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转录因子PPT讲稿

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分子生物学-转录因子

分子生物学-转录因子

Independence of
DNA-binding domain and
transcription-activation domain
UASG
GAL4 protein :
a yeast activator
• a set of genes responsible for metabolism of galactose
(TBP); needed for RNApol I, II, III
TFIIA;
Binds to TFII D Enhances TFII D binding to TATA box Stabilizing the DNA-TFII D complex
TFII A TBP of D
Wilds minor groove
bridging factor
TFIIH; Large complex made up of > 5 subunits Helicase activity (ATPase, ) kinase activity Phosphorylation of CTD of RNApol IIO DNA repair
+ Cis-factor
4.3.3.2. RNA polymerase in Eukaryotes
RNApol. I, II, III
Including L, L’ subunit & 7-12 small subunits
L’ with 78%±homologous
between 3 RNApol. I, II, III
stimulate only a basal level of transcription.
4.3.3. 与基本转录相关的T.F.

bHLH转录因子介绍(课堂PPT)

bHLH转录因子介绍(课堂PPT)
• 再者，与动物相比，只有少数植物bHLH蛋白的功 能得到解析，且主要局限于水稻和拟南芥等模式 植物，所以目前各个家族还没有相应的名称。
9
四、bHLH转录因子的生物学功能
4.1动物bHLH转录因子的主要功能
• A组bHLH转录因子可与E-box（5’-CAGCTG3’）相结合，主要调控神经细胞、肌肉细胞生成 以及中胚层的形成；
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4.2.1.2在植物耐盐方面的研究
• 在拟南芥中过表达 Orb HLH2 能够增强转基因植 株的耐盐性及渗透胁 迫 抗 性，同 时 胁 迫 响 应 的 相 关 基 因 如DREB1A / CBF3、RD29A、 COR15A 和 KIN1 在转基因植株中也都上调表达， 但是该基因的过表达不能增强植株的耐冷性，说 明该基因与 ICE1 的代谢途径不同。
• F组由COE-bHLH蛋白组成，COE结构域在形成 二聚体和与DNA结合中发挥重要作用，主要参与 调控头部发育、嗅觉神经元生成和B细胞发育。
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4.2植物bHLH转录因子的主要功能
4.2.1bHLH转录因子在植物抗逆方面的研究
4.2.1.1在植物抗旱方面的研究
• 研究发现，Osb HLH148通过参与茉莉酸信号途 径对水稻的干旱耐受性起调节作用。用茉莉酸甲 酯( Me JA) 、脱落酸以及干旱、高盐、低温和机 械损伤等非生物胁迫处理水稻时，Osb HLH148 的转录水平迅速增加。
和水稻中分别分离鉴定了158和173个转录因子其 它植物中也鉴定出bHLH基因。对基因序列的系统 发生进行分析，结果表明，植物bHLH基因序列与 动物的B组成员有共同的祖先；
8
• 由于植物和动物bHLH转录因子的结构与功能存在 差异，两者的系统发生也是相互独立的。因此植 物bHLH转录因子的分类与动物不同;

南师大 分子生物学第五章 转录因子

南师大 分子生物学第五章 转录因子

Molecular Biology
第一节 转录因子的结构

一、转录因子常见的基本结构 二、转录因子的种类
Molecular Biology
一、转录因子常见的基本结构

转录因子有一个共同的特性，即由不同的功能结 构域组成可调变的蛋白质结构，而这些功能结构 域从蛋白总体分离出来后，无论是单独作用还是 与其它来源的蛋白连接后，仍保持原有的功能。

乙烯应答元件结合因子（ERF），最先是从烟草中，作为 GCC-box结合蛋白分离出来的。 ERF蛋白具有一个高度保守的含58或59个氨基酸的DNA 结合域。 在拟南芥基因组中，有124个ERF 基因，参与对低温、干 旱、病原体及其诱发因子的反应，构成一个转录因子基因 家族。 这类基因家族在植物的生长、发育、抗病、抗胁迫以及次 生代谢等方面起着非常重要的作用。 该家族现只在高等植物中被发现。
Molecular Biology
转录因子的DNA芯片技术研究
Molecular Biology
Molecular Biology
Molecular Biology
第三节 一些常见的植物转录因子

一、植物中常用的特异性转录因子 二、植物中特有的转录因子——Dof
Molecular Biology
Molecular Biology
二、转录因子的研究方法



