲｉｃｅｂｌａｓｔｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅｓꎻＭｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒ㊀㊀水稻是世界上的主粮作物之一ꎬ近一半的人口以稻米为主食[１－２]ꎮ稻瘟病是水稻生产上最重要的病害ꎬ严重影响水稻产量和品质[３－４]ꎮ山东省一般５年左右会暴发一次ꎬ发病田块一般减产１０％~３０％ꎬ严重的甚至超过５０％[５]ꎮ山东属黄淮海稻区ꎬ以粳稻为主ꎬ年均种植面积达１３万公顷[６]ꎮ稻瘟病的发病条件为气温２６~２８ħ㊁相对湿度９０％以上ꎬ临沂㊁日照等稻区水稻抽穗灌浆期的气候特点符合其发生流行的条件ꎬ是山东省稻瘟病发生较重的地区[７]ꎮ目前ꎬ选育和合理种植抗病品种是控制稻瘟病流行最经济有效的途径[８－９]ꎮ由于田间稻瘟病菌小种类型多样ꎬ易发生变异ꎬ一些抗病水稻品种连续种植３~５年后抗性就会丧失ꎬ田间表现为感病ꎬ从而造成减产[１０]ꎮ随着水稻基因组学和测序技术的迅速发展ꎬ越来越多的抗稻瘟病基因被定位与克隆ꎬ目前已被定位的抗瘟基因有１００多个ꎬ已克隆的抗瘟基因超过３０个[１１]ꎮ抗瘟基因多为显性基因ꎬ其作用方式多为通过与核苷酸结合位点－富含亮氨酸重复序列蛋白(ＮＢＳ－ＬＲＲ)结合ꎬ从而使病原菌失去侵染性[１２－１３]ꎮ近年来ꎬ抗瘟基因分子标记的开发ꎬ主要为ＳＳＲ㊁Ｉｎｄｅｌ㊁ＳＮＰ标记ꎬ为高效检测抗瘟基因奠定了基础[１４－１６]ꎮ张亚玲等利用３５个抗瘟基因标记检测了黑龙江省５０个水稻主栽品种ꎬ发现抗瘟基因Ｐｉｓｈ㊁Ｐｉ３６㊁Ｐｉ３３和Ｐｉ－ＣＯ３９在供试品种中的出现频率为１００％ꎬＰｉ６３㊁Ｐｔｒ㊁Ｐｉ３７㊁Ｐｉ６４㊁ｐｉ２１㊁Ｐｉ９㊁Ｐｉ５４㊁Ｐｉａ㊁Ｐｉｋｐ㊁Ｐｉ３５㊁Ｐｉｋｍ和Ｐｉｋ的出现频率为５０％~１００％ꎬＰｉｔａ㊁Ｐｉｂ㊁Ｐｉｉ㊁Ｐｉ５㊁Ｐｉｚ－ｔ㊁Ｐｉ５０和Ｐｉ２的出现频率为１０％~５０％ꎬＰｉｄ２仅在２个品种中被检测到ꎬＰｉｇｍ仅在１个品种中被检测到ꎬ而Ｐｉｔ㊁Ｐｉｄ３㊁Ｂｓｒ－ｄ１㊁Ｐｉ２５㊁Ｐｉｄ３－Ａ４㊁Ｐｉ５６㊁Ｐｉ１㊁Ｐｉｋｅ和Ｐｂ１在供试品种中未检测到[１７]ꎻ杨林浩等利用一套稻瘟病菌标准菌株和特异性分子标记相结合ꎬ检测了吉林省６８个主栽水稻品种ꎬ发现Ｐｉ￣ｔａ㊁Ｐｉａ㊁Ｐｉｓｈ㊁Ｐｉｔａ２㊁Ｐｉｂ和Ｐｉ９为吉林省主栽品种中出现频率较高的抗瘟基因ꎬ推测所有品种可能不含有Ｐｉ２㊁Ｐｉ５４㊁Ｐｉｋｍ㊁Ｐｉ１１和Ｐｉ１２基因[１８]ꎮ山东省作为重要的粳稻产区ꎬ有着丰富的地方品种资源ꎬ但有关这些品种资源的抗瘟基因分布未见报道ꎮ本研究利用Ｐｉｔａ㊁Ｐｉｔａ２㊁Ｐｉａ㊁Ｐｉ９㊁Ｐｉｇｍ㊁Ｐｉｋｍ㊁Ｐｉ５４㊁Ｐｉ５㊁Ｐｉｉ㊁Ｐｉｂ㊁Ｐｉｓｈ㊁Ｐｉ１共１２个抗瘟基因的分子标记对７８个山东省地方品种进行抗瘟基因检测ꎬ以初步明确这些品种的抗瘟基因组成ꎬ为今后进一步挖掘和利用抗瘟基因㊁培育持久广谱抗瘟品种提供基因信息和数据支持ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀试验材料供试材料为７８个山东省地方水稻品种ꎬ见表１ꎬ均由山东省农业科学院湿地农业与生态研究所种质资源团队收集和保存ꎬ均以常规方法栽培ꎮ试剂及仪器:十六烷基三甲基溴化铵(ＣＴＡＢ)ꎬ购于生工生物工程(上海)股份有限公司ꎻＰＣＲ试剂ꎬ北京全式金生物技术(ＴｒａｎｓＧｅｎＢｉｏｔｅｃｈ)有限公司产品ꎻＥｖａＧｒｅｅｎｑＰＣＲ核酸染料ꎬ美国Ｂｉｏｔｉｕｍ公司产品ꎮＳＰＸ智能型生化培养箱㊁ＲＸＺ－５００Ｃ－ＬＥＤ人工气候培养箱ꎬ宁波江南仪器厂产品ꎻＢＣＤ－２９０Ｗ型立式冰箱ꎬ青岛海尔股份有限公司产品ꎻ罗氏ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ９６实时荧光定量ＰＣＲ仪ꎬＲｏｃｈｅ公司产品ꎮ１.２㊀水稻ＤＮＡ提取剪取３段供试水稻品种的叶片(大小为２ｍｍˑ２ｍｍ)于２ｍＬ离心管中ꎬ采用ＣＴＡＢ法提取ＤＮＡꎮ具体步骤如下:(１)向装有供试水稻叶片的离心管中加６００μＬ６５ħ预热的２ˑＣＴＡＢꎬ然后６５ħ温浴３０ｍｉｎꎻ(２)冷却后加６００μＬ氯仿－异戊醇溶液(氯仿和异戊醇体积比为１ʒ１)混匀ꎬ１２０００ｒ/ｍｉｎ离心１０ｍｉｎꎬ吸２００μＬ上清液ꎬ加入等体积的异丙醇ꎬ轻轻颠倒混匀后于－２０ħ条件下沉淀３０ｍｉｎꎻ(３)１２０００ｒ/ｍｉｎ㊁４ħ条件下离心１５ｍｉｎꎬ弃上清液ꎬ加入６００μＬ体积百分含量为７０％的乙醇洗涤沉淀１~２次ꎬ放入通风橱内吹干ꎻ(４)加入１００μＬＴＥ(１０ｍｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌꎬ０.