教授信息一览表 - 南京农业大学动物医学院

师资队伍/个人信息（样表）姓名周俊性别男职称教授系别农业机械化系学位博士/博导电话E-mail zhoujun@单位地址南京市浦口区点将台路40号邮编210031 研究领域农业机器人，农业装备智能化技术，机器视觉，精准农业装备社会兼职江苏省自动化学会农业自动化分会委员承担项目1.国家重点研发计划项目“电动拖拉机智能化操控与作业关键技术研究及核心零部件研制(编号: 2016YFD0701003)”；2.江苏省农机三新工程项目“谷物联合收获机自动导航及测产系统开发与应用（编号：NJ2015-10）”；3.国家自然科学基金面上项目“粘弹性农业物料机器人抓取模型辨识及主动柔性控制（编号：31471419）”；4.国家自然科学基金面上项目“农业机器人动态作业场景概率图模型研究（编号：31071325）”；5.国家863计划项目“移动式果蔬采摘机器人关键技术研究（编号：2006AA10Z259）” （项目副组长）；6.国家863计划项目“水稻收获机械智能测产系统的研究开发（编号：2006AA10A305）” ；7.教育部博士点基金博导类项目“可变形易损伤农业物料机器人抓取研究（编号：20130097110043）”；1.农业部现代农业装备重点实验室开放课题“密植果园作业农业机械定位与导航方法研究（编号：201302003）” ；2.江苏省自然科学基金面上项目“基于立体视觉导航农业机器人大尺度地形推理研究（编号：BK2010458）” ；3.苏州市农业科技支撑项目“基于无线传感网络的智能温室信息监测系统集成示范（编号：SN201003）” 。

4.国家863计划项目子课题“农田作业机械智能导航控制技术与产品研发”（编号：2006AA10A304）；5.教育部科学技术研究重点项目“基于机器视觉的农业机械自动导。