与传统的“单基因” 技术比较，微阵列具有无可 比拟的优势。 该技术能在同一时间内对数千个基因表达谱的差 异进行平行分析，从而可以对基因进行大量、快 速、平行研究，实现高通量筛选； 而且，还可得出其所筛选出的特异性配基的相对 亲和力信息。
Molecular Biology

第五章转录ppt课件

第五章转录ppt课件

一、E.coli RNA聚合酶
E.coli RNA聚合酶由5个亚基组成（5个 多肽链），即α2ββ′σ
αββ′σ四个亚基的分子量分别为36.5KDa、 150 KDa、160KDa和82 KDa，整个酶 分子的分子量为465KDa
分别是基因rpoA、rpoB、rpoC和rpoD的
产物
RNA聚合酶Ⅲ也存在于核质中,其功 能是合成tRNA和5S rRNA以及转录 Alu序列
在细胞质中也能发现一些RNA聚合酶 Ⅲ，它是从细胞核中渗漏出来的。
三种主要的RNA聚合酶的分子量都在 500 KDa左右(14S－15S)，每种酶分子 含有两个大亚基和4～8个小亚基，每 个小亚基的分子量为10 KDa－90KDa
这些名称最早是依据它们从DEAE－纤维素柱上洗脱的 先后顺序而定出来的。后来发现不同生物的三种RNA聚 合酶的洗脱顺序并不相同，因而改用三种不同的RNA聚 合酶对于α-鹅膏蕈碱(α-amanitine)的敏感性不同来 进行区别。RNA聚合酶I基本不受α-鹅膏蕈碱的抑制， 在大于10－3 mol/L时才表现出轻微的抑制作用；RNA聚 合酶Ⅱ对于α-鹅膏蕈碱最为敏感，在10-9－10-8mol/L 浓度下就会被抑制；RNA聚合酶Ⅲ的敏感性介于RNA聚 合酶Ⅰ和Ⅱ之间，在10-5－10-4 mol/L时表现抑制作用。
与RNA聚合酶相结合的一个很小的蛋白质(MW＝ 10KDa)，叫做ω亚基，其功能尚不清楚，有人认 为ω亚基对于RNA聚合酶的结构和功能没有太大的 影响。
原核生物的 RNA聚合酶
亚基 分子量

36512

150618

155613

70263
功能
决定哪些基因被转录 催化功能

浙江农林大学生物化学--转录PPT课件

浙江农林大学生物化学--转录PPT课件
❖ β亚基与底物（NTP）及新生RNA链结合； ❖ β′亚基与模板DNA结合； ❖ β和β′亚基组成酶的活性中心，通过DNA的磷酸基团与核心
酶的碱性基团间的非特异性吸附作用，核心酶能与模板DNA 非特异性松驰结合； ❖ σ亚基的功能是识别启动子，辩认转录起始点，但不能单独 与DNA模板结合，当它与核心酶结合时，可引起酶构象的改 变，从而改变核心酶与DNA结合的性质，使全酶对转录起始 点的亲和力比其他部位高4个数量级，在转录延长阶段，σ亚 基与核心酶分离，仅由核心酶参与延长过程。
-
4
第二节 转录所需的条件
一、RNA聚合酶， 二、启动子（-10序列和-35序列）， 三、各种转录因子（TFA、TFB、TFD）。 四、四种NTP。
-
5
一、RNA聚合酶
❖ 转录酶（transcriptase）是依赖DNA的RNA聚合酶 （DNA dependent RNA polymerase，DDRP）， 亦称为DNA指导的RNA聚合酶（DNA directed RNA polymerase），简称为RNA聚合酶（RNA pol）。 它以DNA为模板催化RNA的合成。
-
14
第四节 真核生物的转录
一、真核生物与原核生物转录的区别 1、转录与翻译部位不同 2、RNA聚合酶不同 3、启动子不二、真核生物的转录过程
一)转录的起始
1、RNA聚合酶I催化的转录起始RNA聚合酶I催化前 rRNA（40S RNA）的合成。前rRNA基因转录起始 点上游有两个顺式作用元件，一个是跨越起始点的 核心元件，另一个在–100bp处有上游调控元件（ UCE）。RNA聚合酶I催化的转录需要2种转录因子 ，分别称为上游结合因子（UBF）和选择性因子1 （SL1）。SL1含有4个亚基，一个是TATA盒结合蛋 白（TBP），另3个是TBP相关因子（TAF）。UBF 与DNA结合令模板DNA发生弯曲，使相距上百bp的 UCE和核心元件靠拢，接着SL1和pol I相继结合到 UBF-DNA复合物上，完成起始复合物的组建,开始 转录 。

