免疫药理学方法与技术简介
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第一章现代药理学实验方法与技术简介第一节分子生物学试验方法与技术分子生物技术在药理学实验中应用较为广泛,包括核酸分子探针的标记、核酸分子杂交、多聚酶链反应、蛋白印迹杂交技术、cDNA文库、随机分子库技术、外核基因在真核细胞中的表达、转基因动物、人类基因治疗等。
现将更为常用的技术介绍如下:一、核酸分子探针的标记标记核酸分子探针(nucleic acid probe)是进行核杂交的基础,根据核酸分子探针的来源及性质进行选择,选择的基本原则是具有高度的特异性,探针选择直接影响杂交结果的分析。
根据检测对象和目的不同,,可选择不同的探针种类及标记方法。
㈠探针种类1.基因组DNA探针是克隆化的各种基因片断,也是最常用的核酸探针,探针应尽可能选用基因编码(外显子),避免使用内含子及其它非编码序列。
2.cDNA探针与mRNA互补的DNA链称cDNA,是一种较为理想的核酸探针,特异性较高。
3.RNA探针RNA与RNA或DNA杂交体的探针稳定性,特异性高。
4.寡核苷酸探针人工合成寡核苷酸片段做探针,可根据需要合成相应序列。
㈡标记物常用的探针标记物有两类:放射性同位素和非放射性同位素。
标记物的检测具有高度灵敏性和特异性。
标记和探针结合不影响杂交的特异性和稳定性。
其中放射性同位素是应用最多的探针标记物,但易造成放射性污染,多数同位素的半衰期短,不能长期存放。
常用的放射性同位素有32P¸3P¸35S,有时也用14C,125I或131I。
二、核酸分子杂交(nucleic acid hybridiazation )是指具有一定同源序列的两条核酸单链在一定的条件下,按碱基互补配对原则形成异质双链的过程。
核酸分子杂交是分子生物学领域应用最广泛的技术,灵敏度高、特异性强,主要用于特异DNA或RNA的定性定量检测。
三、聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是一种体外酶促扩增特异DNA片段的方法。
免疫学在生物学、医学、药学等领域的应用
1、在医学中的应用
免疫学的发展及其向医学各学科的渗透,产生了许多免疫学分支学科和交叉学科
1免疫学的纵向发展:由单一层次发展到多层次,群体免疫学、个体免疫学、细胞免疫学、分子免疫学、原子免疫学;
2免疫学的横向发展:由单一学科发展成多分支多边缘的学科免疫化学、免疫生物学、免疫生理学、免疫病理学、免疫遗传学、免疫血清学、分子免疫学、免疫组织学、免疫药理学、免疫毒理学、临床免疫学、免疫血液学、移植免疫学、肿瘤免疫学、生殖免疫学、神经免疫学、营养免疫学、神经内分泌免疫学、免疫分类学、数学免疫分类学、光免疫学、免疫酶学、免疫生物工程这些分支学科的研究极大地促进了现代生物学和医学的发展;免疫学的发展必将在恶性肿瘤的防治、器官移植、传染病的防治、免疫性疾病的防治、生殖的控制,以及延缓衰老等方面推动医学的进步;
2、在生物科学研究中的应用
免疫学技术的发展,为生命科学的研究提供了有力的手段;单抗的应用给生物科学的发展带来了突破性的变革;免疫组化技术与分子杂交技术的结合,使得对基因及其表达的研究可达到定量、定性、定位的程度;二十世纪前后,免疫学在抗感染方面的巨大成功,促进了生物制品产业的发展;人工主动免疫和被动免疫的应用,有力地控制了多种传染病的传播;在过去的几十年中,免疫学的巨大进展在更深的层次和更广阔的范围内,推动了生物高技术产业的发展;用细胞工程产生的单克隆抗体用基因工程产生的细胞因子为临床医学提供
了一大类具有免疫调节作用的新型药物;。
免疫药理学药物对免疫系统的调节免疫系统作为人体的天然防御机制,对抗外界的病原体和有害物质起着重要作用。
然而,有时免疫系统可能会出现过度活跃或抑制不足的情况,导致一系列免疫相关疾病的发生。
为了调节免疫系统的功能,科学家们研发出了一系列免疫药理学药物,并取得了显著的疗效。
一、免疫抑制剂的应用免疫抑制剂是一类药物,旨在降低免疫系统的活性,从而减少对自身正常组织的攻击。
这类药物通常在器官移植术后使用,以防止机体发生排斥反应。
常用的免疫抑制剂包括环孢素A、他克莫司等。
这些药物通过抑制T细胞的功能,减少免疫反应的程度,从而延长移植器官的存活时间。
