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㊃论著㊃基金项目:苏州科技发展项目(S Y S 201434)通信作者:何萍,E m a i l :h ps z _2005@126.c o m 儿童中枢神经系统感染脑脊液主要病原菌的构成及耐药性的监测何 萍,徐 俊,丰 涛,王运中,陶云珍,房锐颖,邵雪军,朱 宏(苏州大学附属儿童医院检验科,江苏苏州215003) 摘 要:目的 探讨儿童中枢神经系统感染脑脊液病原菌的构成及耐药性㊂方法 全自动细菌鉴定仪V I T E K 32进行细菌鉴定和药敏实验并结合K -B 药敏实验法,根据美国临床和实验室标准协会(C L S I)标准进行结果判读㊂结果 住院患儿中枢神经系统感染脑脊液标本1990份共分离病原菌181株,检出阳性率9.1%(181/1990)㊂细菌检出率95.0%(172/181),真菌检出率5.0%(9/181),其中肺炎链球菌19.3%(35/181),表皮葡萄球菌18.8%(34/181),大肠埃希菌17.1%(31/181)㊂3种主要细菌的分离率较高,主要集中分布在1岁以内患儿㊂大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β内酰胺酶(E S B L s )检出率较高,分别为41.9%(13/31)和50.0%(3/6)㊂主要的革兰阴性细菌大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对厄它培南和亚胺培南耐药率为0,未发现耐万古霉素的革兰阳性细菌㊂结论 对中枢神经系统感染患儿脑脊液进行培养和药敏实验,根据药敏结果合理选用抗生素,对降低细菌的耐药和提高药物的敏感性,临床合理使用抗菌药物有指导作用㊂关键词:脑膜炎,细菌性;抗药性,细菌;儿童中图分类号:R 515.2 文献标识码:A 文章编号:1004-583X (2016)10-1121-04d o i :10.3969/j.i s s n .1004-583X.2016.10.020S u r v e i l l a n c e o f p a t h o g e nd i s t r i b u t i o na n da n t i m i c r o b i a l r e s i s t a n c e o f b a c i l l i f r o m c e r e b r o s p i n a l f l u i da m o n g c h i l d r e nw i t h c e n t r a l n e r v o u s s ys t e mi n f e c t i o n H eP i n g ,X u J u n ,F e n g T a o ,W a n g Y u n z h o n g ,T a oY u n z h e n ,F a n g R u i y i n g ,S h a oX u e j u n ,Z h uH o n gD e p a r t m e n t o f C l i n i c a lL a b o r a t o r y ,t h eA f f i l i a t e dC h i l d r e n H o s p i t a l o fS o o c h o w U n i v e r s i t y ,S u z h o u 215003,C h i n a C o r r e s p o n d i n g a u t h o r :H eP i n g ,E m a i l :h ps z _2005@126.c o m A B S T R A C T :O b je c t i v e T o a n a l y z e p a t h o g e nd i s t r i b u t i o n a n d a n t i m i c r o b i a l r e s i s t a n c e of b a c i l l i f r o mc e r e b r o s p i n a l f l u i da m o ng chi l d r e n w i t h c e n t r a l n e r v o u s s ys t e m i n f e c t i o n .M e t h o d s T h e V I T E K 32w a s u s e d f o r b a c t e r i a i d e n t i f i c a t i o n .T h eb a c t e r i a l s u s c e p t i b i l i t y t e s t i n g w a sd o n eb y K i r b y -B a u e r m e t h o d .T h ea n t i m i c r o b i a l s u s c e p t i b i l i t y w a s d e t e r m i n e da c c o r d i n g t oC L S I s t a n d a r d .R e s u l t s 1990c e r e b r o s p i n a l f l u i do f c h i l d r e nw i t h c e n t r a l n e r v o u s s ys t e m i n f e c t i o nw e r e d e t e c t e d .181s t r a i n sw e r e i s o l a t e d ,a n dt h ed e t e c t i o nr a t ew a s9.1%(181/1990).T h e i s o l a t e dr a t eo f b a c t e r i a w a s 95.0%(172/181)a n d f u n g u s r a t e w a s 5.0%(9/181).T h e r a t e o f S t r e pt o c o c c u s p n e u m o n i a ,S t a p h y l o c o c c u se pi d e r m i d i s a n d E s c h e r i c h i a c o l i w e r e 19.3%(35/181),18.8%(34/181),17.1%(31/181),r e s p e c t i v e l y .T h e i s o l a t e d r a t e o f E S B L