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应用流式细胞仪对176例急性白血病进行免疫表型分析急性白血病是一种由于造血干细胞发生异常增殖或分化障碍而引起的血液系统恶性肿瘤疾病。
精准的免疫表型分析可以为临床诊断、疾病分型和治疗选型提供准确的基础数据，流式细胞仪作为一种先进的免疫学检测技术，能够敏锐的分辨各种细胞的表型特征，因此成为研究、诊断急性白血病的重要方法之一。
本文通过分析176例患者的免疫表型，探讨了流式细胞仪在急性白血病诊断中的应用。
在分析过程中，我们首先采用流式细胞仪检测患者血液中的白细胞、粒细胞、单核细胞、淋巴细胞的表型特征，发现不同类型的急性白血病白细胞的表型特征差异显著。
以AML-M1型急性髓系白血病为例，该型白血病细胞通常表现为CD33、CD13、CD14、CD15等多种粒细胞系标记阳性，而CD34、CD41等为幼稚血细胞标志物阳性。
而ALL-T2型急性淋巴系白血病的淋巴母细胞往往表现为CD10、CD19、CD34、CD45、CD123等标记阳性。
通过这些特征的分析，我们可以对不同类型的急性白血病进行准确的诊断、分类。
同时，我们还应用流式细胞仪检测了患者白细胞的CD34+和CD117+细胞数量，发现在急性髓系白血病中，CD34+和CD117+细胞较高，而在急性淋巴系白血病中，这两种细胞的数量明显降低。
基于这些数据，我们可以更精确地评估患者的病情严重程度和预后。
此外，我们还对患者骨髓中的淋巴细胞进行了CD45RA和CD45RO的表型分析，发现在某些淋巴系急性白血病中，CD45RA+淋巴细胞数量降低，而CD45RO+淋巴细胞数量增多。
这一结果提示了CD45RA和CD45RO在急性白血病中具有重要的临床应用价值，可以用于病情的评估和疾病类型的判断。
综上所述，流式细胞仪具有高灵敏度、高分辨率，能够对患者血液中各种细胞的表型特征进行快速、准确的检测，对急性白血病的诊断、分类、评估病情严重程度和预后等方面具有重要的应用价值。
随着流式细胞仪技术的不断发展，相信在未来，它将在临床急性白血病诊断、治疗中发挥着越来越重要的作用。
多参数流式细胞术分析急性白血病免疫表型高雁群;靳海杰;闫蓓;汪菲菲;李晓红;高春记【期刊名称】《标记免疫分析与临床》【年(卷),期】2005(012)004【摘要】为了探讨急性白血病免疫表型特征,利用流式细胞术三色荧光直接标记技术CD45/SSC多参数散点图设门方法,对162例急性白血病患者幼稚细胞表面及胞浆内分化抗原进行分析.结果提示:急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者主要表达CD117(94.9%)、CD13(88.5%)和CD33(70.5%);急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中B-ALL主要表达cCD79a(100%)、CD19(92.1%),T-ALL表达cCD3(100%)、CD2(83.3%);ANLL伴淋系抗原表达(Ly+ANLL),以CD7(56.2%)、CD19(31.2%)多见;ALL伴髓系抗原表达(My+ALL),以CD13(88.9%)、CD33(27.8%)多见.为此用多参数流式细胞术三色荧光直接标记法进行免疫分型,对急性白血病的确诊、治疗和预后有重要的临床意义.【总页数】3页(P229-231)【作者】高雁群;靳海杰;闫蓓;汪菲菲;李晓红;高春记【作者单位】河南省新乡市中心人民医院血液科,河南,新乡,470000;中国人民解放军总医院血液科,北京,100853;中国人民解放军总医院血液科,北京,100853;中国人民解放军总医院血液科,北京,100853;中国人民解放军总医院血液科,北京,100853;中国人民解放军总医院血液科,北京,100853【正文语种】中文【中图分类】R733.7【相关文献】1.多参数流式细胞术在多发性骨髓瘤及其微小残留疾病的免疫表型分析 [J], 许艳丽;王顺清;毛平;杜庆华2.