二、免疫增强剂的作用与免疫抑制剂相反,免疫增强剂旨在增强免疫系统的反应能力,以对抗病原体的入侵。
这类药物对于免疫系统低下或免疫功能衰竭的患者尤为重要。
目前,常见的免疫增强剂包括重组人干扰素和白细胞介素等。
它们能够促进免疫细胞的活化和增殖,增强机体对病原体的清除能力。
三、免疫调节剂的疗效免疫调节剂是一类既可以抑制免疫系统反应,又能增强免疫系统功能的药物。
这类药物在治疗自身免疫性疾病、免疫性肿瘤等方面有着广泛应用。
常见的免疫调节剂包括环孢素A和MTX等。
它们能够修复机体的免疫平衡,调节免疫反应的程度,使免疫系统恢复正常功能。
四、免疫抗炎剂的研究进展免疫抗炎剂作为免疫药理学的热点研究领域,旨在抑制和调节炎症反应。
免疫抗炎剂有望在治疗自身免疫性疾病、炎症性肠病等方面发挥重要作用。
目前,研究人员发现了一系列免疫抗炎剂的候选药物,并进行了临床试验。
这些药物能够抑制炎症因子的释放,减轻组织损伤,对改善免疫系统功能具有潜在疗效。
五、免疫药理学药物的副作用尽管免疫药理学药物在调节免疫系统方面起到重要作用,但仍然存在一定的副作用。
免疫抑制剂可能导致感染和肿瘤发生率的增加,而免疫增强剂可能引起免疫系统的过度兴奋,导致自身免疫疾病的发生。
因此,在使用免疫药理学药物时,医生需要权衡利与弊,合理规划治疗方案,并密切监测患者的状况。
中药抗肿瘤药理常用的技术和方法1. 细胞毒性实验:使用各种肿瘤细胞株进行细胞毒性实验,观察中药抗肿瘤药理的抑制效果。
2. 免疫荧光染色:通过免疫染色技术观察中药对肿瘤细胞的免疫活性和杀伤作用。
3. 病理切片观察:采用组织病理切片技术观察患有肿瘤的动物组织在给药后的变化,评估中药对肿瘤组织的影响。
4. Western blot分析:通过Western blot技术检测中药对肿瘤相关蛋白的表达和信号通路的影响。
5. 内源性酶活性测定:测定肿瘤细胞中相关内源性抗氧化酶的活性,评估中药的抗氧化和抗肿瘤效果。
6. 荧光素酶报告基因实验:构建荧光素酶报告基因的肿瘤细胞株,检测中药对基因表达的影响。
7. 流式细胞仪分析:利用流式细胞仪观察中药对肿瘤细胞周期、凋亡和增殖率的影响。
8. 分子对接模拟:利用计算机辅助模拟技术,预测中药分子与肿瘤相关蛋白的结合模式和亲和力。
9. 组织工程技术:将中药与支架材料结合,应用于三维细胞培养系统,模拟体内环境评估抗肿瘤作用。
10. 核磁共振成像:利用核磁共振成像技术观察中药对肿瘤动物模型的瘤内代谢和组织学变化。
11. 质谱分析:通过质谱技术分析中药提取物中的化学成分,寻找对肿瘤有效的活性成分。
12. 体内药代动力学研究:通过体内实验及药代动力学参数研究中药的吸收、分布、代谢和排泄特性。
13. 乙醇沉淀法提取:采用乙醇沉淀法提取中药有效成分,评价其抗肿瘤药理活性。
14. 超声辐照提取:利用超声波技术辐照中药提取,增加有效成分的释放率和药效。
15. 气相色谱-质谱联用技术:结合气相色谱和质谱技术对中药成分进行分析和鉴定。
16. 纳米载体技术:利用纳米技术将中药有效成分载入纳米载体,提高其生物利用度和靶向性。
17. 载脂蛋白封装技术:利用载脂蛋白封装技术提高中药有效成分的稳定性和药效。
18. 化学修饰法:通过化学修饰改善中药的药物性质,提高其抗肿瘤效果。
19. 双荧光素酶报告基因激活实验:构建双荧光素酶报告基因激活体系,评估中药对肿瘤相关基因的调控作用。
药理学常见实验操作方法药理学是研究药物在生物体内的活性、代谢、毒性和药物与生物体之间的相互作用等问题的学科。
药理学实验是药理学研究的重要手段,通过实验可以研究药物的药效、药代动力学、药物的药理作用和机制等方面的问题。
下面将介绍一些药理学常见的实验操作方法。
1. 细胞培养实验:细胞培养实验是研究药物对细胞的作用的一种常见的药理学实验方法。
首先需要选择合适的细胞系进行培养,如癌细胞、原代细胞等。
接下来,将药物加入到细胞培养基中,观察药物对细胞的影响,如细胞的增殖、凋亡、分化等。
可以使用细胞形态学方法、免疫组化、蛋白质分析等技术手段来评估药物对细胞的影响。
2. 动物实验:动物实验是研究药物在整个生物体内的药效和毒性的重要手段。
常见的动物实验包括药物的急性毒性实验、慢性毒性实验、药物代谢动力学实验、药效学实验等。
首先需要选择合适的动物模型,如小鼠、大鼠、猴子等。