s o f E s c h e r i c h i a c o l i a n dK l e b s i e l l a p n e u m o n i a ew e r e 41.9%(13/31)a n d 50.0%(3/6).T h e i s o l a t e d r a t eo f t r i -p r e d o m i n a n tb a c t e r i aw e r e t h eh i g h e s t i n p e d i a t r i c p a t i e n t sw i t ho n e y e a ro f a g e .T h e d r u g o f r e s i s t a n t r a t e so f f u n d a m e n t a l g r a m -n e g a t i v eb a c t e r i a i n c l u d i n g E s c h e r i c h i ac o l i a n dK l e b s i e l l a p n e u m o n i a e t o e r t a p e n e ma n d i m i p e n e m w e r e 0.T h e r e s i s t a n c e t ov a n c o m y c i no f g r a m -p o s i t i v e b a c t e r i aw a s n o t d e t e c t e d .C o n c l u s i o n I t i s i m p o r t a n t t oa p p l y c l i n i c a l a n t i b i o t i c s f o r i n c r e a s i n g a n t i b i o t i c s s u s c e p t i b i l i t y ont h eb a s i so f c u l t i v a t i o nr e s u l t s a n da n t i m i c r o b i a l r e s i s t a n c e o f b a c i l l i f r o mc e r e b r o s p i n a l f l u i da m o n g c h i l d r e nw i t hc e n t r a l n e r v o u s s ys t e mi n f e c t i o n .K E Y W O R D S :m e n i n g i t i s ,b a c t e r i a l ;d r u g r e s i s t a n c e ,b a c t e r i a l ;c h i l d 细菌性脑膜炎是儿童较常见的中枢系统急性感染性疾病㊂在我国,小于5岁的儿童发病率为6.95~22.3例/10万例儿童[1]㊂近年来,随着抗生素的大量使用,细菌性脑膜炎病死率大幅下降,但后遗症的发生率没有明显改变,仅近期后遗症发生率高达25%[2],严重威胁患儿健康㊂脑脊液标本病原菌的鉴定和药敏实验,对临床治疗儿童细菌性脑膜炎和预防并发症㊁后遗症有重要意义㊂1 资料与方法1.1 菌株来源和鉴定 2011年1月至2016年1月我院微生物实验室共收到脑脊液标本1990份,按全国临床检验操作规程进行培养㊁分离㊁鉴定㊂同一患者10天内相同菌株,不计入细菌总数㊂㊃1211㊃‘临床荟萃“ 2016年10月5日第31卷第10期 C l i n i c a l F o c u s ,O c t o b e r 5,2016,V o l 31,N o .10Copyright ©博看网. All Rights Reserved.1.2标本采集对发热入院或有明显感染征象的患儿进行腰椎穿刺,无菌操作取脑脊液1~2m l注入血培养瓶,1小时内送微生物室,并放入美国B D公司B A C T E C9240全自动血培养仪进行培养㊂培养阳性的标本,直接涂片,革兰染色检查细菌;并转种到血培养基,然后放5%~10%C O2培养箱35ħ培养18~24小时㊂如有细菌生长,按要求上机进行细菌鉴定和药敏实验㊂在脑脊液注入血培养瓶前和转种到血培养基前均用75%乙醇消毒血培养瓶口避免污染㊂1.3试剂和仪器美国B D公司B A C T E C9240全自动血培养仪及其配套培养瓶,法国生物梅里埃公司的全自动细菌鉴定仪V I T E K32及其相关配套试剂㊂配制血平板和巧克力平板的哥伦比亚琼脂为英国O x o i d产品,实验所用M-H琼脂和抗菌药物纸片均为英国O x o i d公司产品㊂细菌鉴定由杭州天和微生物试剂有限公司提供㊂1.4药敏试验革兰阳性菌和革兰阴性菌使用全自动细菌鉴定仪V I T E K32进行细菌鉴定和药敏试验并结合K-B药敏试验法,根据逐年更新美国临床和实验室标准协会(C L S I)标准进行结果判读㊂肺炎链球菌药敏试验使用A T B板条(手工法)㊂所用纸片均用大肠埃希菌A T C C25922㊁金黄色葡萄球菌A T C C25923㊁铜绿假单胞菌A T C C27853,质控合格,上机鉴定和药敏板用大肠埃希菌A T C C25922和金黄色葡萄球菌A T C C29213质控㊂1.5超广谱β内酰胺酶(E S B L s)检测采用双纸片协同扩散法,选择阿莫西林/棒酸㊁头孢噻肟㊁头孢他啶㊁头孢曲松㊁氨曲南5种抗生素纸片,将置阿莫西林/棒酸于中央,周围纸片中心与中央纸片中心距离为20mm㊂结果以周围纸片与中央纸片间出现协同抑菌环为E S B L s阳性菌株㊂1.6统计学分析采用S P S S17.0统计分析软件进行统计学分析㊂2结果2.1病原菌的分布脑脊液标本1990例,共分离出病原菌181例,男101例,女80例,阳性检出率9.1% (181/1990)㊂细菌检出率95.0%(172/181),革兰阳性菌122株,占67.4%(122/181),革兰阴性菌50株,占27.6%(50/181),真菌检出率5.0%(9/181),病原菌分布前3位的依次是肺炎链球菌㊁表皮葡萄球菌和大肠埃希菌㊂病原菌的分布见表1㊂表1脑脊液标本病原菌分布情况病原菌株数百分比(%)革兰阴性菌5027.6大肠埃希菌3117.1肺炎克雷伯菌63.3副流感嗜血杆菌42.2鲍曼不动杆菌21.1嗜麦芽窄食单胞菌21.1铜绿假单胞菌21.1其他革兰阴性菌31.7革兰阳性菌12267.4肺炎链球菌3519.3表皮葡萄球菌3418.8无乳链球菌147.7屎肠球菌95.0溶血葡萄球菌84.4沃式葡萄球菌63.3人葡萄球菌52.8产单核李斯特菌42.2头状葡萄球菌31.7金葡萄球菌21.1其他革兰阳性菌21.1真菌95.0白色念珠菌95.02.23种主要细菌的年龄构成在住院患儿中枢神经系统感染脑脊液标本中,肺炎链球菌在ɤ1岁患儿较多㊂表皮葡萄球菌也主要集中在ɤ1岁患儿㊂大肠埃希菌也同样主要分布在ɤ1岁的患儿,在1岁以上患儿仅有2例㊂3种主要的细菌分离率较高,主要集中分布在ɤ1岁患儿㊂ɤ1岁患儿肺炎链球菌㊁表皮葡萄球菌和大肠埃希菌均占优势,3种致病菌差异无统计学意义(χ2=3.221,P>0.05)㊂>1岁患儿以肺炎链球菌为主要病原菌,与其他病原菌差异有统计学意义(χ2=14.563,P<0.05)㊂见表2㊂表23种主要细菌的年龄构成情况[例(%)]年龄例数肺炎链球菌表皮葡萄球菌大肠埃希菌ɤ1岁18120(11.0)30(16.6)29(16.0) >1岁18115(8.3)4(2.2)2(1.1) 