１ｍｍｏｌ/ＬＥＤＴＡꎬｐＨ８.０)溶解ＤＮＡꎬ使用核酸定量仪测量ＤＮＡ浓度ꎬ并将浓度调整为约１０ｎｇ/μＬꎬ８㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第５５卷㊀㊀㊀表１㊀供试山东省地方水稻品种编号品种名编号品种名编号品种名编号品种名编号品种名编号品种名１小黄稻１４塘稻２７秋旱稻４０北圆１号－１５３香稻６６大红芒－２２竹秆青－１１５旱糯稻２８高秸水旱稻－１４１北圆１号－２５４水稻６７佃户屯乡１１号３大青秸－１１６汪稻２９高秸水旱稻－２４２北圆１号５５郯城野生稻６８石槐４大青秸－２１７水牛皮旱稻－１３０紫皮水旱稻４３清水稻５６红皮高丽旱稻－１６９糯米－１５大青秸－３１８水牛皮旱稻－２３１白芒子４４明水香稻５７红皮高丽旱稻－２７０糯米－２６竹秆青－２１９木枪秆稻子３２小白屯４５旱稻５８水旱稻－１７１小壳旱稻７小红芒２０旱稻白芒３３香粘稻－１４６老旱稻－２５９水旱稻－２７２旱粘稻－１８旱稻子２１明水米旱稻－１３４香粘稻－２４７白砂米６０白米稻７３旱粘稻－２９紫皮旱稻２２明水米旱稻－２３５香粘稻－３４８铁耙子６１粘稻７４白香糯１０秋白水稻２３粘旱稻－１３６青旱稻４９八月芒６２秃头红米稻７５紫秆旱稻１１蒋庄１号２４粘旱稻－２３７蓬莱稻－１５０乐陵旱稻６３短顶芒白米７６紫皮旱稻－１１２大长芒旱稻２５圆粒水稻３８蓬莱稻－２５１葫芦香稻６４水斗扬７７紫皮旱稻－２１３紫颖稻２６半芒水稻３９蓬莱稻－３５２小雪稻６５大红芒－１７８范李庄１号－２０ħ保存待测ＤＮＡꎮ１.３㊀抗瘟基因分子标记本研究选用抗瘟基因Ｐｉｔａ㊁Ｐｉ９㊁Ｐｉｋｍ㊁Ｐｉｇｍ㊁Ｐｉａ㊁Ｐｉ５４㊁Ｐｉｓｈ㊁Ｐｉｉ㊁Ｐｉ１㊁Ｐｉｂ㊁Ｐｉｔａ２㊁Ｐｉ５的分子标记进行试验ꎬ其ＰＣＲ特异性引物信息见表２ꎮ所有引物均由华大基因有限公司合成ꎮ㊀㊀表２㊀抗瘟基因的特异性引物引物名称引物序列(５ᶄ－３ᶄ)退火温度/ħＰｉｔａ－ＦＣＴＴＣＴＴＴＣＴＴＴＣＴＣＴＧＣＣＧＴＧＧ５７Ｐｉｔａ－ＲＣＡＴＣＡＡＧＴＣＡＧＧＴＴＧＡＡＧＡＴＧＰｉ９－ＦＴＧＡＴＴＡＴＧＴＴＴＴＴＴＡＴＧＴＧＧＧＧ５７Ｐｉ９－ＲＡＴＴＡＧＴＧＡＧＡＴＣＣＡＴＴＧＴＴＣＣＰｉｋｍ－Ｅ－ＦＣＡＡＴＧＣＣＡＧＣＡＣＴＣＧＡＡＡＴＣＡＴ５７Ｐｉｋｍ－Ｅ－ＲＣＡＧＴＧＡＣＧＡＴＧＣＣＡＴＣＡＡＣＡＡＡＰｉｋｍ－Ｉ－ＦＴＧＡＡＡＡＴＣＴＣＣＧＴＧＡＧＧＴＧＣＡＴ５９Ｐｉｋｍ－Ｉ－ＲＴＴＧＧＴＴＡＴＴＧＣＴＴＣＴＧＣＣＣＣＡＴＰｉｇｍ－Ｆ２ＣＧＡＡＣＴＡＡＴＡＡＣＴＣＣＡＡＡＣＧＴＡ６０Ｐｉｇｍ－Ｒ１ＧＧＡＧＧＴＧＣＴＡＧＡＧＴＴＴＧＴＣＧＣＣＰｉａ－ＦＡＧＡＴＡＧＴＴＧＴＴＡＡＧＧＴＧＣＡＣＡ６０Ｐｉａ－ＲＣＧＴＴＣＡＣＴＧＡＣＧＣＡＧＣＣＡＧＣＧＣＰｉ５４－ＦＣＡＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＴＴＴＴＣＡＧＧ６０Ｐｉ５４－ＲＧＣＴＴＣＡＡＴＣＡＣＴＧＣＴＡＧＡＣＣＰｉｓｈ－ＦＴＣＴＡＧＡＣＧＡＧＡＴＧＴＡＣＴＴＣＣ５８Ｐｉｓｈ－ＲＴＡＣＡＴＴＴＴＣＡＡＧＡＴＴＡＡＣＧＡＰｉｉ－ＦＡＧＡＡＡＧＡＴＣＣＡＧＴＧＣＴＴＣＴＧ５８Ｐｉｉ－ＲＣＡＡＴＣＴＣＡＧＣＡＧＧＴＴＣＣＴＣＡＰｉ１－ＦＧＴＧＣＴＧＣＴＧＴＧＧＣＴＡＧＴＴＴＧ５８Ｐｉ１－ＲＡＧＴＣＣＣＣＧＣＴＣＡＡＴＴＴＴＴＣＴＰｉｂ－Ｆ４ＣＧＴＧＡＴＧＣＧＴＧＧＡＣＴＴＴＣＧＣ５５Ｐｉｂ－Ｒ７ＴＡＡＣＴＣＣＡＡＡＧＧＡＧＣＴＣＡＧＧＰｉｔａ２－ＦＣＡＧＣＧＡＡＣＴＣＣＴＴＣＧＣＡＴＡＣＧＣＡ６０Ｐｉｔａ２－ＲＣＧＡＡＡＧＧＴＧＴＡＴＧＣＡＣＴＡＴＡＧＴＡＴＣＣＰｉ５－０９ＲＬ０９Ｆ２ＴＣＴＧＧＴＧＡＡＡＡＣＴＣＴＧＡＡＣＧ５６Ｐｉ５－０９ＲＬ０９Ｒ２ＣＧＧＴＧＡＧＴＴＴＡＧＣＧＡＡＧＡＣＣ１.４㊀ＰＣＲ扩增荧光ＰＣＲ反应体系:１０ˑＴａｑｂｕｆｆｅｒ(含２０ｍｍｏｌ/ＬＭｇ２＋)１μＬꎬ２５０μｍｏｌ/ＬｄＮＴＰ０.２μＬꎬ０.５ＵＴａｑＤＮＡＰｏｌｙｍｅｒａｓｅ０.１μＬꎬ２０ˑＥｖａｇｒｅｅｎ０.１２５μＬꎬ１０ｎｇ/μＬＤＮＡ模板３μＬꎬ０.１ｍｍｏｌ/Ｌ正㊁反向引物各０.２μＬꎬ用ｄｄＨ２Ｏ定容至１０μＬꎮ荧光ＰＣＲ扩增程序:９４ħ预变性２ｍｉｎꎻ９４ħ变性１０ｓꎬ６０ħ退火３０ｓꎬ４０个循环ꎮ普通ＰＣＲ反应体系:２ˑＥＳＴａｑＭａｓｔｅｒＭｉｘ(Ｄｙｅ)７.５μＬꎬ水稻ＤＮＡ３.０μＬꎬ正㊁反向引物各０.５μＬꎬ３.５μＬｄｄＨ２ＯꎮＰＣＲ反应程序:９５ħ预变性５ｍｉｎꎻ９５ħ变性３０ｓꎬ５５~６０ħ退火３０ｓ(根据梯度ＰＣＲ的结果选择最佳退火温度)ꎬ７２ħ延伸０.