然后,将药物给予动物进行观察和检测,如观察动物的行为、记录动物的生理指标、取动物组织样本进行药物浓度测定等。
3. 体外药物解剖学实验:体外解剖学实验是研究药物在体内分布、转化和代谢的重要手段。
常见的体外实验包括药物的分配实验、药物代谢实验、药物排泄实验等。
该实验通过收集和分析体内样本(如血液、尿液、组织)中的药物浓度以及代谢产物的浓度来评估药物在体内的代谢和排泄情况。
使用的方法包括液相色谱质谱联用技术、高效液相色谱技术、放射性同位素标记技术等。
4. 离体器官实验:离体器官实验是研究药物在特定器官上的药理作用的一种常见实验方法。
常见的离体器官实验包括离体心脏实验、离体肠段实验、离体骨骼肌实验等。
该实验将动物的某个器官取出,放置在体外培养液中,然后加入药物进行实验。
通过记录器官的生理活动的变化来评估药物对该器官的作用。
以上是药理学常见的一些实验操作方法,这些实验方法可以帮助研究人员深入了解药物的药理学特性和作用机制。
当然,在进行这些实验时,也需要遵守实验操作规范,保护实验动物的权益,确保实验结果的准确性和可靠性。
病理学研究的新方向和新方法病理学是医学领域中的一门重要学科,其主要研究疾病的发生、发展和变化规律,为临床医学提供重要的诊断依据和治疗方案。
随着科技的不断进步和研究的深入,病理学研究也在不断发展,涌现出了许多新方向和新方法。
一、分子病理学分子病理学是病理学的一个新的研究方向,它通过研究疾病的分子机制和分子表达模式,揭示疾病的发生和发展的本质。
分子病理学的研究方法主要包括PCR技术、基因芯片技术、蛋白质组学技术等。
分子病理学的应用范围广泛,可用于疾病的早期诊断、治疗和预后判断。
二、免疫病理学免疫病理学是病理学中的一个重要分支,它研究免疫系统对于疾病的应答和作用,以及免疫系统本身的疾病。
免疫病理学的研究方法主要包括免疫组化技术、流式细胞术等。
免疫病理学的应用范围广泛,可用于疾病的诊断、治疗和预后判断。
三、计算机辅助病理学计算机辅助病理学是一种新的病理学研究方法,它将计算机技术应用于病理学研究中,通过数字化图像处理、数字化病理学技术等,提高疾病的诊断准确性和效率。
计算机辅助病理学的应用范围广泛,可用于疾病的诊断、治疗和预后判断。
四、组织工程学组织工程学是一种新的病理学研究方法,它将细胞学、材料学和工程学等多个学科技术应用于病理学研究中,重点研究组织细胞的发育、生长和再生机制。
组织工程学的研究方法主要包括细胞培养技术、生物材料技术等。
组织工程学的应用范围广泛,可用于疾病的治疗和再生医学等领域。
五、药理学药理学是病理学中的一个重要分支,它研究药物对于疾病的治疗和预防作用,以及药物的代谢和毒性作用等。
药理学的研究方法主要包括药物筛选技术、药物代谢动力学等。
药理学的应用范围广泛,可用于疾病的治疗和预防等领域。
六、系统病理学系统病理学是病理学中的一个新的研究方向,它将病理学与系统科学相结合,研究疾病的系统性和整体性,以及疾病与生物环境的相互关系。
系统病理学的研究方法主要包括数学建模、计算机模拟等。
系统病理学的应用范围广泛,可用于疾病的预防和治疗等领域。
international immunopharmacology写作模板标题:国际免疫药理学的研究进展导言:国际免疫药理学研究随着现代医学的发展而日益增加,对于探索新药物及治疗方法具有重要意义。
本文将介绍国际免疫药理学的研究进展,包括其定义、应用领域、研究方法和最新成果。
一、定义:国际免疫药理学研究免疫系统与药物相互作用的学科。
它通过研究免疫系统对药物的反应,来探索药物对免疫功能的调节作用,以及免疫学在药物研发中的应用。
二、应用领域:国际免疫药理学研究的应用领域广泛。
首先,它在免疫疾病的治疗方面发挥重要作用,如自身免疫疾病、感染性疾病等。
其次,它对于免疫药物研发和临床应用具有指导意义,帮助科学家更好地理解和利用免疫系统。
此外,它还在免疫细胞治疗、免疫调节药物等领域有广泛应用。
三、研究方法:国际免疫药理学的研究方法包括体内实验和体外实验。
体内实验通过动物模型研究,观察免疫系统的反应与药物治疗效果。
体外实验则利用细胞培养和分子生物学技术,研究药物对免疫细胞的影响和免疫相关分子的表达。
四、最新成果:国际免疫药理学的最新成果让我们对免疫系统的调控有了更深入的了解。