2.3大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌E S B L s的检出率脑脊液标本分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分别检出E S B L s株数为13株和3株,检出率分别为41.9%(13/31)和50.0%(3/6)㊂2.4主要病原菌的抗生素耐药情况主要的革兰阴性细菌大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对厄它培南和亚胺培南耐药率为0,对氨苄西林耐药率最高为64.5%(20/31)和100.0%(6/6)㊂对头孢唑啉耐药率较高为58.1%(18/31)和66.7%(4/6)㊂主要的革兰阳性细菌肺炎链球菌对红霉素㊁克林霉素和青霉㊃2211㊃‘临床荟萃“2016年10月5日第31卷第10期 C l i n i c a l F o c u s,O c t o b e r5,2016,V o l31,N o.10Copyright©博看网. All Rights Reserved.素耐药率高为94.3%(33/35)㊁91.4%(32/35)和82.9%(29/35)㊂表皮葡萄球菌对青霉素和红霉素耐药率较高为88.2%(30/34)和79.4%(27/34)㊂无乳链球菌对四环素和红霉素耐药率高为92.9%(13/14)和64.3%(9/14)㊂3种主要的革兰阳性细菌对万古霉素均敏感㊂见表3,4㊂表3 主要革兰阴性细菌的抗生素耐药情况[株(%)]抗菌药物大肠埃希菌(n =31)肺炎克雷伯菌(n =6)厄它培南00亚胺培南0丁胺卡那霉素0庆大霉素10(32.3)1(16.7)妥布霉素9(29.0)0环丙沙星14(45.2)0左氧氟沙星17(54.8)0复方新诺明17(54.8)0氨苄西林20(64.5)6(100.0)氨苄西林/舒巴坦17(54.8)1(16.7)哌拉西林/他唑巴坦02(33.3)头孢替坦00头孢他啶7(22.6)3(50.0)头孢曲松10(32.3)1(16.7)头胞吡肟7(22.6)4(66.7)氨曲南4(12.9)1(16.7)头孢唑啉18(58.1)4(66.7)头孢呋新11(35.5)3(50.0)头孢哌酮/舒巴坦3(9.7)2(33.3)头孢西丁01(16.7)哌拉西林14(45.2)3(50.0)E B S L13(41.9)3(50.0)表4 主要革兰阳性细菌的抗生素耐药情况[株(%)]抗菌药物肺炎链球菌(n =35)表皮葡萄球菌(n =34)无乳链球菌(n =14)红霉素33(94.3)27(79.4)9(64.3)青霉素29(82.9)30(88.2)0复方新诺明28(80.0)17(50.0)6(42.9)万古霉素000头孢噻肟27(77.1) -0克林霉素32(91.4) -8(57.1)四环素27(77.1)5(14.7)13(92.9)左氧氟沙星015(44.1)5(35.7)氯霉素0 -3(21.4)阿莫西林9(25.7) - -喹奴普汀21(60.0)03(21.4)利奈咗烷00-利福平03(8.8) -氯洁霉素 -10(29.4)1(7.1)苯唑西林 -24(70.6) -庆大霉素 -8(23.5) -环丙沙星 -11(32.4)1(7.1)莫西沙星-4(11.8)1(7.1)3 讨 论本研究显示革兰阳性菌122株,占67.4%(122/181),革兰阴性菌50株,占27.6%(50/181),真菌9例,占5.0%(9/181)㊂表明在苏州地区儿童细菌性脑膜炎以革兰阳性菌为主,而革兰阳性菌以肺炎链球菌为主㊂革兰阴性菌以大肠埃希菌为主,与国内部分地区病原菌流行病学相似[3-4]㊂肺炎链球菌是引起化脓性脑膜炎的常见病原菌,为儿童化脓性脑膜炎的三大病原之一[5]㊂全球2个月以上的细菌性脑膜炎患儿致病菌90%为肺炎链球菌㊂婴幼儿细菌性脑膜炎患者中,主要病原菌也是以肺炎链球菌为主[6]㊂国内其他临床研究发现,有病原菌主要以凝固酶阴性葡萄球菌和大肠埃希菌为主的;也有以革兰阳性菌比例为主,以凝固酶阴性葡萄球菌和肺炎链球菌为主[7-8]㊂在本组临床细菌性脑膜炎患儿中,主要是肺炎链球菌,表皮葡萄球菌和大肠埃希菌为主要致病菌,共100株,占总致病菌的55.2%(100/181)㊂ɤ1岁患儿中,肺炎链球菌20株,占11.0%(20/181);表皮葡萄球菌30株,占16.6%(30/181);大肠埃希菌29株,占16.0%(29/181);>1岁患儿中,肺炎链球菌15株,占8.3%(15/181);表皮葡萄球菌4株,占2.2%(4/181);大肠埃希菌2株,占1.1%(2/181)㊂以上表明在婴幼儿患者中,主要为表皮葡萄球菌和大肠埃希菌和肺炎链球菌占优势,3种致病菌在ɤ1岁患儿差异无统计学意义(P >0.05)㊂而在>1岁患儿脑脊液标本检出菌以肺炎链球菌主要致病菌,与其他病原菌差异有统计学意义(P <0.05)㊂肺炎链球菌作为细菌性脑膜炎三大致病菌之一,其致病性有侵袭性,可导致严重并发症㊂同时,多年广泛大量抗生素的应用使得其多重耐药性日益严峻㊂我国多家医院的171株肺炎链球菌中青霉素耐药率为76.6%[9],已接近儿童耐药株的比例(81.3%㊁94.3%㊁80.3%)[10]㊂在血清型分型中,肺炎链球菌在相对稳定的遗传背景上,容易接受外源基因,导致表型变化[11]㊂多重耐药肺炎链球菌的发展形势益严峻,疫苗仍是预防肺炎链球菌感染最重要的保护方式[12-13]㊂在本研究的脑膜炎患儿中,革兰阳性菌对青霉素和红霉素类耐药严重,耐药率79.4%~94.3%,对万古霉素㊁左氧氟沙星和阿莫西林敏感,但左氧氟沙星是儿童的慎用药,所以推荐使用阿莫西林类药物,病情较重可以考虑使用万古霉素㊂作为革兰阴性菌常见病原菌,大肠埃希菌的耐药日益增高㊂其主要耐药机制是E