2015免疫学实验方法

免疫学实验方法免疫学实验方法是免疫学研究的重要部分，它通过一系列的技术手段来识别、分析免疫系统中的各种生物分子、细胞和组织，以及它们之间的相互作用。

这些方法在免疫学领域广泛应用于疾病诊断、药物研发、疫苗研究等方面，对促进免疫学的发展和应用发挥了重要作用。

下面将介绍一些常用的免疫学实验方法。

一、ELISA法ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种用于检测抗体或抗原的免疫学实验方法。

该方法通过将待测抗体或抗原与固相物质结合，再加入酶标记的二抗来进行标记，最后通过酶底物的底物变色反应或荧光底物的发光反应来检测待测抗体或抗原的存在量。

二、流式细胞仪流式细胞仪是一种用于分析和计数悬浮细胞的仪器，它利用激光照射细胞，通过细胞膜上的特异性抗体标记来检测细胞的表面标记物和内部细胞器的性质和分布，对免疫细胞的表型和功能进行高效的分析。

三、免疫印迹法免疫印迹法是一种用于检测蛋白质的免疫学实验方法，通过电泳将待测蛋白分离，再将其转移到膜上，最后使用特异性抗体和标记的二抗来检测待测蛋白的存在量和大小。

四、免疫组化法免疫组化法是一种用于检测组织中特定蛋白的免疫学实验方法，通过将组织切片后进行脱水、脱脂和脱水处理，再使用特异性的抗体来标记待测蛋白，并观察标记物的颜色变化或发光情况来确定蛋白的位置和表达量。

五、免疫沉淀法免疫沉淀法是一种用于检测蛋白相互作用的免疫学实验方法，通过将待测抗体与蛋白结合，再使用蛋白A/G琼脂糖或磁珠等材料将蛋白抗原免疫沉淀下来，最后使用核酸酶或质谱技术来分析蛋白的互作关系。

以上介绍的是一些常用的免疫学实验方法，它们在免疫学研究中起着举足轻重的作用，不仅在科研领域有重要应用，同时在临床诊断和治疗中也有着广泛的运用。

希望以上内容能够对您有所帮助。

免疫学实验操作流程第一次实验 双向免疫扩散试验1、小鼠摘眼球取血，双侧均摘取，(搞眼球者和用Eppendorf 管接血者配合好，尽量不要让血液流到管外)。

收集血液于Eppendorf 管中(1管/鼠)。

(小鼠取血前12小时停止给固体食物，多给水)2、待血液凝固后，用牙签剥离血块，将Eppendorf 管于37℃放置半小时后，转入4℃ 冰箱中，直至血清彻底析出(约2小时)。

3、在第一个半小时内(37℃ 孵育)，解剖小鼠，观察小鼠免疫器官的状、大小、位置等。

4、在4℃ 的2个小时内，要做两件事情。

一是为第二天的ELISA 实验做准备，具体是包被的那一步骤；二是双向免疫扩散的实验操作。

(1) ELISA 的包被包被是将抗原吸附于酶标板的过程。

抗原的包被浓度为10ug/ml 。

48孔酶标板各孔依次加包被液100ul/孔，注意设置空白对照。

包被好的酶标板置于4℃ 过夜。

包被说明：设三复孔。

A1-A3不包被抗原，C1-C3不包被抗原，它们用于阴性对照。

2 43 5 6 7 8 10 9 1211(2) 琼脂双向免疫扩散实验操作步骤①制板配制1.5%琼脂粉溶液(用生理盐水)，微波炉加热至琼脂成溶胶状态(短间隔多次)，室温自然冷却至50℃左右(手摸上去能忍受)将琼脂粉溶液倾倒至载玻片上，待琼脂成凝胶状态后进行下一步。

(琼脂凝胶尽可能厚一些)②打孔用打孔器在琼脂上打孔。

③为稀释抗体和抗原(倍比稀释)做准备。

抗体浓度在做预实验时从原浓度开始稀释至8倍结束共3个梯度。

稀释方法：取三个EP管，分别标记为1/2、1/4、1/8。

每管先加50ul的生理盐水。

取血清50ul，加入标记1/2的EP管内，充分混匀后，用加样器吸出50ul，加入到标记有1/4的EP管内，再充分混匀后，再取出50ul，加入至标记1/8的EP管内，充分混匀。

