Cole氏苏木素染色液(常规染色)使用介绍

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苏木染色方法苏木染色是一种常用的组织切片染色方法，常用于生物医学领域的组织学研究中。

苏木染色可以清晰地显示细胞核和细胞质，有助于观察细胞结构和组织形态。

下面将介绍苏木染色的方法步骤和注意事项。

1. 材料准备。

苏木染色所需材料包括，苏木精溶液、甲醛固定液、酒精、蜡块、切片、显微镜等。

其中，苏木精溶液和甲醛固定液是必不可少的试剂，其浓度和保存条件需严格控制。

2. 样本处理。

首先，将待染色的组织样本进行固定处理，一般采用甲醛固定液固定组织，固定时间视样本大小而定，一般为6-24小时。

固定后，进行脱水和透明化处理，使组织脱水透明。

3. 切片制备。

将处理后的组织样本进行包埋、切片，制备出5-8μm厚的切片。

切片后，将其放置在温水中，使切片展开并粘附在载玻片上。

4. 染色步骤。

将载玻片放置在苏木精溶液中浸泡，时间一般为5-10分钟，然后取出晾干。

接着，将载玻片放入蜡熔点略高于60℃的热蜡中，使切片蜡块包埋。

包埋后，切片放入苏木精溶液中浸泡，时间一般为2-5分钟。

最后，将切片取出，经过脱水、透明化处理后，封片即可。

5. 注意事项。

在进行苏木染色时，需要注意苏木精的浓度和染色时间，过浓的苏木精会使细胞核染色过深，影响观察效果；染色时间过长也会导致染色过深。

此外，切片的制备过程中要保持刀片锋利，切片厚度均匀，以确保染色效果。

总结。

苏木染色方法是一种简单易行的组织切片染色技术，通过对组织样本的固定、切片和染色处理，可以清晰地显示细胞核和细胞质的结构，为细胞学和组织学研究提供了重要的技术支持。

在实际操作中，需要严格控制各个步骤的条件和时间，才能获得理想的染色效果。

通过本文的介绍，相信大家对苏木染色方法有了更深入的了解，希望能够在实验操作中取得良好的结果。

祝大家实验顺利！。

北京索莱宝科技有限公司
Scott蓝化液使用说明书
货号：G1865
规格：500ml
保存：RT避光，12个月
产品说明：
苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色简称HE染色，是病理学和组织学最常用的一种染色方法。

苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色。

分化之后，苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，呈红色；在碱性条件下处于蓝色离子状态，呈蓝色。

组织切片经酸性乙醇分化后呈红色或粉红色，立即用水除去组织切片上的酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木素染上的细胞核呈现蓝色，这个过程称为返蓝作用或蓝化作用。

另外用自来水浸洗也可使细胞核返蓝，但所需时间较长。

Scott蓝化液全称为Scott Tap Water/Bluing，又称Scott促蓝液，主要由硫酸镁、碳酸氢钠等组成，多用于苏木素染色后蓝化，尤其适用于Gill苏木素染色液(Gill No.3)的蓝化。

操作说明(仅供参考)：
1.按实验具体要求操作。

一般蓝化2～60s。

注意事项：
1.切片脱蜡应尽量干净。

系列乙醇应经常更换新液。

2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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H o e c h s t染色的讨论H o e c h s t染色的具体步骤caspase8428：我看到资料上说，荧光染色的时候可以用DAB与荧光物质反应生成沉淀。

那么，Hoechst染色时，什么时候加DAB，浓度是多少，用什么稀释，最后怎么来终止反应？是不是还要用抗退色固片介质来封片？sunandsuny：Hoechst染色时无需用DAB来显色，它直接结合细胞的DNA ，经过紫外光激发后发出蓝色荧光。

如果你是用来染培养的细胞的话，可以参考下面的步骤（切片雷同）：细胞涂片：甲醇：冰乙酸（3：1）固定15分钟，PBS洗一次，加Hoechest 33258荧光染料37℃孵育15~30分钟，于荧光显微镜下观察。