S B L s 的产生㊂㊃3211㊃‘临床荟萃“ 2016年10月5日第31卷第10期 C l i n i c a l F o c u s ,O c t o b e r 5,2016,V o l 31,N o .10Copyright ©博看网. All Rights Reserved.E S B L s的出现是第三代头孢菌素选择压力下耐药基因突变的结果;其流行的增加主要是质粒在肠杆菌中传递和含E S B L s的潜伏株在患者间传播㊂在刘晟等[14]的研究中,大肠埃希菌肺炎173例改用哌拉西林/他唑巴坦,52例改用头孢哌酮/舒巴坦,43例改用亚胺培南/西司他丁钠,68例继续使用原有的抗生素治疗(头孢西丁54例,头孢他啶14例)㊂我们耐药性研究结果与其基本相似,菌株对抗生素敏感性也依次是哌拉西林/他唑巴坦和亚胺培南,头孢哌酮/舒巴坦,氨曲南和头孢他定等㊂而根据水解抗生素的不同,β-内酰胺酶又可分为广谱(b r o a d-s p e c t r u m)和超广谱(e x t e n d e d-s p e c mm a)两类,T E M-1㊁T E M-2和S H V-1属前者,可使细菌青霉素类和一代头孢菌素头孢唑林耐药,其余T E M和S H V以及K P C㊁C T X.M㊁O X A为后者,可使细菌耐药谱扩展至二代及以上头孢菌素[15]㊂国内最新研究发现,在462株临床菌株中,61.7%对多种青霉素类和头孢菌素类抗生素耐药,耐药率与国内其他地区相似[16-17]㊂大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对头孢哌酮/舒巴坦和氨曲南以及哌拉西林/他唑巴坦㊁头孢西丁和亚胺培南高度敏感,推荐经验型适用于革兰阴性细菌性脑膜炎㊂综上所述,我院患儿细菌性脑膜炎脑脊液培养以革兰阳性菌为主㊂脑脊液培养结果耐药率偏高㊂因此根据细菌培养及药敏结果,及时有效指导临床医生合理应用抗菌药物,对患儿及时有效的治疗从而改良预后及降低病死率㊂同时,控制医院内感染,做好消毒隔离和手卫生,防止交叉感染以及加强对产E S B L s菌株的耐药性监测,合理使用抗菌药物,是控制E S B L s传播和蔓延的重要措施㊂参考文献:[1] L iY,Y i nZ,S h a oZ,e ta l.A c u t e M e n i n g i t i sa n dE n c e p h a l i t i sS y n d r o m e S t u d y G r o u p P o p u l a t i o n-b a s e d s u r v e i l l a n c e f o rb ac t e r i a lm e n i n g i t i s i nC h i n aS e p t e m b e r2006-D e c e m b e r2009[J].E m e r g I n f e c tD i s,2014,20(1):61-69.[2] C h a n d r a nA,H e r b e r tH,M i s u r s k iD,e t a l.L o n g-t e r ms e q u e l a eo f c h i l d h o o d b a c t e r i a lm e n i n g i t i s:a n u n d e r a p p r e c i a t e d p r o b l e m[J].P e d i a t r I n f e c tD i s,2011,30(1):3-6.[3]蒋鸿超,奎莉越,黄海林,等.116例细菌性脑膜炎儿童脑脊液病原菌分布及耐药性分析[J].中国当代儿科杂志,2013,15(4):264-267.[4]林罗娜,林立,温顺航,等.儿童细菌性脑膜炎100例病原分布及耐药分析[J].临床儿科杂志,2016,34(2):105-110. [5]东方邹,廖建湘,胡雁,等.婴儿化脓性脑膜炎55例临床分析[J].实用医学杂志,2011,27(4):639-642.[6]陶陈娟.儿童化脓性脑膜炎108例临床分析[J].临床儿科杂志,2010,28(1):51-54.[7]李鸿,张玉琴,张金婷,等.儿童细菌性脑膜炎致病菌分布和耐药性及临床特点10年变迁[J].中华儿科杂志,2009,47(4): 272-275.[8]谢永强,邓秋连,虢艳,等.儿童细菌性脑膜炎病原学及耐药性分析[J].临床儿科杂志,2011,29(11):1037-1040.[9] X u e L,Y a o K,X i e G,e t a l.S e r o l y p e d i s t r i b u t i o n a n da n i m i c r ob i a lr e s i s t a nc eo fS t r e p t o c o c c u s p n e u m o n i a ei s o l a t e st h a t c a u s e i n v a s i v ed i s e a s ea m o n g C h i n e s ec h i l d r e n[J].C l i nI n f e c tD i s,2010,50(5):741-744.[10] Y a n g F,X u X G,Y a n g M J,e ta l.A n t i m i c r o b i a ls u s c e p t i b i l i t ya n d m o l e c u l a r e p i d e m i o l o g y o f S t r e p t o c o c c u s p n e u m o n i a ei s o l a t e d f r o m S h a n g h a iC h i n a[J].I n tJ A n t i m i c r o b A g e n t s,2008,32(5):386-391.[11]S i n g h R,G u p t a P,S h a r m a P K,e t a l.P r e d i c t i o n a n dc h a r a c t e r i z a t i o no fh e l p e r T-c e l le p i t o p e sf r o m p n e u m o c o c c a ls u r f a c e a d h e s i nA[J].I mm u n o l o g y,2014,141(4):514-530.[12]蒋浩琴,明亮,李天铭,等.上海地区成人患者肺炎链球菌分子流行病学的分析[J].