再将各管内的血清加入到对应的孔内，每个对应孔加25ul(见图)。

④加样结束后将载玻片置于一个湿盒内，置于37℃孵箱中过夜。

免疫学实验技巧分享免疫学实验是生命科学研究中的重要组成部分，对于揭示免疫机制、诊断疾病以及研发免疫治疗方法都具有至关重要的意义。

在进行免疫学实验的过程中，掌握一些实用的技巧可以大大提高实验的成功率和准确性。

接下来，我将为大家分享一些在免疫学实验中积累的宝贵经验。

一、实验前的准备（一）实验设计在开始实验之前，一定要进行详细的实验设计。

明确实验的目的、预期结果以及所需的实验步骤。

同时，要考虑到可能出现的误差和干扰因素，并制定相应的应对措施。

合理的实验设计是实验成功的基础。

（二）试剂和材料的选择选择高质量、可靠的试剂和材料至关重要。

对于抗体、细胞因子等关键试剂，要选择知名品牌，并仔细查看其说明书，了解其适用范围、保存条件和使用方法。

此外，实验中使用的耗材，如移液器枪头、离心管等，也要确保无菌、无杂质。

（三）仪器设备的校准和维护定期对实验中使用的仪器设备进行校准和维护，如移液器、离心机、酶标仪等。

确保仪器的准确性和稳定性，能够有效减少实验误差。

二、细胞培养技巧（一）细胞的复苏细胞复苏是细胞培养的第一步，操作不当容易导致细胞死亡。

从液氮中取出细胞冻存管后，要迅速放入 37℃水浴中，轻轻摇动使其快速融化。

融化过程中要避免水没过管盖，以免造成污染。

待细胞完全融化后，将其转移至离心管中，加入适量的培养基，离心去除冻存液，然后将细胞重悬并接种到培养瓶中。

（二）细胞的传代当细胞生长至 80%－90%汇合度时，需要进行传代。

传代前要先对细胞进行消化处理，常用的消化酶有胰蛋白酶和 EDTA 等。

消化时间要根据细胞的类型和状态进行调整，一般控制在 1-5 分钟。

消化结束后，加入适量的培养基终止消化，轻轻吹打细胞使其分散，然后按照适当的比例进行传代。

（三）细胞的冻存为了长期保存细胞，需要进行冻存。

冻存细胞时，要先将细胞消化、离心，然后用含有 10%DMSO 的冻存液重悬细胞，将细胞分装至冻存管中，缓慢降温至－80℃，最后转移至液氮中保存。

实验二： 对流免疫电泳实验报告实验者：毛寰宇 时间：2015年3月25日 合作者：周鹏、张国栋一、实验原理对流免疫电泳是双向琼脂扩散与电泳分析的结合产物。

CIEP 是一种加速的免疫双扩散技术。

在琼脂糖凝胶平板的两个孔中分别加入抗原和抗体，抗体侧连接电源正极。

通电后，带负电荷的抗原向抗体孔方向移动，而抗体则由于电渗作用被带向抗原孔侧。

两者相遇时形成沉淀物。

可用于检测抗原，但敏感性较低。

在pH8.6的缓冲液中，大部分蛋白质抗原成分（等电点约3~5）常带较强的负电荷，在电场中向正极移动；而作为抗体的IgG ，等电点偏高(约为5~6)，在pH8.6时带负电荷较少，再加上分子量较大，移动速度慢，所以它本身向正极移动缓慢甚至不移动，这样它就会在凝胶的电渗作用下，随水流向负极，电渗引向负极移动的液流速度超过了IgG 向正极的移动，因此抗体移向负极，在抗原抗体最适比处形成沉淀线。

二、实验材料1、抗原 & 抗体2、微量可调加样器、加样头、玻片3、打孔器、针头、打孔样纸（均放平皿内）4、电泳液、电泳槽、电泳仪、标签纸5、1.2%琼脂糖(加热溶化）、5ml 刻度吸管、吸耳球三、实验步骤1、制版与打孔：取洁净玻片，将1.2%融化的琼脂3~4ml 均匀浇注于玻片上，厚度约1.5~2.0mm 。