５~１.５ｍｉｎ(由扩增产物的长度决定)ꎬ３２次循环ꎻ７２ħ延伸１０ｍｉｎꎮ１.５㊀琼脂糖凝胶电泳检测抗瘟基因Ｐｉｓｈ㊁Ｐｉｉ㊁Ｐｉｂ㊁Ｐｉｔａ２㊁Ｐｉ５的扩增产物用１％琼脂糖凝胶电泳检测ꎬ１５０Ｖ稳压电泳３０ｍｉｎꎬ然后在凝胶成像系统中拍照ꎮ１.６㊀ＨＲＭ检测抗瘟基因Ｐｉｔａ㊁Ｐｉ９㊁Ｐｉｋｍ㊁Ｐｉｇｍ㊁Ｐｉａ㊁Ｐｉ５４㊁Ｐｉ１的扩增产物经熔解曲线(ＨＲＭ)检测ꎮ分析程序:９５ħ变性１５ｓꎻ６０ħ退火１５ｓꎻ以０.０７ħ/ｓ的速率升温ꎬ１０ｒｅａｄｉｎｇ/ħ采集荧光信号ꎬ至９０ħ保持１ｓꎬ采用ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ９６ｓｏｆｔｗａｒｅ软件进行熔解曲线分析ꎮ１.７㊀数据处理与统计分析采用ＭｉｃｒｏｓｏｆｔＥｘｃｅｌ对数据进行整理和作图ꎮ采用ＮＴＳＹＳ２.１０软件计算７８个品种间的遗９㊀第１０期㊀㊀㊀㊀㊀房文文ꎬ等:１２个抗稻瘟病基因在山东省地方水稻品种中的分布传相似系数ꎬ然后利用非加权类平均法(ＵＰＧＭＡ)对遗传相似系数进行聚类分析ꎬ得到聚类树形图ꎮ２㊀结果与分析２.１㊀稻瘟病抗性基因的分子标记检测及在品种中的分布本研究利用Ｐｉｔａ㊁Ｐｉｔａ２㊁Ｐｉａ㊁Ｐｉ９㊁Ｐｉｇｍ㊁Ｐｉｋｍ㊁Ｐｉ５４㊁Ｐｉ５㊁Ｐｉｉ㊁Ｐｉｂ㊁Ｐｉｓｈ和Ｐｉ１的功能标记对７８个山东省地方水稻品种进行分子检测ꎬ结果(表３)发现ꎬ有５３个品种含有Ｐｉ５４ꎬ有３９个品种含有Ｐｉａꎬ有２３个品种含有Ｐｉ５ꎬ有１７个品种含有Ｐｉｋｍꎬ有１６个品种含有Ｐｉｂ和Ｐｉｉꎬ有１３个品种含有Ｐｉ１ꎬ有１个品种含有Ｐｉ９㊁Ｐｉｓｈ和Ｐｉｔａ２ꎬ所有品种中均未检测到Ｐｉｔａ和Ｐｉｇｍꎮ部分基因分子标记的检测结果如图１㊁图２所示ꎮＰｉ５４和Ｐｉａ在供试品种中的分布频率最高ꎬ分别高达６７.９５％和５０.０％ꎻ其次是Ｐｉ５㊁Ｐｉｋｍ㊁Ｐｉｂ㊁Ｐｉｉ和Ｐｉ１ꎬ分布频率分别为２９.４９％㊁２１.７９％㊁２０.５１％㊁２０.５１％和１６.６７％ꎻ分布频率较低的是Ｐｉ９㊁Ｐｉｓｈ和Ｐｉｔａ２ꎬ均为１.２８％ꎻ检测品种中都不含有抗性基因Ｐｉｔａ和Ｐｉｇｍ(表３㊁图３)ꎮＡ为Ｐｉ１基因分型结果ꎬ红色曲线代表携带Ｐｉ１基因纯合型ꎬ蓝色曲线代表不含Ｐｉ１基因的野生型ꎻＢ为Ｐｉ９基因分型结果ꎬ红色曲线代表携带Ｐｉ９基因的纯合型ꎬ蓝色曲线代表不含Ｐｉ９基因或含有其他等位基因的野生型ꎻＣ为Ｐｉａ基因分型结果ꎬ红色曲线代表携带Ｐｉａ基因的纯合型ꎬ蓝色曲线代表不含Ｐｉａ基因的野生型ꎮ图１㊀高分辨率熔解曲线检测地方水稻品种的抗瘟基因０１㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第５５卷㊀Ａ为Ｐｉ５４基因检测结果ꎬ２１６ｂｐ(抗病基因)/３５９ｂｐ(感病基因)ꎻＢ为Ｐｉｂ基因(９１５ｂｐ)检测结果ꎻＣ为Ｐｉｉ基因(１２２０ｂｐ)检测结果ꎮ泳道２５~３６依次是圆粒水稻㊁半芒水稻㊁秋旱稻㊁高秸水旱稻－１㊁高秸水旱稻－２㊁紫皮水旱稻㊁白芒子㊁小白屯㊁香粘稻－１㊁香粘稻－２㊁香粘稻－３㊁青旱稻ꎮ图２㊀琼脂糖凝胶电泳检测地方水稻品种的抗瘟基因Ｐｉ５４㊁Ｐｉｂ㊁Ｐｉｉ㊀㊀表３㊀山东省地方水稻品种抗瘟基因检测结果编号品种名抗瘟基因ＰｉａＰｉ９ＰｉｋｍＰｉ５４Ｐｉ５ＰｉｉＰｉｂＰｉｓｈＰｉｔａ２Ｐｉ１ＰｉｔａＰｉｇｍ１小黄稻－－－－＋－－－－－－－２竹秆青－１＋－－＋－－－－－－－－３大青秸－１－－－－－－－－－－－－４大青秸－２＋－－＋－－－－－－－－５大青秸－３－－＋－－－－－－－－－６竹秆青－２＋－－＋－－－－－－－－７小红芒－－－＋－－－－－－－－８旱稻子＋－－－－－－－－－－－９紫皮旱稻＋－－＋＋＋－－－－－－１０秋白水稻－－－＋－－－－－－－－１１蒋庄１号－－－＋－－－－－－－－１２大长芒旱稻－－－＋＋－－－－－－－１３紫颖稻－－＋－－－－－－－－－１４塘稻－－－＋＋－－－－－－－１５旱糯稻＋－－＋－－－－－－－－１６汪稻－－－－－－－－－－－－１７水牛皮旱稻－１－－－－－－－－－－－－１８水牛皮旱稻－２＋－＋＋－－＋－－－－－１９木枪秆稻子－－－＋－－－－－－－－２０旱稻白芒－－－＋－－－－－－－－２１明水米旱稻－１＋－－＋－－－－－－－－２２明水米旱稻－２－－－＋－－－－－－－－２３粘旱稻－１－－－＋＋＋－－－－－－２４粘旱稻－２＋－＋－－－－－－－－－２５圆粒水稻＋－－＋－－－－－－－－２６半芒水稻－－－＋＋－－－－－－－２７秋旱稻－－－＋＋＋－－－－－－２８高秸水旱稻－１－－－－－－＋－－－－－２９高秸水旱稻－２－－＋＋＋－－－－－－－３０紫皮水旱稻－－－