中华检验医学杂志,2015,38(4):256-261.[13] B a d d o u r L M,Y u V L,K l u g m a n K P,e l a l.C o m b i n a t i o na n t ib i o t ic t h e r a p y l o w e r sm o r t a l i t y a m o n g s e v e r e l y i l l p a t i e n t sw i t h p n e u m o c o c c a lb a c t e r e m i a[J].A m J R e s p i r C r i t C a r eM e d,2004,170(4):440-444.[14]刘晟,张亚丽,蔡海芳.婴儿大肠埃希菌肺炎临床特点及耐药性分析[J].临床儿科杂志,2014,32(3):228-231.[15]S h a h A A,H a s a n F,A h m e d S,e t a l.C h a r a c t e r i s t i c se p i d e m i o l o g y a n d c l i n i c a li m p o r t a n c e o fe m e r g i n g s t a i n s o fG r a m-n e g a t i v e b a c i l l i p r o d u c i n g e x t e n d e d-s p e c t r u m b e t a-l a c t a m a s e s[J].R e sM i c r o b i o l,2004,155(6):409-421. [16]谈潘莉,汪浙炯,孙爱华,等.大肠埃希菌临床菌株优势β-内酰胺酶基因型及其诱导表达与抑制的研究[J].中华流行病学杂志,2015,36(5):484-490.[17] H uF P,Z h uD M,W a n g F,e t a l.2011C H I N N E Ts u r v e i l l a n c eo f b a c t e r i a l r e s i s t a n c e i nC h i n a[J].C h i nJ I n f e c tC h e m o t h e r, 2012,12(5):321-329.收稿日期:2016-09-20编辑:张卫国㊃4211㊃‘临床荟萃“2016年10月5日第31卷第10期 C l i n i c a l F o c u s,O c t o b e r5,2016,V o l31,N o.10Copyright©博看网. All Rights Reserved.。
中枢神经系统感染患儿脑脊液和血清中NSE及S-100β的变化及临床意义作者：陶拉娣郑岚婷来源：《中外医疗》2011年第21期【摘要】 目的探讨中枢神经系统感染患儿脑脊液和血清中神经元特异性烯醇化酶(NSE)、S-100β蛋白(S-100β)水平变化及其临床意义。
方法选取病毒性脑炎35例,结核性脑膜炎5例,化脓性脑膜炎15例,检测患儿脑脊液和血清中NSE、S-100β水平变化,与20例对照组比较分析,并对神经系统感染组脑脊液和血清中NSE、S-100β水平进行相关分析。
结果急性期中枢神经系统感染各组患儿脑脊液和血清中NSE、S-100β含量均明显高于对照组(P0.05)。
结论脑脊液和血清中NSE和S-100β可以作为中枢神经系统感染患儿脑损害的标志物,其含量高低与胶质细胞和神经元的损伤程度有关。
【关键词】 中枢神经系统感染神经元特异性烯醇化酶S-100β蛋白脑脊液【中图分类号】 R51 【文献标识码】 A 【文章编号】 1674-0742(2011)07(c)-0082-02中枢神经系统感染(CNSI)是小儿神经系统常见疾病,其病理改变主要为脑实质和(或)脑膜的炎性改变,表现为神经元或神经胶质细胞等脑细胞的变性、坏死。
其中以化脓性脑膜炎(化脑)、病毒性脑炎(病脑)和结核性脑膜炎(结脑)最为常见。
近年发现CNSI患者脑脊液(CSF)和血清中神经元特异性烯醇化酶(NSE)及S-100β蛋白(S-100β)的变化能够敏感且特异地反映神经元的损伤及严重程度[1～3]。
本研究中对中枢神经系统感染患儿脑脊液和血清中NSE、S-100β进行联合检测,探讨NSE和S-100β在小儿CNSI中的临床意义。
1资料与方法1.1一般资料来自我院2002年6月至2009年6月住院患儿55例,经临床和脑脊液检验符合中枢神经系统感染的诊断标准[4]。
男20例,女35例。
年龄4个月～13岁。
其中病毒性脑炎35例,化脓性脑膜炎15例,结核性脑膜炎5例。
β1和sICAM-1的检测及其临床意义神经疾病与精神卫生2001年第1卷第2期重症肌无力患者血清TGF—l和sICAM一1的检测及其临床意义何志义欧阳嶷侯率陈晏李润辉吕昌龙【摘要】目的探讨转化生长因子一pl(TGF一口1)及可溶性细胞间粘附分子(slCAM一1)在重症肌无力(MG)发病中的作用及其临床意义.方法采用酶联免疫吸附ELISA方法,测定了32例MG患者及3O名正常对照组(NC)血清TGF—S1和slCAM一1的水平.结果与NC组相比,MG患者血清TGF—p1明显降低(P<001),而slCAM一1水平则明显升高(P<0.01).与轻型组比较,重型组TGF一0l水平明显降低(P<001),而slCAM一1水平则明显升高(P<0.01).动态观察显示,治疗后随着病情的好转,TGF—p1水平逐渐升高,而slMCA一1水平则逐渐下降.结论TGF—l和slCMA一1可能参与了MG的发病机制,且与病情的轻重有密切关系. 【关键词】重症肌无力转化生长因子一p1可溶性细胞间粘附分子TheDetectionandClinicalSignificanceoftheSerumTGF—plandsICAM一1inPatientswithMyasthe-niaGravisHeZhiyi,Ou3~ngYi,Ih>uShuai,elal(DepartmentofNeurology,TheFirstAffi li—atedHospitalofChinaMedicalUniversity.Shenyang110001)【-Abstractl0bjectiveTostudythepatl~ogenicmechanismandclinicalsignificanceoftrans