例如,免疫检查点抑制剂被广泛应用于肿瘤治疗,通过抑制免疫抑制分子的功能,增强机体的免疫应答。
此外,免疫疫苗和免疫细胞治疗在免疫药理学的研究中也取得了重大突破。
结论:国际免疫药理学的研究对于理解免疫系统的功能及其与药物相互作用具有重要意义。
未来,我们可以预见,随着科学技术的进步,免疫药理学将为药物研发和免疫疾病治疗提供更多创新的解决方案。
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标题:国际免疫药理学研究的意义和前景引言:国际免疫药理学是对免疫系统与药物相互作用进行研究的学科,它在医药领域具有重要的意义。
本文将探讨国际免疫药理学的研究意义和前景,并回答以下几个问题:什么是免疫药理学?为什么国际合作在免疫药理学研究中很重要?免疫药理学的未来发展方向有哪些?一、免疫药理学的定义和重要性免疫药理学是研究免疫系统和药物之间相互作用的学科。
它通过研究药物对免疫系统的影响,可以帮助我们了解药物对免疫系统的调节作用,从而开发和改进治疗免疫相关疾病的药物。
免疫药理学的研究对医药领域具有重要意义。
首先,它可以帮助我们理解药物在免疫系统中的作用机制,从而为研发新型药物提供理论依据。
其次,免疫药理学的研究可以提高现有药物的疗效和安全性,从而改善临床治疗效果。
最后,免疫药理学的研究也有助于我们了解免疫系统的正常功能和异常反应,从而为预防和治疗免疫相关疾病提供新的思路和方法。
二、国际合作在免疫药理学研究中的重要性国际合作在免疫药理学研究中扮演着重要的角色。
首先,国际合作可以促进研究成果的共享和交流。
不同国家和地区的科学家在各自的研究领域有独特的经验和专长,通过合作可以互补优势,提高研究的深度和广度。
其次,国际合作可以加强研究的可重复性和可信度。
通过多中心、多样本的研究设计,可以验证和复制研究结果,从而提高研究的可靠性。
最后,国际合作还可以加强人员培训和技术交流,培养更多的免疫药理学研究人才。
三、免疫药理学的未来发展方向免疫药理学的未来发展方向主要包括以下几个方面:一是基于免疫监测的治疗策略。
通过免疫监测技术,可以实时了解患者免疫状态以及药物对免疫系统的影响,从而个体化、精准化地制定治疗策略。
二是免疫药物的创新研究。
随着对免疫系统的研究不断深入,我们可以探索和开发更多的靶向免疫系统的药物,提高治疗效果和降低不良反应。
基础医学概论免疫学基础理论免疫学发展简史(一)免疫学的诞生免疫学是在人类与传染病斗争的过程中发展起来的。
人们在长期实践中看到有很多流行性疾病,如麻疹、天花等,患病康复后很少第二次感染。
免疫学于18世纪末开始,至今经历了三个发展阶段:免疫学形成阶段(16世纪—18世纪末)▪16世纪(明朝)中国医生首先实践用人痘痂皮接种青少年预防天花▪18世纪传到亚洲、欧洲各国▪18世纪末,英国医生Jenner首次发明牛痘预防天花。
▪免疫学诞生▪Vaccination(种痘)定为人计划“免疫接种”Edward Jenner (1749-1822年) ,13岁在Sodbury学医8年,1792年荣获医学博士学位。
1796年5月14日他从挤奶女工接触牛痘而不生天花这一现象得到了启发,把牛痘的脓泡液接种于健康的男孩,待反应消退之后再用同样方法接种天花,男孩不再发病。
1798年他发表了开创新纪元的牛痘疫苗的报告。
这一发现当时被称为Jenner牛痘疫苗接种,是人们与天花奋斗长达200年之久的最重要的武器。
1980年5月8日在日内瓦召开的第33届世界卫生大会(WHA)上宣布全球消灭天花。
在免疫科学真正确立之前,Jenner的贡献是巨大的,所以人们通常把免疫学的起源归功于他。
免疫学实验研究阶段(19世纪末—20世纪中)▪实验室发明人工培育疫苗▪Pasteur(法)微生物学、免疫学创始人▪1880年鸡霍乱(巴氏杆菌)弱毒菌苗▪1882年狂犬病病毒弱毒疫苗Louis Pasteur 巴斯德(1822-1895年)是一位法国化学家、微生物学家和免疫学家。
1880年他发现鸡霍乱杆菌的陈旧培养物能预防鸡霍乱的感染,首先创造了减毒疫苗。
为了纪念一个世纪前Jenner的功勋,他将这种方法称之为预防接种(vaccination),并将这种制剂称之为疫苗(vaccine),相继他又创造了炭疽杆菌减毒疫苗,狂犬病的减毒疫苗,兴起了主动免疫的方法(active immunization)。
