Feb. 2022 CHINA FOOD SAFETY 115分析检测
乳粉中单核细胞增生李斯特氏菌能力 验证结果与分析樊惠华，侯磊磊，方 莹，柴梅梅（榆林市食品检验检测中心，陕西榆林 719000）摘 要：为了提升食品检验检测机构对食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验能力，提高微生物实验室外部质量控制水平。本实验室参加中国检验检疫科学研究院测试评估中心组织的ACAS-PT1108（2021）乳粉中单核细胞增生李斯特氏菌检测能力验证，参考参试指导书、《食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验》（GB 4789.30—2016）、海博单增李斯特氏菌成套生化鉴定管和MicroScan WalkAway 40 Plus全自动微生物生化鉴定仪。结果表明，参试样品编号21-T031为单核细胞增生李斯特氏菌，样品编号21-U887未检出单核细胞增生李斯特氏菌，经鉴定为伊氏李斯特氏菌，最终能力验证结果评价为满意，可见本实验室具有成熟的单核细胞增生李斯特氏菌检验能力。关键词：乳粉；单核细胞增生李斯特氏菌；能力验证Results and Analysis of the Proficiency Testing of Listeria Monocytogenes in Milk PowderFAN Huihua, HOU Leilei, FANG Ying, CHAI Meimei(Yulin Food Inspection and Testing Center, Yulin 719000, China)Abstract: In order to improve the ability of food inspection and testing institutions to detect Listeria monocytogenes in food and to improve the external quality control level of microbiology laboratory. The laboratory participated in the proficiency testing of Listeria monocytogenes in ACAS-PT1108 (2021) milk powder organized by the Testing and Evaluation Center of the Chinese Academy of Inspection and Quarantine Sciences. Reference was made to the test guidelines, the GB 4789.30—2016, the complete biochemical identification tubes of Listeria monocytogenes in Haibo and the MicroScan WalkAway 40 Plus automatic microbial biochemical identification instrument. The results showed that the sample number 21-T031 was detected as Listeria monocytogenes, and the sample number 21-U887 was not detected as Listeria monocytogenes, which was identified as Listeria.ivanovii. The final proficiency test results were satisfactory. It can be seen that the laboratory has a mature ability to test Listeria monocytogenes.Keywords: milk powder; Listeria monocytogenes; proficiency test李斯特菌属目前包括17种公认的短杆状革兰氏阳性菌，其中单核细胞增生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌被认为是病原体[1]。单核细胞增生李斯特氏菌会感染人和动物，伊氏李斯特氏菌最初被认为仅感染反刍动物，GUILLET等报道伊氏李斯特氏菌可引起胃肠炎和菌血症，被认为是一种肠道机会性病原体[2]。单核细胞增生李斯特氏菌是一种主要的食源性致病菌，可引起李斯特菌病，表现为胃肠炎、败血症、中枢神经系统感染以及母儿感染，导致流产、死胎、早产或患有新生儿李斯特菌病[3-4]。其广泛存在于自然环境中，能够在低温、酸性pH、高盐浓度等恶劣条件下生存，其中凉拌菜、肉及肉制品、乳与乳制品、动物性水产品等更易受到单核细胞增生李斯特氏菌的污染[5]。作者简介：樊惠华（1984—），女，陕西榆林人，硕士，工程师。研究方向：食品微生物学检验。Copyright©博看网. All Rights Reserved.116 食品安全导刊 2022年2月分析检测
76单核细胞增生性李斯特菌（Listeria monocytogenes，LM）是李斯特菌属中致病力最强
的革兰氏阳性菌，是一种常见的食源性致病菌。由于其在细胞内寄生，可穿越宿主的三道屏障，会导致严重的人兽共患病。有研究表明，LM在即食性食品中的污染率达31%。近年来，由此引发的食品中毒病例不断增加。20世纪90年代世界卫生组织（WHO）将其列为四大食源性致病菌之一。近年来，我国建立了全国食品污染物监测网和食源性疾病监测网，重点监测LM。国家食品安全法规定食物中不得检出LM。由于LM的严重危害性，各国学者们也针对食品中LM的检测技术进行了大量研究，以寻求快速、简单、高灵敏度的检测方法。1 传统生物学分离培养与生化鉴定法传统的检验方法是将通过分离培养后产生的可疑菌落进行生化反应、溶血实验、协同溶血实验、动物实验、典型运动后，再进行血清分开，耗时长，且工作量大。目前我国常用的是国标法和显色培养基诊断法。1.1 国标法（EB法）国标法是我国国标《食品卫生微生物学检验：
单核细胞增生李斯特氏菌检验》（GB4789.30—2008）采用的方法。该方法一般需要5~14 d，在食
品中检出英诺克李斯特菌的几率比LM高。但该方法容易造成假阳性和假阴性的出现，且存在杂菌与LM肉眼难区分的缺点，需要进一步验证。
1.2 显色培养基诊断法该方法是利用酶与底物的相互作用产生显色物质或荧光物质，将能与LM的毒力因子PI-PLC酶和β-D-葡萄糖苷酶反应的一类底物加入分离培养基中，使LM与其他菌落形成色差。该方法比EB法节省了时间、人力和原材料投入。
2 免疫学检测技术食源性单增李斯特菌检测技术研究进展
孙玉霜，李 颖，李秀梅，杨 颖（天津市动物疫病预防控制中心，天津 300402）
摘 要：单增李斯特菌是一种常见的食源性致病菌，会导致严重的人兽共患病。目前单增李斯特菌的检测方法主要包括传统方法、酶联免疫法、免疫胶体金技术、PCR检测技术、等温扩增技术、全自动微生物检测系统、生物芯片技术等。本文对各方法的原理、优缺点、应用情况及发展前景进行了概述。关键词：单增李斯特菌；检测；进展 中图分类号：S855.1 文献标识码：B 文章编号：1005-944X（2017）08-0076-05DOI：10.3969/j.issn.1005-944X.2017.08.021
食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检测方法研究进展
刘书花;魏云波;林小静;李景超
【摘 要】单核细胞增生李斯特氏菌是一种重要的食源性致病菌,广泛分布于自然界.针对目前单核细胞增生李斯特氏菌的检测现状,总结了4种现行有效的常用检测方法,并对各种检测方法的优缺点进行了分析比较.实时荧光定量PCR检测技术,可精确定量、反应迅速、信号重复性好、灵敏度和特异性高,不需要凝胶电泳过程,避免了扩增产物对环境造成的污染问题,将是未来分析检测发展的一个主要趋势.