forminggrowthfactor—pl(TGF—p1)andsolubleintercellularadhesionmolecule一1(slCAM一1)inmyastheniagravis(MG).MethodsTheTGF—plandslCAM一1levelinserum~,voremeasuredin32patientswithMGand30normalcontrols(NC)byELISAmethodResultsComparingwithNCgroup,FheT GF一0lleveldecreased,andthesICAM一1levelincreasedsignificantlyintheseruulofMG(P<001).TI1clevelofTGF一0landsICAM—IinthepatientswithMGcorrelateddirectlywiththeseverityofthedis—eases.ThelevelofSICAM一1decreased,andtheI'GF—S1levelincreasedaftertreatmentofMG.Con. clusionsTheresultssuggestedtheTGF—p1andslCAM一1systemwasinvolvedinthepathogenicmechanismofMG,andmighthaveanevidentcorrelationwiththeSt%rerityofthisdisease.【Keywords】MyastheniagravisI'GF一0lslCAM一1中图分类号:R746.2文献标识码:A文章编号:1009—6574(2001)O2—0015一O3 重症肌无力(MG)是一种主要累及神经一肌肉接头处突触后膜上乙酰胆碱受体(AchR)的自身免疫性疾病.近年来研究表明,免疫细胞因子等的异常变化与其发病密切相关|1j,但是,有关MG患者血清转化生长因子一p】(TGF—p)的研究,国内外未见报道,而可溶性细胞间粘附分子(slCAM一8)的研究,国外报道极少.为探讨上述两种细胞因子在MG发病机制中的作用,我们于1995年12月～2000年5月间对32例MG患者血清I'GF一8和slCAM一1水平进行了检测,现报道如下.1研究对象和方法1.1研究对象1.1.1MG组32例,男20例,女l2例,年龄l4～68岁,平均(30.6±18.9)岁,病程1周～5年.均系我院门,急诊及住院患者.根据病史,典型的临床表现,肌电图重复电刺激以及新斯的明试验阳性而作者单位:110001中国医科大学第一临床学院神经内科(何志义,欧阳嶷,侯率,陈晏,李润辉);中国医科大学基础医学院免疫学教研室(吕昌龙)l5?论着?确诊.参照改良Osserman分型将32例MG患者分为I型8例,Ha及Hb型15例,山和I\型9例,其中12例行胸腺瘤切除术.为动态观察治疗前后细胞因子的变化情况,对其中13例进行了治疗后2个月的再次采血.上述患者在首次采血前2个月内未用过激素或免疫抑制剂.1.1.2正常对照组(NC)为健康献血员,共30名,男l8名,女12名,年龄20～53岁,平均(33.1—4-8.9)岁.近期内无感染及服用激素类等药物.1.2方法1.2.1标本的采集及检测MG患者及健康对照者均清晨空腹采肘静脉血5ml,分离血清后置一70℃冰箱待测.TGF一8和slCAM一1水平的测定采用酶联免疫吸附EIISA方法,试剂盒分别购于深圳市晶生实业有限公司和法国国际技术有限公司(Immunotech).TGF—p1和slCAM—l的全部操作均按试剂盒说明书进行,吸光度.值由美国产EL一309全自动酶标检测仪(Bio—TEKinstruments, USA)测定.根据各稀释标准品TGF一8】和sICAM一1的单16?位以及吸光度A∞5值分别绘制各自的参考标准曲线.从标准曲线上查得待测样品TGF—l3和slCAM一1的含量,单位以/,g/I表示.1.2.2统计学处理本资料以±5表示,组间比较用t检验.2结果2.1MG患者血清TGF一和sICAM一1水平的测定与NC组相比,MG患者血清TGF—p1水平明显下降(P<0.01),而slCAM一1水平则明显升高(P<0.01),见表1.表1MG患者血清TGF一和slCAM一1水平的测定(±s,I~g/L)与NC组比较*P<0.O1.2.2Osserman不同分型MG患者血清TGF—l3l和slCAM一1水平的比较与I型组相比较,Ⅲ型Ⅳ型组TGF—p1水平明显降低(P<0.01),而slCAM一17J(平则明显升高,见表2.表2Ossorrrmn不同分型MG患者血清TGF—B1和slCAM一1水平的比较(i±,/*g/L) 与l型组相比较*P<0.01.2.3MG患者治疗前,后血清TGF—j3I和slCAM一1 水平比较与治疗前相比较,治疗后MG患者血清TGF—p1水平明显升高(P<0.01),而slCAM一1水平则明显下降(P<0.01),见表3.表3MG患者治疗前,后血清TGF～B1和slCAM一1水平的比较(i±,I~g/L)与治疗前相比较*P<0.01.3讨论TGF—p1作为一种重要的内源性免疫抑制性细胞因子,可影响MG患者体内的细胞免疫和体液免疫功能.国内张栩J等报告了MG患者外周血单核细胞(MNC)TGF—p】水平的变化情况,其结果显示,与对照组相比,MG患者MNC中TGF—p水平明显增高.国外Link[IJ等报告认为TGF一8在MG NervotJsDiseasesandMentalHygiene,200l,V o1.1,No.2中起着免疫抑制作用.俚上述研究结果均是反映外周血MNC中TGF—p1的含量变化情况,而有关MG血清中TGF—p1的变化如何尚不十分清楚.我们的研究结果显示与NC组相比,MG血清TGF—p1的含量明显下降,Osserman分型中,MG重型组I'GF—p1下降明显.而经过2个月后TGF—p1水平则明显升高.这一结果显示血清TGF—p1水平可以反映MG的病情变化,说明该细胞因子的检测对MG的疗效判定也起了非常重要的作用.与外周血MNC所测的结果相比,本实验具有简便易行,临床应用可操作性强等特点.有关MG血清TGF—p1浓度降低的机制及其意义如何目前也不十分清楚.有报道3J认为血清FGF—p1的产生主要来源于外周血白细胞.在某些病理情况下,TGF一作为免疫调节细胞因子可直接参与和影响周围神经系统的代谢功能.Cre—angeL5J等报告认为TGF—J31在炎性脱髓鞘性免疫反应过程中被过度利用或受到炎性环境刺激后在组织中积聚,使TGF—j3l被大量消耗,从而导致TGF—j3l血浆浓度下降.随着运动功能的逐渐恢复,TGF—j3l血浆浓度也开始上升,此时周围神经细胞中TGF—plmRNA的表达也开始上调.另外,还有报道认为lL6J TGF—p1在自身免疫性炎症反应过程中可能发挥着如下几点作用:(1)抑制T,B淋巴细胞功能.(2)起负性免疫调节作用,以衰减或抑制炎症反应.