转录因子PPT课件

转录因子PPT课件
（DNA-蛋白质） 转录抑制因子 共调节因子 （蛋白质-蛋白质）
特点：
至少含3个功能结构域：DNA结合功能域，转录活性功能域，其他转 录 因子结合功能域；
能识别并结合上游调控区中的顺式作用元件； 对基因表达有正性或负性调控作用，即激活或阻遏基因表达。
目前研究较广泛的有:识别TATA区的TFⅡD，识别CAAT 区的CTF，识别GGGCGG的SP1，识别热激蛋白启动区的 HSF。
通过从一侧逐段缺失 来确定启动子的边界. 当一段缺失不会阻碍 RNA合成, 而下一段缺 失使转录不再发生时, 那么我们可以确定启 动子的边界必然存在
于两者之间.
启动子克隆的几种方法
启动子的克隆对于构建基因工程载体，表达目的蛋白有着重要的意义。启动子 克隆的方法很多，从常用的利用启动子探针型载体筛选启动子到PCR方法的应 用，此后相继问世的一些基于PCR法的克隆启动子技术，像I-PCR、P-PCR、 SSP．PCR、YADE、TAIL-PCR等，为克隆启动子提供了更可靠，更合理的方 法。
并非任何细胞型特异的蛋白在任何情况下都起作用，而是取决于核心 启动子提供一个合适的环境来决定基因是被激活还是被抑制。
构建多个启动子连接多个基因的表达载体，虽然可以实现同时转入多 个基因的愿望，但这种载体一方面构建困难，另一方面如果引入的启 动子之间仅仅有90bp 的同源性顺序，导入生物体内，就会引起所谓的 基因表达”共抑制”现象，而使基因沉默。因此，将极性启动子人工改 造为高效双向表达的启动子，对于促进基因工程的进展具有重要意义 。
2.1.1 基本转录因子(general transcription factors)
是RNA聚合酶结合启动子所必需的一组蛋白因子， 决定三种RNA(mRNA、tRNA及rRNA)转录的类别，包 括 TF Ⅱ A、TF Ⅱ B、TF Ⅱ D、TF Ⅱ E、TF Ⅱ F、TF Ⅱ H、 TFⅡI等7种因子。

转录ppt(共66张PPT)


RNA 聚合酶
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
转录
产物
加工
45SrRNA
18SrRNA 28SrRNA
hnRNA tRNA 5SRNA
snRNA
mRNA
利福平
抑制原核生物的RNA聚合酶
鹅膏蕈碱
抑制真核生物的RNA聚合酶
利福平 主要用于治疗结核病、麻风病等
鹅膏蕈碱 鬼笔鹅膏
三、真核生物的转录产物为单顺
反子
与原核生物不同，真核生物一个转 录单位仅生成一个mRNA分子，经翻 译生成一条多肽链
（三）都形成3’, 5’-磷酸二酯键
二、复制与转录的不同点
模板
原料
酶
校读
复制 两条链 dNTP DNA聚合酶
有
转录 一条链
NTP RNA聚合酶
无
配对
产物
引物
复制
A=T GC
子代双
链DNA
需要
转录
A=U T=A
GC
mRNA tRNA rRNA
不需要
第一节 原核生物的转录
一、转录模板 二、RNA聚合酶 三、模板和酶的辨认结合
第 11 章
RNA的生物合成（转录）
DNA DNA DNA
RNA
蛋白质
中心法则
目录
前 言 复制与转录的异同 第1节 原核生物的转录
第2节 真核生物的转录特点
第3节 真核生物转录后加工
前言 复制与转录的异同
一、相同点 二、不同点
一、复制与转录的相同点
（一）服从碱基配对规则
（二）合成方向都是5’-3’
DNA-dependent RNA polymerase （二）合成方向都是5’-3’ （四）腺嘌呤脱氨成为次黄嘌呤 σ亚基从三元起始复合物上脱落后，核心酶的构象随之发生改变，并沿着模板链的3’→5’方向滑行，进入延长阶段 第1节 原核生物的转录 原核生物的RNA聚合酶仅1种，合成全部RNA 主要用于治疗结核病、麻风病等 真核生物rRNA转录后加工 α2 β β’ ω σ称为全酶

