耐酸耐热菌的测定

耐热大肠菌群测定的流程英文回答：The process of determining the heat-resistant coliform group involves several steps to ensure accurate and reliable results.1. Sample Collection: The first step in the process is to collect the samples from the environment or the source being tested. It is important to ensure that the samples are collected in sterile containers and under hygienic conditions to prevent contamination.2. Sample Preparation: Once the samples are collected, they need to be prepared for analysis. This may involve homogenizing the sample to ensure an even distribution of microorganisms and diluting the sample to an appropriate concentration for testing.3. Incubation: The prepared samples are then incubatedat a specific temperature for a set period of time. This allows any heat-resistant coliforms present in the sample to grow and multiply, making them easier to detect.4. Enumeration: After the incubation period, the number of heat-resistant coliforms present in the sample is determined. This can be done using various methods such as membrane filtration or most probable number (MPN) techniques.5. Confirmation: To ensure the accuracy of the results, any suspected colonies of heat-resistant coliforms are further tested and confirmed using biochemical and molecular methods.6. Reporting: Finally, the results of the heat-resistant coliform testing are reported, detailing the concentration of coliforms present in the sample and any relevant information regarding the source or environment from which the sample was collected.中文回答：耐热大肠菌群测定的流程包括多个步骤，以确保结果准确可靠。

蓝莓，又称越桔，淡蓝色，果肉细软，多浆汁[1]。

蓝莓果实营养丰富，除含有常规的矿质元素外，还富含熊果苷、花青苷和SOD[2]，被誉为“浆果之王”[3]，很受消费者欢迎[4]。

根据耐酸耐热菌的特性研究[5-9]，采用不同的培养基培养，从蓝莓果浆中分离出耐酸、耐高温的纯菌并对耐酸耐高温菌的生长条件进行分析，确定耐酸耐高温菌的加热条件及pH值范围，并运用传统的微生物鉴定方法和分子生物学鉴定方法以及微生物生化反应鉴定对耐酸耐高温菌进行鉴定。

1　材料与方法1.1　材料蓝莓果磨成果浆，市售。

1.2　主要试剂1.2.1　试剂0.85%无菌生理盐水、革兰氏染色试剂、pH计校正液、1 mol/L稀盐酸溶液。

1.2.2　培养基平板计数琼脂（PCA）：青岛高科园海博生物技术有限公司；MRS培养基：北京陆桥技术有限责任公司；马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）：北京陆桥技术有限责任公司。

酸化K氏培养基：酵母浸膏：2.5 g，蛋白胨：5.0 g，琼脂粉：15 g，葡萄糖：1.0 g，吐温80：1.0 mL。

1.3　仪器与设备本实验所用仪器与设备见表1。

1.4　方法1.4.1　蓝莓果浆中微生物的检测参考GB 4789.2—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验 菌落总数测定》[10]。

取健康、无损伤、成熟度好的新鲜蓝莓果实，将其磨成果浆然后进行梯度稀释，通过平板培养计数法计数菌落总数，以此检验蓝莓中是否存在微生物，以及菌落总数是否超标。

1.4.2　菌株的分离纯化1.4.2.1　微生物的分离纯化用PCA、PDA和MRS 3种培养基，对蓝莓果浆中的菌落进行培养，在36 ℃下培养48 h，观察菌落生长情况，根据菌落形态学特征挑取菌落，经多蓝莓果浆中耐酸耐高温微生物的分离与鉴定□ 李　新　卜　菁　沈静雯　国家轻工业食品质量监督检测南京站摘　要：为了解和控制蓝莓果浆中的耐酸耐菌，采用酸化的凯氏培养基对蓝莓果浆中的耐酸耐热菌进行分离、培养和鉴定。

耐热菌的检测与控制摘要：主要对香辛料进行了耐热菌数量的检测。

试验原理主要参照菌落总数测定法，分别对在常温、70℃、80℃、90℃、100℃水浴1h处理条件下的香辛料进行了耐热菌的测定。

得出的结论为香辛料中存在耐热菌，并根据试验结果分析了如何控制香辛料中的耐热菌。

关键词：耐热菌；香辛料；控制1 前言耐热菌是指在实验型巴氏杀菌温度下可以存活的菌体，乳微细菌、芽孢菌通常可100 ％存活，一些微球菌的耐热性差，产碱杆菌仅有1％～10％存活，链球菌（即粪肠球菌）、乳杆菌和一些棒状杆菌是耐热菌，可在60 ℃下耐受20min ，但仅有1 ％左右的菌株可耐受到63 ℃ 30min ，常见的耐热菌有芽孢菌属芽孢菌，芽孢菌属芽孢菌属是乳中污染的主要的耐热菌种，蜡样芽孢杆菌是许多食品的污染菌种，可引起人的食物中毒，当人体摄入含有大量活菌的食品时即可能引起呕吐、腹泻、肠绞痛等为主要症状的食物中毒，一般在食品中含有105～108 个／g 活菌时就可能引起食物中毒。