(3) TGF—p1不仅对致炎性细胞因子TNF—a(肿瘤坏死因子)具有明显的拮抗作用,而且还可减少细胞间粘附分子如ICAM一1等的表达,从而起到免疫下调作用,以促进炎症的修复.由此,我们推测在MG发病初期,血清TGF—p浓度的降低可能与其参与免疫病理过程中被大量消耗有关,在这一反应过程中,如何充分发挥和利用TGF～p在上述自身免疫性炎症反应中的修复和保护作用,对于MG的临床治疗将会起到非常重要的指导作用.近年来有文献报道J,sICAM一1在多发性硬化,病毒性脑膜炎以及脑缺血损伤患者的血清和脑脊液中的含量明显升高,而且,其升高的程度与血脑屏障破坏程度及病情的严重程度有关.TeSar8J8等报道认为MG患者经血浆交换后,血清sICAM～1水平明显升高,其升高的机制可能是由于乙酰胆碱受体抗体的增加,激活了体内免疫反应系统的活性所致.但是,sICAM一1在MG发病中的详细作用机制目前仍不十分清楚.我们的研究结果显示,血神经疾病与精神卫生2001年第l卷第2期清slCAM一1水平在MG疾病初期以及重型患者中明显升高,经过治疗后其含量则明显下降.因此,我们认为血清sICAM一1的检测对于判断MG的病情变化可能会成为一个较为敏感和可靠的指标.关于sICAM的来源和功能目前尚未十分明确.有报道-9J认为血中slCAM一1来源于血管内皮细胞膜ICAM一1,经酶裂解脱落后产生,中枢神经系统内的微血管内皮细胞,脑脊液中被激活的淋巴细胞和巨噬细胞等也均可产生.其主要功能在于sICAM可介导和参与机体内的免疫性炎症反应,当其被炎症介质(如TNF,IL一8,H2O2等)激活时,血中sICAM的分子数量和功能均显着上调,其结果是将白细胞牢固地粘附在血管内皮细胞表面.这样, sICAM不仅使白细胞堵塞微循环通道,影响局部血流量,而且还能促进炎性细胞释放大量毒性物质,加重损伤局部血管和神经细胞,从而影响神经系统功能的恢复.我们的研究结果也与上述的论点相吻合,即MG患者病情越重时,血清sICAM水平升高越明显,而当临床症状缓解或改善时,血清sICAM水平又呈下降趋势.这一结果提示我们在MG的治疗中,如何抑制或减少sICAM所介导的炎症反应就显得尤为重要.国内杨欢El0]等报道认为,用几种主要的抗粘附分子抗体来阻断上述的粘附反应过程或粘附机制中的某一共同环节,从而减少或阻止T,B淋巴细胞介导的免疫反应进程,这样将能极大地减轻血管内皮细胞及神经元的损伤程度.因此,我们相信今后随着粘附分子基因结构的逐步阐明,如果能运用当代先进的反基因抑制技术和方法来达到调节或降低sICAM—l产生的话,将有可能对MG的治疗起到重大的推动作用,这些均有待于今后进一步研究和探讨.参考文献lLinkJ,HeB,NavikasV,etaJ.Transforminggrowthfactor—beta lsuppressesautoantigeninducedexpressionofpro—inflammatorycy- tokinesbutnotofinterleukin.10inmuhiplesclerosisandmyastheni- agravis.JNeuroimmunol,1995,58(1):2l～252张栩,孙兆林,丛志强.重症肌无力患者外周血单核细胞转化生长因子的变化中华神经科杂志,1999,32(5):271.3D'ErasmoE,CellFS,AccaM,eta1.Relationshipbetweenplatelet andwhiteblookcellcountsduringtheearlyphaseofcerebralinfare- tionStroke,1991,22:283～2884赵中,许中,邱晨红,等.急性脑梗死患者血清TGF一口l检测的临床意义,临床神经病学杂志,2000,13(4):2l0～2l2,5CreangeA,BelecL,ClairB.eta1.Circulatingtransforminggrowth factorbeta1(TGF—p1)inGuillain—BarreSyndrome:decreasedcon- eentrationintheearl:,'courseandincreasewithmotorfunction.J NeurolNeunosurgPsychiatry,1998,64:162～165.6佐藤靖史TGF一口I血管病变.实验医学,1992,10(suppl15):94 ～102.7HartungHP,MichealM,ReinersK,eta1.8olublelCAM一1serum levelsinmultiplesclerosisandviralencephalitis.Neurology,1993,43:2331～2335.8I'esarV,JelinkovaE,JirsaMJr,eta1.Solubleadhesionmolecules andcytokinesinpatientswithmyastheniagravistreatedbyplasmaex. changeBloodPurif,2000,182):115～120.9霍红霉,张志琳,包仕尧.脑缺血损伤与抗粘附分子治疗研究进展.国外医学脑血管疾病分册.2000,8(4):213～216.10杨欢,李静,肖波,等.T细胞亚群及粘附分子在实验性变态反应性神经炎中的作用.中华神经科杂志,1998.3l:44～47.(上接14页)参考文献lSelhubJ,D'AngeloA.Relationshipbetweenhomocysteineand thromboticdisease.AmJMedSci,1998,316:129～1412金兴中,刘毅.血浆高半胱氨酸和脑卒中的关系.中国神经精神疾病杂志.1998.24:94～95.3CornwellPE,MorganSL,V aughnWH.Modificationofhom~'ys. teineinhumanplasma.JChmmagr,1993,617:136～139.4李明珍,王毓明,郑家驹,等.高压液相色谱测定人:[血浆总高半胱氨酸含量.色谱杂志,1999.17:310～311.5UelandPM,RfusmH,StablerSP.etalTotalhomocysteinein plasmaorserum:methodsandclinicalapplications.ClinChem. 