international immunopharmacology写作模板-回复这是委托写作的题目模板,主题是国际免疫药理学。
下面是一个可能的写作模板,用于回答这个问题:[引言]国际免疫药理学是研究免疫系统与药物相互作用的学科,它的重要性越来越被人们认识到。
本文将探讨国际免疫药理学的定义、研究方法和一些重要的应用实例。
[定义]国际免疫药理学是研究免疫调节及其相关药物的作用机制和效应的学科。
免疫系统对于维持人体健康起着至关重要的作用,因此,了解免疫系统与药物的相互作用有助于开发新的药物治疗方案,提高药物疗效,甚至预防疾病的发生。
[研究方法]国际免疫药理学的研究方法主要包括体外试验、动物模型和临床试验。
体外试验是通过细胞培养或体外回路模拟人体免疫系统的反应,用于研究药物的抗炎、抗肿瘤和免疫调节作用等。
动物模型是在实验动物中模拟人体疾病情况,用于研究药物的疗效和机制。
临床试验则是在人体中进行的实验研究,用于评估药物的安全性和疗效。
[应用实例]国际免疫药理学在临床应用中有着重要的意义。
例如,针对自身免疫疾病的治疗,如类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮等,可以通过免疫调节药物来减轻炎症和改善症状。
同时,免疫药理学在肿瘤治疗中的应用也非常重要,某些药物可以通过增强免疫系统的抗肿瘤功能来抑制肿瘤的生长。
此外,免疫药理学还可以用于疫苗研发,例如,通过药物辅助疫苗可以增强免疫反应,提高疫苗的免疫效果。
[结论]国际免疫药理学是一门十分重要的学科,它研究免疫系统与药物的相互作用,为开发新的治疗方案提供了重要的理论和实践基础。
未来,随着科学技术的不断进步,国际免疫药理学将在预防和治疗疾病方面发挥越来越重要的作用,为人类的健康做出更大的贡献。
[参考文献](列出本文引用的参考文献)。
医学免疫药理学基础知识项操作医学免疫药理学是一门关于人体对病原体的抵抗和治疗机制的学科。
通过药物的干预,可以有效加强人体免疫系统的防御功能。
本文将介绍医学免疫药理学的基础知识,以及相关的实验操作。
一、免疫系统的基础知识人体的免疫系统是由一系列不同的细胞和分子组成的。
其中,主要的免疫细胞包括T细胞、B细胞、巨噬细胞和自然杀伤细胞。
这些细胞可以分别执行不同的免疫功能,包括识别和攻击外来病原体、产生抗体以及清除已受损细胞等。
为了确保免疫系统能够正常地运作,还需要有一些重要的分子和信号通路。
这些分子包括白细胞介素、细胞因子、趋化因子等。
它们能够在免疫系统的各个环节中发挥重要作用,促进免疫细胞之间的相互作用和通讯。
二、免疫药理学的基础知识免疫药理学是一门探讨药物干预免疫系统的学科。
在免疫药理学中,常见的药物包括免疫抑制剂、免疫调节剂、免疫增强剂等。
它们能够影响免疫系统的各个环节,从而在治疗疾病和预防感染方面发挥重要作用。
在免疫药理学的研究中,药物的药效和毒性是非常重要的关注点。
药效是指药物对免疫系统的影响程度,包括免疫细胞的活化或抑制、细胞因子的产生和分泌等。
毒性是指药物对人体的有害反应,包括免疫功能的下降、免疫器官的损伤等。
充分了解药效和毒性是确保药物安全和有效的关键。
三、实验操作1. 细胞培养实验细胞培养技术是免疫药理学中常用的实验操作之一。
在细胞培养实验中,首先需要准备需要研究的免疫细胞来源,比如从小鼠的骨髓或人类的外周血中分离出淋巴细胞。
然后将这些细胞种植在适合的培养基中,并添加相应的生长因子和激活剂,以诱导细胞的活化或增殖。
最后可以通过检测细胞表面标记分子或细胞因子的产生等方式,对细胞的活化效果进行评估。
2. 动物实验动物实验是免疫药理学中不可或缺的实验技术之一。
主要的动物模型包括小鼠、大鼠、兔子等。
在动物实验中,研究者可以通过给动物注射药物、感染病原体等方式,模拟人体免疫反应或治疗疾病。
在实验过程中,需要注意动物福利、安全防护等问题,遵守相关的伦理法规。
免疫组化操作规程及操作流程免疫组化技术是一种常用的细胞和组织学研究方法,广泛应用于病理学、生物学、药理学等领域。
下面将详细介绍免疫组化操作规程及操作流程。
一、实验前准备1.准备实验所需的试剂和试验设备,包括抗体、缓冲液、加标物、显色剂等。
2.检查免疫组化试剂的有效期,确保试剂的质量。
