土壤蔗糖酶(Solid-Sucrase,S-SC)试剂盒使用说明

土壤脂肪酶（S-LPS）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法货号:UPLC-MS-4046规格:50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体30mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体6mL×1瓶常温保存试剂三粉剂×1瓶2-8℃保存试剂四液体20mL×1瓶2-8℃保存标准品液体59.3μL×1支2-8℃保存溶液的配制：1、标准品：临用前加入1.97mL甲苯，即100μmol/mL油酸。

用前注意解冻溶解。

用不完的试剂可以2-8℃保存一个月。

2、工作液的配制：将试剂三临用前加入20mL蒸馏水于沸水浴中溶解，2-8℃保存两周。

冷却至常温后加入5mL试剂二混合，高速震荡2次，每次3min，间隔5min。

可根据该比例现用现配。

产品说明：脂肪酶（LPS）又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。

该酶在土壤生物动力学中具有重要的作用。

LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算LPS活性。

Triglyceride+LPS Fatty Acid+GlycerolFatty Acid+Cu2+Copperoleate(Soap)（蓝色络合物）710nm 注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、台式离心机、震荡混匀器、恒温水浴锅/恒温培养箱、可调式移液枪、研钵、甲苯（不可快递）、冰和蒸馏水、30-50目筛。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）新鲜土样自然风干，过30-50目筛。

二、测定步骤1、分光光度计预热30min以上，调节波长至710nm，甲苯调零。

2、标准溶液的稀释：取50µL100µmol/mL油酸标准溶液，加入950µL甲苯，充分混匀，配制成5µmol/mL标准溶液待测，现用现配。

土壤漆酶（Soil Laccase，SL）试剂盒使用说明微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号:BC1965规格：100管/48样产品内容：试剂一：液体40mL×1瓶，4℃保存。

工作液：粉剂×2瓶，4℃避光保存，临用前每瓶加10mL试剂一溶解。

产品说明：漆酶（Laccase）是一种含铜的多酚氧化酶，属于铜蓝氧化酶家族，广泛分布于真菌和高等植物中，具有较强的氧化还原能力，在纸浆生物漂白，环境污染物降解和木质纤维素降解以及生物检测方面有非常广泛的应用。

漆酶分解底物ABTS产生ABTS自由基，在420nm处的吸光系数远大于底物ABTS，测定ABTS自由基的增加速率，可计算得漆酶活性。

自备实验用品及仪器：天平、低温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、震荡仪。

测定操作1.分光光度计计/酶标仪预热30min，调节波长到420nm，蒸馏水调零。

对照管测定管样本（g）0.020.02试剂一（μL）250工作液（μL）25037℃震荡反应10min，冰浴5min，分别取出上清200μL于420nm处测定吸光值，记为A对照管和A测定管。

△A=A测定管-A对照管2.酶活性计算公式a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下酶活性定义：每克土壤每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位（U）。

SL活性（nmol/min/g）=△A/(ε×d)×V反总÷W÷T=0.694×△A÷Wε：ABTS毫摩尔消光系数：36L/mmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，0.25mL；W，样本质量，g；T：反应时间，10min。

b.用96孔板测定的计算公式如下酶活性定义：每克土壤每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位（U）。

SL活性（nmol/min/g）=△A/(ε×d)×V反总÷W÷T=1.388×△A÷Wε：ABTS毫摩尔消光系数：36L/mmol/cm；d：比色皿光径，0.5cm；V反总：反应总体积，0.25mL；W，样本质量，g；T：反应时间，10min。

土壤酸性磷酸酶活性测定试剂盒使用说明微量法货号：BC0145规格：100T/96S产品内容：试剂一：液体×1瓶，4℃避光保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。

用前加100mL蒸馏水充分溶解。

试剂三：液体×1瓶，4℃保存。

试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。

临用前加576μL无水乙醇（自备），24μL蒸馏水充分溶解。

（变褐色后不能再使用）标准品：液体×1瓶，0.5μmol/mL苯酚标准液，4℃保存。

产品说明：土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。

土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响，根据最适pH范围，通常分为酸性、中性和碱性三种类型。

