RP-HPLC法测定人血清中维生素C的含量

RP-HPLC测定含银杏叶提取物的注射液中维生素C的含量李玉彩;李响明;周永妍;孙胜斌;姜国志【摘要】目的:建立含银杏叶提取物的注射液中维生素C的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法,选用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 (250 mm ×4.6 mm,5μm)色谱柱,乙腈-0.03 mol· L-磷酸二氢钾水溶液(用磷酸调节pH值4～5)(10:90),流速0.8 mL· min-,柱温:30℃,检测波长为280 nm.结果:在上述色谱条件下,维生素C在0.149 1 ～4.472 6μg(r =0.999 8),y=3 055.5X+ 63.415,线性关系良好.维生素C的平均加样回收率为99.65％,RSD为1.12％.结论:本方法可作为含银杏叶提取物的注射液中维生素C的质量控制方法.【期刊名称】《中国现代中药》【年(卷),期】2019(021)003【总页数】4页(P380-382,389)【关键词】银杏叶提取物;注射液;维生素C;反相高效液相色谱;含量测定【作者】李玉彩;李响明;周永妍;孙胜斌;姜国志【作者单位】神威药业集团有限公司,河北石家庄051430;神威药业集团有限公司,河北石家庄051430;神威药业集团有限公司,河北石家庄051430;神威药业集团有限公司,河北石家庄051430;中药注射剂新药技术开发国家地方联合工程实验室,河北石家庄051430【正文语种】中文【中图分类】R284.1银杏叶提取物具有扩张血管、改善微循环的作用。

含银杏叶提取物的注射剂主要用于治疗缺血性心脑血管疾病、冠心病、心绞痛、脑栓塞、脑血管痉挛等[1-2]。

中药注射剂中往往为了保护主药，而加入维生素C、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠等抗氧剂。

随着抗氧剂在产品效期内的不断消耗，可能影响到注射剂的安全性、稳定性。

因此维生素C用量的确定及在产品有效期内的变化需建立有效的监测控制手段，而这方面的研究相对较少。

H P L C法测定维生素C注射液中维生素C的含量王奇年（江苏省泰州市第四人民医院药剂科 泰州 225300）【摘 要】摘要：目的:考察高效液相色谱法测定维生素C注射液中维生素C的含量的优点。

方法:高效液相色谱法测定维生素C注射液中维生素C的含量（色谱柱：Boston BosChrom Amino 5μm，柱长250mm，柱径4.6mm），流动相：0.01mol·L-1磷酸二氢钾（用磷酸调节pH值至 2.4）-乙腈（30∶70），柱温：35℃，流速：1.0mL·min-1，波长为 246nm。

结果：维生素 C 在9.97～39.88μg·mL-1的浓度范围内有良好的线性关系（r=0.9997）；平均回收率为100.6%，RSD为0.8%。

结论:由于维生素C在波长246nm处有最大吸收峰，确定246nm为本实验的测定波长。

维生素C具有水解性及强还原性，但其在酸性介质中由于受空气中氧的氧化速度减慢及生成单钠盐所以不致发生水解，故本文选取流动相A[0.5%亚硫酸氢钠溶液（用磷酸调节pH值至2.4）]稀释配备维生素C溶液，维持其稳定性。

另外，由于维生素C对光不稳定，故在检验操作及储存中应注意避光处理。

实验表明，本法简便，快速，准确，灵敏度高，回收率高，适合作维生素C的含量测定方法。

【期刊名称】北方药学【年(卷),期】2015(000)009【总页数】2【关键词】高效液相色谱法 维生素C注射液 含量测定1 资料与方法1.1 临床资料：维生素C（vitamin C）在临床上不仅用于眼科、口腔科及外科系统疾病药物治疗而且在心血管系统、消化系统疾病的辅助治疗中十分常用[1]。

维生素C是一种水溶性维生素，不但具有防治坏血酸的功能，还是一种强还原剂，脱氢维生素C的形成是由于分子中2位及3位碳原子的两个烯醇式羟基易解离而释放H+氧化而成[2]。

脱氢维生素C和维生素C共同形成了可逆的氧化还原系统，在人体内发挥着重要的作用：参与了体内的氧化还原反应，保持着谷胱甘肽的还原状态和巯基酶的活性，起到了解毒的作用；还参与体内多种羟化反应，既可以促进胶原蛋白的合成，又可以促进胆固醇的代谢；刺激免疫系统，可抑制病毒的增生，防治感染，阻止致癌物质的生成。