耐热菌的检测国际上普遍采用的是美国 KFL (Krueger Food Laboratories，库格食品实验室)或澳大利亚 Berri公司的方法[1-2]，苹果浓缩汁中耐热菌的间接 ELISA（酶联免疫吸附法）快速检测方法[3],傅里叶变换红外光谱(FT-IR)[4]，常规检测培养法，其基本原理是将待检果汁中的微生物富集到无菌滤膜上，然后富集菌的滤膜在选择性培养基上培养4—5d 后菌落计数例[5]。

目前，食品行业中开展耐热菌检测项目的企业为之不多，主要是奶制品、果汁、饼干烘烤类食品企业。

国标中没有耐热菌检测方法，而且国标肉制品里也未限制检测耐热菌。

为进一步保证公司产品质量，保障食品安全，检测中心对易超出菌落总数内控标准的部分产品进行了分析，主要是凉拌产品细菌总数超标，凉拌产品在生产过程中较难控制微生物，工艺较为复杂，综合判断可能是拌制时的香辛料菌落总数不合格，导致产品不合格，所以对香辛料进行了耐热菌的检测。

耐酸耐热菌（库克）的检测方法1 适用范围本方法适用于清汁、浊汁、水和浓缩果汁中的耐酸耐热菌的检测。

2 仪器和试剂2.1 恒温水浴：80±1℃。

2.2 恒温培养箱：40±1℃。

2.3 灭菌培养皿：直径为90mm。

2.4 灭菌试管：18×180mm。

2.5 滤膜：0.45um水系一次性滤膜。

2.6 酵母粉。

2.7 蛋白胨。

2.8 琼脂粉。

2.9 葡萄糖。

2.10 吐温80。

2.11 12.5%苹果酸。

2.12 灭菌蒸馏水。

2.13 K氏培养基平板：在1000ml的三角瓶中放入500ml蒸馏水，加入1.25g酵母粉、2.50g 蛋白胨、6.50g琼脂粉、0.5g 葡萄糖和0.5ml吐温80，使其溶解，轻轻盖上三角瓶的盖子，在121℃灭菌25分钟；在一个小烧杯中加入10ml蒸馏水和1.25克的苹果酸，搅拌直至溶解，将苹果酸的水溶液用0.45um的滤膜过滤，将处理过的苹果酸水溶液加入到灭菌的K氏培养基中，搅拌均匀，使其pH值达到3.7±0.1。

当冷却到大约50℃时，将K氏培养基倾注到培养皿中，凝固后在0-5℃的冰箱中储存，有效期60天，并记录配制日期。

3 操作步骤3.1 样品处理3.1.1 浓缩清汁：打开水浴锅，调整温度到80±1℃。

以无菌操作，取10ml浓缩清汁于15ml灭菌的试管中，再移取10ml浓缩清汁于另一带有温度计的15mL的试管中，作为温度控制用，盖上样品试管的盖子。

将上述样品试管和温度控制试管放在水浴锅中，当温度达到80±1℃，开始计时，维持13分钟（用计时器计时）。

冷却至室温，用90-100ml的灭菌蒸馏水将热处理过的样品转入灭菌容器中，摇匀。

将稀释后的样品溶液用0.45um的滤膜真空过滤。

3.1.2 清汁、水：打开水浴锅，调整温度到80±1℃。

以无菌操作，取150ml清汁（或水）于已灭过菌的玻璃样品瓶中，再移取150ml清汁（或水）于另一带有温度计的玻璃样品瓶中，作为温度控制用，盖上样品瓶的盖子。

耐酸耐热菌的测定(企业内控法)(总4页)页内文档均可自由编辑，此页仅为封面耐酸耐热菌的测定（企业内控法）1、适用范围本方法仅适用于浓缩苹果清汁中耐酸耐热菌的测定。