酸性环境中，S-ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-ACP活性。

试验中所需的仪器和试剂：紫外分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水、乙醇和甲苯。

操作步骤：一、粗酶液提取：称取风干混匀土壤约0.1g，加入0.05mL甲苯（自备），轻摇15min；加0.4mL试剂一并且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。

10000rpm室温离心10min，取上清液置于冰上待测。

二、测定步骤：1.分光光度计预热30min以上，调节波长到660nm，蒸馏水调零。

2.空白管：取微量玻璃比色皿/酶标板，加入10μL蒸馏水，20μL试剂三，4μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水166μL，混匀后室温静置30min，于660nm测定吸光度，记为A空白管。

3.标准管：取微量玻璃比色皿/酶标板，加入10μL标准液，20μL试剂三，4μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水166μL，混匀后室温静置30min，于660nm测定吸光度，记为A标准管。

土壤蔗糖酶的测定方法(一)土壤蔗糖酶的测定方法简介土壤蔗糖酶是一种重要的土壤酶活性指标，其测定方法可以帮助我们了解土壤中有机质分解和糖类循环的过程。

本文将详细介绍几种常用的土壤蔗糖酶测定方法。

方法一：邻苯二甲酸缓冲法1.准备土壤样品和邻苯二甲酸缓冲液。

2.将土壤样品加入邻苯二甲酸缓冲液中，使样品均匀悬浮。

3.在恒温水浴中将样品搅拌一定时间，通常为1小时。

4.用酚酞指示剂进行滴定，直到溶液从紫色转变为粉红色。

5.记录滴定所需的酚酞滴定液体积。

6.根据滴定液体积和样品重量计算蔗糖酶活性。

方法二：多酚类抑制法1.准备土壤样品和多酚溶液。

2.将土壤样品与多酚溶液混合，使样品与抑制剂充分接触。

3.静置一段时间，通常为4小时。

4.加入邻苯二甲酸缓冲液和酚酞指示剂，进行滴定。

5.记录滴定所需的酚酞滴定液体积。

6.根据滴定液体积和样品重量计算蔗糖酶活性，与未添加抑制剂的样品相比较，计算抑制率。

方法三：重组蔗糖酶法1.准备土壤样品和蔗糖酶底物。

2.将土壤样品与蔗糖酶底物混合，使底物与土壤酶反应。

3.反应一定时间后停止反应，通常为30分钟。

4.加入试剂，使反应停止。

5.根据试剂的反应产物的浓度变化，利用分光光度法或其他适当方法测定蔗糖酶活性。

方法四：荧光素二葡萄糖测定法1.准备土壤样品和荧光素二葡萄糖底物。

2.将土壤样品与荧光素二葡萄糖底物混合，使底物与土壤酶反应。

3.反应一定时间后停止反应，通常为30分钟。

4.根据底物反应产物的荧光强度变化，利用荧光分析仪或其他适当设备测定蔗糖酶活性。

5.根据荧光强度的变化计算蔗糖酶活性。

结论通过以上介绍的几种方法，可以选择适合实际需求的土壤蔗糖酶测定方法。

无论是邻苯二甲酸缓冲法、多酚类抑制法、重组蔗糖酶法还是荧光素二葡萄糖测定法，都可以有效地测定土壤中的蔗糖酶活性，为土壤质量评价和农作物种植提供参考依据。

不同方法的选择应根据实际情况权衡利弊，以提高分析结果的准确性和可靠性。

一、实验目的1. 了解土壤蔗糖酶活性的测定原理和方法。

2. 掌握土壤蔗糖酶活性的测定步骤和操作技巧。

3. 分析土壤蔗糖酶活性与土壤有机质、氮、磷含量、微生物数量及土壤呼吸强度等因子的关系。

二、实验原理土壤蔗糖酶活性测定采用3,5-二硝基水杨酸比色法。

该方法以蔗糖为基质，在土壤蔗糖酶作用下生成葡萄糖和果糖，再与3,5-二硝基水杨酸反应生成橙黄色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在508nm波长下，通过测定吸光度，可以计算出土壤蔗糖酶活性。