二、标本处理1.收集组织标本,如活检样本或动物组织。
2.快速处理标本,迅速取出,并选择适当的处理方法,如固定、包埋等。
3.处理过程中要避免标本的冻融、干燥等。
三、抗原回复1.对于经过固定的组织标本,使用抗原回复方法来恢复组织标本中的抗原活性。
2.选择适当的抗原回复方法,如热处理、酶解等。
四、非特异性结合阻断1.使用非特异性抗血清或蛋白质来阻断非特异性结合位点。
2.使非特异结合抗体活性降低,减少假阳性结果。
五、抗体处理2.优化抗体浓度,确保抗体与标本中的抗原结合。
3.对于特定抗体,可以进行荧光标记或酶标记等。
六、免疫组织染色1.用适当的缓冲液稀释抗体,并将其应用于组织标本上。
2.根据实验需求选择适当的孵育时间和温度。
3.利用显色剂或荧光显像剂对标本进行染色。
七、显微镜观察与分析1.将染色后的标本放置在显微镜下观察,并选择适当的增强荧光信号方法。
2.结合相关的正对照和负对照进行结果分析,确定一些蛋白质在组织中的表达情况。
3.分析结果并记录数据。
八、结果分析与报告1.根据观察结果,分析样本中目标抗原的表达情况。
2.比较不同样本之间的差异,得出结论并撰写实验报告。
九、实验后处理1.清洗使用过的实验工具和材料,避免交叉污染。
2.妥善处理废弃物和化学品,根据实验室内相应的安全操作规范进行处理。
实验药理学期中总结一、实验药理学概论1.实验药理学的研究内容:①药物的药理作用的试验研究②药物作用机理的实验研究③药理学实验技术④药理学试验设计⑤实验结果的分析2.实验药理学的研究目的就是通过探讨药理学实验的特点和规律,使药理学实验符合科学、规范、准确的要求,能够有效地解决药理学研究中的实际问题,为药理学研究提供合理方法和技术保障。
3.实验药理学的特点主要表现为:①以药理学的要求为核心研究实验技术和方法②采用各种可以解决药理学科学问题的技术和方③实验药理学的发展依赖于多学科的发展④实验药理学的核心是创造性的将各种技术方法引入药理学研究中,通过药理学研究实现技术方法的进步和药理学理论的进步。
4.实验药理学的内容是根据药理学的特点进行分类,如:受体药理学,酶药理学,心脏药理学,血管药理学,电生理药理。
分子药理学实验研究5.实验药理学的基本问题1.给药方式:1.1预防给药与治疗给药1.2口服给药与注射(及其他)给药(动物实验)1.3体外实验给药方式:器官实验:药物与器官的接触,药物作用的时间细胞实验:细胞在药物中的暴露时间,药物对细胞生存环境的影响分子水平实验:药物对分子相互作用的影响;药物对生物靶分子的作用2.给药剂量2.1确定药物剂量的基本原则能够反映药物的作用,能够反映药物作用的量效关系,与临床用药密切关联,符合实验要求(如动物给药量,实验环境改变)2.2动物实验给药剂量的确定①动物种属差异②动物接受量的限定(动物胃容量、动物血容量、腹腔注射)③已有药物有效剂量的可能信息(天然产物人用量,已有实验信息等)④合理的计算方法(体重、体表面积等)⑤预实验的必要性(选择适当指标进行多剂量预实验)⑥急性毒性实验(以大剂量进行预实验,最小中毒量、致死量)⑦体外实验的有效浓度(细胞分子水平的实验获得有效浓度,血浆浓度换算)⑧给药途径(口服,静脉注射、腹腔注射、肌肉注射、皮下注射2.3体外实验药物浓度的设定条件 ①一般实验浓度:符合常用药物合理剂量②实验类型(细胞实验、生物化学实验、分子生物学实验)③可能的血药浓度,合理的给药量(10-4M -10-6M -10-9M );(100ug/ml ,10ug/ml ) 2.4体外实验剂量设置(分子水平实验)药物作用的数学模型,对数曲线的制作,剂量的设置 2.5新药体外筛选的剂量设置 分子水平筛选方法-药物期待活性 样品的特点-化合物和混合物 一般剂量设置:10ug/ml ,10-5M 3.动物选择 3.1动物选择的原则①符合研究目的(能够反应所需要的症状) ②反应药物作用(易于观察药物作用) ③药物作用机制与人类相近(利于评价) ④符合实验要求(均一、稳定、背景清楚) ⑤符合动物管理规范 6.实验设计的3要素①实验因素:可能影响实验指标的实验因素 ②实验单元:接受实验处理的对象 ③实验效应:反映实验处理效果的标志 8.实验设计的类型和特点 方差分析--单因素方差分析方差分析--两因素等重复实验的方差分析回归分析:一元线性回归分析:回归系数的最小二乗估计;一元非线性回归分析;多元线性回归分析①正交设计:正交表是正交试验设计的工具,根据均衡分散思想,运用组合数学理论在拉丁方和正交拉丁方的基础上构造的一种表格 交互作用的正交实验设计 多指标实验 ②参数设计三次设计:系统设计,参数设计,容差设计稳健设计:减少波动,寻找使得质量波动达到最小的可控因素的水平组合 灵敏度设计③均匀设计:全面实验法;均匀设计表;使用表二、膜片钳原理技术膜片钳技术的关键是吸管与细胞膜的封接以及电流的测量。