＋＋＋＋－－－－－３１白芒子－－＋－－－－－－－－－１１㊀第１０期㊀㊀㊀㊀㊀房文文ꎬ等:１２个抗稻瘟病基因在山东省地方水稻品种中的分布㊀㊀表３(续)编号品种名抗瘟基因ＰｉａＰｉ９ＰｉｋｍＰｉ５４Ｐｉ５ＰｉｉＰｉｂＰｉｓｈＰｉｔａ２Ｐｉ１ＰｉｔａＰｉｇｍ３２小白屯＋－－＋－－－－－－－－３３香粘稻－１－－－＋－－－－－－－－３４香粘稻－２＋－－－－－－－－－－－３５香粘稻－３＋－－＋－－－－－－－－３６青旱稻＋－＋＋－－＋－－－－－３７蓬莱稻－１＋－－－＋＋－－－＋－－３８蓬莱稻－２＋－－－－－－－－－－－３９蓬莱稻－３＋－－＋－－＋－－－－－４０北圆１号－１＋－－＋－－－－－－－－４１北圆１号－２－－－－－－－－－＋－－４２北圆１号＋－－＋－－－－－－－－４３清水稻＋－－＋－－－－－－－－４４明水香稻－－－＋－－－－＋－－－４５旱稻－－－－＋＋－－－－－－４６老旱稻－２－－－－－－－－－－－－４７白砂米－－－＋＋－－－－－－－４８铁耙子＋－－＋＋＋＋－－－－－４９八月芒＋－－＋＋＋＋－－－－－５０乐陵旱稻＋－－＋＋＋＋－－－－－５１葫芦香稻＋－＋＋－－＋－－－－－５２小雪稻－－－＋－－－－－＋－－５３香稻＋－－－－－＋－－－－－５４水稻＋－＋＋－－－－－－－－５５郯城野生稻－－＋－＋＋－－－－－－５６红皮高丽旱稻－１＋－＋＋＋＋＋－－＋－－５７红皮高丽旱稻－２－－－＋－－－－－＋－－５８水旱稻－１－－－＋－－－－－＋－－５９水旱稻－２＋－＋＋－－－－－＋－－６０白米稻＋－－＋－－－－－－－－６１粘稻＋－＋＋＋＋＋－－＋－－６２秃头红米稻＋－－＋＋＋＋＋－－－－６３短顶芒白米＋－－＋＋＋＋－－－－－６４水斗扬－－－＋－－－－－＋－－６５大红芒－１＋－＋＋－－－－－－－－６６大红芒－２＋－＋＋－－－－－－－－６７佃户屯乡１１号－－－＋＋＋－－－－－－６８石槐＋－－＋－－－－－－－－６９糯米－１－－－＋－－－－－－－－７０糯米－２－－－－－－－－－＋－－７１小壳旱稻＋－＋＋－－－－－－－－７２旱粘稻－１＋－－－－－＋－－＋－－７３旱粘稻－２－－－－－－－－－－－－７４白香糯＋－－－－－＋－－＋－－７５紫秆旱稻－－＋＋－－－－－－－－７６紫皮旱稻－１－－－－＋＋－－－－－－７７紫皮旱稻－２＋＋－－＋－－－－－－－７８范李庄１号－－－－－－－－－＋－－㊀㊀注:分子标记检测结果中 ＋ 代表含有抗病基因ꎬ － 代表不含有抗病基因或含有其等位基因ꎮ２１㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第５５卷㊀图３㊀１２个抗稻瘟病基因在山东省地方㊀㊀水稻品种中的分布频率２.２㊀不同地方水稻品种含抗瘟基因的数量分析由表３和图４可知ꎬ竹秆青－１㊁竹秆青－２㊁塘稻㊁明水米旱稻－１㊁明水香稻㊁紫秆旱稻等２７个品种检测出２个抗瘟基因ꎬ占检测品种总数的３４.６２％ꎬ其中ꎬ有２３个品种检出Ｐｉ５４ꎬ有１５个品种检出了Ｐｉａꎮ小黄稻㊁大青秸－３㊁小红芒㊁旱稻子㊁秋白水稻㊁蒋庄１号等１９个品种检测出１个抗瘟基因ꎬ占检测品种总数的２４.３６％ꎬ其中ꎬ有８个品种检测出Ｐｉ５４ꎮ粘旱稻－１㊁秋旱稻㊁高秸水旱稻－２㊁蓬莱稻－３㊁香稻㊁郯城野生稻等１３个品种检测出３个抗瘟基因ꎬ占检测品种总数的１６.６７％ꎮ另外ꎬ紫皮旱稻㊁水牛皮旱稻－１㊁青旱稻㊁蓬莱稻－１㊁葫芦香稻等７个品种检测出４个抗瘟基因ꎬ铁耙子㊁八月芒㊁乐陵旱稻㊁短顶芒白米４个品种检测出５个抗瘟基因ꎬ仅秃头红米稻检测出６个抗瘟基因ꎬ红皮高丽旱稻－１㊁粘稻２个品种检测出７个抗瘟基因ꎮ而大青秸－１㊁汪稻㊁水牛皮旱稻－１㊁老旱稻－２㊁旱粘稻－２共５个品种未检测到１２个抗瘟基因中的任何一个ꎮ图４㊀山东省地方水稻品种含抗瘟基因数统计２.３㊀山东省地方水稻品种的聚类分析基于遗传相似系数ꎬ利用ＵＰＧＭＡ法对７８个山东省地方水稻品种进行聚类分析ꎬ结果(图５)显示ꎬ在遗传相似系数０.８０处ꎬ可将７８个供试材料分为四类ꎮ第一类包括大青秸－１㊁汪稻及水牛皮旱稻－１共３个品种ꎻ第二类仅有高秸水旱稻－１ꎻ第三类包括大青秸－３㊁紫颖稻㊁粘旱稻－２及白芒子共４个品种ꎻ其余７０个品种均聚在第四类中ꎮ图５㊀７８个山东省地方水稻品种的聚类分析结果３㊀讨论与结论水稻与稻瘟病菌存在协同进化关系ꎬ一个抗病新品种在生产上使用几年后ꎬ由于稻瘟菌变异而突破水稻的防御机制ꎬ使抗病品种的抗病能力下降甚至丧失ꎬ变为感病品种ꎮ因此ꎬ在改良水稻品种的稻瘟病抗性时ꎬ要首先弄清品种中的抗瘟３１㊀第１０期㊀㊀㊀㊀㊀房文文ꎬ等:１２个抗稻瘟病基因在山东省地方水稻品种中的分布基因(组合)ꎬ从而更好地利用不同的抗瘟基因组合对品种进行改良ꎮ有关我国现有水稻品种中