待琼脂凝固后，放置于打孔样纸上，按样纸上图形打孔。

2、用水倍比稀释抗体：原液、1: 2、1: 4、1: 8。

3、加样：在加样孔中加入5 μl 待测抗原样品（人IgG ）和抗体（羊抗人IgG 血清）。

靠近负极的孔中加入抗原，正极端的孔中加入抗体，玻片标记抗原抗体方向。

4、电泳：将已加样的琼脂板平放于电泳槽内，以纱布为桥，电压为100v ，时间约30min 。

四、实验结果图1：实验电泳结果A.原液、1:2、1:4稀释抗体条件下均可见沉淀线；1:8稀释度不能见沉淀线。

B.抗体稀释到1:2后，可见沉淀线向抗体侧移动。

1:2和1:4条件下沉淀线位置差异较小。

免疫学实验技术分享免疫学是一门研究生物体免疫系统结构和功能的学科，它对于理解疾病的发生机制、诊断疾病以及开发治疗方法都具有极其重要的意义。

而免疫学实验技术则是我们探索免疫系统奥秘的有力工具。

在这篇文章中，我将和大家分享一些常见且重要的免疫学实验技术。

一、免疫细胞的分离与鉴定免疫细胞包括淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞等，它们在免疫应答中发挥着不同的作用。