转录因子

转录因子转录因子是细胞的蛋白质哨兵，它决定DNA 中众多基因中的某些特定基因在给定的时间内转录为mRNA 。

细菌里面含有200~300种转录因子，而动物细胞包约含1000种。

通过使DNA 和基本转录装置联系起来，转录因子决定了细胞的蛋白质结构。

作为初级控制者，它们在细胞内浓度很低。

其浓度很大程度上取决于具体的蛋白质、细胞类型和环境因素，根据经验法则，它的在浓度在n 摩尔(nM)浓度范围，细菌的每个细胞有1~1000个转录因子，在哺乳动物细胞中约有3610~10个。

通常，低浓度转录因子只控制少数基因，高浓度的则相反。

转录因子激活DNA 转录 拓展：在分子生物学中，转录因子（Transcription factor ）是指能够结合在某基因上游特异核苷酸序列上的蛋白质，这些蛋白质能调控其基因的转录。

转录因子可以调控核糖核酸聚合酶（RNA 聚合酶，或叫RNA 合成酶）与DNA 模板的结合。

转录因子一般有不同的功能区域，如DNA 结合结构域与效应结构域。

转录因子不单与基因上游的启动子区域结合，也可以和其它转录因子形成转录因子复合体来影响基因的转录。

转录因子的调节是一个十分复杂的过程, 因为它取决于很多因素，其中最明显的是其他的DNA 结合蛋白(包括转录因RNA 聚合酶转因录子子等)以及局部的染色体结构. 早期的体外实验认为DNA序列决定转录因子的装配顺序，但愈来愈多的证据显示转录的激活取决于大量的转录因子的相互作用。

目前表观遗传学似乎对转录激活也扮演重要角色。

通常每个细胞只含大约10个四聚体，大多数转录因子有相似或者更高的浓度为每nM几十个或上百个。

有趣的是，DNA非特定的吸引力使90%的乳糖抑制体被吸附在DNA周围，只有少数的溶解在细胞质内。

这引发了一个重要的问题：与如此少量的随机波动是如何被生物细胞控制的？例如，如果这些转录因子是完全随机的，在细胞分裂时，如此少量的的转录因子可能使某些子细胞完全不含转录因子。

转录因子表达模式


转录因子表达模式与心血管疾病
心血管疾病的发生和发展过程中，某些转录因 子表达模式的改变可以影响心肌细胞和血管平 滑肌细胞的增殖、凋亡和分化等过程。
例如，在动脉粥样硬化病变中，NF-κB和AP-1 等转录因子的表达增加，可以促进动脉粥样硬 化的发生和发展。
通过调控心血管疾病相关转录因子的表达，可 以预防和治疗心血管疾病，如抗炎药物和血管 紧张素转换酶抑制剂等。
基因芯片技术
基因芯片技术是一种高通量的检测方法，可 用于检测细胞或生物体中转录因子的表达水 平，从而分析其表达模式。
测序技术
新一代测序技术如RNA-seq可以全面、准 确地测定转录组，从而深入了解转录因子在 不同条件下的表达模式和调控机制。
THANK YOU
05
转录因子表达模式的实验研究 方法
基因敲除与敲入技术
基因敲除技术
通过基因敲除技术，可以研究特定转录因子缺失对细胞或生物体表型的影响，从 而揭示其在生长发育、代谢等方面的功能。
基因敲入技术
基因敲入技术则用于将特定转录因子的突变形式导入细胞或生物体中，以研究突 变对转录因子功能的影响。
基因编辑技术
转录因子在生物体的不同组织或器官中具有不同的表达模式，这些差异表达的转录因子调控着特定组 织或器官的发育和功能。例如，一些转录因子只在肝脏中表达，调控肝脏的代谢和解毒功能；另一些 转录因子只在神经系统中表达，调控神经元的生长和分化。
发育阶段特异性表达模式
总结词
发育阶段特异性表达模式是指转录因子在生物体的特定发育阶段特异表达，调控该阶段的发育过程。
详细描述
在生物体的发育过程中，不同发育阶段需要不同的基因表达模式来调控发育过程。一些转录因子只在特定的发育 阶段表达，如胚胎发育、生长、青春期等。这些转录因子的表达模式调控着生物体的发育过程，确保生物体正常 生长和发育。