实验药理学实验药理学是一门研究药物作用机制和药物相互作用的学科,其广泛应用于新药研发、药物评价、药物治疗等领域。
以下是实验药理学的主要内容:1.药理学实验方法:药理学实验方法包括体内实验和体外实验两种。
体内实验主要是利用动物进行药物作用机制和药物相互作用的观察和研究,而体外实验则是在细胞、组织或器官等离体条件下进行药物作用机制和药物相互作用的观察和研究。
2.药效学实验:药效学实验主要是研究药物对机体的作用机制和药理效应,包括药物的抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗病毒等方面的作用机制和药理效应。
3.药代动力学实验:药代动力学实验主要是研究药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄等过程及其动力学特征,为药物的合理设计和优化提供依据。
4.药物安全性评价:药物安全性评价主要是对药物的安全性和不良反应进行评估和预测,包括药物的急性毒性、亚急性毒性、慢性毒性、致畸性、致突变性等方面的评价。
5.药物制剂学实验:药物制剂学实验主要是研究药物的剂型设计、制备工艺和质量控制等方面的理论和实践,为药物的研发和生产提供技术支持。
6.药物分析学实验:药物分析学实验主要是对药物进行分析和检测,包括药物的定性定量分析、杂质检查、稳定性考察等方面的实验方法和技术。
7.遗传毒性实验:遗传毒性实验主要是研究药物对遗传物质的损伤作用及其对后代的影响,包括基因突变、染色体畸变等方面的观察和研究。
8.免疫毒性实验:免疫毒性实验主要是研究药物对机体免疫系统的损伤作用及其对免疫功能的影响,包括免疫抑制、免疫增强等方面的观察和研究。
9.细菌毒性实验:细菌毒性实验主要是研究药物对细菌的抗菌作用及其对细菌耐药性的影响,包括抗菌谱测定、最低抑菌浓度(MIC)测定等方面的实验方法和技术。
10.病毒毒性实验:病毒毒性实验主要是研究药物对病毒的抑制作用及其对病毒复制的影响,包括抗病毒谱测定、治疗指数等方面的观察和研究。
11.寄生虫毒性实验:寄生虫毒性实验主要是研究药物对寄生虫的作用机制和药理效应,包括抗寄生虫谱测定、最低致死浓度(MLC)测定等方面的实验方法和技术。
第六节免疫药理学实验方法与技术简介
免疫药理学是介于免疫学和药理学间的边缘学科,主要研究药物对机体免疫系统和免疫功能的作用及其机制,为某些疾病药物治疗提供理论基础。
免疫药理学方法一般是采用体外的试管内研究和体内的整体研究相结合,体外试验研究可澄清药物对免疫应答某一特定环节如T细胞增殖、细胞因子等产生的具体影响,而整体研究则可探讨药物对抗原介导的的免疫应答、正常的体液免疫及细胞免疫功能、同种异体移植排斥反应、异常免疫应答如超敏反应和自身免疫病以及初次及再次免疫应答等的影响。
在未来免疫药理学的研究领域中,基因工程、基因治疗、细胞因子治疗以及其它各种生物治疗的研究和应用将是研究的热点和前沿区域。
一、免疫细胞的分离与纯化
体内外的免疫药理学实验研究都需要从动物或人的血液或淋巴组织中分离免疫细胞,获得高纯度的免疫细胞是进行本研究的最基本的前提条件。
外周血中白细胞的分离常用自然沉降法和高分子聚合物沉降法;外周血单个核细胞(peripheral mononuclear cells,PMNC)分离多采用密度梯度离心法。
从淋巴组织中分离淋巴细胞悬液---制备脾细胞悬液、淋巴结细胞悬液、胸腺细胞悬液。
淋巴细胞的分离纯化包括:①分离PMNC中的淋巴细胞和巨噬细胞常用方法有玻璃粘附法、磁铁吸引法、羰基铁乳胶分层液法、补体溶解法及葡聚糖凝胶过滤法等。