三、实验材料与仪器1. 材料：风干土壤、蔗糖、3,5-二硝基水杨酸、氢氧化钠、硫酸铜、盐酸、硫酸、蒸馏水等。

2. 仪器：恒温水浴锅、移液器、比色计、试管、烧杯、漏斗、滤纸等。

四、实验步骤1. 土壤样品处理：称取风干土壤0.15g，加入5ml蒸馏水，充分振荡后过滤，得到土壤悬液。

2. 标准曲线绘制：配制一系列葡萄糖标准溶液，加入3,5-二硝基水杨酸试剂，在508nm波长下测定吸光度，以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

3. 土壤蔗糖酶活性测定：取3ml土壤悬液，加入1ml蔗糖溶液和2ml氢氧化钠溶液，混匀后置于50℃恒温水浴锅中反应30分钟。

取出后，加入3,5-二硝基水杨酸试剂，混匀，在50℃恒温水浴锅中反应10分钟。

取出后，加入硫酸终止反应，冷却至室温。

在508nm波长下测定吸光度，根据标准曲线计算出土壤蔗糖酶活性。

4. 数据处理：计算土壤蔗糖酶活性，分析土壤蔗糖酶活性与土壤有机质、氮、磷含量、微生物数量及土壤呼吸强度等因子的关系。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得到线性方程为：y=0.0628x-0.0026，相关系数R²=0.9989。

2. 土壤蔗糖酶活性测定：根据标准曲线计算出土壤蔗糖酶活性为1.23U/g土壤。

3. 分析：土壤蔗糖酶活性与土壤有机质、氮、磷含量、微生物数量及土壤呼吸强度等因子呈正相关。

土壤蔗糖酶活性测定（3,5- 二硝基水杨酸比色法）一、原理蔗糖酶与土壤许多因子有相关性，如与土壤有机质、氮、磷含量，微生物数量及土壤呼吸强度有关，一般情况下，土壤肥力越高，蔗糖酶活性越高。

蔗糖酶酶解所生成的还原糖与 3,5- 二硝基水杨酸反应而生成橙色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

颜色深度与还原糖量相关，因而可用测定还原糖量来表示蔗糖酶的活性。

二、试剂1）酶促反应试剂：基质8%蔗糖，pH5.5磷酸缓冲液：1/15M磷酸氢二钠（11.876g Na2HPO4·2H2O溶于1L蒸馏水中）0.5ml加1/15M磷酸二氢钾（9.078gKH2PO4溶于1L蒸馏水中）9.5ml即成，甲苯2）葡萄糖标准液（1mg/mL）预先将分析纯葡萄糖置80℃烘箱内约12小时。

准确称取50mg葡萄糖于烧杯中，用蒸馏水溶解后，移至50mL容量瓶中，定容，摇匀（冰箱中4℃保存期约一星期）。

若该溶液发生混浊和出现絮状物现象，则应弃之，重新配制。

3） 3,5- 二硝基水杨酸试剂（DNS试剂）称0.5g二硝基水杨酸，溶于20ml 2mol/LNaOH和50ml水中，再加30g酒石酸钾钠，用水稀释定容至100ml（保存期不过7天）。

三、操作步骤（1）标准曲线绘制分别吸1 mg/mL的标准葡糖糖溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL于试管中，再补加蒸馏水至1mL，加DNS试剂3mL混匀，于沸水浴中准确反应5min（从试管放入重新沸腾时算起），取出立即泠水浴中冷却至室温，以空白管调零在波长540nm处比色，以OD值为纵坐标，以葡萄糖浓度为横坐标绘制标准曲线。

