苏木素伊红染色

实验四病理组织切片制作一、实验目的组织切片技术是病理学中不可缺少的一个组成部分。

通过实验，能够使学生了解和掌握病理组织切片的基本方法之一，即石蜡包埋的组织切片法。

二、实验原理根据病变及检查的要求，合理采集病料，经固定、脱水、透明、浸蜡、包埋后进行切片，在进行染色得到结果。

固定是用化学药品把组织原来的结构保存下来，以便观察。

脱水是除去组织中的水分，以利于透明和浸蜡。

组织的透明是便于透蜡包埋。

包埋的是使石蜡透入组织内部，把软组织变为适当硬度的包埋块，以便切成薄片。

最后使用切片机，将包埋块中组织切成薄片。

三、主要仪器及试材已固定好病料，石蜡，手术刀，手术剪，镊子，脱水框，染色缸，梯度脱水酒精和透明剂一套，烘箱，切片机，毛笔，玻片，蛋白甘油，染色架，酒精灯，三角架，大烧杯，温度计，火柴，切片刀，记号笔或铅笔。

四、实验方法与步骤。

（一）固定采取的病理材料必须立即放入10％福尔马林固定液中。

（二）脱水组织经固定后，尚含有多量水分，而水与透明剂苯、石蜡根本不相融合。

必须先把组织中的水分除去。

但脱水剂必须是与水在任何比率下均能混合的液体，脱水剂常兼有硬化组织的作用。

最常用的脱水剂为酒精、丙酮等。

1．酒精沸点78．4℃，为最常用的脱水剂。

脱水能力强，并能使组织硬化，能较好地与二甲苯透明剂相混合。

最终结果表明，只要脱水环节处理好，都会得到好的切片。

脱水的程序为70％一80％一95％一100％。

各级酒精2—4小时，视材料的大小、厚薄而定。

100％酒精有硬化组织的作用，时间不宜太长，一般不超过3小时。

脑组织、脂肪组织或疏松结缔组织，脱水时间要适当延长。

2．丙酮沸点为56℃。

脱水作用比乙醇强，但对组织块的收缩较大，主要用于快速脱水或固定兼脱水。

脱水时间l一3小时左右。

（三）透明透明对组织有脱酒精及透明两种作用。

当组织中全部为透明剂占有时，光线可以透过，组织可呈现不同程度的透明状态，此种现象称为透明，具有这种作用的试剂称为透明剂。

苏木素-伊红染色液（H-E）说明书【产品名称】苏木素-伊红染色液（H-E）H&E Staining System【产品编号】HE-500ml,HE-1000ml,HE-2500ml【包装规格】苏木素染色液500ml、1000ml2500ml；伊红染色液500ml、1000ml 2500ml；返蓝染色液500ml、1000ml2500ml。

【预期用途】主要用于对细胞组织进行染色。

【检验原理】苏木素-伊红染色液（H-E）由3部分组成：苏木素染色液、伊红染色液和返蓝染色液。

苏木素氧化后与金属媒染剂作用，可形成不可替代的细胞核颜料。

带有正电荷的苏木素-金属媒染剂复合体，易与细胞核内DNA上带负电荷的磷酸基团结合，因而使细胞核染色形成特定的蓝色。

伊红染色液是一种广泛用于组织学染色中与苏木素染色形成对比的染料（HE染色法）。

此染色法可观察到清晰的细胞结构。

样本中细胞核可经苏木素染色呈蓝色，细胞质经伊红染色呈粉红色。

伊红是一种阴离子染料，可将红细胞染成亮红色，同样也可对其他基本的细胞组分（细胞质，胶原及肌纤维）进行染色。

返蓝染色液为组织学染色试剂，可替代水洗，快速使核染色质和核膜显现蓝色。

由于其坚硬度和碱性，水冲洗后改变苏木素染核后的颜色。

使用BioGnost 返蓝染色液，粘附在玻片上的样本不会发生像使用其他返蓝染色液时发生降解。

【主要组成成分】苏木素：乙二醇、苏木素、碘酸钠、硫酸铝；伊红：伊红、乙醇；返蓝染色液：碳酸锂。

【储存条件及有效期】保证产品包装完整的情况下，储存温度在+15°C和+25°C 之间。

保持储存环境干燥，不要放置于寒冷的环境中，不要冷冻产品，避免直接阳光直射。

产品使用效期为2年，具体效期见标签。

【适用仪器】不适用【样本要求】使用合适的设备仪器收集组织样本，并标记清楚，根据操作说明进行实验。

为避免发生错误，染色及诊断过程最好由具相关专业知识的技术人员操作。

根据标准医疗诊断实验室标准镜检诊断。

苏木素伊红(HE)染色试剂盒产品简介：苏木素(Hematoxylin)和伊红( Eosin)染色，简称HE染色，是病理学常规制片中最基本的染色方法，应用机器广泛。