多参数流式细胞术分析难治性贫血伴原始细胞增多患者骨髓细胞的免疫表型特点[J], 黄竞;杜欣3.多参数流式细胞术检测91例急性白血病免疫表型分析 [J], 李珊凤;易汉杰;金明威;陈哲;陈颖;王建华;孙伟亮;裴仁治4.多参数流式细胞术检测儿童急性B淋巴细胞白血病免疫表型与预后分析 [J], 张霞;付笑迎;覃文琪;李济填;周杰;刘新刚5.多参数流式细胞术在多发性骨髓瘤患者细胞免疫表型及其微小残留病灶检测中的应用价值分析 [J], 邓银芬;袁红建;孙善芳;钱小丽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
白血病免疫表型方法学比对白血病是一种由于骨髓中恶性克隆细胞的快速增殖导致的血液恶性肿瘤。
免疫表型是指通过检测细胞表面的分子标记来确定细胞类型和状态的方法。
在白血病的免疫表型研究中，常用的方法包括流式细胞术和免疫组化染色。
流式细胞术是一种通过检测细胞表面的抗原分布来确定细胞类型和状态的方法。
在白血病的免疫表型研究中，流式细胞术常用于分析白血病细胞表面的免疫分子标记，例如CD标记。
CD标记是一种用于区分不同细胞类型和状态的标记物。
通过流式细胞术可以确定白血病细胞的表面CD标记的表达情况，从而确定其免疫表型。
免疫组化染色是一种通过使用特异性抗体来检测细胞内或细胞表面蛋白的方法。
在白血病的免疫表型研究中，免疫组化染色常用于检测白血病细胞中特定蛋白的表达情况。
通过免疫组化染色可以确定白血病细胞中特定蛋白的表达水平，进而确定其免疫表型。
除了流式细胞术和免疫组化染色，还有其他一些方法可以用于白血病的免疫表型研究。
例如，多色流式细胞术可以同时检测多个免疫分子标记，提高免疫表型的准确性和效率。
此外，还可以利用质谱分析等技术来确定白血病细胞中特定蛋白的表达水平。
研究白血病的免疫表型可以帮助医生确定疾病的类型和进展情况，指导治疗方案的选择。
例如，通过分析白血病细胞中CD标记的表达情况，可以确定其所属的亚型，从而指导相应的治疗。
此外，免疫表型研究还可以用于监测治疗的效果，评估疾病的预后。
然而，白血病的免疫表型研究也存在一些挑战和限制。
首先，由于白血病细胞的异质性，不同患者之间、甚至同一患者的不同时间点之间可能存在免疫表型的变化。
因此，需要对不同样本进行多次检测，以确定免疫表型的稳定性和一致性。
其次，由于免疫表型的分析涉及到复杂的仪器设备和专业知识，需要有经验丰富的技术人员进行操作和解读结果。
此外，还需要建立可靠的标准和参考范围，以便对免疫表型结果进行解释和比对。
白血病的免疫表型研究是一项重要的临床技术，可以用于确定疾病类型和进展情况，指导治疗方案的选择。
2013年9月瘤,而不是显露脊髓,过多的脊髓显露不仅无助于肿瘤切除,相反可能增加脊髓损伤的机会。
因此,半椎板切除在椎板切除及硬膜切开后,仅显露肿瘤,肿瘤切除过程中不需要任何的脊髓牵拉,尤其适用于位于脊髓侧方及前侧方的肿瘤。
Tredway等的报告让我们得到启发，利用旁正中小切口手术,保留一部分病变侧棘突旁肌肉,深部仅显露肿瘤对应的椎板,达到微创的手术效果的同时在缝合术腔时不留死腔，避免术腔积液，减少感染机会。
骨窗的形成均在显微镜下利用磨钻切除椎板方便可行，高速魔钻磨除骨质过程中亦可达到有效止血作用，缩短了手术时间。
术中经常涉及破坏小关节突的情况，因此在切除椎板时需特别小心保留外侧关节突结构。
小关节的切除是导致椎体不稳的因素。
本组患者手术时均注意椎板切除范围外侧至小关节突，当磨除骨质形成预期的骨窗后，切开硬膜时尤其注意被肿瘤顶起并突向后的神经根。
而对脊髓侧方或侧前方的肿瘤,正常脊髓组织被挤压到对侧,椎板下方即是肿瘤,磨除椎板及剪开硬膜时损伤脊髓的可能性较小。
总之，旁正中小切口半椎板入路结合术中电生理监测（SEP\ MEP）下切除髓外硬膜下肿瘤具有创伤小、手术及麻醉时间短，出血少、脊髓神经骚扰轻，术后创伤性炎症反应轻，患者疼痛轻，对脊柱的稳定性保护良好、可早期下床活动等特点，经济效益好，能降低平均住院日及平均人均费用，值得临床推广应用。