畜牧兽医学报 2023,54(5):2050-2061A c t a V e t e r i n a r i a e t Z o o t e c h n i c a S i n i c ad o i :10.11843/j.i s s n .0366-6964.2023.05.026开放科学(资源服务)标识码(O S I D ):一株鸭腺病毒3型的分离㊁鉴定及致病性分析曹秀芸1,刘吉文1,汤智辉1,郑紫怡1,闫丽萍1,2*,宋素泉1*(1.南京农业大学动物医学院动物健康与食品安全实验室,南京210000;2.南京农业大学免疫研究所,南京210000)摘 要:从现地分离一株3型鸭腺病毒(d u c k a d e n o v i r u s 3,D A d V -3)并命名为D A d V -3Y N 株,分析该毒株的基因特征与致病特性,本研究选用L MH 细胞进行病毒分离与纯化,并对Y N 株的h e x o n ㊁p e n t o n b a s e ㊁f i b e r 1和f i b e r 2基因进行测序分析㊂通过腿部肌肉注射病毒感染7日龄番鸭,观察番鸭精神状态,记录体重变化㊁脏器剖检特征㊁组织病理学变化㊁计算脏器载毒量㊁泄殖腔拭子排毒量以及血清生化等数据,同时测定法氏囊与脾内凋亡相关基因转录水平以探究Y N 株对宿主免疫功能的影响㊂结果显示,番鸭感染Y N 株后体重增长受到显著抑制(P <0.01;P <0.0001);体内各脏器均出现不同程度病变,攻毒组鸭的肝组织与肾组织脏器系数均大于对照组且在攻毒后第7天差异极显著(P <0.01);攻毒组番鸭血清内丙氨酸氨基转移酶㊁天冬氨酸氨基转移酶和尿素氮含量均显著高于对照组(P <0.001,P <0.0001);同时,法氏囊与脾内细胞凋亡相关基因m R N A 水平显著上升(P <0.01;P <0.001)㊂以上结果提示,Y N 株感染7日龄番鸭后,可以导致肝和肾等脏器损伤,同时可以诱导法氏囊与脾内细胞凋亡从而影响番鸭免疫功能㊂关键词:鸭腺病毒3型;基因特征;致病力;免疫功能中图分类号:S 858.32 文献标志码:A 文章编号:0366-6964(2023)05-2050-12收稿日期:2022-05-18基金项目:禽腺病毒亚单位疫苗平台的构建及应用项目(J B G S 202103)作者简介:曹秀芸(1997-),女,浙江绍兴人,硕士生,主要从事病毒分离工作,E -m a i l :1677588114@q q.c o m *通信作者:闫丽萍,主要从事动物传染病学研究,E -m a i l :y a n l i p i n g @n j a u .e d u .c n ;宋素泉,主要从事临床兽医相关研究,E -m a i l :s u q u a n .s o n g@n ja u .e d u .c n I s o l a t i o n ,I d e n t i f i c a t i o n a n d P a t h o g e n i c i t y A n a l y s i s o f a D u c k A d e n o v i r u s T y pe 3C A O X i u y u n 1,L I U J i w e n 1,T A N G Z h i h u i 1,Z H E N G Z i y i 1,Y A N L i p i n g 1,2*,S O N G S u qu a n 1*(1.A n i m a l H e a l t h a n d F o o d S a f e t y L a b o r a t o r y ,C o l l e g e o f V e t e r i n a r y Me d i c i n e ,N a n j i n g A g r i c u l t u r a l U n i v e r s i t y ,N a n j i n g 210000,C h i n a ;2.N a n j i n g A g r i c u l t u r a l U n i v e r s i t y I n s t i t u t e of I mm u n o l og y ,N a n j i n g 210000,C h i n a )A b s t r a c t :T h e p u r p o s e o f t h i s s t u d y wa s t o i s o l a t e a n o v e l D u c k a d e n o v i r u s 3(D A d V -3)Y N s t r a i n a n d e l u c i d a t e i t s g e n e t i c c h a r a c t e r i s t i c s a n d p a t h o g e n i c i t y.L MH c e l l s w e r e s e l e c t e d f o r v i -r u s i s o l a t i o n a n d p u r i f i c a t i o n ,a n d t h e n t h e v i r u s g e n e s ,i n c l u d i n g h e x o n ,pe n t o n b a s e ,f i b e r 1,a n d f i b e r 2w e r e s e q u e n c e d a n d a n a l y z e d .S e v e n -d a y s -o l d M u s c o v y d u c k s w e r e i n f e c t e d b y i n t r a -m u s c u l a r i n j e c t i o n i n t h e l eg s ,a n d th e m e n t a l s t a t e o f t h e d u c k s w a s o b s e r v e d .B e si d e s ,t h e b o d yw e i g h t c h a n g e s ,n e c r o p s y c h a r a c t e r i s t i c s o f o r g a n s ,h i s t o p a t h o l o g i c a l c h a n ge s ,v i r a l l o a d of o r -g a n s ,c l o a c a s w a b d e t o x i f i c a t i o n ,a n d s e r u m b i o ch e mi s t r y w e r e r e c o r d e d a n d a n a l y z e d .F u r t h e r -m o r e ,t h e t r a n s c r i p t i o n l e v e l s o f a p o p t o s i s -r e l a t e d g e n e s i n t h e b u r s a a n d t h e s pl e e n w e r e m e a s -u r e d t o e x p l o r e t h e e f f e c t o f Y N s t r a i n o n i mm u n e f u n c t i o n .T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t t h e w e i gh t g a i n o f i n f e c t e d d u c k s w a s s i g n i f i c a n t l y i n h i b i t e d (P <0.01,P <0.0001),a n d d i f f e r e n t d e gr e e s o f l e s i o n s a p p e a r e d i n v a r i o u s o r g a n s .T h e c o e f f i c i e n t s o f l i v e r s a n d k i d n e y s o f t h e e x pe r i m e n t a l5期曹秀芸等:一株鸭腺病毒3型的分离㊁鉴定及致病性分析g r o u p w e r e l a r g e r t h a n t h o s e o f t h e c o n t r o l g r o u p,a n d t h e d i f f e r e n c e w a s e x t r e m e l y s i g n i f i c a n t o n t h e7t h d a y a f t e r t h e c h a l l e n g e.A l a n i n e a m i n o t r a n s f e r a s e,a s p a r t a t e a m i n o t r a n s f e r a s e,a n d u r e a n i t r o g e n i n t h e s e r u m o f t h e M u s c o v y d u c k s i n t h e c h a l l e n g e g r o u p w e r e s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n t h o s e i n t h e c o n t r o l g r o u p(P<0.001,P<0.0001).A t t h e s a m e t i m e,t h e m R N A l e v e l s o f a p-o p t o s i s-r e l a t e d g e n e s i n t h e b u r s a a n d t h e s p l e e n i n c r e a s e d s i g n i f i c a n t l y(P<0.01,P<0.001).(C o n c l u s i o n)T h e a b o v e r e s u l t s s u g g e s t t h a t D A d V-3Y N s t r a i n c a n d a m a g e l i v e r s a n d k i d n e y s w h e n c h a l l e n g i n g t h e7-d a y s-o l d M u s c o v y d u c k s,s i m u l t a n e o u s l y,i t c a n a f f e c t t h e i mm u n e f u n c-t i o n o f M u s c o v y d u c k s b y c a u s i n g a p o p t o s i s o f c e l l s i n t h e b u r s a a n d t h e s p l e e n.K e y w o r d s:d u c k a d e n o v i r u s3;g e n e t i c c h a r a c t e r i s t i c s;p a t h o g e n i c i t y;i mm u n e f u n c t i o n*C o r r e s p o n d i n g a u t h o r s:Y A N L i p i n g,E-m a i l:y a n l i p i n g@n j a u.e d u.c n;S O N G S u q u a n,E-m a i l: s u q u a n.s o n g@n j a u.e d u.c n鸭腺病毒(d u c k a d e n o v i r u s,D A d V)被发现最早可以追溯到1977年法国番鸭场中爆发的一场大规模疾病之中,在疫病中被感染的番鸭体重下降,站立不稳,直到1982年,B o u q u e t等[1]通过中和试验,确认该病毒不同于之前所知的禽腺病毒属成员,是一种新型腺病毒㊂2011年,H a r r a c