2、设备和材料2．1、广口三角瓶，250mL、1000mL。

2．2水浴箱：80℃水浴。

2．3、冰箱。

2．4、量筒：50mL。

2．5、灭菌镊子。

2．6、酒精灯。

2．7、培养箱： 50±1℃。

2．8、玻璃铅笔。

2．9、溶剂过滤器。

2. 10、µm滤膜：Ø50mm。

2．11、真空泵。

2．12、温度计。

2．13、培养皿。

2．14、高压蒸汽灭菌锅。

3、培养基和试剂3．1、K氏培养基3．1．1、组成A：酵母浸膏 1.25g蛋白胨 2.50g葡萄糖 0.5g琼脂 7.5g吐温80将上述各种试剂放入1L的三角瓶中,加入500mL的蒸馏水,在电炉上加热溶解后,在121℃高压灭菌20分钟。

3．1．2、组成B：苹果酸 1.25g将苹果酸用10mL的蒸馏水溶解,通过一次性无菌注射器和针头式过滤器连接,将苹果酸溶液过滤到已灭菌的培养基中,混匀。

3．1．3、平板制作当已酸化的K氏培养基温度降至50℃左右时，将其分装倒入已灭菌的培养皿中，待培养基凝固后，用牛皮纸包扎好，放入冰箱中保存，一般可保存60天。

3．2、蒸馏水。

4、检验程序：检样适当稀释80℃水浴13分钟无菌水膜过滤检样膜过滤膜放入平板培养基培养50±1℃ 4天菌落计数报告5、操作步骤5．1、将装有150mL蒸馏水的三角瓶、µm的滤膜、50mL量筒、过滤装置于121℃灭菌15min。

5．2、用已灭菌的50mL量筒取待检浓缩果汁50mL，加入已灭菌的盛有150mL灭菌蒸馏水的三角瓶中，混匀。

5．3将稀释的样品放入80℃的水浴中，同时放置一个带有温度计的控制样，做为温度控制。

观察温度计，待温度升至80℃时开始计时，维持13min，将样品取出并迅速用自来水冷却。

5．4、用已灭菌的µm的滤膜及真空抽滤装置过滤热处理后的果汁,移取抽滤装置的上部,将镊子在酒精灯上灭菌后,用镊子将滤膜移置于预先准备好的K氏培养基上,轻敲滤膜几次,使其与滤膜充分接触。

可乐耐热耐酸菌的检测方法1 介绍浓缩果汁中有时含有导致腐败的芽孢菌，耐酸耐热菌，也叫TAB，它们的特点是：1）能耐热的孢子；2）能耐果汁中的酸；3）能在含有很少量的氧中生长；这个程序描述了检验浓缩苹果清汁（比如苹果）的TAB的检验方法。

2 设备和试剂2.1 设备2.1.1 三角瓶：1000ml。

2.1.2 灭菌的99ml的去离子水的稀释空白。

2.1.3 磁力搅拌棒。

2.1.4 带有搅拌器的加热盘。

2.1.5 塑料注射器：10ml。

2.1.6 注射用的滤膜装置（0.45um）。

2.1.7 灭菌培养皿：90mm。

2.1.8 恒温水浴锅：74-76°C。

2.1.9 恒温培养箱：43±1℃。

2.1.10 广口灭菌吸管：25ml。

2.1.11 一次性的带有螺旋盖子的试管。

2.1.12 可以无菌过滤0.45um的过滤装置。

2.1.13 异丙基酒精。

2.2 试剂2.2.1 酵母粉（VWR DF0127-15）2.2.2 蛋白胨（VWR DF0118-15）2.2.3 琼脂粉（VWR DF0145-17）2.2.4 葡萄糖（VWR EM-DX0145-11）2.2.5 吐温80（VWR JTX 257-7）2.2.6 苹果酸（VWR JTP494-7）3 操作步骤3.1 配制K氏培养基，在一个1升的烧瓶中，加入：3.1.1 去离子水：500-mL3.1.2 酵母粉： 1.25-g3.1.3 蛋白胨： 2.50-g3.1.4 琼脂粉： 7.50-g3.1.5 葡萄糖： 0.50-g3.1.6 吐温80：0.50-mL3.1.7 磁力搅拌装置或者直接购买K氏培养基，按照厂家的说明配制。