参考文献[1]卞留贯,孙青芳,沈建康,等.经单侧半椎板显微切除椎管内肿瘤[J].中国微侵袭神经外科杂志,2003,8(3):106-109.[2] RATLIFF J K, COOPER P R. Cervical laminoplasty: a criti-cal review [J]. J Neurosurg, 2003, 98(3 Suppl): 230-238.[3]宗少晖,王振宇.单侧半椎板“开窗”显微手术切除颈椎椎管内肿瘤[J].中国微创外科杂志,2005,5(7):565-566.[4]菅凤增,陈赞,凌锋.小切口半椎板技术切除椎管内肿瘤[J].中国微侵袭神经外科杂志(CMINSJ),2007,12(2):85-86.1临床资料患者男，56岁，因四肢麻木、行走不稳1.5月，加重伴言语不清、吞咽困难6天入院。
急性髓系白血病112例流式细胞术检测免疫表型研究作者：董进梅张峰罗娇来源：《中外医疗》 2013年第13期董进梅张峰罗娇云南省普洱市人民医院血液科，云南普洱 665000[摘要] 目的探讨流式细胞术检测在急性髓系白血病诊断中的意义。
方法回顾分析在该院就诊初治的急性髓系白血病患者（AML）112例，采用流式细胞术CD/SSC双参数散点图设门的方法对患者骨髓细胞进行12种抗原监测，并结合FAB法则对其进行标准分类，并对不同亚型中抗原表达的差异性进行有效比较。
结果在112例初治的急性髓系白血病患者中，表达指数最高的是CD、CD、CD，分别为100%、94.5%、77.9%。
而在淋系抗原中，CD的表达指数最高为30.5%，其次为的CDl9、、26.9%、CD的16.7％。
而且有些免疫表型与FAB法则分类具有一定的相关性。
结论在急性髓系白血病诊断中运用流式细胞术检测有助于急性髓系白血病患者诊断和分型的准确性，对于急性髓系白血病患者选择治疗方案以及预后的判断具有重要意义。
[关键词] 急性髓系；白血病；流式细胞术；免疫表型[中图分类号] R733[文献标识码] A[文章编号] 1674-074２（２０１3）05（a）－０174-02急性髓系白血病包括所有非淋巴细胞来源的急性白血病，是一种具有高度异质性特性的疾病群，可由正常的髓系细胞分化发育过程中不同阶段的造血祖细胞恶性变转化而来[1]。
其发病原因及发病机制相对复杂，目前世界临床医学界普遍认为，大多白血病引发因素是由于环境因素与细胞遗传物质相互作用造成的。
由于AML患者本身白细胞质量差，自身抵抗力底下，患者被感染几率高，治疗困难且并发症多。
而且常伴有皮肤黏膜出血最常见为眼底、球结膜的出血现象。
流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是一种在功能水平上对液流中单列的细胞或者是其它微生物粒子快速逐一的进行筛选以及定量分析的检测手段[2]，同传统的荧光镜检查相比，其具有高速、精准、多用途等优点，在基础研究和临床实践被广泛的运用，且在细胞生物学、血液学、免疫学、遗传学及临床检验等各领域各学科中也发挥着重要的作用。
160例儿童急性白血病免疫表型分析高怡瑾;吴玥;陈笑韵;陆凤娟;吴长根【期刊名称】《中国当代儿科杂志》【年(卷),期】2004()1【摘要】目的免疫表型可以确定细胞的来源和分化阶段 ,是急性白血病的重要生物学特征。
该文了解儿童急性白血病 (AL)抗原表达规律、分布情况并探讨其临床意义。
方法采用流式细胞术直接或间接免疫荧光法检测 1 6 0例儿童AL的免疫表型。
结果 1 6 0例AL中 ,急性淋巴细胞白血病 (ALL) 1 1 2例 ,急性髓细胞白血病(AML) 4 8例。
1 1 2例ALL中 ,T系ALL 1 2例 (1 0 .7% ) ;B系ALL(不包括成熟B ALL) 93例 (83.0 % )。
ALL中 ,1 3.8%有髓系抗原表达 ,以CD33阳性最常见 ;AML中 ,4 0 %有淋系抗原表达 ,以CD7阳性率最高。
儿童AML淋系抗原表达阳性率高于儿童ALL髓系抗原表达 (P <0 .0 1 )。
