管碟法效价测定中实验结果的影响因素及有效控制

实验2 管碟法测定土霉素生物效价一、目的要求1、了解管碟法测定抗生素生物效价的基本原理。

2、学会管碟法测定抗生素效价方法，并学习抗生素发酵过程一些重要生理生化指标分析。

二、基本原理衡量抗生素发酵液中抗菌物质的含量称效价。

抗生素效价测定可采用化学法或生物效价测定法。

抗生素生物检定法是利用抗生素对细菌（或真菌）的杀死或抑制的程度，作为客观指标来衡量维生素中有效成分的效力的一种方法。

此法检测灵敏性高，由微量抗生素即可检出（0.5u/ml）。

因此，微生物检定法被作测定抗生素效价的一种经典方法。

生物效价测定有稀释法、比浊法、扩散法三大类。

管碟法是扩散法的一种。

本实验采用管碟法测定抗生素的效价。

管碟法就是利用有一定体积的不锈钢制的小管（牛津杯），将抗生素溶液装满小杯，在含有敏感试验菌的琼脂培养基上进行扩散渗透，经过一定时间后，抗生素扩散到适当的范围，产生透明的抑菌圈。

抑菌圈的半径与抗生素在管中的总量(单位)、抗生素的扩散系数(cm2/h)、扩散时间(即抗生素溶液注入钢管至出现抑菌圈所需的时间)、培养基的厚度(mm)和最低抑菌浓度(u/ml)等因素有关。

抗生素总量的对数和抑菌圈直径的平方呈直线关系。

因此，抗生素效价可以由抑菌圈的大小来衡量。

将已知效价的土霉素标准液先制成标准曲线，比较已知效价标准液与未知效价的被检品溶液的抑菌圈的大小，就可算出样品中抗生素的效价。

三、实验材料1、培养基（供摊布平板用）蛋白胨6g 酵母膏6g 牛肉膏1.5g 葡萄糖1g 琼脂15—18g蒸馏水1000ml pH:6.8 1.05kg/cm?/SPAN> 121.3?/SPAN>C灭菌20分钟2、菌种：黄色八叠球菌（Sarcina flava）3、土霉素碱标准品4、仪器：玻璃试管、试管架、吸管（1ml,2ml,10ml）、吸耳球、离心管、容量瓶、烧杯、三角瓶（5 00ml）、量筒（250ml,500ml,1000ml）、玻璃棒、温度计、牛津杯、镊子、培养盘、恒温箱、台秤等管碟法测定抗生素效价一、目的和要求1、了解管碟法的原理。