h等[2]提议将这种病毒命名为2型鸭腺病毒(d u c k a d e n o v i r u s2, D A d V-2),但是因为缺乏全株基因序列,该提议并没有被国际病毒委员会(T h e I n t e r n a t i o n a l C o m-m i t t e e o n T a x o n o m y o f V i r u s e s,I C T V)所采纳㊂2014年,奥地利科学家M a r e k等[3]成功获得D A d V-2全基因组序列㊂同年在我国广东,部分番鸭养殖场也出现了类似D A d V-2感染的症状,对所分离毒株进行全基因组测序发现,分离株不同于先前的D A d V-2G R株,被认为是3型鸭腺病毒(d u c k a d e n o v i r u s3,D A d V-3)的候选毒株[4-5]㊂根据I C-T V最新分类,D A d V-2和D A d V-3均属于禽腺病毒属成员㊂目前,国内多地流行的鸭腺病毒仍以D A d V-3为主[6],被感染番鸭主要表现为肝㊁肾肿胀出血和轻微心包积液㊂发病率在40%~55%之间,死亡率可达35%~43%,给各地养殖场带来极大的经济损失[6]㊂2021年7月,云南某番鸭养殖场内7日龄雏鸭纷纷发病,呈现典型D A d V-3的感染症状,本实验室在此批病料中分离获得1株D A d V-3,命名为D A d V-3Y N株㊂本研究拟通过分析毒株的4段主要结构蛋白基因,并感染7日龄番鸭观察分析其临床症状㊁脏器变化㊁脏器载毒量以及法氏囊内细胞凋亡相关基因转录水平,对D A d V-3的遗传特性和致病特征做出全面系统描述,以期为临床对D A d V-3的科学防控提供理论支持㊂1材料与方法1.1试剂材料T r e l i e f T M A n i m a l G e n o m i c D N A K i t购自擎科生物有限公司,2ˑH i e f f P C R M a s t e r M i x㊁H i f a i r Ⅱ1s t S t r a n d c D N A S y n t h e s i s K i t㊁H i e f f U N I C O N q P C R S Y B R G r e e n M a s t e r M i x购自翌胜生物, R N A i s o l a t e r T o t a l R N A E x t r a c t i o n R e a g e n t购自诺唯赞生物公司;D L600D N A M a r k e r㊁D L2000 D N A M a r k e r㊁p M D T M18-T V e c t o r C l o n i n g K i t购自T a k a R a宝日医生物公司㊂1.2样品处理与病原检测2021年7月,云南某番鸭养殖场内7日龄番鸭广泛发病,主要临床病变为肝肾肿胀出血㊂无菌采集番鸭肝组织冷藏运送至实验室进行检测㊂取适量肝组织置于E P管内,充分研磨后取组织悬液上清,按照说明书提取组织D N A和R N A㊂使用常见鸭源病毒引物进行检测,P C R阳性产物连接T载体后送往擎科生物有限公司进行测序验证,每样质粒送3份样品㊂1.3病毒扩增与纯化选取雄性莱昂鸡肝癌(L e g h o r n m a l e h e p a t o-m a,L MH)细胞按照文献中内容进行病毒扩增,当80%以上细胞出现病变后收取培养上清[7]㊂采取有限稀释法进行病毒纯化,3轮有限稀释法后用P C R 方法检测无外源病毒,随后使用蚀斑试验进一步纯化病毒株㊂1.4病毒T C I D50测定L MH细胞接种于96孔板,根据文献中方法接毒[8-9],采用R e e d-M u e n c h两氏法计算T C I D50为107.8㊃m L-1㊂收集细胞培养上清用于后续试验㊂1502畜牧兽医学报54卷1.5Y N株主要结构蛋白基因序列分析参照N C B I上已有D A d V-3G D MM10株(MH777398)的h e x o n㊁p e n t o n b a s e㊁f i b e r1和f i-b e r2基因序列,设计5对引物进行序列扩增,引物由擎科生物有限公司合成,相关信息见下表㊂按照各自退火温度进行P C R扩增,在1%琼脂糖凝胶上电泳,切下明亮条带连接T载体后送往擎科生物有限公司进行测序㊂所得测序结果使用D N AMA N 软件进行序列拼接并使用M E G A7进行序列比对分析㊂表1测序引物信息表T a b l e1T h e i n f o r m a t i o n o f s e q u e n c i n g p r i m e r s引物名称P r i m e r n a m e 引物序列(5'ң3')S e q u e n c e(5'ң3')片段长度/b pP r o d u c t l e n g t h退火温度/ħA n n e a l i n g T e m p e r a t u r eD-h e x o n-A F:A T C G C G T A G A C G A A T GR:T G G C A G G T A A T C A G C A 140660D-h e x o n-B F:T A A T A T C C C G G C T T C T AR:G C T G A C T G T C G G T G G T T 156460D-p e n t o n F:T A G C C A A T A A C T T A C C G CR:A T C C T A G A G C A C G A C C T T 168162D-f i b e r1F:A A G G C A G G A T T C A G A G GR:C A G A A C G G A T A T G T T A G G T C 151357D-f i b e r2F:C G T A C C T A G C G A A G A T T GR:T G C C A T G C G A G T A C A T T 160053F.上游引物序列;R.下游引物序列㊂下同F.F o r w a r d p r i m e r s e q u e n c e.R.R e v e r s e p r i m e r s e q u e n c e.T h e s a m e a s b e l o w1.6D A d V-3Y N株动物致病性试验1.6.1试验动物分组与攻毒设计1日龄番鸭(购自南京特给力种植有限公司)适应性饲养至7日龄,随机分为攻毒组与对照组㊂对照组包含12只番鸭,攻毒组分为观察组与剖检组,每组各10只㊂攻毒组番鸭腿部肌肉注射0.3m L病毒液(3ˑ106.8㊃m L-1 T C I D50),对照组相同部位注射0.3m L P B S㊂攻毒组与对照组番鸭在不同房间饲养,并由不同人员管理,其余条件相同,连续观察14d,记录观察组番鸭临床变化,攻毒后每间隔2d称量番鸭体重并采集泄殖腔拭子㊂剖检组与对照组番鸭在攻毒后第3与第7天随机剖检3只㊂攻毒后14d安乐死剩余攻毒组与对照组番鸭并进行剖检㊂1.6.2剖检观察与切片制作番鸭静脉采血后处死㊂对番鸭进行解剖,观察有无脏器病变㊂称取心㊁肝㊁肾重量并计算脏器系数,脏器系数的计算公式为:脏器重量(g)/体重(g)*100%㊂采集脏器保存于-80ħ冰箱准备后续检测病毒,固定攻毒后第7天番鸭相应脏器,送往武汉皮诺飞生物公司制作切片㊂1.6.3血清生化检测攻毒后第3㊁7和14天分别采集攻毒组与对照组血清,使用南京建成生物工程研究所检测试剂盒检测番鸭血清内丙氨酸氨基转移酶(a l a n i n e a m i n o t r a n s f e r a s e,A L T)㊁天冬氨酸氨基转移酶(a s p a r t a t e a m i n o t r a n s f e r a s e,A S T)和尿素氮(u r e a n i t r o g e n,B U N)三种酶含量,每个样本重复检测3次㊂参照说明书计算分析酶活性㊂1.6.4番鸭排毒量与脏器病毒载量测定攻毒后第3㊁7和14天分别采集攻毒组与对照组番鸭脏器,攻毒后每隔2d采集泄殖腔拭子㊂依照说明书步骤提取病毒D N A㊂以D A d V-3Y N株h e x o n基因序列为模板,使用P r i m e r5软件设计引物,引物信息见表2,引物由擎科生物有限公司合成㊂以实验室所构建T-h e x o n质粒为阳性模板,按照文献方法[10],10倍比稀释制作荧光定量标准曲线㊂q P C R检测脏器与泄殖腔拭子所含病毒,将攻毒组C t值数据带入标准曲线公式内计算拷贝数㊂每个样品重复3次㊂根据10c o p i e s病毒量为界限, 3个重复孔C t值大于35的判定为阴性,反之则判断为阳性㊂1.6.5法氏囊与脾凋亡基因m R N A转录水平测定 T R I z o l法提取法氏囊和脾总R N A并反转录成c D N A,S Y B R G r e e n q P C R进行检测,所得数据基于2-әәC t的方式进行计算,获得促凋亡基因25025期曹秀芸等:一株鸭腺病毒3型的分离㊁鉴定及致病性分析B a x,B a k-1,c a s p a s e-3和c a s p a s e-9以及抑凋亡基因B c l-2的转录水平㊂引物参考现有文献内序列,相关信息见表3,由擎科生物有限公司合成㊂表2D A d V-3病毒定量P C R引物信息T a b l e2P r i m e r i n f o r m a t i o n o f q u a n t i t a t i v e P C R d e t e c t i o n f o r D A d V-3引物名称P r i m e r n a m e 引物序列(5'ң3')S e q u e n c e(5'ң3')片段长度/b pP r o d u c t l e n g t hD A d V-3-F G T C T G C T C A G G T A C G C T T A A T T CD A d V-3-R T C T A C T G C C T G A T T C C A T A G T G C149表3引物信息表T a b l e3P r i m e r i n f o r m a t i o n引物名称P r i m e r n a m e 引物序列(5'ң3')S e q u e n c e(5'ң3')片段长度/b pP r o d u c t l e n g t hB a x[11]F:A A AC C A A G C G G C T C A G C G A G TR:G G C C C C A G T T G A A G G C T C C G T C C 162B a k-1[12]F:G G T G A GC C A G C G T T A G A A A GR:G C T C C T G T C A C C A T G T T C C T 135B c l-2[12]F:G G A G G GC T G A A A G A A A A A GR:T A T G A T G C G G C A C G A C T G 213c a s p a s e-3[12]F:C G G A C T G T C A T C T C G T T C A G G C A CR:G T C C T T C A T C G C C A T G G C T T A G C 200c a s p a s e-9[11]F:A T C C T G T C C C A C G G C T G T C AR:T C G G G T G A A T C G C A A T C C A C T 212β-a c t i n[12]F:A T G T C G C C C T G G A T T T C GR:C A C A G G A C T C C A T A C C C A A G A A1651.7数据分析本研究中使用G r a p h P a d P r i s m整理试验数据并绘图,数据均表示为 平均值ʃ标准误差(m e a nʃS E M) ,通过双因素方差分析(T w o-w a y A N O V A)对不同组数据之间的差异性进行统计学检验㊂*Pɤ0.05被认为具有显著性差异㊂2结果2.1病毒的分离番鸭样品经过检测发现禽流感病毒㊁减蛋综合征病毒㊁4型禽腺病毒等常见病原均为阴性,但D A d V-3呈强阳性,同时伴随着鸭瘟病毒(d u c k e n-t e r i t i s v i r u s,D E V)和番鸭细小病毒(M u s c o v y d u c k p a r v o v i r u s,M D P V)感染㊂P C R产物经过测序比对确认无误㊂选择L MH细胞进行病毒分离,病毒接种于L MH细胞24h后,细胞出现典型的细胞病变(图1A):细胞皱缩呈现葡萄串状,大量死细胞脱落漂浮于培养上清中,与腺病毒接毒后病变相似[13]㊂病毒在细胞上多次传代均可见一致的细胞病变㊂收取细胞培养上清,P C R结果显示培养上清中可扩增得到633b p的特异性条带(图1B)㊂2.2Y N株基因进化分析鸭腺病毒主要依据h e x o n与f i b e r等基因序列的同源性进行种属分类[6,14]㊂序列比对结果显示(图2),Y N株h e x o n,p e n t o n b a s e和f i b e r1基因与D A d V-3G D MM10株以及C H-G D-12-2014株高度同源(100%);f i b e r2在第1338个碱基处存在突变,由腺嘌呤(A)突变为胞嘧啶(C),翻译的氨基酸由异亮氨酸变为谷氨酰胺,与G D MM10等毒株相同源性99.93%㊂与禽腺病毒的一些血清型相比,Y N 株与G o o s e a d e n o v i r u s-4同源性更高,相比之下禽腺病毒虽然也能感染鸭,但与Y N株同源性相对较低㊂3502畜 牧 兽 医 学 报54卷A.