要研究这些细胞的功能，首先需要将它们从复杂的细胞混合物中分离出来。

1、密度梯度离心法这是一种常用的分离免疫细胞的方法。

其原理是根据细胞的密度不同，在一定的离心力作用下，使其在密度梯度介质中分层，从而实现分离。

例如，我们可以使用淋巴细胞分离液来分离外周血中的单个核细胞。

2、流式细胞术这是一种能够对单个细胞进行快速定量分析和分选的技术。

通过给细胞标记上特定的荧光抗体，然后让细胞逐个通过激光束，仪器可以检测到荧光信号，从而确定细胞的表面标志物表达情况，进而对细胞进行鉴定和分选。

二、免疫细胞功能检测1、 T 细胞增殖实验T 细胞在受到抗原刺激后会发生增殖。

常用的检测方法有放射性核素掺入法，比如 3HTdR 掺入法。

将待检测的 T 细胞与刺激物共同培养一段时间后，加入 3HTdR，通过检测细胞内掺入的放射性强度，就可以反映 T 细胞的增殖情况。

2、细胞毒实验这是检测细胞毒性 T 细胞（CTL）或自然杀伤细胞（NK 细胞）杀伤活性的方法。

常见的有 51Cr 释放法，将靶细胞用 51Cr 标记，与效应细胞共同培养后，检测上清液中的放射性强度，从而反映效应细胞的杀伤能力。

三、抗体检测技术1、酶联免疫吸附试验（ELISA）这是一种广泛应用的抗体检测方法。

将抗原或抗体固定在固相载体上，然后加入待检测的样品，通过酶标记的二抗和底物显色来检测样品中抗体或抗原的含量。

ELISA 有多种类型，如间接法、双抗体夹心法等。

2、免疫荧光技术利用荧光素标记的抗体与抗原结合，在荧光显微镜下观察荧光的分布和强度，从而确定抗原或抗体的存在和定位。

免疫学实验操作技巧免疫学实验是研究免疫系统及其相关疾病的重要手段，准确而熟练的实验操作技巧对于获得可靠的实验结果至关重要。

在这篇文章中，我们将详细介绍一些常见的免疫学实验操作技巧，帮助您在实验中更加得心应手。

一、实验前的准备在进行免疫学实验之前，充分的准备工作是成功的关键。

首先，要熟悉实验的目的和原理，仔细阅读实验操作手册，了解所需的试剂、仪器和设备。

同时，确保实验环境的清洁和无菌，对实验台面、移液器等进行消毒处理。

准备好高质量的试剂也是必不可少的。

购买试剂时，要选择可靠的供应商，并注意试剂的保质期和储存条件。

对于需要自行配制的试剂，要严格按照配方和操作步骤进行，确保浓度和纯度的准确性。

仪器设备的校准和调试同样重要。

例如，移液器需要定期校准，以保证移液的准确性；离心机的转速和时间要根据实验要求进行正确设置。

二、样本的采集和处理样本的质量直接影响实验结果的准确性。

在采集血液样本时，要注意无菌操作，避免血液受到污染。

对于血清样本，采集后要让血液自然凝固，然后通过离心分离血清。

离心的速度和时间要适当，一般为3000rpm，10-15 分钟。

组织样本的采集要迅速，并在低温条件下保存，以防止蛋白质的降解。

在处理组织样本时，要将其充分匀浆或研磨，以释放出细胞内的成分。

细胞样本的处理需要特别小心。

在培养细胞时，要控制好培养条件，如温度、湿度、CO₂浓度等。

在收集细胞时，要使用适当的消化酶，避免对细胞造成损伤。

三、抗体的选择和使用抗体是免疫学实验中最常用的试剂之一。

选择合适的抗体对于实验的成功至关重要。

要根据实验的目的和样本的类型选择特异性高、亲和力强的抗体。

同时，要注意抗体的来源（如鼠抗、兔抗等）和亚型（如 IgG、IgM 等）。

在使用抗体时，要按照说明书进行稀释。

稀释抗体的缓冲液要选择合适，一般常用的有 PBS、TBS 等。

稀释后的抗体要在规定的时间内使用，避免长时间放置导致活性下降。

为了提高实验的准确性，常常需要进行抗体的预吸附。

免疫学实验实验一与免疫相关的细胞形态的观察目的要求：观察与免疫相关的几种细胞的形态，了解它们在机体免疫反应中的作用。

实验器材：显微镜血液涂片（瑞氏染色）结缔组织切片方法：油镜观察一．血涂片的观察（A）红细胞：淡红色，无核的圆形细胞，因红血球为双凹形，故边缘部分染色较深，中心较浅，直径7—8微米。

（B）颗粒白血球嗜中性颗粒白血球：体积略大于红细胞，细胞核被染成紫色分叶状，可分1—5叶，核叶之间联以染色质细丝，染色质染成粉色，其中充满细小的大小均匀的颗粒被染成紫红色。

直径10—12微米。

嗜酸性颗粒白血球：略大于嗜中白血球，细胞核染成紫色，通常为2叶，胞质充满嗜酸性大圆颗粒，被染成鲜红色。

直径10—15微米。

嗜碱性颗粒白血球：体积略小于嗜酸性白血球，细胞质中有大小不等被染成紫色颗粒，颗粒数目较嗜酸性白血球的颗粒少，核为1—2叶染成淡兰色。

直径10—11微米。

（C）无颗粒白血球淋巴细胞：涂片中可观察到中、小型两种。

小淋巴细胞与红血球大小相似，圆形。

其中含致密的核，染成深紫色。

周围仅有一薄层嗜硷性染成淡蓝的细胞质。

中淋巴细胞较大，有较宽层的细胞，核圆形。

6-8微米。

单核细胞：体积最大，细胞圆形。

胞质染成灰蓝色。

核呈肾形或马蹄形，染色略浅于淋巴细胞的核。

直径14-20微米。

二．肥大细胞的观察（示教）胞体较大，呈卵圆形，胞质内充满粗大均等的嗜硷性颗粒。

其中含肝素、组织胺等物质。

常成群地分布于血管的周围。

三．浆细胞的观察（示教）细胞呈圆形或卵圆形，胞质丰富，呈嗜硷性。

核圆形，着色深，多偏于细胞的一侧，染色质核膜呈车轮分布。

正常组织浆细胞少，慢性炎症时增多。

浆细胞合成和分泌抗体，对免疫有重要意义。

四．巨噬细胞：又称组织细胞，细胞形态不规则。

常伸出短而钝突起，有很强的吞噬能力。

附：瑞特氏染色：1．染色液配置称取瑞特氏染料0.1克溶于60ml甲醇中，过滤。

贮褐色瓶中备用。

（配置时，要先将瑞特氏染料置研钵体内边研边滴加甲醇，使染料溶液得更好。