凋亡细胞由于染色质固缩，细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。

操作比较容易的。

altbenair:想做肝癌细胞hepG2。

看过很多帖子还有文献上的方法，但是都不太具体大都是这样：固定（福尔马林4%），pbs洗三遍，加hoechst孵育1H，将细胞悬液滴于载玻片上荧光显微镜检测。

细胞悬液怎么做？我要做贴壁细胞用胰酶消化？drake015: .1．贴壁细胞，让细胞自己在盖玻片上爬片。

操作如下：A. 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养PBS 或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。

将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%-80%满。

B. 刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0.5ml固定液，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。

C. 去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。

洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。

D. 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。

也宜用摇床，或手动晃动数次。

E. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。

F. 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免气泡。

常规苏木素－伊红（HE）染色操作规程染色步骤：1、二甲苯Ⅰ：5－10min2、二甲苯Ⅱ：5－10min3、二甲苯Ⅲ：5－10min4、无水乙醇Ⅰ：1－3min5、无水乙醇Ⅱ：1－3min6、95%乙醇：1－3min7、80%乙醇:：1－3min8、水洗：1min9、苏木素：3－10min10、流水冲洗：1min11、酸乙醇分化：1－3S12、水洗：30S13、40%氨水或温水（40度左右）返蓝1min14、0.5%伊红液染色：1－3min15、水洗：10S16、80%乙醇：10S17、95%乙醇：1－3min18、无水乙醇Ⅰ：1－3min19、无水乙醇Ⅱ：1－3min20、二甲苯Ⅰ：3－5min21、二甲苯Ⅱ：3－5min22、二甲苯Ⅲ：3－5min中性树胶封固（湿封）以上1、2、3中二甲苯的作用：石蜡切片的常规染色必须先用二甲苯脱去切片中的石蜡，其作用是二甲苯可以溶解切片中的石蜡，以使染料易于进入细胞和组织，石蜡的存在妨碍水和染料进入细胞。

以上4、5、6、7中酒精的作用：酒精用于苏木素染色前由高浓度向低浓度逐渐下降处理切片，是为了洗脱用于脱蜡的二甲苯，使水能进入细胞和组织中，因为纯酒精可以中和二甲苯互溶，二甲苯经过二次纯酒精的洗涤，完全被除去，再经过95%、80%酒精使水分逐渐进入切片，以免引起细胞形太结构改变。

此时水洗作用：洗去未与切片结合的染液。

此时分化的作用：苏木素染色之后，用水洗去未结合在切片中的染液，但是在细胞核中结合过多的染料和细胞浆中吸附的染料必须用分化液0.5~1%盐酸酒精脱去，才能保证细胞核和细胞浆染色的分明，把这个过程称为染色的分化作用，因酸能破苏木素的醌型结构，使色素与组织解离，分化不可过度。

此时水洗的作用：为了除去分化液和脱下的染料中止分化作用。

此时水洗的作用：用水洗去未结合的染液，以防止大量伊红染液进入脱水的酒精中。

以上16、17、18、19中酒精的作用：为二甲苯进入细胞创造条件，这时必须彻底脱水，否则二甲苯不能进入细胞组织切片透明度达不到光符显微镜观察时透光度的要求，在显微镜下能显示清晰的细胞和组织结构。