接毒后L MH 细胞产生病变;B .D A d V -3P C R 后电泳结果:M.D L 2000D N A M a r k e r ;1.阳性对照;2.细胞培养上清;3.阴性对照A.C y t o p a t h i c e f f e c t (C P E )w a s p r o d u c e d i n L MH c e l l s p o s t -i n f e c t i o n o f t h e v i r a l i s o l a t e ;B .E l e c t r o ph o r e s i s r e s u l t s o f D A d V -3a f t e r P C R :M.D L 2000D N A M a r k e r ;1.P o s i t i v e ;2.C e l l c u l t u r e s u p e r n a t a n t ;3.N e ga t i v e c o n t r o l 图1 Y N 株接毒后细胞病变与P C R 检测F i g .1 C y t o pa t h i c e f f e c t d e t e c t e d i n L M H c e l l a n d P C R d e t e c t i o n o f Y N s t r a in A.h e x o n 基因进化树;B .p e n t o n b a s e 基因进化树;C .f i b e r 1基因进化树;D.f i b e r 2基因进化树㊂方框内为本研究中Y N 株A.G e n e t i c e v o l u t i o n a r y t r e e o f h e x o n g e n e ;B .G e n e t i c e v o l u t i o n a r y t r e e o f p e n t o n b a s e g e n e ;C .G e n e t i c e v o l u t i o n a r y tr e e o f f i b e r 1g e n e ;D.G e n e t i c e v o l u t i o n a r y t r e e o f f i b e r 2g e n e .T h e Y N s t r a i n w a s s h o w e d b y a bo x 图2 D A d V -3Y N 株基因进化树F i g .2 G e n e t i c e v o l u t i o n a r yt r e e o f D A d V -3Y N s t r a i n 2.3 攻毒后番鸭临床症状7日龄番鸭攻毒后出现精神沉郁,蹲卧好静等情况,未见死亡病例㊂对照组番鸭精神状态良好,生长发育正常㊂每隔2d 对番鸭进行称重(图3),结果显示,攻毒组番鸭体重在第7与第9天显著低于对照组(P <0.0001),攻毒后第11天攻毒组仍显著低于对照组(P <0.05)㊂直至攻毒后第13天,两组番鸭体重差异不显著㊂结果表明,7日龄番鸭攻毒后体重增长受到一定抑制㊂2.4 攻毒后番鸭脏器病变2.4.1 脏器解剖学病变 雏鸭通过腿部肌肉注射感染病毒后,在感染后第3㊁7和第14天进行剖检,发现攻毒组番鸭出现轻微心包积液(图4A ),心表观未见明显变化㊂在第3㊁7天肝组织略显肿大并45025期曹秀芸等:一株鸭腺病毒3型的分离㊁鉴定及致病性分析*.P <0.05;**.P <0.01;***.P <0.001;****.P <0.0001,下同*.P <0.05;**.P <0.01;***.P <0.001;****.P <0.0001.T h e s a m e a s b e l o w图3 攻毒后番鸭体重(n =5)F i g .3 B o d y w e i g h t o f M u s c o v y du c k s a f t e r i n f e c t i o n (n =5)存在出血点,第14天肝充血肿胀,边缘略显钝圆,存在明显出血点(图4B )㊂此外,攻毒组番鸭肾组织存在不同程度的肿胀,颜色加深(图4C )㊂脾淤血肿胀,边缘钝圆,颜色暗红(图4D )㊂2.4.2 脏器组织病理学变化 固定脏器相应部位后制作切片,显微镜观察未发现心肌细胞出现明显变化㊂攻毒组番鸭肝细胞变性,染色不均,肝细胞排列混乱,肝索结构消失㊂脾淤血,大量红细胞分布于脾细胞间㊂攻毒后番鸭肾组织内肾小球萎缩,与小囊间间隙增大且肾小囊内血细胞增多,肾小管上皮细胞变性㊁肿大突入管腔内导致管腔狭窄,小管结构不清(图5)㊂A.番鸭出现心包积液;B .番鸭肝组织病变;C .攻毒后番鸭肾组织病变;D.番鸭脾组织病变㊂心包内积液由黑色箭头指出,肝组织出血点由白色箭头指出㊂d pi 表示攻毒后天数A.P e r i c a r d i a l e f f u s i o n a f t e r i n f e c t i o n ;B .P a t h o l o g i c a l c h a n g e s o f l i v e r s ;C .P a t h o l o g i c a l c h a n g e s o f k i d n e y s ;D.P a t h o l o gi -c a l c h a n g e s o f s p l e e n s .P e r i c a r d i a l e f f u s i o n w a s s h o w e d b y b l a c k a r r o w s a n d b l e e d i n g p o i n t i n l i v e r s w a s s h o w e d b y w h i t e a r -r o w s .d p i m e a n s d a ys p o s t i n f e c t i o n 图4 攻毒后番鸭脏器病变F i g .4 O r g a n s p a t h o l o g i c a l c h a n g e s o f M u s c o v y du c k s a f t e r i n f e c t i o n 2.4.3 脏器系数变化 通过计算脏器系数,发现攻毒组与对照组番鸭心脏系数无明显差异,攻毒组番鸭的肝脏与肾脏系数在攻毒后均大于对照组,在攻毒后第7天存在显著差异(图6A ,P <0.01),提示攻毒后肝㊁肾存在一定肿胀㊂2.4.4 血清生化指标变化 检测血清A L T ,A S T 以及B U N 三种酶的含量㊂结果显示,血清内B U N 含量在攻毒后第3㊁7㊁14天都显著高于对照组(P <0.001)㊂A L T 在攻毒后第3㊁7与14天差异极显著(P <0.01,P <0.001)㊂攻毒组血清A S T5502畜 牧 兽 医 学 报54卷图5 不同脏器病理切片(400ˑ)F i g .5 P a t h o l o g i c a l s e c t i o n o f d i f f e r e n t o r ga n s (400ˑ)A.心脏系数;B .肝脏系数;C .肾脏系数;D.血清B U N 含量;E .血清A L T 含量;F .血清A S T 含量A.C a r d i a c c o e f f i c i e n t ;B .L i v e r c o e f f i c i e n t ;C .K i d n e y co e f f i c i e n t ;D.L e v e l o f B U N ;E .L e v e l o f A L T ;F .L e v e l o f A S T 图6 脏器系数与血清生化指标(n =3)F i g .6 O r ga n c o e f f i c i e n t a n d s e r u mb i oc h e m i c a l i nde x (n =3)含量在攻毒后第3天(P <0.01),第7天(P <0.001)和第14天(P <0.01)与对照组相比差异极显著(图6B )㊂结果提示攻毒后番鸭肝与肾均存在一定损伤㊂2.5 攻毒后番鸭排毒量与脏器载毒量使用荧光定量P C R 对所采集泄殖腔拭子以及不同组织脏器进行检测,结果显示,攻毒后番鸭排毒量持续在102~103c o pi e s ㊃m L -1,攻毒后第1天排毒量最高,直至试验结束仍可向环境中持续排毒(图7A )㊂攻毒后番鸭肝与心载毒量较高,在攻毒后第7和14天分别达105和104c o p i e s ㊃g -1,攻毒后第7与14天,肝载毒量逐渐升高,与其他脏器差异显著(P <0.01,P <0.001,P <0.0001)㊂攻毒后脾脏载毒量较其他脏器略低,约103~104c o p i e s ㊃g -1㊂试验过程中对照组番鸭的泄殖腔拭子与脏器载毒量检测均呈阴性㊂2.6 法氏囊与脾凋亡相关基因转录水平由结果可知(图8㊁9),攻毒后番鸭法氏囊与脾65027502 5期曹秀芸等:一株鸭腺病毒3型的分离㊁鉴定及致病性分析A.攻毒后试验组番鸭泄殖腔排毒情况;B.攻毒后3d脏器载毒量;C:攻毒后7d脏器载毒量;D.