【期刊名称】《现代农业科技》
【年(卷),期】2010(000)019
【总页数】2页(P327-328)
【关键词】单核细胞增生李斯特氏菌;传统检测方法;酶联免疫技术;分子生物学技术
【作 者】刘书花;魏云波;林小静;李景超
【作者单位】山东省分析测试中心,山东省大型精密仪器应用技术重点实验室,山东济南,250014;山东省分析测试中心,山东省大型精密仪器应用技术重点实验室,山东济南,250014;山东省分析测试中心,山东省大型精密仪器应用技术重点实验室,山东济南,250014;山东省分析测试中心,山东省大型精密仪器应用技术重点实验室,山东济南,250014
【正文语种】中 文
【中图分类】R155.5 单核细胞增生李斯特氏菌（Listeie monocytogenes简称L．M；单增李氏菌）是一种人畜共患病病原菌[1]，使人和动物患脑膜炎、脑炎、败血症及造成怀孕妇女流产、死胎等疾病。近年来国外报道该菌所致的食物中毒越来越多，病死率高达30%～70%[2-3]。国内也不断有散发病例，引起了国内医学界的普遍关注。WHO在20世纪90年代已将其列为食品四大致病菌之一[4-5]。该菌在自然界分布广泛，以家畜、家禽兽为主要宿主，很容易污染食品而引起食物中毒和李斯特病暴发[6-7]。食品是导致人类受单核细胞增生李斯特氏菌感染的主要传播途径，该菌在4℃冰箱保存的食物中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌。在绝大多数食品中都能找到李斯特氏菌，肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都已被证实是李斯特氏菌的感染源[8]。随着我国冷藏、速冻食品消费量的迅速增多，食品中单增李斯特氏菌的潜在危险性也越来越突出，因此在食品卫生微生物检验中，必须加以重视。现针对其常用检测方法的优缺点进行分析比较。
青岛科标检测研究院 李斯特氏菌检测
李斯特菌（也称李氏杆菌）引起的急性传染病，以败血病为主要症状，伴有内脏器官和中枢神经系统病变。李斯特菌是1926年英国南非裔科学家穆里在病死的兔子体内首次发现的，为纪念近代消毒手术之父、英国生理学家约瑟夫·李斯特（1827～1912），1940年被第三届国际微生物学大会命名为李斯特菌。
单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人畜的李氏菌的病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。它广泛存在于自然界中，食品中存在的单增李氏菌对人类的安全具有危险，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一，因此，在食品卫生微生物检验中，必须加以重视。
李斯特菌在环境中无处不在，在绝大多数食品中都能找到李斯特菌。肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都已被证实是李斯特菌的感染源。李斯特菌中毒严重的可引起血液和脑组织感染，很多国家都已经采取措施来控制食品中的李斯特菌，并制定了相应的标准。
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实验步骤
1. 增菌培养
将未开封的测试片贮藏在≤8℃的环境下，并在包装上标示的有效期内使用。在高湿度的地方，最好在使用前将测试片回复到室温。
取回的样品应在4℃下处理、存放和运送，如果是冷冻样品，则在检验前要保持冷冻状态。
取25mL液体或25g半固体或固体样品放入含有225mL无选择性试剂增菌肉汤（EB）的均质杯中进行均质，然后转入三角瓶中，30℃培养4h，加入选择性试剂吖啶黄素、萘啶酮酸和放线菌酮，继续培养20h和44h.。
2. 分离
共培养24h和48h后，取EB培养物分别在OXA和LPM或加七叶苷/Fe3 LPM琼脂平板上划线。PALCAM琼脂可替代LPM琼脂。将OXA和PALCAM平板置于35℃培养24-48h，LPM平板在30℃培养24-48h。然后，把LPM平板放于解剖镜载物台上，以450角入射光从平板下面照射平板，通过目镜垂直向下观察寻找可疑菌落。李斯特氏菌在LPM平板上呈有光泽的兰色或灰色。用已知阳性菌和阴性菌划线的平板作对照。