抗瘟基因的分布情况ꎬ前人已进行过一些研究ꎬ如岂长燕等研究了抗瘟基因Ｐｉｂ㊁Ｐｉｔａ㊁Ｐｉ５㊁Ｐｉ２５和Ｐｉ５４在我国１２４份水稻微核心种质中的分布[１９]ꎻ范方军等研究了Ｐｉｂ㊁Ｐｉｔａ㊁Ｐｉ５４和Ｐｉｋｍ在江苏省迟熟中粳稻预试６４份品系中的分布[２０]ꎮ本研究利用１２个抗瘟基因(Ｐｉｔａ㊁Ｐｉｔａ２㊁Ｐｉａ㊁Ｐｉ９㊁Ｐｉｇｍ㊁Ｐｉｋｍ㊁Ｐｉ５４㊁Ｐｉ５㊁Ｐｉｉ㊁Ｐｉｂ㊁Ｐｉｓｈ㊁Ｐｉ１)的分子功能标记检测了７８个山东地方水稻品种的抗瘟基因分布情况ꎬ结果表明ꎬ除Ｐｉｔａ㊁Ｐｉｇｍ未检测到外ꎬ其余１０个基因均能在山东省地方水稻品种中检测到ꎮ其中ꎬＰｉ５４和Ｐｉａ在供试品种中的分布频率较高ꎬ达６７.９５％和５０.０％ꎻ其次是Ｐｉ５㊁Ｐｉｋｍ㊁Ｐｉｂ㊁Ｐｉｉ和Ｐｉ１ꎬ分布频率分别为２９.４９％㊁２１.７９％㊁２０.５１％㊁２０.５１％和１６.６７％ꎻＰｉ９㊁Ｐｉｓｈ㊁Ｐｉｔａ２的分布频率较低ꎬ仅为１.２８％ꎮ各品种含有抗瘟基因的数量为１~７个不等ꎬ抗瘟基因组合种类丰富ꎮ目前ꎬ培育持久广谱抗病品种和合理布局抗病品种仍是控制稻瘟病最经济有效的途径ꎬ而挖掘种质资源中的抗瘟基因是重要基础ꎮ本研究结合山东省稻瘟病菌群体生理小种的变异动态ꎬ挑选出可进一步利用的抗瘟基因Ｐｉ５４㊁Ｐｉａ㊁Ｐｉ５㊁Ｐｉｋｍ㊁Ｐｉｂ和Ｐｉｉꎬ下一步可作为目的基因利用到主栽品种中ꎬ这为育种家培育抗稻瘟病新品种提供了数据支持ꎬ助力了培育持久和广谱抗稻瘟病水稻新品种ꎮ但需注意有些抗瘟基因与不良性状的 连锁累赘 效应ꎬ如Ｐｉｇｍ与小粒性状连锁ꎬ以避免在提高抗病性的同时负向影响产量或品质ꎮ本研究仅检测了１２个抗瘟基因在７８个山东省地方水稻品种中的分布情况ꎬ但其他抗瘟基因的分布情况还有待进一步研究ꎻ另外ꎬ地方品种中抗瘟基因数量与水稻品种稻瘟病抗性频率间的关系也有待进一步研究ꎮ参㊀考㊀文㊀献:[１]㊀ＧｌｏｂａｌＲｉｃｅＳｃｉｅｎｃｅＰａｒｔｎｅｒｓｈｉｐ.ＲｉｃｅＡｌｍａｎａｃ[Ｍ].ＬｏｓＢａñｏｓꎬＰｈｉｌｉｐｐｉｎｅｓ:ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＲｉｃｅＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅꎬ２０１３. [２]㊀ＦＡＯＳＴＡ.ＦＡＯＳｔａｔｉｓｔｉｃａｌＤａｔａｂａｓｅｓ[ＤＢ/ＯＬ].Ｒｏｍｅ:ＦｏｏｄａｎｄＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＯｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ(ＦＡＯ)ｏｆｔｈｅＵｎｉｔｅｄＮａｔｉｏｎｓ.２０１７.ｈｔｔｐ://ｗｗｗ.ｆａｏ.ｏｒｇ/ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ.[３]㊀ＫｈａｎＭＡꎬＢｈｕｉｙａｎＭＲꎬＨｏｓｓａｉｎＭＳꎬｅｔａｌ.Ｎｅｃｋｂｌａｓｔｄｉｓ￣ｅａｓｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓｇｒａｉｎｙｉｅｌｄａｎｄｑｕａｌｉｔｙｔｒａｉｔｓｏｆａｒｏｍａｔｉｃｒｉｃｅ[Ｊ].ＣｏｍｐｔｅｓＲｅｎｄｕｓＢｉｏｌｏｇｉｅｓꎬ２０１４ꎬ３３７(１１):６３５－６４１. [４]㊀孙国昌ꎬ杜新法.水稻稻瘟病防治研究进展和２１世纪初研究设想[Ｊ].植物保护ꎬ２０００ꎬ２６(１):３３－３５. [５]㊀刘振林ꎬ杨军ꎬ金桂秀ꎬ等.山东水稻稻瘟病发病规律㊁特点及防治措施[Ｊ].安徽农业科学ꎬ２０１５ꎬ４３(１４):１０５－１０６. [６]㊀吴修ꎬ杨连群ꎬ陈峰ꎬ等.山东省水稻生产现状及发展对策[Ｊ].山东农业科学ꎬ２０１３ꎬ４５(５):１１９－１２５. [７]㊀赵文生.水稻稻瘟病发病规律与防治措施[Ｊ].科技创新与应用ꎬ２０１２(１):１８７.[８]㊀朱有勇ꎬ陈海如ꎬ范静华ꎬ等.利用水稻品种多样性控制稻瘟病研究[Ｊ].中国农业科技ꎬ２００３ꎬ３６(５):５２１－５２７. [９]㊀贺雄ꎬ丁朝辉ꎬ胡立东ꎬ等.湖南４８个水稻栽培品种抗瘟性评价及抗性基因鉴定[Ｊ].江苏农业科学ꎬ２０２０ꎬ４８(１):１０８－１１３.[１０]ＦａｎｇＷＷꎬＬｉｕＣＣꎬＺｈａｎｇＨＷꎬｅｔａｌ.Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎ￣ｔｉａｌｉｓｏｌａｔｅｓｏｆＭａｇｎａｐｏｒｔｈｅｏｒｙｚａｅｆｏｒｐｏｓｔｕｌａｔｉｏｎｏｆｂｌａｓｔｒｅｓｉｓｔ￣ａｎｃｅｇｅｎｅｓ[Ｊ].Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙꎬ２０１８ꎬ１０８:８７８－８８４. [１１]高清ꎬ张亚玲ꎬ葛欣ꎬ等.水稻抗稻瘟病基因研究进展[Ｊ].分子植物育种ꎬ２０２２ꎬ２０(１１):３６３４－３６４３.[１２]ＰａｒｋＣＨꎬＣｈｅｎＳꎬＳｈｉｒｓｅｋａｒＧꎬｅｔａｌ.ＴｈｅＭａｇｎａｐｏｒｔｈｅｏｒｙｚａｅｅｆｆｅｃｔｏｒＡｖｒＰｉｚ￣ｔｔａｒｇｅｔｓｔｈｅＲＩＮＧＥ３ｕｂｉｑｕｉｔｉｎｌｉｇａｓｅＡＰＩＰ６ｔｏｓｕｐｐｒｅｓｓｐａｔｈｏｇｅｎ￣ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｐａｔｔｅｒｎ￣ｔｒｉｇ￣ｇｅｒｅｄｉｍｍｕｎｉｔｙｉｎｒｉｃｅ[Ｊ].ＰｌａｎｔＣｅｌｌꎬ２０１２ꎬ２４(１１):４７４８－４７６２.[１３]ＴａｋａｈａｓｈｉＡꎬＨａｙａｓｈｉＮꎬＭｉｙａｏＡꎬｅｔａｌ.ＵｎｉｑｕｅｆｅａｔｕｒｅｓｏｆｔｈｅｒｉｃｅｂｌａｓｔｒｅｓｉｓｔａｎｃｅＰｉｓｈｌｏｃｕｓｒｅｖｅａｌｅｄｂｙｌａｒｇｅｓｃａｌｅｒｅｔｒｏ￣ｔｒａｎｓｐｏｓｏｎ￣ｔａｇｇｉｎｇ[Ｊ].ＢＭＣＰｌａｎｔＢｉｏｌ.ꎬ２０１０ꎬ１０:１７５. [１４]易怒安ꎬ李魏ꎬ戴良英.水稻抗稻瘟病基因的克隆及其分子育种研究进展[Ｊ].分子植物育种ꎬ２０１５ꎬ１３(７):１６５３－１６５９.[１５]ＢｒｙａｎＧＴꎬＷｕＫＳꎬＦａｒｒａｌｌＬꎬｅｔａｌ.ＡｓｉｎｇｌｅａｍｉｎｏａｃｉｄｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈｅｓｒｅｓｉｓｔａｎｔａｎｄｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅａｌｌｅｌｅｓｏｆｔｈｅｒｉｃｅｂｌａｓｔｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅＰｉ￣ｔａ[Ｊ].ＴｈｅＰｌａｎｔＣｅｌｌꎬ２０００ꎬ１２(１１):２０３３－２０４６.[１６]ＸｉａｏＧꎬＹａｎｇＪꎬＺｈｕＸꎬｅｔａｌ.Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅｏｆｉｎｅｆｆｅｃｔｉｖｅｈａｐｌｏ￣ｔｙｐｅｓａｔｔｈｅｒｉｃｅｂｌａｓｔｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ(Ｒ)ｇｅｎｅｌｏｃｉｉｎＣｈｉｎｅｓｅｅｌｉｔｅｈｙｂｒｉｄｒｉｃｅｖａｒｉｅｔｉｅｓｒｅｖｅａｌｅｄｂｙｓｅｑｕｅｎｃｅ￣ｂａｓｅｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｄｉ￣ａｇｎｏｓｉｓ[Ｊ].Ｒｉｃｅꎬ２０２０ꎬ１３(１):６.[１７]张亚玲ꎬ高清ꎬ赵羽涵ꎬ等.黑龙江省水稻种质稻瘟病抗性评价及抗瘟基因结构分析[Ｊ].中国农业科学ꎬ２０２２ꎬ５５(４):６２５－６４５.[１８]杨林浩ꎬ王瀚ꎬ赵丹ꎬ等.吉林省主栽水稻品种抗瘟性评价及抗瘟基因型鉴定[Ｊ].植物病理学报ꎬ２０２２ꎬ５２(３):４０４－４１５.[１９]岂长燕ꎬ许兴涛ꎬ马建ꎬ等.抗稻瘟病基因Ｐｉｂ㊁Ｐｉｔａ㊁Ｐｉ５㊁Ｐｉ２５和Ｐｉ５４在我国水稻微核心种质中的分布[Ｊ].植物遗传资源学报ꎬ２０１９ꎬ２０(５):１２４０－１２４６ꎬ１２５４.[２０]范方军ꎬ王芳权ꎬ刘永峰ꎬ等.Ｐｉ－ｂ㊁Ｐｉ－ｔａ㊁Ｐｉｋｍ和Ｐｉ５４对水稻穗颈瘟的抗性评价[Ｊ].华北农学报ꎬ２０１４ꎬ２９(３):２２１－２２６.４１㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第５５卷㊀。
温度升高对不同生活型植物光合生理特性的影响赵娜;李富荣【摘要】为探讨未来温度升高对不同生活型植物的影响，选取了华南地区常见且分布较广的11种木本植物、7种草本植物和3种藤本植物为研究对象，通过人工模拟温度升高（20、25、30、35℃）的实验方法研究其光响应曲线及特征参数。
结果表明，木本植物中大叶相思（Acacia auriculaeformis）、无患子（Sapindus mulorossi）、樟树（Cinnamomum camphora）罗汉松（Podocarpus macrophyllus）、降香黄檀（Dalbergia odorifera）和马樱丹（Lantana camara）的光合生理指标在不同温度下差异均不显著；麻楝（Chukrasia tabularis）的光补偿点（LCP）和气孔导度（Gs）随着温度升高而升高；火力楠（Michelia macclurei）和海南蒲桃（Syzygium cumini）的胞间CO2浓度（Ci）随着温度的升高而下降；海南石梓（Gmelina hainanensis）的Gs和Ci均随着温度升高而下降，其最大净光合速率（Pmax）在不同温度下差异不显著；凤凰木（Delonix regia）的Pmax和Gs随着温度升高而升高，在30℃达到最大。
