抗狂犬病血清生产工艺及检查

人用浓缩狂犬病疫苗制造及检定规程本品系用狂犬病固定毒（aG）适应株接种原代地鼠肾单层细胞，培养后收获病毒液，加入甲醛溶液灭活后浓缩，再加氢氧化铝制成。

用于预防狂犬病。

1 毒种1.1 毒种来源狂犬病固定毒aG适应株系用狂犬病固定毒北京株先在地鼠肾细胞传代适应后，再通过豚鼠脑内交替传代适应而成。

由中国药品生物制品检定所检定、保存与分发。

生产用毒种传代应不超过10aG交替代。

1.2 毒种检定无菌试验aG毒种每次传代收剖后均须做无菌试验，合格者方可使用。

病毒滴定aG毒种用体重11～13g小白鼠进行脑内病毒滴定，滴度方可用于生产。

纯毒试验生产前和生产末期用小白鼠做脑内法中和试验，以鉴定毒种的特异性。

所用特异性抗血清由中国药品生物制品检定所提供。

中和指数必须在500以上。

生产过程中如对毒种发生疑问，应及时进行鉴定。

1.3 毒种传代选择体重120～160g健康豚鼠，脑内注射，选潜伏期80～100小时具有典型狂犬病症状者放血致死，无菌取脑。

豚鼠脑连续传代不超过5代。

1.4 毒种保存供生产用aG株在-60℃以下保存，不得超过1年。

2 疫苗制造2.1 细胞制备地鼠选用12～14日龄健康地鼠，如腹腔有充血、渗出液、肾脏异常等应废弃。

解剖处死地鼠，用消毒液洗涤皮毛数次，末次浸泡一定时间，无菌取肾，置于瓶中剪碎。

细胞消化及分装将剪碎肾块洗涤数次，加入适量胰蛋白酶消化液，置2～8℃过夜（约16～20小时）或37℃水浴消化适当时间，弃去消化液，经洗液洗涤2～3次，振摇或吹打分散细胞，加入适量生长液，分装培养瓶，置3 7℃℃培养长成单层。

使用液体均不得含青霉素或其他β内酰胺类抗生素。

生长液为含不超过10%小牛血清水解乳蛋白SMI液或其他适宜培养液，可加入适量抗生素。

浸泡液为水解乳蛋白SMI液或其他适宜培养液，其中保护剂可选用0.1%以上人白蛋白，可加入适量抗生素。

维持液为199或其他适宜的溶液，其中保护剂中可选用0.4%以上人白蛋白，可加入适量抗生素。

狂犬病免疫球蛋白制造及检定规程本品系由乙型肝炎疫苗免疫后，再经狂犬病疫苗免疫的献血员中采集狂犬病抗体效价较高的血浆，经低温乙醇法提制的特异性免疫球蛋白制剂。

本品所含丙种球蛋白占总蛋白量的90%以上，每ml含狂犬病抗体效价不低于100IU。

主要用于狂犬病的预防。

1 制造1.1 制造要求1.1.1 原料血浆应符合《原料血浆采集（单采血浆术）规程》中11项要求。

1.1.2 狂犬病疫苗免疫按卫生部批准的免疫程序进行。

所用抗原应符合《人用狂犬病浓缩疫苗制造及检定规程》要求。

免疫后血样用酶标法或蚀斑法或小鼠脑内中和试验测定抗体效价，达到10Iu /ml以上者即可采集免疫血浆作为原料。

在末次免疫后半年中，可每间隔2周采浆一次，每次400ml。

1.1.3 原料血浆应无热原污染，并保持无菌。

不能及时投料制备时，应及时置-20℃以下冻存。

冻存期最长不应超过1年。

1.1.4 制造工作室、冷库及各种生产用具等要求同《人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程》中1.1.3项。