CD1 4在儿童M 4和M 5的表达频率为 77.8%。
B系ALL中CD34阳性率 5 8.5 %。
AML中 ,CD34的表达频率为 5 5 .3% ,其中M1和M 2的CD34阳性率为 76 .5 % ,高于其它AML病人的CD34阳性率 (4 3.3% ) ,P <0 .0 5。
HLA DR抗原在M 3的表达频率为 1 1 .1 % ,低于其它类型AML病人的HLA DR阳性率 (76 .3% ) ,P <0 .0 1。
B系ALL中 ,CD34表达与FAB分型、起病时白细胞数、髓外侵润情况均无关 (P >0 .05 ) ;CD34-组婴幼白血病发生率 (1 7.6 % )高于CD34+ 组 (4 .2 % ) ,P <0 .0 5。
结论HLA DR阴性对于M3的诊断具有一定参考价值。
【总页数】4页(P30-33)【关键词】儿童;急性白血病;AL;免疫表型;流式细胞术;抗原【作者】高怡瑾;吴玥;陈笑韵;陆凤娟;吴长根【作者单位】复旦大学儿科医院血液科【正文语种】中文【中图分类】R733.71【相关文献】1.儿童急性白血病免疫表型及临床研究 [J], 黄婕;何璐璐;方拥军;芮耀耀;周莉;陆勤;杨引2.儿童急性白血病免疫表型及临床意义 [J], 林珊;陈成璇3.三色流式细胞术对儿童急性白血病免疫表型的分析 [J], 杨芝红;魏军;杨宝珍;白永泽;任新明4.儿童急性白血病免疫表型与临床分析 [J], 吴玥;徐冬娥;高巧娣;刘美华;吴长根5.83例儿童急性白血病免疫表型分析 [J], 李卫;倪麟;王耀莉;殷燕南;杜玲珍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
【全科临床论著】218例急性白血病流式细胞术免疫表型分析赵皓,余晾,吕合作,郑宏波,项平【摘 要】 目的 研究急性白血病(AL)免疫表型特征及诊断价值。
方法 采用流式细胞术(FC M)对218例初诊急性白血病患者进行免疫分型。
结果 急性髓系白血病(AML)患者均表达两种以上髓系抗原,其中部分伴有淋系抗原(C D7)表达。
急性淋系白血病(ALL)患者均表达淋系抗原,部分表达一种或两种髓系抗原。
14例混合型白血病同时表达两种以上淋系和髓系抗原标志。
4例慢粒急淋变既表达髓系抗原又表达淋系抗原。
结论 FC M免疫分型是在细胞形态学和细胞化学染色基础上对急性白血病诊断与分型的重要补充。
【关键词】 急性白血病;免疫表型;流式细胞术【中图分类号】 R733.7 R446.63 【文献标识码】 A 【文章编号】 167424152(2010)1021239202Ana lysis of Imm unophenotype in218Ca ses w ith Acute L eukem i a by Flow Cyto m etry ZHAO Hao,YU L iang,LV He2zuo,et al.Central L aboratory,the First A ffiliated Hospital of B engbu M edical College,B engbu233004,A nhui,China【Abstract】O bjecti ve To exp l ore the acute Leukem ia i m munophenotype and its diagnosis value.M ethods A ssay the i m mune phenotype in218patients with acute leuke m ia by fl ow cyt ometer.Results The patients with acute myel oid leukem ia(AML)ex2p ressed more than t w o kinds of myel oid antigens;part of the m exp ressed ly mphatic antigens(CD7).The patients with acute ly m2 