（2）土壤蔗糖酶测定称取5 g土壤，置于50mL三角瓶中，注入15ml 8%蔗糖溶液，5ml pH 5.5磷酸缓冲液和5滴甲苯。

摇匀混合物后，放入恒温箱，在37℃下培养24h。

到时取出，迅速过滤。

从中吸取滤液1ml，注入50ml容量瓶中，加3ml DNS试剂，并在沸腾的水浴锅中加热5min，随即将容量瓶移至自来水流下冷却3min。

土壤蔗糖酶活性测定1.原理采用3,5-二硝基水杨酸比色法。

该方法以蔗糖为基质, 基质在土壤蔗糖酶作用下生成葡萄糖, 葡萄糖和3,5-二硝基水杨酸反应生成橙黄色的3-氨基-5-硝基水杨酸, 并在508nm波长下有最大吸光值。

2.测定方法①称取壤土0.15g、砂土0.3g、粘土0.1g风干土于10mL离心管中, 加入0.06 mL甲苯和1mL ph5.5磷酸缓冲液, 再加3mL 8%蔗糖溶液, 摇匀后加盖, 放进36~37℃的培养箱中进行培养24个小时；②培养完成后取出, 摇匀, 并于4000r/min离心5min；③取上层清液0.2ml于20ml玻璃管中, 并加入0.5ml3,5-二硝基水杨酸, 再立即将玻璃管沸水浴中加热5min, 加热完毕后在自来水流下冷却3min；④将显色液体用蒸馏水稀释到5ml, 在508nm波长下比色, 记录吸光值。

3.蔗糖酶标准曲线的测定方法（1）葡萄糖标准溶液的配制a.饱和苯甲酸溶液的配制在洁净的烧杯中加入适量蒸馏水, 慢慢加入少量苯甲酸同时用玻璃棒搅拌, 直至苯甲酸溶解的同时出现析出的苯甲酸晶体为止。

b.标准葡萄糖溶液的配制称取500mg葡萄糖溶解于适量苯甲酸饱和溶液中, 并取100ml容量瓶用苯甲酸饱和溶液定容（5mg/ml）。

（2）.操作步骤a.取11支洁净20ml玻璃管编号0—10。

b.按下表加液编号: 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10葡萄糖母液（ml）0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07饱和苯甲酸（ml）0.2 0.195 0.19 0.185 0.18 0.175 0.17 0.16 0.15 0.14 0.13葡萄糖浓度（mg/ml）0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03 0.04 0.05 0.060.07吸光值（A508nm）0 0.05 0.117 0.227 0.31 0.392 0.49 0.666 0.839 1.0061.176c.在玻璃管中各加入0.5ml3,5-二硝基水杨酸溶液, 并立刻放入沸水浴中加热5min.加热后, 立刻将玻璃管在流动自来水下冷却3min.冷却完毕后, 用蒸馏水定容至5ml.d.将显色液在508nm波长下比色。

土壤过氧化氢酶（Solid-Catalase，S-CAT）试剂盒使用说明微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC0105规格：100管/48样产品内容：试剂一：液体×1瓶，4℃保存；临用前加入29.7mL蒸馏水充分溶解后待用；用不完的试剂4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入1mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存；试剂三：液体×1瓶，4℃保存。

产品说明：S-CAT是土壤微生物代谢的重要酶类，在H2O2清除系统中具有重要作用。

H2O2在240nm下有特征吸收峰，通过测定与土壤反应后溶液在此波长下吸光度的变化，即可反应S-CAT活性的高低。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）和蒸馏水操作步骤：一、样品处理：新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。

二、测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至240nm，蒸馏水调零。

2、加样表试剂名称测定管无基质管无土管风干土样（g）0.030.03试剂一（μL）260260双蒸水（μL）26025℃振荡培养20min试剂二（μL）101010混匀8000g，25℃离心5min，取全部上清试剂三（μL）303030混匀，取200uL至微量石英比色皿或96孔板中，240nm处记录各管吸光值A。