草本植物中，香根草（Vetiveria zizanioides）、华南毛蕨（Cyclosorus parasiticus）、马齿苋（Portulaca oleracea）的光饱和点（LSP）、LCP、Pmax、Ci在不同温度下均差异不显著，Gs随着温度的升高而增大；飞扬草（Euphorbia hirta）、升马唐（Digitaroa ciliaris）、中华结缕草（Zoysia sinica）的Pmax和Gs随着温度升高而增大。
金钟藤（Merremia boisiana）、薇甘菊（Mikania micrantha）和厚叶悬钩子（Rubus crassifolius）的Pmax、Gs随着温度的升高而增大，在30℃时达到最大值；LCP 随着温度的升高而增大；LSP 在不同的温度下无显著性差异。
不同温度处理对金钟藤种子萌发的影响倪广艳，王昌伟，彭少麟*中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室，广东广州510275摘要：主要研究了恒温25、28、30 ℃不同处理下温度对金钟藤种子萌发的影响，并采用发芽率、发芽指数、活力指数、芽长和胚根长等指标对金钟藤种子发芽效果进行了评价。
结果表明，随着温度的升高，金钟藤种子发芽率、发芽指数、活力指数均上升。
此外，随着温度的升高，芽和胚根出现不同的生长趋势，芽生长增加而根生长减少，进一步显示其地上部分受温度影响会加快生长，预示其入侵危害可能加剧。
鉴于金钟藤目前在广州的危害情况，文章提出应将金钟藤列为潜在的入侵植物，加强研究，尽早开展预防和控制措施。
关键词：金钟藤；温度；种子萌发；入侵植物中图分类号：Q142 文献标识码：A 文章编号：1672-2175（2005）06-0898-03金钟藤（Merremia boisiana (Gagnep.) Ooststr.）是旋花科（Convolvulaceae）多年生缠绕大藤本，别名又称多花山猪菜，分布于海南、广西、云南、越南、老挝及印度尼西亚等地。
它开出黄色漏斗状花朵，白色花冠，常攀附于树上，是一种危害次生林恢复的杂草[1, 2]。
金钟藤在海南植物志和云南植物志均有记载，但广东植物志无记载，是在广东分布的新记录种[3]。
它能够通过种子和藤茎进行繁殖，一般新侵入点以种子繁殖为主，当侵入点已形成庞大群体时，主要靠藤茎的萌芽扩散作用[4]。
自1994年首次在广州龙洞林场发现金钟藤危害树木以来，在广州的发生面积目前已达278.7 hm2[5]，这种危害情况的出现可能与全球变暖及城市热岛效应有关[6]。
因此，本文报道了不同温度处理对金钟藤种子萌发的影响，旨在探讨金钟藤种子繁殖及种群扩散与全球气候变暖之间的关系，为金钟藤的危害发生和防治提供必要的参考资料。
1 材料和方法1.1 材料受试植物金钟藤的种子于2005年1月采集于广州凤凰山（N 23°13′，E 113°23′），该地区属南亚热带季风气候，年降雨量为1600~1800 mm，主要集中在4月和7月，年平均气温23.0 ℃，最高气温可达37.8 ℃。
SD大鼠极端高温高湿环境暴露的实验研究刘刚;刘诗颖;黄伍蓉;简燚;呼永河;吴丽娟【摘要】目的调查极端高温高湿环境暴露对SD大鼠生存、血液生化指标的影响及对主要脏器的伤害.方法 26只SD大鼠分为常温常湿组和极端高温高湿组.观察SD大鼠在极端高温高湿环境中的死亡情况并于半数致死时间点捕杀动物进行血清生化指标测定和心、肺、肾、脑、肌肉和小肠6种组织的病理检测.结果极端高温高湿环境暴露可导致SD大鼠死亡,半数致死时间为48 h;极端高温高湿组与常温常湿组相比,SD大鼠血清肌酐(Scr)显著性升高(P<0.05),血清碱性磷酸酶(ALP)、缺血修饰性清蛋白(IM A)明显下降(P<0.05),其他生化指标无显著性改变;极端高温高湿组SD大鼠心、肺、肾、小肠组织可见炎性细胞浸润,脑和肌肉组织未见明显病理性改变.结论极端高温高湿环境暴露对SD大鼠有明显伤害,可引起某些血液生化指标异常和心、肺、肾、小肠组织的炎性改变,甚至造成死亡.