抗生素效价测定(管碟法)缺项的补救引言:抗生素效价测定是评价抗生素抑制细菌生长能力的方法之一。

管碟法是一种常用的抗生素效价测定方法，但在实施过程中可能会出现缺项的情况。

本文将探讨抗生素效价测定(管碟法)缺项的补救方法。

一、缺项的原因抗生素效价测定(管碟法)中出现缺项的原因可能有多种，如实验操作失误、实验材料不足、数据记录错误等。

缺项会导致测定结果的不准确性，因此需要及时采取补救措施。

二、补救方法1. 重新进行实验如果只是个别的缺项，可以考虑重新进行实验。

在重新实验时，要注意核对试验操作步骤，确保实验的准确性和可靠性。

同时，还要确保实验材料的充足性，避免再次出现缺项的情况。

2. 数据插补如果缺项较多，或者实验条件无法重现，可以考虑进行数据插补。

数据插补是根据已有数据的规律和特点，通过一定的方法估计缺项的数值。

常用的数据插补方法有平均值插补、线性插补、多项式插补等。

选择合适的插补方法需要根据实际情况进行判断。

3. 参考文献补充如果实验中出现的缺项与文献中的数据相符，可以考虑参考文献中的数据进行补充。

在参考文献补充时，需要确保所选文献的可靠性和相关性，避免引入错误数据。

4. 数据分析与推测对于无法进行实验和数据插补的情况，可以通过数据分析和推测来补充缺项。

通过对已有数据的分析，可以获得一些相关规律和趋势，进而推测出缺项的数值。

数据分析与推测需要基于一定的统计方法和模型，确保推测结果的可靠性。

5. 结果说明与限制在补救缺项的过程中，需要对实验结果进行说明和限制。

说明实验中出现缺项的原因，以及所采取的补救方法和补充数据的可靠性。

同时，还要明确补救后结果的可靠程度和适用范围，避免误导他人。

三、注意事项1. 实验操作的准确性和规范性是避免缺项的关键。

在进行抗生素效价测定(管碟法)实验前，需要仔细阅读实验方法和操作要点，确保操作正确无误。

2. 实验材料的充足性和质量是保证实验可靠性的基础。

在进行实验前，需要检查实验材料的存储条件和有效期，确保实验材料的可靠性。

管碟法测定抗生素效价中的影响因素分析及对策摘要:目的提高管碟法测定抗生素效价的准确性。

方法按操作步骤逐步分析，并提出合理的解决方案。

结果减少外界因素与人为因素给试验带来的误差。

结论可以提高测定结果的准确性。

Abstract: OBJECTIVE To improve the veracity of antibiotics titer evaluation by cylinder-plate method. METHOD According to the process of test, analyze the test and offer a proper measure to avoid influencing factors. RESULTS Reduce the errors caused by environmental and artificial factors. CONCLUSION This can improve the veracity of test results.Key words: cylinder-plate method; antibiotics; titer; bacterial inhibition ring管碟法是国内外常用的抗生素微生物检定法[1]，利用管碟法测定抗生素效价，具有准确、直观、重复性好等优点，因而被广泛采用。

但是整个试验过程中影响结果的因素很多，任何一个环节操作不当或者忽略就会造成很大误差，导致整组试验失败。

根据实际操作中的积累经验，对管碟法中影响试验结果的因素进行如下分析及提出解决的方法。

1. 实验器材的准备1.1 实验器材的选择试验应该选择底面平整的玻璃双碟，避免底面的凹凸影响琼脂层的厚度。

可将双碟放置在水平台上，下垫一层白纸，加入3mL水，再滴加蓝墨水，根据蓝色是否深浅一致来判断双碟底面平整程度。

小钢管则应该选择加工精细的同一批产品，这样才能保证管壁厚薄与重量均匀一致，使得小钢管在培养基中下陷相同的深度，抗生素溶液扩散均匀有可比性。

管碟法测定抗生素效价中的影响因素分析及对策摘要：目的提高管碟法测定抗生素效价的准确性。

按操作步骤逐步，并提出合理的解决方案。

结果减少外界因素与人为因素给试验带来的误差。

结论可以提高测定结果的准确性。

管碟法是国内外常用的抗生素微生物检定法，利用管碟法测定抗生素效价，具有准确、直观、重复性好等优点，因而被广泛采用。

但是整个试验过程中结果的因素很多，任何一个环节操作不当或者忽略就会造成很大误差，导致整组试验失败。

根据实际操作中的积累经验，对管碟法中影响试验结果的因素进行如下分析及提出解决的方法。

1、实验器材的预备1.1实验器材的选择试验应该选择底面平整的玻璃双碟，避免底面的凹凸影响琼脂层的厚度。

可将双碟放置在水平台上，下垫一层白纸，加入3mL水，再滴加蓝墨水，根据蓝色是否深浅一致来判定双碟底面平整程度。

小钢管则应该选择加工精细的同一批产品，这样才能保证管壁厚薄与重量均匀一致，使得小钢管在培养基中下陷相同的深度，抗生素溶液扩散均匀有可比性。

假如小钢管两端不够平，就应予剔除，否则会使抗生素溶液漏出，破坏均匀扩散现象。

1.2实验器材的清洗抗生素试验中，玻璃双碟、小钢管往往会连续使用。

由于清洗方面的原因，它们还是轻易残留上次试验中的抗生素或者被清洗用的杀菌剂污染，以至于在下次试验中造成抑菌圈不正常的现象。

因此，在清洗时要尤为注重多用流水冲洗。

160℃干热灭菌2h后备用。

2、配制试验所需的样品、标准品、缓冲液与培养基2.1样品与标准品溶液的配制标准品与样品从冰箱取出后，使与室温平衡。

供试品应放于干燥器内至少30min方可称取。

称量最好为一次取样称量，动作迅速，不得反复称取，取样后立即将称量瓶瓶盖盖好，以免吸水。

标准品的称量最好用1/100，000克的分析天平，样品称量不得低于1/10，000克的分析天平。

天平中的干燥剂应保持经常注重更换。

称量结束后，加入超声波处理后的磷酸缓冲液，定容至刻度，过滤并稀释。

稀释时，都应采用容量瓶，每一步稀释取样量不得少于2mL。

检验结果质量影响因素分析与控制广西CDC质量管理科邓莲芬在检验过程中，影响检验结果的因素很多，主要的影响因素有：人、机、料、法、环、测量溯源、被检样品以及样品的处置等。