转录因子YY1与乙型肝炎病毒的相互作用演示稿件


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02
乙型肝炎病毒概述
病毒结构
乙型肝炎病毒是一种DNA病毒，由核心和外壳组成，表面有包膜。
目前已有一些研究探讨了利用YY1作为治疗靶点的可能性，包括开发小分子抑制剂、反义寡核苷酸和siRNA等技术手段。然而，这些治疗方法仍处于实验阶段，需要进一步的研究和临床验证。
THANKSFOR
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YY1对乙型肝炎病毒复制的调控有助于病毒在宿主体内的生存和传播。
01
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转录因子YY1可以调控宿主细胞内的基因表达，从而影响乙型肝炎病毒与宿主细胞的相互作用。
YY1可以促进或抑制宿主细胞内的基因表达，从而影响乙型肝炎病毒在宿主细胞内的生存和复制。
YY1对乙型肝炎病毒与宿主细胞相互作用的调控有助于病毒在宿主体内的生存和传播。
入侵机制
乙型肝炎病毒通过表面包膜上的受体与肝细胞表面的受体结合，进入细胞内。
复制场所
乙型肝炎病毒在肝细胞内复制，利用肝细胞的酶和代谢产物进行核酸复制和蛋白质合成。
对宿主细胞的影响
乙型肝炎病毒感染可引起宿主细胞基因表达的改变，导致细胞功能异常和疾病的发生。
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YY1与乙型肝炎病毒的相互作用
研究表明，YY1的高表达与肝癌的发生和发展密切相关，可能成为肝癌诊断和治疗的潜在靶点。此外，YY1还参与了其他与乙型肝炎病毒感染相关的疾病，如肝硬化和肝衰竭等。
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子克隆的方法很多，从常用的利用启动子探针型载体筛选启动子到PCR方法 的应用，此后相继问世的一些基于PCR法的克隆启动子技术，像I-PCR、PPCR、SSP．PCR、YADE、TAIL-PCR等，为克隆启动子提供了更可靠，更合 理的方法。
• 利用启动子探针载体筛选启动子
利用启动子探针载体筛选启动子的过程为，先选用1种适当的限制性 核酸内切酶消化切割染色体DNA，然后将切割产生的DNA限制片段 群体与无启动子的探针质粒载体重组，并按照设计的要求使克隆的片 段恰好插在紧邻报告基因的上游位置；随后再把重组生物
顺式作用元件(cis-acting element)
——可影响自身基因表达活性的DNA序列
转录起始点
DNA
RNA聚合酶Ⅱ
B
A
编码序列
DNA A
转录起始点
RNA聚合酶Ⅱ
mRNA B
mRNA
顺式作用元件
• 按功能特征，真核基因顺式作用元件分为：启动子
（promoter）、增强子（enhancer）、沉默子 （silencer ）
• I-PCR的实验程序包括，基因组DNA经酶切后用T4DNA连接酶进行
自连接，产生环状DNA片段；以环化产物为底物，用根据已知片段设 计的反向引物进行PCR扩增，从而得到含有未知片段的扩增产物
• P-PCR 是由Jones等提出的利用末端反向重复序列与已知序列互补配
对形成环状单链模板，有效增强了引物与模板结合的特异性。反应需 要3个根据已知序列设计的引物，3个引物在已知序列内呈线性排列， 其中第3个引物可作为接头使用，可与已知序列互补配对形成锅柄状 单链模板。其过程为，首先酶切基因组DNA，产生5‘或3’粘末端，然 后连接上合适的接头(primer 3)，连接好后最好用核酸外切酶I除去多 余的接头，由于连接上的接头与已知序列是反向重复序列，变性后的 DNA单链可退火形成锅柄状单链模板，之后分别用3个单引物进行3 次PCR扩增，能有效地扩增2～9kbp的大片段未知序列 。
• 并非任何细胞型特异的蛋白在任何情况下都起作用，而是取决于核心
启动子提供一个合适的环境来决定基因是被激活还是被抑制。