%Objective To investigate the effect of extremely high temperature and high humidity exposure on the survival and blood biochemical indexes of SD rats and the to the major organs .Methods Twenty-six SD rats were divided into the normal tem-perature and humidity group and the extremely high-temperature and high-humidity group .The mortality of SD rats in extremely high-temperature and high humidity environment was observed ,and at the median lethal time ,the living rats were undergoing the tests of serum biochemical indicators and the pathological examination of the heart ,lung ,kidney ,brain ,muscles and intestinal tis-sues .Results The exposure to the extremely high-temperature and high-humidity environment could lead to the death of SD rats , the medianlethal time was 48 h .The serum creatinine(Scr) increasedsignificantly(P<0 .05) ,and the serum alkaline phosphatase (ALP) and ischemia modified albumin (IMA) decreased significantly (P<0 .05) when compared with the normal temperature and humidity group ,and there was no significant difference in other biochemical indicators .The inflammatory cell infiltration was ob-served in heart ,lung ,kidney and intestines ,and there were no obvious pathological changes in brain and muscle .Conclusion The exposure to the extremely high-temperature and high-humidity environment has obvious lesion on SD rats ,it can lead to the abnor-mality of some biochemical indicators ,the inflammatory changes in heart ,lung ,kidney and intestines ,and even death .【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2017(046)036【总页数】3页(P5052-5054)【关键词】高温;高湿;环境暴露;大鼠,Sprague-Dawley;生物学标记;病理学,临床【作者】刘刚;刘诗颖;黄伍蓉;简燚;呼永河;吴丽娟【作者单位】西南交通大学生命科学与工程学院 ,成都610031;中国人民解放军成都军区总医院转化医学科/高湿医学全军重点实验室 ,成都610083;中国人民解放军成都军区总医院转化医学科/高湿医学全军重点实验室 ,成都610083;中国人民解放军成都军区总医院转化医学科/高湿医学全军重点实验室 ,成都610083;中国人民解放军成都军区总医院病理科 ,成都610083;中国人民解放军成都军区总医院中医科 ,成都610083;中国人民解放军成都军区总医院转化医学科/高湿医学全军重点实验室 ,成都610083【正文语种】中文【中图分类】Q494高温高湿环境会导致机体不能有效散热，体温升高，引起机体一系列的生理应激反应，呼吸加深加快、心率增加、消化吸收功能下降等，严重时能导致神经内分泌、能量代谢及免疫功能等系统及组织器官功能的改变[1]。