高效液相色谱法测定维生素C的含量【摘要】高效液相色谱法已经成为解决生命科学、医药学发展中各种难题的重要手段，在实验室中也广泛应用于物质的定性定量分析。

本实验中利用高效液相色谱法对维生素C进行定量分析，所采用的定量分析方法为外标法，通过做出标准溶液浓度与峰面积的标准曲线进而对样品中的维生素C进行定量检测。

【关键词】高效液相色谱法、维生素C、含量1、引言维生素C（VitaminC,Vc）又叫抗坏血酸，是一种水溶性维生素。

Vc在体内参与多种反应，如氧化还原过程，在生物氧化和还原作用以及细胞呼吸中起重要作用。

人体内缺乏Vc时容易导致坏血病。

同时，由于Vc是一种水溶性的强有力抗氧化剂并参与胶原蛋白的合成，它同时还具有防癌、预防动脉硬化、治疗贫血、抗氧化和提高人体免疫力等功效。

Vc在蔬果中普遍存在，尤其是柑桔类水果中含量较高。

樱桃、番石榴、辣椒、猕猴桃等水果中Vc含量在50-300mg/100g。

溶于流动相（mobilephase）中的各组分经过固定相时，由于与固定相（stationaryphase）发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。

高效液相色谱法（HighperformanceLiquidChromatography，HPLC）是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。

它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法（HighPressureLiquidChromatography，HPLC）。

HPLC系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。

其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部件。

有的仪器还有梯度洗脱装置、在线脱气机、自动进样器、预柱或保护柱、柱温控制器等，现代HPLC仪还有微机控制系统，进行自动化仪器控制和数据处理。

RP-HPLC法同时测定维C银翘片中绿原酸和牛蒡苷的含量黄婧;马健雄【摘要】目的:建立同时测定维C银翘片中绿原酸和牛蒡苷含量的方法,为该制剂质量标准的修订提供依据.方法:采用RP-HPLC法,色谱柱为Diamonsil-ODSC18(250mm×4.6mm,5μ);流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液;流速为0.8ml/min;检测波长为327nm(0~25min)和280nm(25~50min),柱温:25℃.结果:绿原酸在0.516~4.128μg范围内、牛蒡苷在1.980~15.840μg范围内线性良好;绿原酸平均加样回收率为99.02%,RSD为0.83%,牛蒡苷平均加样回收率为99.56%,RSD为0.69%;结论:本方法精密度高,分离度好,可用于同时测定维C银翘片中绿原酸和牛蒡苷的含量.【期刊名称】《中国民族民间医药》【年(卷),期】2013(022)014【总页数】2页(P17-18)【关键词】维C银翘片;绿原酸;牛蒡苷;RP-HPLC【作者】黄婧;马健雄【作者单位】广西壮族自治区桂林市第二人民医院药剂科,广西,桂林,541001;广西金海堂药业有限责任公司新药研发中心,广西,南宁,530313【正文语种】中文【中图分类】R286.0维C银翘片是由金银花、连翘、薄荷、荆芥、淡豆豉、牛蒡子、桔梗等14种原料制成的中西药复方制剂，具有辛凉解表、清热解毒之功效，用于治疗风热感冒、咳嗽、口干、咽喉疼痛等。

方中金银花和牛蒡子清热解表是本方的重要组成部分，其绿原酸和牛蒡苷为该制剂药典［1］含测指标成分，但药典方法分步测定，较为繁琐且实验成本高，目前尚未有同时测定该制剂中绿原酸和牛蒡苷含量的文献报道。

本文拟用RP－HPLC法对该制剂中绿原酸和牛蒡苷的含量进行同时测定，为保证药品质量，提高、修订药品标准提供参考依据。

1.1 仪器高效液相色谱仪（SHIMADZU，SPD－10A VP Plus）；电子天平（SHIMADZU，AUW120D型）；超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，KQ2200型）1.2 试剂乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯；绿原酸对照品（批号：110753－200413，中国药品生物制品检定所）；牛蒡苷对照品（批号：110819－200505，中国药品生物制品检定所）1.3 试药维C银翘片各批次样品（广西金海堂药业有限责任公司生产）2.1 色谱条件与溶液的制备2.1.1 色谱条件色谱柱：Diamonsil－ODS C18（250mm ×4.6mm，5μ）；流动相为乙腈（A）－0.1%磷酸溶液（B）按表1进行梯度洗脱；流速为0.8ml/min；检测波长为327nm（0～25min）用于检测绿原酸；280nm（25～50min）用于检测牛蒡苷；柱温：25℃。

RP-HPLC测定鱼体肝脏和血清维生素C1实验的目的和意义通过反向高效液相色谱法测定鱼体肝脏和学清维生素C方法摸索，建立快速精确的维生素C检测方法应用于水产研究。

2材料方法（1）材料：采血前先用剪刀柄把鱼击晕，然后用一次性注射器尾静脉取血法抽血，然后于4℃、3500（r/min）低温离心10min后取上层血清用于测定；解剖获得罗非鱼的肝胰脏用于测定。