攻毒后14d脏器载毒量㊂数据分析采用双因素方差分析(n=3)㊂相同字母表示两组数据无显著差异,不同字母表示两组数据存在显著差异,肝与其他脏器差异性用*表示A.E x p e l l i n g o f t o x i n i n c l o a c a o f e x p e r i m e n t d u c k s a f t e r i n f e c t i o n;B.O r g a n v i r u s l o a d i n3d a y s p o s t-c h a l l e n g e;C.O r g a n v i r u s l o a d i n7d a y s p o s t-c h a l l e n g e;D.O r g a n v i r u s l o a d i n14d a y s p o s t-c h a l l e n g e.D a t a w e r e a n a l y z e d u s i n g t w o-w a y A N O-V A(n=3).T h e s a m e l e t t e r i n d i c a t e s n o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e b e t w e e n t h e t w o g r o u p s a n d t h e d i f f e r e n t l e t t e r s i n d i c a t e s i g-n i f i c a n t d i f f e r e n c e s b e t w e e n t h e t w o g r o u p s o f d a t a,t h e d i f f e r e n c e b e t w e e n t h e l i v e r a n d o t h e r o r g a n s i s i n d i c a t e d b y*图7攻毒后试验组番鸭泄殖腔排毒量与脏器组织病毒载量F i g.7V i r a l l o a d o f c l o a c a l s w a b a n d v i s c e r a i n e x p e r i m e n t d u c k s a f t e r i n f e c t i o n图8法氏囊凋亡相关基因转录水平(n=3)F i g.8T r a n s c r i p t i o n l e v e l o f a p o p t o s i s-r e l a t e d g e n e s i n b u r s a(n=3)畜 牧 兽 医 学 报54卷图9 脾凋亡相关基因转录水平(n =3)F i g .9 T r a n s c r i p t i o n l e v e l o f a p o p t o s i s -r e l a t e d g e n e s i n s pl e e n (n =3)促凋亡基因转录水平出现不同程度升高㊂攻毒组番鸭在攻毒后第7天法氏囊内4种促凋亡基因B a x ㊁B a k -1㊁c a s p a s e -3和c a s pa s e -9转录水平显著高于对照组(P <0.0001),攻毒后第14天B a x (P <0.01)㊁B c l -2(P <0.001)㊁c a s pa s e -3(P <0.0001)和c a s pa s e -9(P <0.0001)也显著高于对照组㊂抑凋亡基因B c l -2则在攻毒后第7天(P <0.0001)和第14天(P <0.01)显著下降,B c l -2/B a x 比值也在攻毒后显著下降(P <0.001,P <0.0001)㊂结果表明攻毒后番鸭法氏囊内细胞凋亡水平上升㊂攻毒后第7天番鸭脾内凋亡相关基因转录水平均显著高于对照组(P <0.0001),抑凋亡基因转录水平显著下降(P <0.01,P <0.0001);攻毒后第14天B a x (P <0.01)㊁B a k -1(P <0.001)和c a s p a s e -3㊁c a s pa s e -9(P <0.0001)也显著升高㊂B c l -2/B a x 比值也在攻毒后第7与14天显著下降,以上数据提示攻毒后番鸭脾内细胞凋亡水平上升㊂3 讨 论2014年从广东番鸭体内分离到第一株D A d V -3后[15],国内报告D A d V -3临床感染的情况越来越多㊂2018年,S h i 等[14]自福建㊁浙江㊁安徽和广东分离得到4株鸭腺病毒㊂2016 2019年间,S h i 等[6]分离得到7株D A d V -3,全基因组测序发现O R F 67存在缺失,可能是新的突变株㊂2018 2020年间,广东㊁福建与广西三省番鸭养殖场发生多起D A d V -3感染病例,Y i n 等[16]从病料中分离获得12株D A d V -3㊂本实验室从来自云南的病料中分离得到1株D A d V -3Y N 株,序列比对后发现该毒株与目前在国内流行的C H -G D -12-2014株以及G D MM 10株等相应片段相似度为99.93%~100%㊂不同于现有突变株存在的O R F 67截断突变,Y N 株f i b e r 2蛋白长短未改变,也未见对盲肠存在明显致病效果[6]㊂目前对禽腺病毒的研究发现,毒株的致病能力强弱主要由h e x o n ,f i b e r 2蛋白决定[17-18],有研究表明,f i -b e r 2作为保护性抗原可针对病原感染提供免疫保护[19-20],也有学者认为,f i b e r 1在病毒侵染宿主过程中起到主要作用[21]㊂因此,研究4段主要结构蛋白的基因序列对预测分离株的毒力有一定的指导意义㊂之前的研究报道中,鸭腺病毒可以抑制受感染番鸭的生长发育[1,4],同属的禽腺病毒也存在相同的抑制作用[22]㊂本研究中感染番鸭精神状态不佳,体重增长受到显著抑制,与之前研究相一致㊂对攻毒后番鸭脏器进行检测发现各脏器均存在病毒扩增,在肝组织中拷贝量最高㊂番鸭感染D A d V -3后可向环境中持续排毒,这可能对同群番鸭造成感染风险㊂这也与之前对禽腺病毒的研究相符合:禽腺病毒可以通过口-粪传播途径造成水平传播[23]㊂85025期曹秀芸等:一株鸭腺病毒3型的分离㊁鉴定及致病性分析剖检结果显示,番鸭感染Y N株后肝㊁肾等脏器均出现一定病变,与之前C H-G D-12-2014株感染后病变相似[4]㊂相应脏器固定后切片染色,可观察到相对应的组织学病变,同之前S h i等[6]与Y i n等[16]所观察的D A d V-3导致的组织病理学变化相似㊂A L T㊁A S T和B U N分别在肝与肾细胞受到损伤时逸出到血液中[24],因此,本研究攻毒组番鸭血清A L T㊁A S T和B U N含量升高也从侧面证明了番鸭的肝与肾受损㊂B a x与B a k-1作为同一促凋亡家族蛋白,两者之间可形成二聚体激活c a s p a s e[11,25];c a s p a s e-9为凋亡初始阶段发生作用蛋白,c a s p a s e-3则为凋亡的 执行者 ,一旦被激活则使细胞发生不可逆的凋亡[26]㊂本研究中,攻毒组番鸭在感染后法氏囊与脾内B a x等促凋亡基因的表达量均显著上升,B c l-2/ B a x则在攻毒后显著降低,提示法氏囊与脾功能可能受到损害㊂法氏囊是禽类主要免疫器官,在体液免疫中起到重要作用,与宿主抵抗病毒时抗体水平息息相关[27]㊂一些疾病如传染性法氏囊损伤法氏囊后,宿主的免疫功能受到影响[28]㊂研究发现,当传染性法氏囊与禽腺病毒共同感染鸡时,可以导致宿主免疫反应降低以及死亡率增加[29]㊂脾是全身免疫的重要器官,与禽类的先天性免疫息息相关[30],在病毒侵入机体时积极响应[31]㊂已有研究发现,当一些病原感染机体后通过使脾坏死从而削弱宿主的免疫能力[32]㊂本研究中番鸭中枢免疫与外周免疫器官均受到一定影响,势必会增加其他病原的共感染风险㊂流行病学调查发现禽类养殖场内常存在腺病毒与其他病原混合感染的情况[33-35],亦有报道称D A d V-3与其他病原混合感染后可能会导致D A d V-3临床症状加剧[14,16]㊂本研究检测发现,D A d V-3Y N株存在与D E V㊁M D P V混合感染的情况,番鸭免疫机能受到影响,可能导致养殖场内番鸭在混合感染的情况下D A d V-3的临床症状加剧或者其他病原在番鸭体内致病能力增强,这也从侧面解释了实验室感染D A d V-3Y N株后致病能力弱于当地番鸭的临床感染㊂4结论本研究自云南番鸭养殖场分离得到1株鸭腺病毒,通过对分离株的主要基因序列进行分析证实该病毒为D A d V-3㊂致病性试验证实该病毒以较为温和的方式在番鸭群体中流行,感染番鸭后影响其生长性能,损害多个脏器,且导致番鸭持续向环境中排毒,还可以影响番鸭的免疫功能㊂因此,本研究对D A d V-3的分离鉴定和早期防控都具有重要意义㊂参考文献(R e 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刘圣梅女1925-9-1本科01-01-53南京大学信息管理学系教师副研究馆员金光灿男1921-1-1本科09-01-53原民进省委会秘书长副厅郑惠宁男1921-1-1高中03-01-54原省民进秘书处处长正处单树模男1916-11-1本科01-01-56南京师范大学地科院(退休)教师教授杨竞秋女1918-1-1本科01-01-56南京化工动力专科学校教师中级陈光蓉女1925-3-8本科01-01-56江苏教育学院(退休)教师副教授蔡德粹女1908-4-1本科05-01-56南京师范大学(退休)教师教员邹仁海男1910-8-14本科08-16-56省体育运动学校教师副处级胡令晖女1921-1-1本科01-01-57南京大学图书馆馆员徐大文男1917-3-1本科04-01-57江苏教育出版社编辑副编审葛德生男1919-10-1高中04-01-57江苏教育杂志社编辑副编审罗学宏男1918-9-17本科06-01-56南京体育学院图书馆教师副研究员朱俊杰男1932-1-1本科06-05-80江苏省美术馆高级美术师孙观懋男1943-8-1大专12-05-80江苏省社会主义学院副院长兼副主委副厅韩德森男1953-1-1本科01-01-81江苏教育学院艺术科教师张荷女1946-1-1本科04-01-81江苏教育学院音乐系教师副教授高雪芳女1927-10-11小学05-01-81江苏省歌舞剧院演员文艺二级袁寅琴女1945-1-1中专05-01-81江苏省歌舞剧院演员文艺三级孙世鉴男1944-12-1中专06-01-81江苏省歌舞剧院评弹团演员文艺二级黄续汉女1911-9-1本科07-01-81南师外语学院教师副教授朱凤德男1914-6-28本科08-01-81南京师范大学物理系教师副教授董宽恩男1936-6-1大专09-01-81南京体育学院运动器材厂厂长张逸男1926-9-7本科01-01-82南京体育学院体育系足球教练副教授薛鑑曾男1939-8-19大专03-01-82南京体育学院体育系教师讲师庄弘醒男1941-1-1大专03-01-82江苏教育学院美术系教师副教授许次楠男1933-7-1高中04-01-82南京航运专科学校财务科(退休)会计会计师谢登明男1915-7-1本科05-01-82江苏商业管理干部学院教师张启明男1939-2-25大专07-01-82南京体育学院体育系体操教练副教授魏廉男1925-11-25大专08-01-83江苏省总工会宣传部干部马逢伯男1946-4-24中专09-01-82江苏省歌舞剧院演员文艺三级顾群女1947-2-1初中09-01-82江苏省歌舞剧院演员文艺二级查仲兰女1931-3-9本科10-01-82江苏省体校教师讲师谢隆英女1931-9-1本科10-01-82南京师范大学教科院副主任副研究员邱蕴秋女1933-10-18大专10-01-82江苏省体校化学教师高级讲师周淑德女1936-10-9大专10-01-83江苏省体校教师高级讲师郭荣江男1929-6-1小学01-01-83江苏省戏剧学校京剧教师文艺三级蔡鸣芬男1930-10-1大专01-01-83江苏省戏剧学校昆剧科主任高级讲师聂性诚男1935-12-1大专01-01-83南京师范大学公关体育教研部教师副教授施义贵男1942-8-1本科01-01-83南京工程学院外语教研室主任副教授任序绵女1929-2-1本科03-01-83南京化工动力专科学校图书馆科技情报员馆员郑璞君女1937-12-1大专04-01-83原民进江苏省委会组织处处长兼副秘书长正处刘德宝男1945-5-1中专04-01-83江苏省戏剧学校教师讲师朱竹安男1935-11-1高中04-04-83江苏省昆剧院舞美设计文艺三级吕俊男1945-12-1本科04-22-83南京师范大学外语学院(中共党员教师教授奚一量男1941-11-27本科06-01-83江苏省体校物理教师讲师顾洪星男1946-12-12大专06-19-83江苏省蹦床队主教练高级教练侯向群女1945-9-1本科06-06-83南京气象学院外语系教师讲师陈琳女1936-11-1高中07-01-83江苏省人民艺术剧院演员文艺一级熊国栋男1944-4-1大专07-01-83江苏省人民艺术剧院导演文艺一级沈赞明女1950-9-1博士08-01-83南京农业大学动物医学院基础医学教师教授潘俊卿女1931-1-1本科09-19-83江苏省体校语文副组长副教授高明琪女1944-11-1大专09-01-83江苏省人民艺术剧院演员文艺二级陈广生男1941-2-1大专10-01-83江苏省人民艺术剧院演员文艺二级储雄堡男1918-6-30大专11-01-83南京体育学院江苏省田径队教练高级教练高慰伯男1919-9-1小学11-01-83江苏省戏剧学校演奏员文艺二级袁嘉祺女1924-6-1本科肄12-01-83南京师大资料室(退休)馆员虞健男1953-8-1本科02-01-84南师体育系(中共党员)教师副教授常国