1.1.5 生产用水应符合饮用水标准，直接用于制品的水应符合注射用水标准。

所用各种化学药品应符合《中国生物制品主要原材料试行标准》，未纳入试行标准者应不低于化学纯。

1.2 制造工艺1.2.1 采用低温乙醇法，可加适宜稳定剂。

若加防腐剂硫柳汞，其含量不得超过0.009%(g /ml)。

1.2.2 分批每批制品最少应由100名以上免疫献血员的血浆混合制成。

同一制造工艺、同一容器溶解、稀释的制品作为1批；用不同滤器除菌过滤或不同机柜冻干的制品分为亚批。

1.2.3 半成品检定除菌过滤后每批半成品应进行理化检定、抗体效价测定、无菌试验及热原质试验，其方法及要求同成品检定。

1.2.4 冻干除菌过滤的制品应及时分装，并按《人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程》中1.2.5项进行冻干。

制品温度不得超过35℃。

1.3 剂型与规格剂型：分为冻干及液体两种。

规格：狂犬病抗体效价应不低于100Iu /ml。

狂犬疫苗的生产工艺狂犬疫苗是用于预防狂犬病的重要疫苗。

狂犬病是由狂犬病病毒引起的一种严重传染病，患者一旦感染极易死亡。

因此，狂犬疫苗的生产工艺至关重要。

首先，狂犬疫苗的生产工艺开始于病毒分离。

研究人员通过采集狂犬病患者的体液样本，特别是唾液和脑组织样本。

然后，将这些样本接种到实验动物身上，如小白鼠或小狗，让病毒在这些动物体内复制增殖。

一旦病毒分离成功，研究人员将在实验室中对病毒进行培养。

接下来，狂犬病病毒经过培养后，会将病毒制备成病毒抗原。

这个过程包括病毒的提取和纯化。

研究人员将培养液离心分离出病毒，然后使用一系列的化学和生物技术手段，如超离心、凝胶过滤和柱层析等，将病毒纯化为高纯度的病毒抗原。

然后，研究人员将病毒抗原灭活，使其失去活性。

这样做的目的是防止病毒抗原在后续的疫苗生产过程中继续复制和感染宿主。

通常，病毒抗原会经过一定的时间和温度处理，以确保病毒完全失活。

灭活后的病毒抗原具有一定的免疫原性，可以引起人体产生免疫应答。

接着，灭活的病毒抗原会与辅助物质混合，以提高疫苗的免疫效果。

这些辅助物质包括佐剂和防腐剂等。

佐剂可以增强疫苗的免疫原性，使得疫苗具有更好的免疫效果；防腐剂则用于防止疫苗在保存和使用过程中受到污染和损坏。

最后，疫苗会进行灌装和包装。

研究人员将制备好的疫苗按照一定的剂量装入瓶子中，并进行密封。

通常狂犬疫苗以液体形式保存，因此密封瓶子的选择和密封工艺非常重要，以确保疫苗在贮存期间不受污染和破损。

总结起来，狂犬疫苗的生产工艺包括病毒分离、培养和纯化、病毒灭活、加入辅助物质、疫苗灌装和包装等步骤。

通过严格的工艺控制和质量检验，研究人员可以生产出高质量的狂犬疫苗，为狂犬病的预防提供有效的手段。

狂犬疫苗生产工艺狂犬疫苗是一种用于预防狂犬病的疫苗，它是通过制备、培养和灭活狂犬病病毒并进行灭活制剂的制备来实现。

狂犬疫苗的生产工艺如下。

首先，需要准备狂犬病病毒株。

目前常用的狂犬病毒株有血清媒介的毒株和组织培养的毒株。

在生产中，选择某一株病毒，通过传代培养和扩增来获得病毒种子。

接下来，需要将病毒株接种到合适的细胞种子上。

常用的细胞种子包括鸟胚细胞、绵羊肾细胞和Vero细胞等。

将病毒株接种到细胞种子后，保持一定的温度、PH值和营养液条件下进行培养。

当病毒感染细胞后，需要经过一定的时间来扩增病毒的数量。

此时应定期检测细胞内是否存在有效的病毒感染。

当细胞内病毒感染达到一定水平后，需要对细胞进行破碎以释放病毒。

一般的方法有冻融法、超声波法和酶解法等。

破碎后，通过离心和过滤等方法来获得病毒液。

