(DNA-蛋白质) 转录抑制因子 共调节因子 (蛋白质-蛋白质)
特点:
至少含3个功能结构域:DNA结合功能域,转录活性功能域,其他转 录 因子结合功能域;
能识别并结合上游调控区中的顺式作用元件; 对基因表达有正性或负性调控作用,即激活或阻遏基因表达。
目前研究较广泛的有:识别TATA区的TFⅡD,识别CAAT 区的CTF,识别GGGCGG的SP1,识别热激蛋白启动区的 HSF。
通过从一侧逐段缺失 来确定启动子的边界. 当一段缺失不会阻碍 RNA合成, 而下一段缺 失使转录不再发生时, 那么我们可以确定启 动子的边界必然存在
于两者之间.
启动子克隆的几种方法
启动子的克隆对于构建基因工程载体,表达目的蛋白有着重要的意义。启动子 克隆的方法很多,从常用的利用启动子探针型载体筛选启动子到PCR方法的应 用,此后相继问世的一些基于PCR法的克隆启动子技术,像I-PCR、P-PCR、 SSP.PCR、YADE、TAIL-PCR等,为克隆启动子提供了更可靠,更合理的方 法。
并非任何细胞型特异的蛋白在任何情况下都起作用,而是取决于核心 启动子提供一个合适的环境来决定基因是被激活还是被抑制。
构建多个启动子连接多个基因的表达载体,虽然可以实现同时转入多 个基因的愿望,但这种载体一方面构建困难,另一方面如果引入的启 动子之间仅仅有90bp 的同源性顺序,导入生物体内,就会引起所谓的 基因表达”共抑制”现象,而使基因沉默。因此,将极性启动子人工改 造为高效双向表达的启动子,对于促进基因工程的进展具有重要意义 。
2.1.1 基本转录因子(general transcription factors)
是RNA聚合酶结合启动子所必需的一组蛋白因子, 决定三种RNA(mRNA、tRNA及rRNA)转录的类别,包 括 TF Ⅱ A、TF Ⅱ B、TF Ⅱ D、TF Ⅱ E、TF Ⅱ F、TF Ⅱ H、 TFⅡI等7种因子。