phoblastic leuke m ia(ALL)exp ressed ly mphatic antigens;part of them exp ressed one or t w o kinds of myel oid antigens.Fourteen patients with m ixed acute leuke m ia(MAL)showed t w o kinds or more ly mphoid and myel oid antigens.Four patients with chr onic granular differentiated t o acute ly mphatic leukem ia not only exp ressed myel oid antigens but als o exp ressed ly mphatic antigens. Conclusi on The i m munophenotype by fl ow cyt ometry is the i m portant supp lementary t o acute leuke m ia diagnosis and typ ing inmor phol ogy and cyt oche m ical dyeing foundati on.【Key words】 Acute leuke m ia;I m munophenotype;Fl ow cyt ometry 白血病细胞是一种高度异源性、异质性并具有一定增殖活力的恶性细胞。
传统的F AB(法国、美国和英国形态学标准)分型是在细胞形态学和细胞化学染色基础上进行的,对急性白血病诊断与分型有其局限性。
流式细胞术(Fl ow cyt ometry,M)是根据白血病细胞表面和胞内的特异性抗原,采用单克隆抗体对白血病细胞的来源和分化阶段进行更精细的检测和判断,从而弥补F AB分型的不足,对确定诊断、选择治疗方案和判断预后具有重要意义[1]。
本文采用FC M对218例AL患者进行免疫表型分析,现将结果报告如下。
1 资料与方法111 临床资料 218例患者为我院2008年10月-2010年2月血液科住院患者,年龄10～79岁,男性132例,女性86例。
112 研究方法1.2.1 取材 E DT A2K2抗凝骨髓或血液标本1m l。
1.2.2 仪器与试剂 F ACSCalibur流式细胞仪,购自BD公司。
单克隆抗体:F I T C标记的CD2、C D33、HLA2DR、C D15、CD10,PE 标记的CD7、C D13、C D34、C D11b、C D19,Per CP标记的CD45, APC标记的CD5、CD14、CD20、C D45,同型对照I gG1/I gG2a以及混合抗体CD3/M P O/CD79a,透膜剂F I X&PER M及溶血素,以上试剂均购自BD公司,鞘液为自配的P BS缓冲液。
1.2.3 试验方法 表面标志染色:在各试管中分别加入E D2 T A2K2抗凝骨髓或血液50μl,按表1中的抗体组合分别加入相应的抗体或同型对照(F I TC、PE及PercP标记的抗体为30μl, APC标记的抗体为5μl)室温避光孵育15m in,分别加1000μl 溶血素,室温避光孵育10m in,离心去上清,P BS洗涤细胞一次,去上清,加入0.5m l P BS重悬细胞,上机检测。
胞内标志染色:先用CD452APC同上进行表面染色、溶血、洗涤,然后加200μl作者单位:233004安徽省蚌埠医学院第一附属医院中心实验室通讯作者:赵皓,电子信箱:icecool1980@ 固定液室温固定细胞15m in,P BS洗涤细胞一次,去上清,加200μl透膜液及胞内染色抗体或同型对照30μl,室温避光孵育10m in,离心去上清,P BS洗涤细胞一次,去上清,加入0.5m l P BS重悬细胞,上机检测。