• 构建多个启动子连接多个基因的表达载体，虽然可以实现同时转入多
个基因的愿望，但这种载体一方面构建困难，另一方面如果引入的启 动子之间仅仅有90bp 的同源性顺序，导入生物体内，就会引起所谓的 基因表达”共抑制”现象，而使基因沉默。因此，将极性启动子人工改 造为高效双向表达的启动子，对于促进基因工程的进展具有重要意义。
• 有研究表明，将单向极性植物表达启动子改造为能够双向表达的启动
子对于植物基因工程研究和应用具有不可估量的作用，其应用前景十 分广阔。
Promoter elements are defined by mutations and footprinting. 用突变法和印迹试验法确定启动子元件.
• 在合适的体外或体内检验系统中, 启动子
是根据其附着序列产生转录的能力来进行 定义的.
通过从一侧逐段缺失 来确定启动子的边界. 当一段缺失不会阻碍 RNA合成, 而下一段缺 失使转录不再发生时, 那么我们可以确定启 动子的边界必然存在
于两者之间.
启动子Байду номын сангаас隆的几种方法
• 启动子的克隆对于构建基因工程载体，表达目的蛋白有着重要的意义。启动
1.1 启动子
真核基因启动子是RNA聚合酶结合位点周围的一组转 录控制组件，至少包括一个转录起始点以及一个以上 的功能组件。位于转录起点附近，是促进DNA转录的 DNA序列，又称分子内作用元件，是DNA分子上可与 RNA聚合酶结合并使之转录的部位，但启动子本身不 被转录。
生物中有许多启动子，如E.coli约有2000个启动子。各启动子的效率可不相同， E.coli的强启动子每2秒钟启动一次转录，而弱启动子每10分钟才启动一次，从百 多个大肠杆菌启动子结构的分析，得知两个强启动子的同源序列的中心在转录起 始部位（基因编码链上第一个核苷酸） 5‘侧约10和35个核苷酸处，弱启动子序列 中往往有多处核苷酸被置换。
转录因子课件
由某一基因表达产生的蛋白质因 子，通过与另一基因的特异的顺式作 用元件相互作用，调节其表达。
这种调节作用称为反式作用。
还有的蛋白质因子可特异识别、 结合自身基因的调节序列，调节自身 基因的表达，称顺式作用。
DNA
a
mRNA 蛋白质A
C
A c
顺式调节
C
反式调节
A
b
DNA mRNA
蛋白质C
• 利用PCR技术克隆启动子
即根据发表的基因序列，设计引物，克隆基因的启动子，由于PCR法
简便快捷，近年来人们较多采用此方法克隆基因启动子。
•
苏宁等根据已报道的水稻叶绿体16SrRNA启动子基因序列设计
5‘启动子序列的引物，以水稻叶绿体DNA为模板，PCR扩增出
16SrRNA基因5’启动子区的片段，酶切克隆到pSK的SacI和SphI位点，
根据启动子的转录模式可将其分为3类：组成型启动子、组织或器官特异 性启动子和诱导型启动子.
由两部分组成：
核心启动子（CPE)：指保证RNApolⅡ转录正常起始所必需的、最 少的DNA序列，包括转录起始位点及转录起始位点上游-25 ~ -30 bp 的TATA盒。它单独起作用时，只能确定转录起始位点并产生基础水 平的转录； 上游启动子元件（UPE)：包括通常位于-70bp附近的CAAT盒、GC 盒等，能通过TFⅡD复合物调节转录起始的频率，提高转录效率。
1 顺式作用元件（cis-acting element)
指真核生物基因组中含有可以调控自身基因表达活性的特异 DNA序列。
顺式作用元件能够被特异转录因子识别和结合，从而影响基 因表达活性。
顺式作用元件的作用是参与基因表达的调控，本身不编码任 何蛋白质, 仅仅提供一个作用位点, 要与反式作用因子相互作 用而起作用。
构建测序载体质粒pZ16S，进行序列测定，结果表明所克隆的片段长
为144bp，含有SD序列。同源比较结果表明，所克隆的片段与水稻叶
绿体16SrRNA启动子序列具有100％的同源性。
• 环状PCR
环状PCR包括I-PCR(Inverse-PCR)和P-PCR(Panhandle-PCR)。这2 种PCR都是根据一端已知序列设计的嵌套式引物进行PCR。