一、测序样品要求

DNA测序样品的要求未纯化PCR产物的要求1. 片段大于200bp；2.请提供50ml PCR扩增产物(总量1ug-2ug)；3.取3ml样品，应该能够清晰的分辨出目的条带；自带引物，引物浓度为5-10uM,并请注明。

备注纯化后PCR产物的要求1.PCR产物溶于蒸馏水中(请勿溶解在TE溶液中)；2.浓度大于20ng/ml，体积大于10ml，长片段需适当增加量；3.电泳检测条带专一；自带引物。

所有模板均应提供相应的引物信息自带质粒的要求1.质粒溶于30~50ml ddH2O中(请勿溶解在TE溶液中)，电泳检测浓度大50~100ng/ml；2. 建议用相关试剂盒提取质粒；3. 如有可能，同时提供1ml含有相应质粒的菌液备用；4. 需注明载体和插入目的片段长度、以及测序要求。

菌液模板的要求1.说明载体抗性类型，我们提供A mp, Kan, Tet及Chl四种抗生素；2. 其余类型抗生素需自备；应为高拷贝质粒，对于低拷贝质粒，请直接提供约1mg纯化质粒；3. 提供1ml左右过夜培养（12h）的菌液，加15%灭菌甘油，于E ppendorf 管中封口保存，防止交叉污染或渗漏；4. 大量样品测序，建议在一次性塑料培养皿固体培养基上穿刺培养；5. 建议尽量提供穿刺培养或斜面培养的菌种（装在EP管中）。

自带引物的要求1.浓度不低于5pmol/ml(或5umol/L)，溶液体积15-50ml；2. 随机引物（RA PD引物）和简并引物以及引物长度不足15bp不能用于本公司提供如下通用测序引物：M13+，M13-，T7, SP6, T7 ter，BGH rev, pGL3+, pGL3-，pGEX5’，pGEX3’，5’AOX1，3’A OX1 ，a-factor。

其他引物请自带或提供序列由我们合成。

常用载体特征PCR类型测序模板注意事项∙总反应体积建议为50uL或100uL，扩增结束后取3ul用1%左右的琼脂糖电泳检测，应为单一的条带。

肿瘤基因测序标本要求
肿瘤基因测序的标本要求包括以下几点：
1. 肿瘤样本量足够大，以确保检测结果的准确性。

2. 肿瘤细胞应充分存活，以避免检测结果的误导。

3. 肿瘤标本应保持新鲜，以确保基因表达的稳定性和可靠性。

4. 肿瘤标本质量应高，操作稳定可靠，以减少误差和偏差。

5. 肿瘤标本材料必须清晰明确，样本必须足够多，以避免遗漏或误判。

在实际操作中，为了获得最佳的基因测序结果，还需要注意以下几点：
1. 固定组织标本时，建议固定最多5mm厚的组织，福尔马林与组织的比例至少应为10:1。

固定的时间不应超过24小时，以避免过度固定。

2. 组织标本应完全脱水，因为残留的水分可能导致样品降解。

3. 在石蜡包埋过程中，应避免温度过高，使用熔解温度低的石蜡，并避免包含添加剂如蜂蜡，因为它们可能干扰生物分子的回收。

4. 染色过程中，某些染料和试剂可能对核酸造成不利影响，特别是那些用于免疫组化染色的试剂。

因此，应选择对核酸影响小的染料和试剂。

5. FFPE样品应在最佳温度下保存，以减缓核酸和蛋白的降解。

在比较不同保存温度的实验中，如果FFPE样品保存在4°C，而不是室温或更高，则RNA在1年后仍基本完整。

通过遵循这些要求和建议，可以获得更准确和可靠的肿瘤基因测序结果，有助于医生更好地诊断和治疗肿瘤。

临床测序样本筛选原则
临床测序样本筛选原则主要包括以下几点：
1.样本的来源和类型：根据测序目的和目标基因的不同，选择合适的样本来源和类型。

例如，对于遗传性疾病的研究，通常会选择患者的血液或细胞样本；对于肿瘤研究，则可能会选择肿瘤组织样本。

2.样本的代表性：选择的样本应能够代表目标基因或表型的变异情况。

如果目标基因在某些亚型或特定组织中表达，则应选择来自这些亚型或组织的样本。

3.样本的数量和质量：为了保证测序结果的可靠性和可重复性，通常需要足够的样本数量，并确保样本质量良好，无严重降解或污染。

4.伦理和法律考虑：在选择临床测序样本时，应遵守相关伦理和法律法规，确保患者的隐私和权益得到保护。

同时，应获得患者或其监护人的知情同意。

5.成本效益分析：根据测序目的和预算限制，选择合适的样本数量和测序方案，确保能够获得有价值的测序结果，并避免浪费资源和成本。

总之，临床测序样本筛选原则是确保测序结果的可靠性和可重复性的关键因素之一。

在选择样本时，应综合考虑以上因素，并根据具体情况进行权衡和取舍。

高通量测序样品要求及注意事项高通量测序样品要求及注意事项BIOPIC面向北京大学校内提供高通量测序服务，所使用的测序仪为Illumina公司的HiSeq 2000测序仪。