3.2 加热使药品充分溶解。

3.3 轻轻的盖上烧瓶的塞子，将培养基在15磅下高压灭菌25分钟。

3.4 在一个小烧杯中加入1.0克的苹果酸和10 ml去离子水，搅拌使其溶解。

3.5 将苹果酸的溶液抽入10ml的一次性塑料注射器中。

耐热大肠菌群方法原理耐热大肠菌群是一类能够在特定温度条件下生长的细菌群体，其检测对于食品安全和公共卫生具有重要意义。

本文将详细介绍耐热大肠菌群检测方法的原理，帮助读者了解这一领域的基本知识。

一、耐热大肠菌群概述耐热大肠菌群是一类能在37℃条件下生长的大肠菌群，主要包括大肠埃希菌、产气肠杆菌等。

它们在一定条件下能够引起食物中毒和水源污染，因此，对耐热大肠菌群的检测是评估食品安全和水质的重要指标。

二、耐热大肠菌群检测方法原理1.乳糖发酵法乳糖发酵法是检测耐热大肠菌群的一种传统方法。

其原理是利用大肠菌群能够发酵乳糖产生酸和气体的特性，通过观察培养基中是否出现酸碱指示剂的颜色变化和气泡产生来判断样品中是否存在耐热大肠菌群。

2.酶联免疫吸附法（ELISA）酶联免疫吸附法是一种基于抗原与抗体特异性结合的检测方法。

该方法通过制备特异性抗体，将抗体固定在酶标板上，待测样品中的耐热大肠菌群抗原与抗体结合，再加入酶标记的二抗，最后通过酶催化底物产生颜色变化来判断样品中耐热大肠菌群的存在。

3.聚合酶链反应（PCR）聚合酶链反应是一种分子生物学方法，通过设计特异性引物，扩增样品中耐热大肠菌群的特异性基因片段。

该方法具有灵敏度高、特异性强、检测速度快等优点，被广泛应用于耐热大肠菌群的检测。

4.实时荧光定量PCR（qPCR）实时荧光定量PCR是在普通PCR基础上发展起来的一种检测方法，通过荧光标记的探针与目标DNA序列特异性结合，实时监测PCR扩增过程中荧光信号的变化，从而实现定量检测样品中耐热大肠菌群的数量。

5.纸片法纸片法是一种简便、快速的检测方法，适用于现场检测。

其原理是将特异性抗体固定在纸片上，待测样品滴在纸片上，若样品中含有耐热大肠菌群，则抗原与抗体结合，通过酶标记的二抗和底物产生颜色变化，从而判断样品中耐热大肠菌群的存在。

三、总结耐热大肠菌群的检测方法有多种，包括乳糖发酵法、酶联免疫吸附法、聚合酶链反应、实时荧光定量PCR和纸片法等。

耐酸耐热菌（库克）的检测方法1 适用范围本方法适用于清汁、浊汁、水和浓缩果汁中的耐酸耐热菌的检测。

2 仪器和试剂2.1 恒温水浴：80±1℃。

2.2 恒温培养箱：40±1℃。

2.3 灭菌培养皿：直径为90mm。

2.4 灭菌试管：18×180mm。

2.5 滤膜：0.45um水系一次性滤膜。

2.6 酵母粉。

2.7 蛋白胨。

2.8 琼脂粉。

2.9 葡萄糖。

2.10 吐温80。

2.11 12.5%苹果酸。

2.12 灭菌蒸馏水。

2.13 K氏培养基平板：在1000ml的三角瓶中放入500ml蒸馏水，加入1.25g酵母粉、2.50g 蛋白胨、6.50g琼脂粉、0.5g 葡萄糖和0.5ml吐温80，使其溶解，轻轻盖上三角瓶的盖子，在121℃灭菌25分钟；在一个小烧杯中加入10ml蒸馏水和1.25克的苹果酸，搅拌直至溶解，将苹果酸的水溶液用0.45um的滤膜过滤，将处理过的苹果酸水溶液加入到灭菌的K氏培养基中，搅拌均匀，使其pH值达到3.7±0.1。

当冷却到大约50℃时，将K氏培养基倾注到培养皿中，凝固后在0-5℃的冰箱中储存，有效期60天，并记录配制日期。

3 操作步骤3.1 样品处理3.1.1 浓缩清汁：打开水浴锅，调整温度到80±1℃。

以无菌操作，取10ml浓缩清汁于15ml灭菌的试管中，再移取10ml浓缩清汁于另一带有温度计的15mL的试管中，作为温度控制用，盖上样品试管的盖子。

将上述样品试管和温度控制试管放在水浴锅中，当温度达到80±1℃，开始计时，维持13分钟（用计时器计时）。

冷却至室温，用90-100ml的灭菌蒸馏水将热处理过的样品转入灭菌容器中，摇匀。

将稀释后的样品溶液用0.45um的滤膜真空过滤。

3.1.2 清汁、水：打开水浴锅，调整温度到80±1℃。

以无菌操作，取150ml清汁（或水）于已灭过菌的玻璃样品瓶中，再移取150ml清汁（或水）于另一带有温度计的玻璃样品瓶中，作为温度控制用，盖上样品瓶的盖子。