1993,39:1764～17796Chamber—JC,McGrego—A,Jeanl—MerleJ.eta1.Demonsteratof rapid—onsetvascularendothelialdysfunctionafterhyper—homoeys. (收稿日期:2000—12—13)beimia:aneffectreversiblewithvitaminCtherapy.Circukation 1999,99(9):1156～l1607StamlerJS,OsbomeJA,JarakiO,eta1.Adversescularrelaxingfac. torandrelatedoxidesofnitrogen.JClinlnvest,l993,53:308～3l8.8EliasPR,HannAC,Gerald—CurtisC.etalAratveinperfusion modelforstudinghomocysteineinducedtoxicity.BioSocieTrans,l994.22:342.9RodgersGM,ConnMT.Homocystein,atherogenicstimulus,re. ducesproteincactivationby~rterialandvenousendothelialcells. Blood,1990,75:895～901.10EversS,KochHG,GrotemeyerKH,eta1.Features,symptoms.andneurophysiologicalfindingsinstrokeassociatedwithhyperho? mocysteinemia.ArchNeurol,1997,54:1276～1282.。
中枢神经系统感染患儿脑脊液各项指标观察及在临床诊断中的价值分析摘要】目的：观察中枢神经系统感染（ICNS）患儿脑脊液各项指标，探讨其在临床诊断中的价值。
方法：收集我院儿科2015年1月-2016年8月153例ICNS患儿资料，其中结核性脑膜炎37例，病毒性脑膜脑炎72例，化脓性脑膜炎21例，隐球菌性脑膜炎23例，比较脑脊液中的乳酸脱氢酶、肌酸激酶和乳酸指标变化。
结果：TBM组、 PM组、CM组LDH、CK和LA水平均明显高于VM组（P＜0.05）；TBM组、PM组、CM组LDH、CK和LA水平差异无统计学意义(P＞0.05)。
TBM组IFN-γ、sIL-2R水平明显高于PM组、CM组和VM组（P＜0.05）；TBM组和PM组sICAM-l水平明显高于CM组和VM组（P＜0.05）；PM组TNF-α、IL-8水平明显高TBM组、CM组和VM组（P＜0.05）；CM组TNF-α、IL-8水平明显高TBM组和VM组（P＜0.05）。
结论：脑脊液各项指标在不同类型ICNS患儿中增加程度各异，在临床症状、体征、影像检查的同时联合脑脊液检查可提高对ICNS类型诊断的敏感性，具有较高的诊断价值。
【关键词】中枢神经系统感染；脑脊液；检测；诊断价值The central nervous system infection in children with cerebrospinal fluid observation and analysis in the clinical diagnosis value of the indicators【Abstract】 Objective: To observe the central nervous system infection (ICNS) in children with cerebrospinal fluid indicators, discusses its value in clinical diagnosis. Methods: To collect the hospital pediatric in January 2015 - August 2016 data of 153 cases of children with ICNS tuberculous meningitis in 37 cases, 72 cases of viral meningoencephalitis, fester sex meningitis 21 cases, 23 cases of cryptococcus meningitis, comparison of cerebrospinal fluid lactate dehydrogenase, creatine kinase and lactate index changes. Results: TBM group, PM, CM group of LDH, CK, and LA levels were significantly higher than the VM group (P<0.05); TBM group, PM, CM group of LDH, CK, and there was no statistically significant difference level of LA (P>0.05). TBM group of IFN gamma, sIL 2 r level obviously higher than that of PM, CM group and VM group (P<0.05); TBM sICAM - l level group and PM group was obviously higher than that of CM and VM group (P<0.05); TNF alpha, IL - 8 PM group level significantly higher TBM, the CM group and VM group (P<0.05); TNF alpha, IL-8 CM group level significantly higher TBM and VM group (P<0.05). Conclusion: The indicators of cerebrospinal fluid in different degree of increase in children with different types of ICNS, at the same time of clinical symptoms, signs, imaging joint cerebrospinal fluid examination can improve the diagnostic sensitivity of ICNS type, has high diagnostic value.【Key words】 the central nervous system infection; Cerebrospinal fluid; Detection; Diagnostic value中枢神经系统感染（ICNS）是儿童的常见病和多发病[1]。