注意：每个测定管要设一个无基质管，无土管只要做一管。

三、S-CAT活性计算：A、用微量石英比色皿测定的计算公式如下单位的定义：每天每g风干土样催化1μmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。

计算公式：S-CAT（μmol/d/g）＝[(A无土管-A测定管+A无基质管)×V反总÷（ε×d）×106]÷W÷T=16.5×（A无土管-A测定管+A无基质管）V反总：反应体系总体积，3×10-4L；ε：过氧化氢摩尔消光系数，4.36×104L/mol /cm；d：比色皿光径，1cm；T：反应时间，20min=1/72d；W：样本质量，0.03g。

ICS13.080.30B10团体标准T/NAIA XXXX—2020土壤蔗糖酶活性的测定（3,5-二硝基水杨酸比色法）2020-XX-XX发布2020-XX-XX实施宁夏化学分析测试协会发布前言本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》规定编写。

本标准由宁夏昊标检测服务研究院（有限公司）提出。

本标准由宁夏化学分析测试协会归口。

本标准起草单位：宁夏昊标检测服务研究院（有限公司）、宁夏大学、宁夏农林科学院荒漠所、宁夏化学分析测试协会。

本标准主要起草人：任亚丽、白玲、杨婷、燕翀、杨洁、季波、张小飞、刘娜娜。

本标准于2020年XX月XX日首次发布。

土壤蔗糖酶的测定（3,5-二硝基水杨酸比色法）1范围本标准规定了土壤蔗糖酶的测定方法（3,5-二硝基水杨酸比色法）。

本标准适用于各类土壤蔗糖酶的测定（3,5-二硝基水杨酸比色法）。

2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。

凡是注日期的应用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 601化学试剂标准滴定溶液的制备GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法NY/T 1121.1土壤检测第一部分：土壤样品的采集、处理和贮存3原理土壤蔗糖酶将蔗糖酶促水解为还原糖，还原糖与3,5-二硝基水杨酸在沸水浴中反应而生成橙色的3-氨基-5-硝基水杨酸，颜色深度与还原糖量呈正相关，因而可用还原糖量来表示蔗糖酶的活性。

4试剂和溶液除非另有说明外，本方法均使用符合国家标准的分析纯试剂，分析用水为GB/T 6682规定的三级水。

4.1甲苯（C 7H 8）。

4.2蔗糖（C 12H 22O 11）。

4.3磷酸氢二钠（Na 2HPO 4）。

4.4磷酸二氢钾（KH 2PO 4）。

4.5葡萄糖（C 6H 12O 6）。

4.63,5-二硝基水杨酸（C 7H 4N 2O 7）。

蔗糖合成酶（分解方向；SS-I）活性检测试剂盒说明书微量法货号:UPLC-MS-4147规格:100T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体60mL×1瓶4℃保存试剂一液体8mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1瓶-20℃保存试剂三液体8mL×1瓶4℃保存标准品粉剂×1支4℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用前加入2.5mL试剂一充分溶解待用，用不完的试剂建议分装后，-20℃保存，避免反复冻融；2、标准品：20mg果糖，临用前加入1mL蒸馏水溶解，配成20mg/mL果糖溶液备用，4℃保存一周。

产品说明：蔗糖合成酶（Sucrose Synthase，SS）是植物糖代谢过程的关键酶，负责催化蔗糖分解与合成的可逆反应，其分解活性可以催化蔗糖水解成UDPG与果糖，参与淀粉、纤维素和半纤维素的合成等代谢途径。

分解方向SS-I催化蔗糖和UDP生成果糖与UDPG，果糖与3,5–二硝基水杨酸反应生成在540nm有特征吸收峰的棕红色物质，通过测定540nm处吸光值变化可计算得SS-I活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、台式低温离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）组织：按照质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，8000g，离心10min，取上清置于冰上待测。

二、测定步骤1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、将20mg/mL标准液用蒸馏水稀释为8、6、5、4、3、2、1mg/mL的标准溶液备用。