武男1929-12-1本科02-01-84南京师范大学文学院(退休)教师教授耿青松男1941-4-1本科02-01-84南京理工大学老干部处教师中学高级曹锡华男1950-6-10初中03-01-84江苏省电视台编辑中级陈翔鸥男1955-11-1本科03-01-84南京师大金陵女子学院教师副教授鞠昭毅男1938-3-1本科03-01-84江苏省体校高级讲师陈吉永男1932-7-1本科05-01-84南京师大体育系(退休)教师讲师杨毓慈女1937-7-1大专06-01-84南京师大音乐系(退休)教师副教授傅小石男1932-9-1本科09-01-84江苏省美术馆高级美术师蒋一斐女1940-7-1中师09-01-84南京大学图书馆古籍组组长馆员王播生男1940-3-1本科11-05-84南京化工动力专科学校科技情报室组长副研究馆员魏德裕男1922-11-1本科12-01-84南京大学图书馆古籍组组长副研究馆员梁鸿泉男1937-7-1本科12-01-84原民进省委会社会服务处(退休)处长正处吴顺祥男1945-10-12大学12-01-84南京体育学院英语教研组组长副教授吴时代女1949-5-1大专03-15-85江苏省人民艺术剧院演员文艺三级胡彦宁女1953-3-1大专03-15-85省民进组织处副处长李伟忠男1936-10-1中专03-15-85金陵神学院办公室主任朱伯铭男1937-11-1中师03-15-85南京师范大学物理系(退休)教师副教授林克仁男1939-11-1本科03-15-85南京师范大学音乐系教师教授张慕林男1927-6-15大专04-22-85江苏人民出版社编辑副编审费炜炜男1948-3-1大专04-24-85江苏教育学院教师政工师陈素贞女1935-11-1本科04-24-85南京化工动力专科学校教师副教授吴达生男1937-10-1本科05-04-85南京师范大学化学系(退休)教师高级工程师李之亿男1943-12-10本科11-29-87江苏省体操队教练员一级教练倪波男1936-1-1本科11-29-85南京大学信息管理研究所教授吴蓉珍女1941-11-14本科03-07-87江苏省体校教师高级讲师李歌男1949-7-1本科06-18-86南京师范大学图书馆副主任副研究馆员李仲英男1951-6-1本科06-18-86南京师范大学图书馆馆员曹小丽女1948-2-1中专08-05-86江苏省戏剧学校昆剧科教师讲师梁慧超男1920-4-1大专08-05-86江苏省戏剧学校教师文艺一级查曼若女1935-2-1本科08-05-86江苏省戏剧学校编导科教师高级讲师羚华健男1958-7-1高中10-03-86江苏省人民艺术剧院演员文艺三级陈惠龄男1916-8-1大专10-03-86江苏教育学院(退休)教师翟秀华女1940-12-25大专10-03-86南京体育学院医务院药剂士主管药师许国山男1944-3-1中专10-03-86江苏省扬剧团演员文艺二级张文婵女1944-5-1中专10-03-86江苏省歌舞剧院演员文艺二级何炬男1946-2-1大专10-03-86江苏省扬剧团乐队指挥兼作文艺二级虞启华女1932-6-1本科10-16-86南京化工动力专科学校电气化系资料员馆员王孟怡女1936-12-31本科10-16-86南京化工动力专科学校物理组教师讲师钟荣女1941-1-1中专10-16-86江苏省京剧院演员文艺一级刘志翔男1941-5-1中专10-16-86江苏省京剧院演员文艺二级移荣华男1943-10-1本科10-16-86民进省委会组织处助理调研员肖冬荣男1944-10-1本科11-10-86南京气象学院计算机与信息工程系主任教授郑春花女1947-2-1本科12-01-86东南大学中大医院人教育处教师中高王继南男1936-6-1中专12-24-86江苏省昆剧院演员文艺二级高继荣男1938-1-1中专12-24-86江苏省昆剧院演员文艺二级黄云女1944-7-1本科12-24-86南大图书馆咨询部门主任馆员谭石孙男1946-4-1大专12-24-86南京大学数学系图书馆馆员陆一鹏男1933-2-1本科02-10-87南京师范大学化学系教师副教授熊宁女1949-3-1硕士03-10-87江苏教育学院地理系教师副教授朱长春男1933-2-1大专03-10-87南京师范大学地科院教师副教授华逸飞女1933-9-23中专03-10-87南京体育学院医务院医师主治医师肖长明男1934-1-1本科03-10-87南京师范大学物理系教师副教授陈青女1936-1-1本科03-10-87南京师范大学数学系教师教授沈孟璎女1936-7-1本科03-10-87南京师范大学文学院教师教授朱作桐男1937-2-19本科03-10-87南京师范大学数学系教师教授吴国芬女1938-2-10本科03-10-87南京体育学院医务院医生副主任医师陈祥风女1928-10-1本科03-20-87南京师范大学外语学院(退休)资料员馆员王韵芳女1928-11-1本科03-20-87南京师范大学外语学院(退休)教师馆员陈彬文男1954-8-1大专03-26-87中国四达国际经济技术合作公司江业务经理中学一级闫玉江男1953-8-17大专04-11-87南京体育学院江苏省羽毛球队教练高级教练刘恩荣男1937-8-14大专04-11-87江苏省篮球队教练员高级教练朱敦名男1942-9-1本科04-11-87江苏教育学院数学系计算机教研室副主任副教授司徒钟宝男1949-3-3大专05-25-87江苏省歌舞剧院辅导部舞蹈演员文艺二级董梅女1949-8-1中专05-25-87江苏省歌舞剧院评弹团演员文艺二级尤丽华女1953-3-25中专05-25-87江苏省歌舞剧院辅导部舞蹈演员文艺二级王素英女1940-10-1本科05-25-87江苏教育学院宣传部院刊编辑室编辑副编审汪兆芬女1942-12-31本科05-25-87南京师范大学数学系主任副研究馆员汪光盛男1936-1-1本科05-30-87原省民进宣调处副处长副处曹啸君男1917-10-1初中07-01-87江苏省歌舞剧院演员文艺一级华士明男1931-8-1本科07-25-87江苏省美术出版社连环画编辑室主任副编审李华女1934-7-1中专07-25-87江苏省扬剧团演员文艺二级陆家齐男1945-9-1中专07-25-87江苏省扬剧团演员文艺二级刘荣兰女1946-6-1初中07-25-87江苏省扬剧团演员文艺一级吴蕙明女1946-9-1初中07-25-87江苏省扬剧团演员文艺一级徐畅男1941-4-1高中09-24-87江苏省草书社高级美术师陈健君女1939-10-1初中10-10-87江苏少年儿童出版社校对中级薛复女1941-11-1本科10-11-87南京师范大学图书馆(退休)主任副研究馆员林树中男1926-5-1本科10-16-87南京艺术学院美术系教师教授张树云男1921-3-1本科11-01-87南京艺术学院美术系教师教授侯莉君女1925-1-1中师12-01-87江苏省歌舞剧院演员文艺一级任福康男1936-4-1本科12-16-87南京艺术学院音乐系教师副教授黄建民男1936-1-1本科01-21-88江苏科技出版社副主编副编审王伟钧女1927-10-1本科01-27-88江苏教育学院教管系教师讲师杜古庭女1935-8-1本科01-27-88南京师范大学教科院(退休)馆员张德元男1940-8-21本科01-27-87南京体育学院体育系办公室主任讲师陈剑霏女1944-2-29本科01-27-89南京体育学院体育系游泳教研室游泳教师讲师马国新女1952-8-1大专02-15-88江苏省民进办公室主任科员主任科员李峻利男1940-12-24本科02-22-88东南大学交通学院副院长教授唐文莉女1953-5-1初中03-18-88江苏省歌舞剧院评弹团演员文艺三级俞子正男1954-10-1博士03-18-88南京师范大学音乐系主任教授任雨越女1934-4-1本科03-18-88南京师范大学音乐系主任馆员陆宝珠女1937-5-1本科03-18-88江苏科学技术出版社农业编辑室副主任编审温克信男1939-2-1本科03-18-88江苏科学技术出版社美编室副主任副编审徐祖林男1944-6-1大专03-18-88江苏省歌舞剧院评弹团演员文艺二级尢雪芬女1945-2-1中专03-18-88江苏省京剧院乐队演奏员文艺三级于桂生男1952-8-2初中04-11-88江苏省歌舞剧院歌剧团演员文艺二级徐季平男1955-11-1高中04-11-88江苏省京剧院京胡演奏员文艺三级冯梁荪男1937-7-1本科04-11-88东南大学电气系教师副教授黄文宣男1938-12-8本科04-11-89南京体育学院体育系田径教研室教练副教授凌定保男1932-1-1硕士05-27-88江苏教育学院教育科研所教师副教授王海燕男1939-6-1本科05-27-88江苏省人民医院内科心血管流行病主任主任医师吴维安女1943-12-1本科05-27-88江苏省歌舞剧院演奏员文艺一级范秋华女1956-8-1大专06-29-88江苏省歌舞剧院歌剧团独唱演员文艺一级王光征女1936-1-1本科06-29-88南京生化制药研究所研究室副主任高级工程师符宝春男1936-3-1本科06-29-88江苏教育学院物理系教师副教授、高芮小珠男1944-1-1本科06-29-88江苏省歌舞剧院民乐队演奏员文艺一级程云田男1952-9-1大专06-30-88省民进组织处主任科员云建男1955-1-1大专06-30-88省民进宣调处处长沈钢男1959-10-1大专06-30-88省民进办公室副主任瞿安华男1915-1-1本科09-30-88南京艺术学院音乐系教师教授卞尚云男1942-6-1本科09-30-88南京化工动力专科学校工程师高级工程师萧平男1942-12-1本科09-30-88江苏省国画院高级美术师王云诗女1937-8-1本科11-04-88南京师范大学留学生部教师副教授吴小清女1957-12-1本科11-04-88南京师范大学数科院教师副研究员胡杰女1955-12-1大专11-08-88南京审计学院基础课部办公室主任讲师张浦生男1934-4-1本科11-17-88南京博物院研究员王学熙男1940-2-1本科11-17-88南京图书馆辅导部主任研究馆员周荣男1958-1-1大专12-01-88南京林业大学教师讲师刘全女1950-3-1本科12-08-88江苏省幼儿师范教师高级讲师张燕女1944-7-19大专12-10-88东南大学人文学院教师副教授相卫男1950-1-1本科12-20-88东南大学交通规划设计研究院教师高级工程师张友生男1956-8-5大专12-20-88南京体育学院江苏省排球队教练运动健将陆西骋男1930-1-1本科肄12-20-88南京大学出版社总编室主任副编审苏璧耀男1934-6-1硕士12-20-88南京师范大学地科院(退休)教师教授沈绍绪男1937-7-1本科12-20-88江苏科技出版社理科编辑室副主任副编审许顺生男1937-11-1本科12-20-88江苏科技出版社工科编辑室副主任副编审陈政男1941-7-1硕士12-20-88南京图书馆古籍部研究馆员谢蕴华男1931-5-10本科12-21-88南京动力专科学校教师副教授申小大男1955-5-1本科(12-29-88南京图书馆科技情报部经理副研究馆员陈大琦男1929-10-28大专12-29-88江苏省扬剧团一级作曲文艺一级秦恒定男1941-6-10中专12-29-88江苏省扬剧团主胡演奏员文艺二级石来鸿男1925-5-1大专01-01-89江苏省扬剧团(退休)一级编剧文艺一级黄厚生男1942-7-1大专01-01-89江苏省扬剧团演奏员文艺三级陈长河男1934-2-1本科02-27-89中国第二历史档案馆副研究馆员黄汉生男1936-9-1大专02-27-89东南大学体育系教师副教授王民城男1936-10-1本科02-27-89南京化工学院化工系教师高级工程师林信元男1938-6-1本科02-27-89南京大学计算机系教师高级工程师宋满英女1939-3-1大专02-27-89南京大学信息管理系教师副教授许丽云女1942-5-1本科02-27-89南京大学国际商学院国贸系副处级馆员单启成男1945-9-5本科02-27-89南京大学信息管理系副主任副教授文明陵男1947-10-1大专02-27-89南京师范大学地科院资料室教师副研究馆员韩明英女1950-11-1中专03-15-89中国银行江苏省分