苏木染色方法
苏木染色是一种常用的组织学染色方法，适用于对细胞核和胞质进行染色，能够清晰地显示细胞核和细胞器的结构。

本文将介绍苏木染色的方法和步骤，希望能够对您有所帮助。

首先，准备工作。

在进行苏木染色之前，需要准备好所需的试剂和材料，包括苏木精染色液、95%乙醇、脱水醋酸、显微镜玻片、组织切片等。

其次，取组织切片。

将需要染色的组织切片放置在玻片上，确保切片的平整和干燥，以便后续的染色步骤顺利进行。

然后，脱水处理。

将组织切片依次浸泡在70%乙醇、95%乙醇和绝对乙醇中，每次浸泡5分钟，以去除切片中的水分，使得染色效果更加明显。

接着，染色处理。

将脱水后的组织切片放入苏木精染色液中浸泡5-10分钟，然后取出放入脱水醋酸中浸泡1-2分钟，最后用95%乙醇洗涤切片，直至切片表面不再有染色液渗出。

最后，封片。

将染色后的组织切片放入透明胶水中，然后放置
在显微镜玻片上，用玻片压实，使得组织切片与玻片紧密结合，最
后晾干即可进行观察。

需要注意的是，在整个染色过程中，要注意操作的细节和步骤，确保每一个步骤都能够得到严格的执行。

另外，苏木染色后的组织
切片要小心保存，避免受潮或者受到其它污染。

总之，苏木染色是一种简单而有效的组织学染色方法，通过合
理的操作步骤和技巧，可以得到清晰的染色效果，为细胞学研究提
供了重要的帮助。

希望本文所介绍的苏木染色方法能够对您的实验
工作有所帮助。

苏木素染液的配制1) Harry`s苏木素苏木素 1g无水酒精10ml硫酸铝钾 20g蒸馏水 200ml氧化汞 0.5g冰醋酸 8ml分别用无水酒精溶解苏木素，蒸馏水加热溶解硫酸铝钾，然后两液混合并煮沸，加入氧化汞，继续加热和搅拌至溶液为深紫色，立即冷却，恢复至室温后过滤备用。

(2) 改良Lillie-Mayer`s苏木素苏木素 2.5g无水酒精 20ml硫酸铝钾 5g蒸馏水330ml碘酸钠250mg甘油150ml冰醋酸 10ml分别用无水酒精溶解苏木素，蒸馏水溶解硫酸铝钾，然后两液混合后，依次加入碘酸钠、甘油和冰醋酸。

(3) Mayer`s苏木素苏木素100mg蒸馏水100ml碘酸钠 20mg硫酸铝铵 5g柠檬酸100ml水合氯醛 5g用蒸馏水溶解苏木素后，依次加入碘酸钠、硫酸铝铵和水合氯醛，过滤后备（4）Ehrlich氏苏木素（1886）苏木素1g无水酒精50ml甘油50ml硫酸铝钾 7.5g蒸馏水50ml冰醋酸5ml将苏木素溶于无水酒精里，硫酸铝钾溶于蒸馏水中，然后所有的试剂都加在一起，充分搅拌均匀后，放于窗台上阳光充足的地，让其慢慢氧化成熟，大约需四个星期，才可使用。

该液量种很好的细胞核染色液，用它染后，细胞核染色清晰，不易过染。

对于用酸脱钙组织细胞核的染色，该试剂优于其它各种苏木素。

这种自然氧化成熟的苏木素，可长期使用，不会变质。

但染色时间较长，需要20分钟以上。

如需急用而苏木素又未成熟时，该液可加入20-30mg的碘酸钠，以促使其迅速氧化成熟，但这试剂配成后，就不是原来的苏木素，不能长期使用，但起码可用半年左右。

（5）Weigert氏铁苏木素A液：苏木素 1g无水酒精100ml将苏木素溶于酒精，让其慢慢氧化成熟，约四周以后，便可以使用，或者用成熟的10%的苏木素酒精配制，即时可用。

B液：29%三氯化铁水溶液 4ml蒸馏水95ml盐酸1ml临用时，取A液和B液等份混合，即可使用，在4小时内使用完毕，如果超时，这种试剂便过分氧化而失效。

苏木素染色液说明书【产品名称】通用名称：苏木素染色液英文名称：EnVision TM FLEX Hematoxylin (Link)【包装规格】3×45mL【预期用途】用于对组织细胞切片中的细胞核染色。