只有对这些主要影响因素加以有效地控制，才能确保检验结果的准确、可靠。

下面就这些影响因素以及对其如何进行有效地控制进行分析和介绍。

1、人人，是指检验人员。

对某个检测项目的检验而言，是要通过人的操作来完成的。

所以，在整个检验过程中，人起关键性的主导作用。

检验人员的专业知识、技术能力以及对工作的态度都直接影响检验结果的质量。

因此，对从事检验工作的人员的要求必须具备以下条件：○1必须具备与其工作相适应的专业理论知识在实验室对每个检测项目的检验，都是遵循方法程序来操作的。

检验人员在检验操作前，要能正确地选择好方法，读懂方法的原理和操作过程（步骤）的技术要求，并能分析检验过程中哪些因素影响检验结果的质量。

要胜任这些要求，必须经过专业理论知识的学习和培训。

○2必须具备与其工作相适应的专业技术能力检验结果报告是通过检验人员完成了整个检验过程的操作后，对整个检验工作出具的最终结果或结论，这些结果或结论对外出具，面向广大的社会群体，这时，检验结果报告就不单纯是检验人员的个人行为，而它代表的是检测机构的能力和水平。

所以，检验人员的专业技术能力和操作水平就突显其重要性。

技术能力和操作水平具体体现在检验过程中能够选择适当的方法和措施对影响检验结果的因素予以有效地控制，使影响控制在可以接受的程度，这些控制是通过实验过程的规范化操作来实现的。

○3必须经过考核合格持证上岗检验人员在上岗前必须经过专业理论知识的考试和操作技能的考核，合格者方可持证上岗。

检验人员的上岗证是证明其技能的资格确认，也是实验室认可、计量认证评审中对实验室考核必须具备的条件之一。

2、机机，是指检验检测所用的仪器设备。

在实验室的检验检测工作中，绝大部分的检验检测项目都是通过仪器设备的采集和分析来完成的，这些仪器设备通常用于样品的采集、定容、培养和分析检测。

抗生素微生物检定法可分为：（1）稀释法；（2）比浊法；（3）琼脂扩散法（管碟法和打孔法）。

各国药典通常采用后两种方法测定抗生素的效价。

管碟法：利用抗生素在摊布特定试验菌的固体培养基内成球面形扩散，形成含一定浓度抗生素球形区，抑制了试验菌的繁殖而呈现出透明的抑菌圈。

此法系根据抗生素在一定浓度范围内，对数剂量与抑菌圈直径（面积）呈直线关系而设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，比较标准品与供试品产生抑菌圈的大小，计算出供试品的效价。

原理：利用抗生素在固体培养基中的平面扩散作用，依据量反应平行线原理并采用交叉实验设计方法，在相同实验条件下通过比较标准品（已知效价）和供试品两者对所接种试验菌产生的抑菌圈（直径或面积）大小，来测定供试品效价的一种方法。

管碟法的操作步骤：1、预试验：确定最佳的试验条件：调整试验菌的浓度、使用量、抗生素终浓度、培养基等，使抑菌圈的大小符合规定：一剂量法中心点的抑菌圈直径应在16～17.5mm，二剂量法高剂量浓度标准品溶液所致的抑菌圈直径在18～22mm，三剂量法中间剂量浓度标准品溶液所致的抑菌圈直径在15～18mm。

2、试验准备：双碟、钢管、毛细滴管、吸管的清洗及灭菌；容量瓶、定量吸管的清洗；培养基、缓冲液的准备、半无菌间的紫外消毒等。

3、双碟的制备：每只双碟加底层培养基约20ml，待培养基凝固后，将双碟放入35～37℃培养箱中，待用。

4、供试品、标准品溶液的制备：估计供试品的效价，根据试验要求设计供试品、标准品溶液稀释步骤，平行制备供试品、标准品相关剂量的溶液。

5、菌层的制备：注意菌层培养基温度；根据预试验确定加入菌层培养基的菌液量，注意制备菌层的速度和平整度。

6、滴加抗生素溶液：注意标准品、供试品高、低剂量溶液滴加顺序，保证滴加速度和加量的均匀一致。

7、双碟的培养：根据培养温度的要求在培养箱中进行培养，培养箱中水平碟放的双碟数以不超过三层为宜。

8、抑菌圈的测量：抑菌圈测量仪的使用，每组试验双碟应在相同的测量参数下进行测量。

管碟法测定抗生素效价中的影响因素分析及对策(1)关键字:管碟法；抗生素；效价；抑菌圈摘要:目的提高管碟法测定抗生素效价的准确性。

方法按操作步骤逐步分析，并提出合理的解决方案。

结果减少外界因素与人为因素给试验带来的误差。

结论可以提高测定结果的准确性。

Abstract: OBJECTIVE To improve the veracity of antibiotics titer evaluation by cylinder-plate method. METHOD According to the process of test, analyze the test and offer a proper measure to avoid influencing factors. RESULTS Reduce the errors caused by environmental and artificial factors. CONCLUSION This can improve the veracity of test results.Key words: cylinder-plate method; antibiotics; titer; bacterial inhibition ring管碟法是国内外常用的抗生素微生物检定法[1]，利用管碟法测定抗生素效价，具有准确、直观、重复性好等优点，因而被广泛采用。