获得病毒液后，需要对病毒进行灭活。

常用的灭活剂有用酸亚硫酸、β-普萘酚和乙醚等。

灭活的时间和灭活剂的浓度等关键因素需要进行严格的控制，以确保病毒完全失活。

完成灭活后，病毒液需要进行精制和纯化。

常用的方法有沉淀法、硝酸盐法、硫酸铵法和超滤法等。

通过这些方法可以去除污染物和无效成分，从而得到纯净的病毒灭活制剂。

最后，将纯化的病毒灭活制剂进行配制和包装。

一般将其加入到适当的稳定剂中来延长疫苗的保质期，并使用适当的容器进行包装和密封。

以上就是狂犬疫苗的生产工艺概述。

狂犬疫苗生产工艺需要在严格的细胞培养和病毒操作条件下进行，以确保病毒的纯净性和有效性。

在生产过程中，需要严格控制各个环节的参数和操作，以确保疫苗的质量和安全性。

抗狂犬病血清Kangkuangquanbing XueqingRabies Antiserum本品系由狂犬病病毒固定毒免疫马所得的血浆，经胃酶消化后纯化制得的液体抗狂犬病球蛋白制剂。

用于配合狂犬病疫苗预防狂犬病。

1基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。

2制造2.1抗原与佐剂应符合“免疫血清生产用马匹检疫和免疫规程”的规定。

2.2免疫动物及血浆2.2.1免疫动物免疫用马匹必须符合“免疫血清生产用马匹检疫和免疫规程”的规定。

2.2.2免疫、采血及分离血浆与分浆按“免疫血清生产用马匹检疫和免疫规程”的规定进行。

免疫血清效价用动物法或其他适宜的方法测定，不低于100IU/ml时，即可采血。

分离之血浆可加入适宜防腐剂，并应做无菌检查（附录Ⅻ A）。

2.3胃酶进行类A血型物质含量测定，应不高于4μg/ml（附录Ⅸ I）。

2.4原液2.4.1原料血浆原料血浆的抗狂犬病效价应不低于80IU/ml(附录Ⅺ J)。

血浆在保存期间，如发现明显的溶血、染菌及其他异常现象，不得用于制备。

2.4.2制备2.4.2.1消化将免疫血浆稀释后,加入适量胃酶及甲苯，调整适宜pH值后，在适宜温度下消化一定时间。

2.4.2.2纯化采用加温、硫酸铵盐析、明矾吸附等步骤进行纯化。

2.4.2.3浓缩、澄清及除菌过滤浓缩可采用超滤或硫酸铵沉淀法进行。

澄清及除菌过滤后，制品中可加入适量硫柳汞或间甲酚或三氯甲烷作为防腐剂。

纯化后的抗血清原液应置2～8℃避光保存至少1个月作为稳定期。

2.4.3原液检定按3.1项进行。

2.5半成品2.5.1配制将检定合格的原液，按成品规格以灭菌注射用水准确稀释，调整效价、蛋白质浓度、pH值及氯化钠含量，除菌过滤。

2.5.2半成品检定按3.2项进行。

2.6成品2.6.1分批应符合“生物制品分批规程”规定。

2.6.2分装应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。

2.6.3规格每瓶2.0ml，含狂犬病抗体应不低于400IU；每瓶5.0ml，含狂犬病抗体应不低于1000IU。

狂犬疫苗生产工艺设计引言狂犬疫苗是一种预防狂犬病的生物制剂。

狂犬病是一种由狂犬病病毒引起的急性传染病，可通过狗类等感染动物的咬伤传播给人类，严重威胁着公众健康。

狂犬疫苗的生产工艺设计是确保疫苗质量和有效性的关键步骤。

本文将介绍狂犬疫苗生产工艺设计的一般概念和步骤。

工艺设计的目标狂犬疫苗生产工艺设计的主要目标是确保生产出的疫苗符合国家和国际质量标准，并具有一致的质量、安全性和有效性。

具体目标包括：- 确保疫苗生产过程的可控性和可重复性；- 最大程度地减少污染和交叉污染的风险； - 确保疫苗的成分和配方得到准确控制； - 确保工艺参数和操作方法得到准确记录和控制。