②T细胞、B 细胞及T细胞亚群的分离纯化常用技术:E花结分离法、Percoll非连续性密度梯度离心分离法、洗淘法(panning)、补体细胞毒法、尼龙毛分离法、磁性激活细胞分离器(magnetic activated cell sorter,MACS)分离技术及流式细胞术(flow cytometry,FCM)。
二、药物对免疫系统功能影响的实验技术简介
1、对免疫细胞表面抗原分子的影响对细胞表面的CD(cluster of differentiation,分化簇)抗原的检测与分析可通过细胞毒法、葡萄菌体蛋白A法、免疫细胞化学法和免疫荧光染色分析法等,借助流式细胞仪进行的免疫荧光染色分析法使该项技术的标准化、定量化和自动化水平大大提高,体内外药理试验均可采用之。
2、对免疫细胞功能的影响常用:3H-TdR掺入试验、固相抗CD3单克隆抗体诱导细胞增殖的检测、混合淋巴细胞反应、抗原刺激的T细胞增殖反应、预激淋巴细胞对抗原的增殖反应等。
3、淋巴细胞功能的体内实验小鼠接触性超敏反应、移植物抗宿主反应(graft-versus-host disease,GVHD)、迟发性超敏反应(delayed-type hypersensitivity,DTH)、体内检测T H细胞活性。
4、对B细胞影响的体内外实验血清中IgG、IgA、IgM的测定(单向免疫扩散法、散射比浊法);抗体生成细胞检测(溶血空斑试验、溶血分光光度法)。
5、对单核巨噬细胞功能的影响实验巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验、白色念珠菌3H葡萄糖掺入实验、单核巨噬细胞对肿瘤细胞的细胞毒反应测定、单核因子测定等。
6、对超敏反应影响的体内外实验总IgE水平测定:酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、放射免疫单扩散法(radioactive single radial diffusion,RSRD)、免疫斑点法(dot immunobinding assay,DIBA)、反向被动血凝法(reversed passive hemagllutination assay,RPHA)、纸片放射免疫吸附试验(paper radio immunosorbent test,PRIST)。
特异性IgE抗体测定:ELISA、放射过敏原吸附试验(radioallergosorbent test,RAST)、P-K试验、被动皮肤过敏反应(passive cutaneous anaphylaxis,PCA)、皮内试验(intradermal test)。
人外周血单个核细胞体外合成IgE的测定:微量固相放射免疫测定法(microtiter solid-phase
radioimmunoassay,MSPRIA)和ELISA法。
参与I型超敏反应介质的测定:相应介质试剂盒测定,如LTs试剂盒。
动物模型:如过敏性哮喘模型等。
三、影响免疫功能的药物药效学研究原则
根据药物对免疫功能的影响进行分类,可分为免疫增强剂、免疫调节剂和免疫抑制剂。
1、免疫增强剂和免疫调节剂的免疫药理学研究
免疫增强剂和免疫调节剂可分为两大类:生物类和化学合成化合物类。
生物制品类包括菌苗、细菌的某些成分如脂多糖、真菌产物、免疫细胞的产物如细胞因子和免疫球蛋白、免疫细菌如LAK细胞、自然化合物及中草药及其单体成分等。
化学合成化合物类包括含硫化合物、多聚核苷酸等。
这些药物的药理作用因用药方案不同,如给药途径、用药剂量和用药时间等,会导致不同的药效;另外,药物本身的纯度和药物受试对象的种系、年龄、疾病类型与程度及遗传背景亦会对药效产生一定的影响,因此,在进行实验设计时要全面考虑这些因素。
临床上免疫增强剂和免疫调节剂主要用于原发性和继发性免疫缺陷病、自身免疫病、
肿瘤及慢性微生物感染的治疗,故选择实验动物模型时,应考虑采用免疫缺陷模型动物、荷
瘤动物、自身免疫病模型及相应病原体感染动物模型。
2、免疫抑制剂的免疫药理学研究
免疫抑制剂的筛选程序一般是先进行体外实验,然后进行体内实验。
动物的体内实验多采用
实验性过敏性脑脊髓炎和淋巴细胞性脉络丛脑膜炎的病理模型和新西兰NZB小鼠。
在动物
实验时,应考虑动物的品系、对免疫应答所影响的环节、治疗指数、给药途径、最佳治疗方
案等。
在免疫药理学研究之后,还应进行基础药理学研究、药物的急性和慢性毒性研究、药
物的动力学研究等。