苏木精是从原产中南美的洋苏木中提取出来的浅黄褐色的结晶，是一种碱性染色剂，它在被氧化后生成苏木素，同媒染剂(常用的是三价的铝或盐铁)一起使用，能够使细胞核染色。

在病理诊断、教学和科研工作中，常用HE染色对正常组织和病变组织进行形态结构观察。

对于确定或鉴别病变组织、细胞中出现的某些异常物质与特殊成分，而需要采用的特殊染色方法、酶组织化学方法、免疫组织化学方法等也均是在观察HE染色组织切片的基础上进行的。

在HE染色的组织切片中，细胞核呈蓝色，细胞浆呈红色，二者形成鲜明的对比，易于观察分析。

Leagene苏木素伊红染色试剂盒中，苏木素染色液采用进口的高纯度苏木精、硫酸铝钾、甘油等组成，不含氧化汞、甲醇等有害物质，对细胞核染色效果好。

其特点：长期保存，不易产生沉淀和金属; 应用范围广，可以用于人、动物、畜牧、水产等领域，可以用于组织石蜡切片、冰冻切片和组织细胞的染色等；苏木素染色液可以重复使用。

染色原理：1、细胞核染色的原理：苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色。

细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA 双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。

苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。

2、细胞浆染色的原理：伊红是一种化学合成的酸性染料，在一定条件下可使细胞浆着色。

细胞浆的主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色与染液的pH值密切相关。

当染液的pH值在胞浆蛋白质等电点(4.7～5.0)以下时，胞浆蛋白质以碱式电离，则细胞浆带正电荷，就可被带负电荷的酸性染料染色。

伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合，使细胞浆着色，呈现红色。

常用染色步骤HE,马松,糖原联系人:周昌斌137******** 133********苏木素伊红染色液一.苏木素伊红染色液套装组合:Harris苏木素染色液50ml水溶性伊红染色液50ml苏木素染色分化液50ml苏木素染色返兰液50ml概述:苏木素伊红染色是组织病理学经典的常规染色方法,历经上百年的应用历史至今仍无可替代。

因此,苏木素伊红染色是病理切片制作中极为重要的技术环节。

二.染色方法:1. 切片脱蜡二甲苯I 5分钟,2. 切片脱蜡二甲苯II 5分钟,3. 100%1、100%2、95%1、95%2、70%梯度乙醇各30,秒钟,4. 自来水流水冲洗1分钟,5. 苏木素染色5—8分钟(依染液新旧调整染色时间),6. 自来水流水冲洗1分钟,7. 进入分化液分化数秒钟,8. 自来水流水冲洗1分钟,9. 进入返兰液处理5—10秒钟,10. 自来水流水冲洗2分钟,11. 进入伊红染色液1-3分钟,12. 自来水冲洗30—60秒钟,13. 75%I、75%II乙醇脱水分色各10秒钟,14. 95%乙醇1、95%乙醇2各脱水10秒钟,15. 100%乙醇1、100%2脱水30-60秒钟,16. 二甲苯1、二甲苯2透明各1分钟,17. 中性树胶封固。