【主要组成成分】苏木素水溶液【储存条件及有效期】室温下避光保存。

有效期12个月。

【适用仪器】组织染色机（Autostainer Link 48）【检测方法】1.检测步骤1)将抗原修复液按照1：50比例配制好，放置在免疫组化预处理系统（PT Link）中2)运行免疫组化预处理系统（PT Link）至65度，将切片放置在抗原修复液中3)加热至95度，持续20分钟，降温至65度4)将切片取出放置在洗脱缓冲液工作液中，5分钟后，放置在自动染色系统上染色5)过氧化物酶阻断剂5分钟6)洗脱缓冲液工作液冲洗7)一抗20分钟8)洗脱缓冲液工作液冲洗9)二抗20分钟10)洗脱缓冲液工作液冲洗11)DAB显色10分钟12)自来水冲洗13)苏木素染色液复染5分钟14)自来水冲洗15)70%酒精，80%酒精，90%酒精，100%酒精，100%酒精各2分钟16)二甲苯透明5分钟17)二甲苯透明5分钟18)封片2.质量控制程序1) 每次染色过程中都应当同时对一份已知的阳性对照标本进行染色，以确定染色时所使用的全部试剂是否有效。

若阳性对照标本没有出现阳性染色结果，此次检测样本的标记过程应当视为无效。

2) 应当同时采用阴性对照试剂对每份标本进行染色，以排除发生非特异性染色的可能性。

如果不能明确区分非特异性染色和特异性染色，此次检测样本的标记过程应当视为无效。

更多信息及使用说明请参见DAB染色液试剂盒（代码K8002）使用说明书和Dako自动染色系统（Autostainer Link 48）仪器操作手册。

【检测结果的解释】含有DAB的底物缓冲液可以在一抗所识别的目标抗原部位产生褐色。

阳性对照样本应当在其目标抗原的预期部位出现褐色。

苏木素-伊红染色液（H-E）说明书【产品名称】苏木素-伊红染色液（H-E）H&E Staining System【产品编号】HE-500ml,HE-1000ml,HE-2500ml【包装规格】苏木素染色液500ml、1000ml2500ml；伊红染色液500ml、1000ml 2500ml；返蓝染色液500ml、1000ml2500ml。

【预期用途】主要用于对细胞组织进行染色。

【检验原理】苏木素-伊红染色液（H-E）由3部分组成：苏木素染色液、伊红染色液和返蓝染色液。

苏木素氧化后与金属媒染剂作用，可形成不可替代的细胞核颜料。

带有正电荷的苏木素-金属媒染剂复合体，易与细胞核内DNA上带负电荷的磷酸基团结合，因而使细胞核染色形成特定的蓝色。

伊红染色液是一种广泛用于组织学染色中与苏木素染色形成对比的染料（HE染色法）。

此染色法可观察到清晰的细胞结构。

样本中细胞核可经苏木素染色呈蓝色，细胞质经伊红染色呈粉红色。

伊红是一种阴离子染料，可将红细胞染成亮红色，同样也可对其他基本的细胞组分（细胞质，胶原及肌纤维）进行染色。

返蓝染色液为组织学染色试剂，可替代水洗，快速使核染色质和核膜显现蓝色。

由于其坚硬度和碱性，水冲洗后改变苏木素染核后的颜色。

使用BioGnost 返蓝染色液，粘附在玻片上的样本不会发生像使用其他返蓝染色液时发生降解。

【主要组成成分】苏木素：乙二醇、苏木素、碘酸钠、硫酸铝；伊红：伊红、乙醇；返蓝染色液：碳酸锂。

【储存条件及有效期】保证产品包装完整的情况下，储存温度在+15°C和+25°C 之间。

保持储存环境干燥，不要放置于寒冷的环境中，不要冷冻产品，避免直接阳光直射。

产品使用效期为2年，具体效期见标签。

【适用仪器】不适用【样本要求】使用合适的设备仪器收集组织样本，并标记清楚，根据操作说明进行实验。

为避免发生错误，染色及诊断过程最好由具相关专业知识的技术人员操作。

根据标准医疗诊断实验室标准镜检诊断。