为保证获得高质量的测序结果，一个重要前提是提供给我们高质量的DNA、RNA样品。

请仔细阅读本说明并严格按照要求准备样品，这将帮助您得到最佳的测序数据和结果。

如果所递交的样品质量不能符合下述要求，您的样品将不被处理并将被通知退回。

接到我们的退回通知后，请到测序中心取回您的样品。

通知一个月后未被领取的退回样品我们将不再保留。

样品信息单一、样品信息单所有样品必须随同《样品信息单》一起递交，请在BIOPIC网站上下载表格或者联系中心的工作人员（62744052，sequencing@）索取表格。

请详细填写信息单上所要求的各项样品信息及您的测序要求，并打印两份、签名后随同样品一起递交至BIOPIC中心测序实验室。

样品要求二、DNA/RNA样品要求我们接受的样品包括提取好的Genomic DNA，Total RNA, ChIP-Seq产物等。

提交的DNA或者RNA样品由中心的工程师建立测序文库并上机测序，结果将以碱基序列的形式提交给用户。

针对基因组测序、mRNA转录组测序、外显子组测序、染色质免疫沉淀测序等不同测序要求，所需样品量略有不同，请参见下表：建议总量/(最低量*) 建议浓度/(最低浓度*)RNA转录组测序 10 / (1) μg 200 / (20) ng/μl链特异RNA测序 10 / (3) μg 200 / (60) ng/μlSmall RNA测序 10 / (3) μg 1000 / (500) ng/μlChIP测序 20 / (5) ng 5 / (1) ng/μlMulti-PCR产物高通量20 / (5) ng 5 / (1) ng/μlDNA重测序 10 / (1) μg 200 / (20) ng/μlHuman Exome测序 10 / (3) μg 200 / (60) ng/μl*最低量或浓度仅以Pico Green (Qubit)检测结果为准，建库有一定风险。