（2）仪器高效液相色谱仪(waters600E，PDA检测器，SunFire TM C18色谱柱(4.6mm×150mm，5μm)；紫外-可见分光光度计；真空隔膜抽滤机，0.45μm滤膜；pH计；玻璃匀浆器；剪刀；镊子；一次性注射器。

（3）试剂维生素C(L-抗坏血酸，广州化学试剂厂，纯度≥99.7%)；甲醇色谱纯；二硫苏糖醇纯度99%，高氯酸（70-72%，1.76g/mL）、EDTA、磷酸二氢钾和磷酸（85%）为分析纯，水为超纯水。

（4）溶液配制标准溶液的配制：先配制1mg/mL的标准液储备液，称取0.1gVC，用超纯水定容至100mL,再分别移取0.05mL、0.1mL、0.2mL、0.5mL和1mL分别用超纯水定容至100mL，配成0.5mg/L、1mg/L、2mg/L、5mg/L和10mg/L的维生素C水溶液；30mmol/L KH2PO4-CH3OH（88:12），pH=3.0：称取4.08g KH2PO4，用超纯水溶解，转移到1L容量瓶中，加入120mL甲醇，用水定容至1L，再用5%的磷酸溶液调节pH至3.0，再用真空隔膜过滤器过滤2遍。

维生素C提取溶剂(0.35mol/L高氯酸－0.27mmol/L乙二酸四乙酸二钠－0.1%二硫苏糖醇)：量取高氯酸2.8mL,EDTA-2Na90mg，0.1g二硫代苏糖醇，配成100mL溶液。

（6）测定①流动相超声波脱气：将要使用的流动相：甲醇、超纯水和30mmol/L KH2PO4-CH3OH（88:12）超声波脱气15min。

r药学研究rRP-HPLC法测定人血清中华法林浓度的方法学研究陈纭1,黄晓晖1,唐海沁2,杨维维2,朱燕舞1,金涌1,李俊1(1.安徽医科大学药学院,安徽合肥230032;2.安徽医科大学第一附属医院心内科,安徽合肥230022)摘要:目的建立一种简易的方法测定成人血清中华法林的含量,便于临床药物浓度监测。

方法采用H ype rs ilOD S C18色谱柱(150mm@4.6mm,5L m),流动相为(0.01m o l#L-1)磷酸二氢钾溶液-甲醇-磷酸(38B62B0.009),流速为1.0m l#m in-1,检测波长为205n m。

结果华法林保留时间为8.7m i n,标准曲线的线性范围为0.0625~4.0m g#L-1,r=0.9993,华法林的高、中、低日间、日内变异系数均在10%以下,回收率>90%。

结论该法简便、快速重现性好,灵敏度高,可用于人血清中华法林药物含量检测及应用于临床治疗药物监测。

关键词:华法林;反相高效液相色谱法;血清浓度Deter m inati on of warfari n i n hu man blood seru m by RP-HPLCC H E N Yun,HUANG X iao-hu,i TANG H a-i qin,YANG W e-i w e,i Z HU Yan-w u,JIN Yong,LI Jun(Co llege of Phar m ac y,A nhuiM edical Universit y,H efei230032)Abstrac t:A i m T o establis h an m ethod for de ter m i nati on o fw arfa ri n i n hu m an.s blood se ru m.M ethods RP-H PLC m ethod w as used,w it h C18co l u m n at the standa rd of150mm@4.6mm,0.01m o l#L-1KH2PO4m ethano-l H3PO4so l ution(38B62B0.009)as m ob ilephase.T he fl ow rate was1.0m l#m i n-1.UV detecti on w as de ter m i ned at205n m.R esu lts The reserve ti m e o fW arfa ri n i n hu m an b l ood se ru m was8.7m i n.T he linear ity rang e o f standard curv e was bet ween0.0625and4.0mg#L-1.The av erage recovery w as90%. R SD o f three consi stencies i nc l ud i ng the high,m i ddle and lo w var i ed i n less t han10%.Conc l u sion T he m ethod i s si m p le,fast and ac-curate fo r t he analysis o fw arfar i n i n hu m an b l ood serum.K ey word s:w arfar i n;RP-H PLC;se ru m concentrati on华法林是临床使用最广泛的双香豆素类抗凝药,可用于房颤等疾病的预防和治疗,心脏瓣膜置换的病人更需终身服用华法林。