但是整个试验过程中影响结果的因素很多，任何一个环节操作不当或者忽略就会造成很大误差，导致整组试验失败。

根据实际操作中的积累经验，对管碟法中影响试验结果的因素进行如下分析及提出解决的方法。

1. 实验器材的准备1.1 实验器材的选择试验应该选择底面平整的玻璃双碟，避免底面的凹凸影响琼脂层的厚度。

可将双碟放置在水平台上，下垫一层白纸，加入3mL水，再滴加蓝墨水，根据蓝色是否深浅一致来判断双碟底面平整程度。

管碟法测定抗生素效价结果的影响因素分析
黄镜娟
【期刊名称】《现代医药卫生》
【年(卷),期】2006(022)018
【摘要】管碟法是测定抗生素效价的方法之一，是国内外常用的方法，我国药典
微生物检定法也一直采用管碟法，该方法是生物测定中准确度、灵敏度较高的方法。

管碟法的基本原理．是以扩散为基础的量反应平行线法，由于该实验方法操作步骤多。

过程长，影响实验结果的因素较多，需要从各个环节加以严格控制，以确保实验结果的准确可靠，下面将管碟法的影响因素及控制方法分述如下：
【总页数】2页(P2853-2854)
【作者】黄镜娟
【作者单位】北海市人民医院,广西,北海,536000
【正文语种】中文
【中图分类】R9
【相关文献】
1.管碟法测定抗生素效价中的注意事项 [J], 萨丽塔娜提·居努司;玛尔江·木坎
2.管碟法测定抗生素效价中的影响因素 [J], 刘英
3.管碟法测定抗生素效价的影响因素及控制方法 [J], 陈家凤
4.管碟法测定抗生素效价中的影响因素分析及对策 [J], 唐靓;盛清;朱染枫
5.管碟法测定抗生素效价影响因素与控制方法的研究进展 [J], 任仲丽;张秀花;王静;李秀菊;刘博
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

管碟法抗生素效价测量实验抗生素的生物检定是以抗生素对微生物的抗菌效力作为效价的衡量标准，具有与应用原理相一致、用量少和灵敏度高等优点。

管碟法是琼脂扩散法中的一种，已被各国药典广泛采用，作为法定的抗生素生物检定方法。

当抗生素在菌层培养基中扩散时，会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度，即扩散中心浓度高而边缘浓度低。

因此，当抗生素浓度达到或高于mic（最低抑制浓度）时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的抑菌圈。

根据扩散定律的推导，抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系。

实验简介在管碟法抗生素效价测量实验中需要注意的影响因素分析及对策如下:管碟法是国内外常用的抗生素微生物检定法[1]，利用管碟法测定抗生素效价，具有准确、直观、重复性好等优点，因而被广泛采用。

但是整个试验过程中影响结果的因素很多，任何一个环节操作不当或者忽略就会造成很大误差，导致整组试验失败。

根据实际操作中的积累经验，对管碟法中影响试验结果的因素进行如下分析及提出解决的方法。

实验器材的准备1.1 实验器材的选择试验应该选择底面平整的玻璃双碟，避免底面的凹凸影响琼脂层的厚度。

可将双碟放置在水平台上，下垫一层白纸，加入3mL水，再滴加蓝墨水，根据蓝色是否深浅一致来判断双碟底面平整程度。

小钢管则应该选择加工精细的同一批产品，这样才能保证管壁厚薄与重量均匀一致，使得小钢管在培养基中下陷相同的深度，抗生素溶液扩散均匀有可比性。

如果小钢管两端不够平，就应予剔除，否则会使抗生素溶液漏出，破坏均匀扩散现象。

1.2 实验器材的清洗抗生素试验中，玻璃双碟、小钢管往往会连续使用。

由于清洗方面的原因，它们还是容易残留上次试验中的抗生素(庆大霉素、争光霉素、链霉素等)或者被清洗用的杀菌剂(如新洁而灭、洗洁精、去污粉等)污染，以至于在下次试验中造成抑菌圈不正常的现象。

因此，在清洗时要尤为注意多用流水冲洗。

160℃干热灭菌2h后备用。

配制试验所需的样品及药品2.1 样品与标准品溶液的配制标准品与样品从冰箱取出后，使与室温平衡。