测序实验报告测序实验报告序言近年来，随着生物技术的不断发展，基因测序技术已经成为生物学研究和医学诊断的重要手段之一。

本篇文章将介绍一项基因测序实验的过程和结果，旨在展示该技术在生物学领域的应用。

实验目的本次实验的目的是对一种未知细菌的基因组进行测序，以了解其基因组结构和功能，为进一步研究提供依据。

实验步骤1. 样品准备：从培养基中取出待测细菌样品，进行细菌培养和提取DNA。

2. DNA纯化：通过离心和酶处理等步骤，将提取到的DNA纯化。

3. DNA片段构建：将纯化后的DNA进行打断，得到一系列短小的DNA片段。

4. 连接接头：在DNA片段的两端连接上适当的接头序列，以便后续扩增和测序。

5. 扩增：利用聚合酶链式反应（PCR）技术，对连接好的DNA片段进行扩增，得到大量的DNA模板。

6. 准备测序样品：将扩增得到的DNA模板进行纯化和浓缩，得到适合测序的样品。

7. 测序：将样品送入高通量测序仪中进行测序，获得大量的测序数据。

实验结果通过测序仪获得的原始数据需要进行一系列的数据处理和分析，才能得到有用的信息。

首先，对原始数据进行质量控制，去除低质量的碱基，减少测序误差。

然后，将清洗后的数据与已知基因组数据库进行比对，以确定待测细菌的亲缘关系和物种分类。

接下来，对测序数据进行组装，将碎片化的DNA片段拼接成连续的序列，得到待测细菌的基因组序列。

最后，对基因组序列进行注释，识别出其中的基因、调控元件和重要功能区域。

讨论与结论通过本次实验，我们成功地对一种未知细菌的基因组进行了测序，并获得了该细菌的基因组序列。

通过对基因组序列的分析和注释，我们发现该细菌拥有多个重要的代谢途径和抗生素抗性基因。

这些发现为进一步研究该细菌的生物学特性和致病机制提供了重要线索。

总结基因测序技术的发展使得我们能够深入研究生物体的基因组结构和功能。

本次实验展示了基因测序的整个过程，从样品准备到数据分析，再到结果解读。

通过测序实验，我们不仅可以了解未知生物的基因组信息，还可以揭示其潜在的生物学特性和重要功能。

rna seq送样标准
RNA测序（RNA-Seq）作为一种高通量测序技术，广泛应用于生物学和医学研究领域。

对于送样标准，以下是一般情况下的建议：
1. 样本质量：确保样本质量好，没有明显的降解，以免影响测序结果。

推荐使用RNase-free的试剂和材料进行样品处理。

2. 样本数量：根据具体实验目的和要求，确定合适的样本数量。

通常建议至少3个重复样本，以提高实验结果的可靠性和统计学意义。

3. 样本类型：RNA-Seq适用于多种不同类型的样本，包括细胞系、动植物组织、生物液体等。

不同样本类型需要选择合适的提取方法和试剂盒。

4. RNA提取：选择合适的RNA提取方法，确保提取到高质量、高纯度的总RNA。

常用的方法包括酚/氯仿法、磁珠法或柱式纯化法等。

5. RNA质检：对提取得到的RNA样品进行质检，包括测定RNA的浓度、纯度和完整性。

常用的检测方法有紫外吸收光谱、琼脂糖凝胶电泳、荧光分析等。

6. 样品存储：提取得到的RNA样品需要储存在-80℃的超低温冰箱中，以保证其稳定性和可靠性。

7. 样品文档：提供详细的样品信息文档，包括样品名称、来源、处理方法、实验目的等，以便后续数据分析和解释。

请注意，以上仅为一般性的送样标准建议，实际情况可能会因不同实验目的、样本类型和研究要求而有所差异。

建议在选择测序服务提供商时，与其进行详细沟通，并根据其具体要求进行样品准备和送样。

附：测序样品的要求
一、PCR原液
∙片断通常大于200bp；
∙提供浓度大于50ng/ul，体积大于50ul；
∙2ul电泳检测条带清晰无杂带。

二、PCR已纯化
∙PCR产物溶于超纯水中；
∙浓度大于50ng/ul，体积大于20ul；
∙电泳检测条带单一。

三、质粒要求
∙质粒浓度大于100ng/ul，体积大于20ul；
∙建议使用相关试剂盒提取；
∙建议同时提供1ml菌液；
∙大质粒需要注明载体长度。

四、菌液模板要求
∙说明载体的抗性，我们提供Amp 、kan、chl、tet四种抗生素；
∙对于低拷贝质粒请直接提供1ug纯化质粒；
∙提供1ml左右的过夜培养菌液，加15%灭菌甘油，于离心管中封口保存，防止交叉污染或泄漏；∙建议尽量提供穿刺培养的菌种。

五、引物要求
∙浓度5umol/l，体积大于20ul；
∙随机引物和兼并引物不适合测序；
∙尽可能提供引物全序列，PCR退火温度；
∙T7、SP6、M13(+)、M13(-)、T3等通用引物我们免费提供。

样品类型及注意事项。

艾博思⽣物转录组测序样品要求1. 艾博思⽣物质量控制体系质量标准严格：QA系统为您的实验全程护航，实验严格按照153个SOP⽂件进⾏。

实验记录完备：⼯⼚化的流⽔线作业项⽬流程，保证所有实验记录可供回溯。

多重实验质控：实验室QC、数据分析QC、项⽬QC—3重QC，减少低质量数据。

（1）样品运输和储存的质量控制（2）实验过程的质量控制（3）结果数据运输和储存的质量控制2.艾博思⽣物RNA-Seq服务样品要求A 样品要求（RNA）1) 样品纯度：OD 260/280值应在1.9～2.2 之间，RNA 28S:18S≥1.5推荐 RIN≥8；DNA 应该去除⼲净。

2) 样品浓度：最低浓度不低于100ng/µl。

3) 样品总量：每个样品总量不少于15µg。

4) 样品溶剂：要溶解在H20或TE (pH 8.0)中。

5) 样品运输： RNA⽤冻存管保存，并⽤⼲冰或液氮运输。

B 样本准备应该遵循的基本原则1) 代表性原则：取样的代表性关系到实验结果是否具有科学意义，因此您应该根据实验⽬的慎重选择您的取样⽅案。

病变组织样本中应不夹带正常组织，正常组织样本中不能含有病变组织。

有条件时，应做到实验组与对照组的样本在取材时间、部位、处理条件等⽅⾯尽可能保持⼀致，否则可能会影响实验结果的可信度。

2) 准确性原则：代表性样本的各种特征数据必须被准确记录，并按要求（低温、迅速）采集、制备、贮存、运输，最终正确地按实验设计进⾏实验和数据处理。

3) 迅速性原则：样本质量是实验中影响实验结果的最关键因素，因此⽤于实验的样本，在采集、制备、贮存、运输过程中应尽可能地做到迅速，最⼤限度的缩短从样本采集到实验的时间。

4) 低温原则：所取样本离体后，应尽快置于液氮、⼲冰或-80℃冰箱中，并保证在实验前始终处于-70℃以下，以避免RNA的降解。

C 样本准备⽅法：详见《艾博思⽣物样品采集操作指南》D 注意事项1) 我们不接收未经TRIzol试剂处理的细胞样本。