HPLC法测定饮料中维生素C含量内蒙古呼和浩特 010070摘要：通过比较食品及保健食品中维生素C的测定方法，发现使用高效液相色谱法测定维生素C更加方便准确。

分析了影响测试的色谱条件，发现在选用反相色谱柱、偏磷酸溶液作为提取液，以离子对试剂为流动相（pH=2.5）,柱温为25℃时，测定饮料基质中维生素C含量，可以获得较好的线性、稳定性及回收率。

关键词：高效液相色谱法；饮料；维生素C含量维生素C又称L（+）抗坏血酸[1]，是维持人类正常生命活动所必需的有机化合物，主要来源于新鲜蔬菜、水果。

其中，L（+）抗坏血酸对人体有生物活性，而D（-）抗坏血酸对人体无生物活性。

维生素C可以促进胶原蛋白合成，延缓细胞衰老和凋亡，具有抗癌作用；它还参与神经介质和激素的生物合成；可以调节胆固醇代谢，将胆固醇转化为胆汁酸。

维生素C广泛应用于食品工业、分析化学、农林牧业及医药领域。

维生素C与舌尖上的安全息息相关，在我国相关食品标准中，维生素C可以在水果、罐头食品、水果泥、饮料、糖果和婴儿食品中适度添加。

因此，研究维生素C的特性并掌握维生素C的准确测定对人类营养和健康非常重要。

1.食品及保健品中维生素C的检测方法维生素C的检测方法有分光光度法、化学发光法,电化学分析法。

由于维生素C具有很强的还原能力，在中性和碱性条件下不稳定，在处理样品时遇热很容易失去维生素C，这对检测有很大的限制。

近年来维生素检测技术取得重大进展，特别是现代分析工具和计算机技术的完美结合。

高效液相色谱法目前是最常见的分析工具，可以快速、敏感、精确地测量，并可以与其他分析方法结合使用，只需要少量的样品。

近年来，维生素C是通过高效液相色谱法来测量的，但实验中的色谱条件差别很大。

通过比较近年来维生素C的测量方法，对色谱柱、浸提剂、流动相、流动相pH值、流速、柱温、检测器等色谱测定条件进行讨论，探索出更合适的测定方法。

2.色谱条件对维生素C测定的影响2.1色谱柱的选择反相色谱柱具有非常广泛的应用和较长的使用寿命，近年来有关液相色谱测定维生素 C 多数采用反相色谱柱。

·28·Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy中国民族民间医药药物研究The Medicine Study高效液相色谱法测定维生素C注射剂的含量赵敏胡付华邵阳市第一人民医院药剂科，湖南邵阳422000【摘要】：目的：建立一种灵敏、准确的高效液相色谱（HPLC）测定维生素C注射剂的方法，并进行分析方法学验证。

方法：采用色谱柱为Xterra RPC18(4.6×150mm，5μm)，柱温为25℃，以0.01mol·L-1（pH为3.5）的磷酸二氢钠为流动相，系统流速为0.6mL·min-1，检测波长为265nm。

结果：该方法的线性范围为50～120μg·mL-1，其标准曲线的相关系数为0.9992，日内RSD为0.87%，其日间RSD为1.03%，加样回收率为100.36%。

结论：此法灵敏、准确、高效，重复性好，可用于注射用维生素C的含量测定。

【关键词】：维生素C；高效液相色谱法；含量测定【中图分类号】R927【文献标识码】A【文章编号】1007-8517 (2010) 04-028-2Determination of vitamin C for injection by HPLCZHAO Min，HU Fu-hua (Department of pharmacy，the First People’s Hospital of ShaoYang city，Shaoyang 422000，China)[ABSTRACT] Objective: To develop a sensitive and accurate High Performance Liquid Chromatography Assay (HPLC) for the quantitative analysis of vitamin C for injection. Method: HPLC for the determination of vitamin C for injection. was performed, using Waters 600 systems on a Xterra RP C18 (4.6×150mm,5μm) column, with the mobile phase of 0.01mol.L-1 dibasic sodium phosphate buffer solution (pH=3.5), at the dectective wavelength of 265nm, with the fl ow rate of 0.6mL·min-1, column temperature at 25℃. Result: According to the chromatographic conditions, sampling the reference mixture, the linear range was 50～120μg·mL-1 and correlation coeffi cient was 0.9992, RSD% of inter-day and within-day precision was 0.87% and 1.03% respectively, Recovery was 100.36%.Conclusion: This method is sensitive， and accurate for determination of vitamin C for injection.维生素C又名抗坏血酸，参与氨基酸代谢、神经递质的合成、胶原蛋白和组织细胞间质的合成，可降低毛细血管的通透性，加速血液的凝固，刺激凝血功能，促进铁在肠内吸收，促使血脂下降，增加对感染的抵抗力，参与解毒功能，且有抗组胺的作用及阻止致癌物质(亚硝胺)生成的作用，其临床用途广泛。