检测结果采用Cell Q uest软件进行分析:首先,在FSC/SSC散点图中,根据细胞大小和颗粒度进行设门选中有核细胞群体;然后,在C D45/SS C散点图中,根据CD45表达强度和颗粒度,对有核细胞进行设门,选中幼稚细胞群体;最后,再对幼稚细胞群体进行分析,确定各种标志的阳性率。
判断阳性的标准为:胞内染色标志CD3/M P O/CD79a>10%,其他表面标志>20%。
表1 AL流式细胞术免疫分型抗体组合抗体A1A2A3A4A5A6B1B2F I TC I gG1CD2CD33DR CD15CD10I gG1CD3PE I gG2a CD7CD13CD34CD11b CD19I gG2a MP O Per Cp CD45CD45CD45CD45CD45CD45-CD79a APC I gG1CD5--CD14CD20CD45CD452 结果 119例经临床确诊的AML各种抗原表达的阳性率依次为M P O(95.80%)、C D13(90.76%)、C D33(81.51%)、HLA2DR (73.95%)、CD34(54.62%)、CD15(30.25%)、C D11b (22.69%)、CD14(10.92%),其中有19例AML患者伴有淋系抗原C D7的表达。
经临床确诊为ALL的83例患者中,经FC M免疫分型,有21例为T系ALL,各种抗原表达的阳性率依次为CD3 (100.00%)、C D7(100.00%)、CD2(90.48%)、CD5(85.71%)、HLA2DR(61.90%)、C D34(42.86%),其中有4例患者伴有CD13等髓系抗原的表达;有62例为B系ALL,各种抗原表达的阳性率依次为CD79a(100.00%)、CD19(93.55%)、CD20 (82.26%)、C D10(69.35%)、HLA2DR(83.87%)、CD34 (69.35%),其中有5例患者伴有CD13等髓系抗原的表达。
AL抗原表达详细结果见表2。
3 讨论 传统的白血病分型主要根据F AB标准,以细胞形态学和细胞化学染色为依据,其诊断符合率仅有60%～80%[2]。
随着单克隆抗体及流式细胞仪的应用,FC M免疫分型已成为诊断AL 的重要辅助手段,FC M技术能多参数、快速的定量分析和分选,具有快速、特异、准确、重复性好等优势,利用荧光标记的单克隆抗体作分子探针,多参数分析白血病细胞膜及细胞浆或细胞核的免疫表型,由此了解白血病细胞所属系列及分化程度,有助于提高白血病诊断的准确率,为临床合理治疗、判断疗效及预后提供重要依据。
本检测方法根据不同分化阶段造血细胞CD45表达与细胞颗粒度的差异,通过CD45/SSC双参数来确定各种细胞群体。
C D45表达在不同细胞各异,成熟粒细胞>单核细胞>淋巴细胞>原/幼细胞,而红细胞不表达;SSC在成熟粒细胞>单核细胞>淋巴细胞与原/幼细胞>红细胞。
根据这些特征,即使原/幼细胞很少,也可以在CD45/SSC散点图中清晰显示[3]。
表2 218例AL流式细胞术免疫分型结果分型n CD2CD5CD7CD13CD33CD34DR CD11b CD14CD15CD10CD19CD20MP O CD3CD79a AML119001910897658827133600011400 ALL8319182190526510043585102162 T2ALL21191821409131000000210B2ALL620005043520004358510062 MAL142351168121376105525慢粒急淋变20002122200222101 M P O为中性粒细胞内嗜苯胺蓝颗粒的主要成分,其蛋白开始合成于早幼粒细胞阶段;C D13除在髓系祖系表达外,也存在于成熟粒细胞上;CD33为髓前体细胞的标记,同时在粒细胞、单核细胞上也有较高表达,在判断白血病细胞是否为髓系来源时具有很高的诊断价值。
本文119例AML中,M P O、C D13、CD33阳性率分别为95.80%、90.76%、81.51%,提示此3类抗原对AML的诊断具有重要意义[4]。
其中有19例表达淋系抗原CD7(15.97%),与文献报道C D7与髓系有10%的交叉反映基本相符[5]。