工艺设计的步骤狂犬疫苗生产工艺设计包括以下步骤：1. 根据疫苗类型和用途确定工艺参数工艺参数是指影响疫苗制备和质量的关键变量，如温度、pH 值、反应时间等。

在工艺设计的第一步，需要根据疫苗类型和用途确定合适的工艺参数。

2. 确定原材料和媒体配方狂犬疫苗的制备需要使用特定的原材料和媒体。

在工艺设计的第二步，需要确定原材料和媒体的配方，确保其符合质量标准和疫苗制备要求。

3. 设计疫苗制备工艺流程根据确定的工艺参数和原材料配方，需要设计疫苗制备的工艺流程。

这包括病毒培养、病毒扩增和病毒灭活等步骤。

工艺流程应具备合理的时间和操作要求，以确保疫苗生产过程的可控性和有效性。

4. 开展验证实验和优化在完成疫苗制备工艺流程设计后，需要进行验证实验和优化。

这些实验可以通过小规模试验或中试来进行，以评估工艺的可行性和效果，并进行必要的调整和优化。

5. 制定标准操作程序（SOP）标准操作程序（SOP）是确保工艺在实际生产中得到准确执行的关键文件。

在工艺设计的最后一步，需要制定相应的SOP，明确每个步骤的操作规程、工艺参数和记录要求，以便操作人员按照标准程序进行操作。

结论狂犬疫苗生产工艺设计是确保疫苗质量和有效性的关键步骤。

通过确定合适的工艺参数、原材料配方和制备工艺流程，以及进行验证实验和制定SOP，可以确保疫苗的质量和安全性，有效预防和控制狂犬病的传播。

精制抗狂犬病血清3效价IU测定方法1 中和用病毒悬液的制备要求中和用病毒悬液经37℃水浴作用1小时的LD50在32～320之间。

1.1病毒株的选择：选用CVS毒种。

1.2 病毒株的传代：取CVS毒种（一般为冻干毒种）制成10-2悬液，脑内接种体重10～12g健康小白鼠0.03ml，待发病后取脑再制成10-2悬液，接种于小白鼠脑内进行传代，一般传至2～3代即可制成冻干中和用病毒或–70℃冻存的中和用病毒，但要选用小白鼠在第5天发病并麻痹的服制备。

1.3 冻干病毒的制备：用第5天发病并麻痹的鼠脑以脱脂牛乳研磨稀释成20%的脑悬液，按0.5ml分装安瓿冻干后真空封口，存-30℃待用。

1.4-70℃冻存病毒的制备：用第5天发病并麻痹的鼠脑用20%小牛血清磷酸盐缓冲液研磨稀释成10-1悬液，经2000r/min20分钟沉淀，取上清混匀后分装小管，存-70℃冰箱待用。

1.5 病毒悬液的预测1.5.1冻干病毒的预测：取含20%脑悬液的冻干病毒，启开后加入含2%小牛血清PBS1.0ml，吹打均匀后再用4.0ml上述稀释液与病毒液充分混匀，1500r/min沉淀10分钟，取上清与等量的稀释液混合则为10-2悬液，然后再用10-3、10-4、10-5、10-6稀释，从10-6至10-2各取0.5ml加入5个小管内，每管再加入2%小牛血清PBS0.5ml，放置37℃水浴一小时。

用体重10~12g小白鼠30只，分成5组，每组6只，经用37℃作用的10-6至10-2病毒悬液接种小白鼠，每个稀释度接种6只小白鼠，每只小白鼠脑内接种0.03ml，观察14天，每天观察小白鼠发病死亡情况，接种后4天内死亡的小白鼠按非特异性死亡计。

以接种5天后的发病死亡小白鼠统计LD50。

1.5.2-70℃冻存病毒悬液的预测：取含10%脑悬液的冰冻病毒用流水融化后即为10-1悬液，然后再做10-2至10-7稀释。

从10-7至10-3各取0.5ml加至5个小管内，每管再加入2%小牛血清PBS0.5ml，放置37℃水浴1小时，用体重10～12g小白鼠30只，分成5组，每组6只，用经37℃作用的10-7至10-3病毒悬液接种小白鼠，每个稀释度接种小白鼠6只，每只小白鼠脑内接种0.03ml，观察14天，每天观察小白鼠发病死亡情况。