行行政科会计会计师郑克珉女1936-5-3本科03-15-89南京化工大学应用化学系教师副教授曹小珏女1939-7-1本科03-15-89南京师范大学物理系教师副教授吴枕源男1942-10-1本科03-15-89江苏省扬剧团乐队演奏员文艺一级胡国瑞男1945-5-1硕士03-15-89南京艺术学院设计艺术系教师教授黄东城男1935-2-1本科03-29-89省作协《雨花》杂志社副编审谢小英女1944-6-29本科03-29-89东南大学图书馆流通部(退休)副研究馆员李敏女1937-1-1大专04-03-89南京林业大学幼儿园（退休）幼儿园主任中学高级陆根章男1949-2-1中专05-15-89江苏省京剧院演员文艺三级袁晓虹女1960-8-16硕士05-15-89南京艺术学院爱乐学院声乐演员文艺一级韩际云男1929-12-1本科05-15-89江苏省测绘局测管处工程师高级工程师周鸿生男1932-11-22本科05-15-89南京大学生化系教师副教授王纲男1933-12-1本科05-15-89南京艺术学院设计艺术系教师副教授李汉康男1936-11-1本科05-15-89江苏省人民医院心内科(共产党员医生主任医师戈孝珍女1937-4-1大专05-15-89南京大学计算机系教师副教授徐开明男1940-2-1大专05-15-89南京大学国际商学院经济信息中心主任高级工程师王伯彝男1942-4-1大专05-15-89南京图书馆副研究馆员刘毅男1942-9-1中专05-15-89江苏省歌舞剧院演奏员文艺二级胡乃洁女1944-5-1本科05-15-89南京电子管厂职工大学教研组长副教授范毓周男1947-12-1博士05-15-89南京大学历史系古代史教研室主任教授谭燕秋女1956-9-14大专06-28-89南京体育学院体育系教师副教授侯长荣男1960-12-1中专06-28-89江苏省扬剧团演员文艺一级张大春男1961-2-1中专06-28-89江苏省扬剧团演员文艺二级巢萍女1963-10-23中专06-28-89江苏省扬剧团演员文艺二级张国威男1934-9-1大专06-28-89南京师范大学电教中心教师实验师许菊芳女1934-10-1本科06-28-89江苏省测绘局测绘资料档案馆高级工程师魏铁生男1936-6-1中专06-28-89江苏省测绘局制图室主任工程师宗祥华女1937-6-17中专06-28-90江苏省体校实验师实验师惠永涛男1938-12-1本科06-28-89南京大学计算机科学系教师高级工程师朱惠娥女1944-12-4大专06-28-89江苏省体校教练高级教练章耀达男1934-4-1本科10-27-89江苏古籍出版社副编审沈素瑛女1943-8-17大专10-27-89南京体院运动训练部科长一级教练俞少华男1962-11-1本科12-01-89江苏省经济广播电台节目主持人中学二级蒋耕六男1937-10-1本科12-02-89东南大学中大医院病案室高级统计师马永才男1940-8-13大专12-02-89省民进联络处助理调研员安志凤女1941-2-10中专12-02-89东南大学中大医院医师主治医师沈霞义男1929-12-1本科12-25-89南京化工供销公司财务科长高级会计师徐存厚男1943-9-1大专12-25-89江苏省广播电视大学教务处考试中科员正科张霖女1936-10-1中专01-13-90东南大学中大医院神经科脑电图室主管技师吴支超男1937-3-1本科01-13-90江苏省美术馆雕塑创作室二级美术师陈云龙男1940-4-28本科01-13-90东南大学中大医院内科内科门诊主任主治医师许琼珠女1940-11-1中专01-13-90东南大学中大医院放射科主管护师王云仙女1941-9-1中专01-13-90东南大学中大医院放射科主管技师贾福琴女1955-11-1本科03-09-90南京师范大学体育系教师讲师陆协新男1932-10-1本科03-09-90南京师范大学文学院(退休)教师副教授孟中岳男1933-5-1本科03-30-90南京师范大学化学系名誉主教授吴汉新男1958-6-26硕士06-04-90江苏省人民医院血液科医生副研究员王学方男1939-1-1本科06-04-90东南大学中大医院眼科医师副主任医师史九林男1940-10-1大专06-04-90南京大学信息管理系教研室主任副教授吴兰洲男1945-12-1高中06-04-90南京大学地质系实验室实验师张传仁男1957-4-1本科09-17-90南京师范大学政治与行政学院教研组长讲师陈琦男1963-3-1本科10-26-90南京艺术学院美术系教师副教授王克宇男1954-6-12本科11-28-90南京师范大学教师工程师孙心菲女1948-5-1大专12-31-90南京大学浦口区外语广播电台台长讲师范小天男1954-5-1本科12-31-90福纳文化科技股份有限公司总经理谢友宁男1957-8-1本科12-31-90河海大学图书馆期刊部主任副研究馆员王继志男1940-11-1本科12-31-90南京大学中文系教师教授唐炳良男1948-3-7本科01-23-91省作家协会《钟山》杂志社编辑缪锟男1956-6-1本科01-23-91江苏省人民医院消化内科医生副主任医师李永革男1937-7-1本科01-23-91江苏省经济信息中心副总工程师高级工程师洪沛男1949-7-19本科04-22-91南京工程学院印刷厂厂长高级工程师查龙女1941-7-1本科04-22-91东南大学中大医院中医内科医师副主任医师傅完珍女1936-9-1本科05-27-91江苏省人民医院呼吸科医生主任医师芮孝芳男1939-12-31本科05-27-91河海大学水文水资源及环境学院教师教授、博导华锡生男1943-9-1硕士05-27-91河海大学土木工程学院教授、博导王锦堂男1939-3-1本科06-13-91南京化工大学应用化学系本科教授程榜芳男1949-2-1硕士08-01-91南京人口管理干部学院人口与健康教师副教授蔡伟男1959-2-1本科09-02-91江苏省人民艺术剧院副院长、艺术总监文艺一级陈荣兴男1939-11-1大专09-02-91河海大学图书馆副研究馆员王淑德女1935-2-1本科09-16-91江苏省电化教育馆节目制作中心教师高级工程师胡德安女1940-11-1本科09-16-91南京大学环科系图书馆副研究馆员徐克斌男1942-3-18大专09-16-91江苏省戏剧学院舞台美术科主任文艺一级秦福生男1963-6-1硕士11-26-91东南大学智能运输研究中心研究所副所长副教授贺阿仁女1941-4-1本科11-26-91南京化工动力专科学校电子教研室组长副教授王永止男1942-7-1大专11-26-91南京师范大学教务处副处长研究员沙正铨男1947-9-13大专11-26-91南京898厂华宁联合职工大学教务主任工程师梁忠民男1962-11-8博士12-16-91河海大学水文水资源及环境学院(教师副教授吴营生男1958-5-1大专12-28-91江苏省戏校三产教师讲师汪洋男1930-8-1本科03-16-92省政府参事室参事一级律师辛洪祥男1957-10-1本科05-06-92南京工程学院动力系教师副教授张郢华男1935-3-1本科05-06-92东南大学中大医院解剖教研组教师副教授周伟君男1937-9-1中专06-24-92东南大学中大医院同位素室主管技师仇麟曾男1944-11-1大专06-24-92南京五四印刷厂设计室工艺师匡乐林男1953-10-26本科07-22-92飞利浦南京磁性材料有限公司副主任工程师朱寿桐男1958-12-1博士07-22-92南京大学中文系教师教授陈守伦男1945-10-1硕士07-22-92河海大学水力水电工程学院教授、博导刘秉衡男1943-8-1高中10-05-92南京市工艺美术工业公司工艺美术师谢佐男1957-9-1本科11-04-92江苏省广播电视大学教务处考试中主任科员助理研究员蔡冲男1958-4-1本科11-04-92省教委师培中心副主任副研究员汪小洋男1958-6-1本科11-04-92江苏广播电视大学文学艺术系副主任副教授张京军男1959-6-1本科11-04-92江苏省广播电视大学教务处考试中副主任科员助理研究员刘锋男1962-10-1本科11-04-92江苏省译林出版社副总编副编审姜国定男1963-4-1本科11-04-92南京师范大学研究生处副处长副研究员陆玉麒男1963-9-27博士11-04-92南京师范大学地科院教师副教授承益清男1964-3-1本科11-04-92东南大学临床医学院影像系教师主管技师胡智华女1943-10-1本科11-04-92东南大学运用化学教研室教师副教授吕登建男1953-3-1大专12-24-92江苏长城律师事务所律师三级律师马文潭男1952-11-1本科03-31-93河海大学出版社发行科科长讲师董鸿鸣男1956-2-1本科03-31-93江苏省广播电视大学财经系系教研室主任讲师盛一平男1961-7-1硕士03-31-93江苏省广播电视大学政法系系教学秘书副教授虞金其男1938-12-1本科03-31-93地矿部综合岩矿测试中心工程师高级工程师王史维女1947-1-1本科03-31-93江苏省广播电视大学远研室教师助理研究员樊天经男1937-4-1本科04-07-93南京人口管理干部学院信息科学系教师副教授郭小明男1954-7-1本科08-07-93江苏省歌舞剧院交响乐团首席文艺一级谢建华女1962-12-1硕士08-07-93南京市委宣传部文艺处(硕士)副科级讲师朱国芳男1949-9-13中专08-25-93江苏省文化艺术研究所省戏曲志副主任艺术二级黄俊男1954-1-22大专09-01-93南京体育学院自行车队领队一级教练李丹女1960-3-6本科09-01-93南京体育学院成教处科长副教授肖立俊男1944-10-20大专09-01-93南京体育学院工会干事副科级郭毅男1958-4-1本科10-23-93东南大学中大医院中医外科医师副主任医师陈兆兰女1961-11-1大专10-23-93江苏教育报刊社编辑部副主任编辑黄文龙女1940-4-1本科10-23-93南京大学基建处工程师司马美琴女1942-11-1本科10-23-93南京大学医院内科医生副主任医师王振槐男1939-11-1本科11-06-93南京大学政治与行政管理学系教师教授王显黎女1955-2-9中专11-24-93江苏省审计厅农业审计处副处长审计师陈俭男1958-5-1本科12-08-93东南大学中大医院超声心动图室医师主治医师冯今明女1940-9-1本科12-08-93东南大学医学化学教研室教师副教授徐秀娟女1945-10-1本科12-16-93江苏省人民医院药剂科医师主管药剂师倪志新男1949-2-1中专01-19-94江苏省锡剧团演出部主任文艺一级吴兆金男1953-10-1本科01-19-94南京大学数学系编辑副编审赵纯男1956-1-1本科01-19-94南京动力高等专科学校自动化系教师副教授张勤女1963-4-25本科01-19-94南京师范大学国交院教师助理研究员谭渭仙女1940-12-1本科01-19-94江苏省人民医院传染科医生主任医师高荣林男1942-9-1本科01-19-94南京师范大学新闻传播学院副院长副教授朱俊贤男1945-2-1大专01-19-94江苏省锡剧团主任科员文艺二级毛翠华女1958-11-1硕士02-02-94东南大学中大医院内科医师副主任医师方云女1964-4-1本科02-02-94南京图书馆历史文献部副研究馆员储兆瑞男1942-11-1本科03-09-94江苏省社会科学院公关咨询中心主任研究员刘仲蔚男1962-12-1本科03-23-94南京林业大学林产工业设计院四室主任高级工程师蒋瞻男1963-1-11本科03-23-94南京林业大学设计院基建处处长高级工程师江仲熙男1939-10-1本科03-23-94南京林业大学林学系教师副教授于彤男1939-3-1本科04-05-94中国第二历史档案馆整理部研究员王佩麟女1947-6-1本科04-13-94南京工程学院物理教研室主任副教授吴来顺男1949-4-1中专05-04-94江苏省歌舞剧院民乐团演奏员文艺二级王晓柳男1949-7-1本科05-04-94南京师范大学教育科学学院副院长副教授邱敏舟男1954-1-1中专05-04-94江苏省歌舞剧院副院长文艺二级李国华男1935-11-1本科05-04-94南京理工大学自动控制系教师副教授。