三.染色技术要点:苏木素染色液在静止由于时染液表面于空气中的氧分子接触极液体代表面水分蒸发会产生氧化作用并形成氧化膜。

因此,在使用前应使用滤纸吸附去除氧化膜以免污染切片。

一般情况下应建立良好的使用习惯,每隔2~3天将苏木素染液彻底过滤一次。

为保证HE切片的恒定染色质量建议每500ml苏木素染色液染1200~1500张切片为宜。

苏木素染色液在用于免疫组织化学染色的的复染时应注意调控染色时间,核染色过浅不易辨识组织结构而核染色过深则喧宾夺主,一般复染的时间应控在10-30秒以内。

此外,复染后的分化和返兰步骤不应省略否则将造成整张切片呈淡蓝色,使DAB呈现土黄色。

分化和返兰步骤是HE染色关键点,应在染色实践中依据分化液和返兰液的新旧调整分化和返兰的处理时间。

病毒包涵体染色液(亚甲蓝伊红法)简介：病毒是一类体积极其微小，能够通过滤菌器的只能在活细胞内生长增殖的微生物。

病毒颗粒一般在10～30nm ，主要由核酸和蛋白质组成。

普通光镜下，某些病毒感染的细胞内可见大小和数量不等的圆形或不规则小体，称为病毒包涵体。

该物质多位于细胞质内，呈酸性，如狂犬病毒包涵体；有些位于细胞核内，呈碱性，如腺病毒核内包涵体；有些既在细胞质内也在细胞核内，如麻疹病毒包涵体。

RNA 病毒常形成细胞质内包涵体，DNA 病毒多形成细胞核内包涵体。

Leagene 病毒包涵体染色液采用Mann 亚甲蓝伊红染色法，细胞核被亚甲蓝染成蓝色，包涵体被伊红染成红色。

在病毒感染中，包涵体可能是病毒增殖部位，但应注意并非细胞内的所有包涵体都是病毒，细胞变性也会形成包涵体。

组成：自备材料：1、10%中性福尔马林固定液2、蒸馏水3、系列乙醇操作步骤(仅供参考)：1、常规固定(常采用10%福尔马林), 常规脱水包埋。

2、组织切片脱蜡入蒸馏水。

3、入亚甲蓝伊红染色液，浸染。

5、蒸馏水洗。

6、Mann 分化液分化。

7、丙酮脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

染色结果：编号 名称DM0062 2×20ml DM0062 2×50ml Storage试剂(A): 亚甲蓝伊红染色液 20ml 50ml RT 避光 试剂(B): Mann 分化液 20ml50mlRT 避光使用说明书1份包涵体红色细胞核蓝色注意事项：1、病毒很小，光镜下不易被发现，应仔细观察。

2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。

相关：编号名称DC0032 Masson三色染色试剂盒DE0001 碱性磷酸酶染色液(改良Gomori钙钴法)DF0135 多聚甲醛溶液(4% PFA)DG0007 AB-PAS染色液DH0006 苏木素伊红(HE)染色液PS0013 RIPA裂解液(强)PW0053 Western抗体洗脱液(碱性)TO1013 丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法)。

生物实验染色剂北京华越洋生物过碘酸溶液(0.5%) 100ml 碳水染色40% 4℃,避光,6个月又称高碘酸溶液，是一种氧化剂，常与Schiff试剂合用对糖原进行染色过碘酸溶液(1%) 100ml 碳水染色40% 4℃,避光,6个月又称高碘酸溶液，是一种氧化剂，常与Schiff试剂合用对糖原进行染色Schiff试剂50ml 碳水染色40% 4℃,避光,6个月又称雪夫试剂、希夫试剂，主要用于碳水化合物染色：如糖原,粘蛋白,糖蛋白,多糖,透明质酸。

又称无色品红染色液。

为无色液体，一般变黄或粉红应弃用。

Schiff试剂100ml 碳水染色40% 4℃,避光,6个月又称雪夫试剂、希夫试剂，主要用于碳水化合物染色：如糖原,粘蛋白,糖蛋白,多糖,透明质酸。

又称无色品红染色液。

为无色液体，一般变黄或粉红应弃用。

糖原PAS染色液4×50ml 碳水染色40% 4℃,避光,6个月经典的糖原染色法,不仅能够显示糖原,还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质以及软骨、垂体、真菌、色素、淀粉样物质、基底膜糖原染色中北京华越洋生物推荐采用该染色液，是最常用的经典糖原染色法,高碘酸和schiff试剂应低温保存。

染色结果为：PAS反应阳性物质(糖原或多糖)均呈红色或紫红色；细胞核呈蓝色。

糖原PAS染色液4×100ml 碳水染色40% 4℃,避光,6个月经典的糖原染色法,不仅能够显示糖原,还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质以及软骨、垂体、真菌、色素、淀粉样物质、基底膜糖原染色中北京华越洋生物推荐采用该染色液，是最常用的经典糖原染色法,高碘酸和schiff试剂应低温保存。

染色结果为：PAS反应阳性物质(糖原或多糖)均呈红色或紫红色；细胞核呈蓝色。

糖原PAS染色液(细胞专用) 4×20ml 碳水染色40% 4℃,避光,6个月经典的糖原染色法,不仅能够显示糖原,还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质,特别适用于细胞、极其薄的切片。