74一例猫瘟热的诊治潘树德1,徐湛2,李学俭1,孙义和1(1.沈阳农业大学牧医学院110161;2.南京农业大学动物医学院210095)猫瘟热又称猫泛白细胞减少症,是由猫泛白细胞减少病毒引起的猫科动物的一种急性高度接触性传染病。

临床上病猫突发高热,呕吐、腹泻、脱水及循环血液中白细胞减少为特征。

1病例情况狸花猫,5月龄,雌性,2.3kg 。

猫主带猫至动物医院就诊。

主诉:此猫在就诊前一天喂过大量猫罐头,平时主要以猫粮为主食,平时很少喂其他食物,当天晚上此猫即发生呕吐、腹泻。

经检查,此猫体温39.6℃、流涎、精神沉郁,肠音较强、心率快。

2诊断与治疗医生根据病猫的临床症状和发病前喂过大量猫罐头,开始诊断为胃肠炎。

治疗:给予胃复安1.2mg 皮下注射,一天两次;5%葡萄糖30ml 加法莫替丁1mg ,静脉注射,一天两次;生理盐水30ml 加氨苄西林钠100mg ,山莨菪碱(654-2)1mg ,地塞米松1mg 静脉注射,一天两次;蒽诺沙星8mg 皮下注射,一天两次。

连续用药治疗2d 后,病猫症状不但未得到缓解,而且呕吐加重,已开始呕吐黄色分泌物。

腹泻由初诊时的灰黄色稀便转变为暗红色的血便,且便味腥臭。

医生又进一步采血对病猫进行血常规化验发现白细胞总数降到3.6×109/L 、淋巴细胞总数降到0.6×109/L 、粒细胞总数降到2.7×109/L 、红细胞降到4.3×1012/L 。

根据血常规检查白细胞降低、淋巴细胞降低、粒细胞降低,意识到有可能是猫瘟感染。

又采集病猫粪便进行猫泛白细胞减少病毒抗原检测,检测结果为强阳性。

最后根据病猫所表现的临床症状,血常规检查白细胞降低,和猫泛白细胞减少病毒抗原检测强阳性,诊断为猫瘟热。

治疗:给予胃复安1.2mg 皮下注射,一天2次;止血敏0.1g 皮下注射,一天2次;5%葡萄糖30ml 加法莫替丁1mg 静脉注射,一天2次;生理盐水30ml 加氨苄西林钠100mg ,山莨菪碱(654-2)1mg ,静脉注射一天2次;乳酸林格20ml 加5%葡萄糖20ml 静脉注射,一天2次;蒽诺沙星8mg 皮下注射,一天2次;猫瘟单克隆抗体3ml 皮下注射,一天1次;猫白细胞干扰素5万单位皮下注射,一天1次。

实现科研理想追逐精彩人生记南京农业大学动物医学院平继辉教授作者：肖延胜王永梅来源：《海峡科技与产业》 2017年第4期文/肖延胜王永梅在科研的道路上，他奋力拼搏，努力探索，追求着不一样的精彩人生。

无数个日日夜夜的辛勤努力，付出的滴滴汗水，终于幻化成丰硕的科研成果，激励着走向更加辉煌灿烂的明天。

他，就是南京农业大学高层次引进人才、教授、博士生导师平继辉。

从2004年开始，平继辉一直致力于流感病毒的遗传变异、致病性、跨宿主感染与传播的分子机制以及流感疫苗的研发，研制了通用于鸡胚和细胞双疫苗生产平台的A型和B型高产流感疫苗供体毒株和一系列的疫苗候选株，建立了流感病毒的抗原变异和进化预测模型并对H1N1、H3N2和H5N8亚型流感病毒的抗原变异进行了预测，揭示了1968年“香港流感”病毒在新宿主适应和致病性的分子机制。

取得了重要的学术成果，发表SCI文章15篇，其中以第一作者在Nature Communications，PNAS，Journal of Virology等杂志发表文章6篇，以共同第一作者在Nature Microbiology发表论文1篇，累积影响因子96.52，累积引用次数380次，并申请国际专利5项，推动了我国科研事业的发展。

积极探索注重实践2003年9月—2008年7月，平继辉就读于南京农业大学攻读博士学位，他师从学识渊博的张书霞教授和陈化兰研究员，开始对H9N2亚型禽流感病毒抗原变异、跨宿主感染哺乳动物的分子机制以及H5N1亚型禽流感病毒标记疫苗展开了研究。

做研究生期间的生活相对来说是比较单调的，除了实验还是实验，做实验很枯燥，可在陈化兰研究员的悉心指导下，在摆弄PCR仪、试管、离心机的过程中，平继辉体验到了无限的的乐趣。

在实验过程中，他一面满怀期待地等待未知的实验结果，一面和实验室的师哥师姐谈科研、谈未来，渐渐地，他感觉到这其实是挺有趣的，他很快喜欢上了做研究。

五年的科研生活，平继辉体验到了科研的无限乐趣，也了解到了真正的自己。