肾素(原)受体在大鼠肾小球系膜细胞和大鼠肾脏中的表达

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肾素(原)受体及其与肾脏疾病相关的研究进展

脏病理损伤中起重要作用。ＰＲＲ可以通过促使Ａｎｇ
Ⅱ生成、激活ＭＡＰＫ途径，并上调促纤维化因子的表达，加重肾脏纤维化，最终导致肾脏的损害。到目前为止，ＰＲＲ基因敲除小鼠模型尚未成功
跨膜蛋白，完整的ＰＲＲ由４个部分组成，包括一个氨基信号末端、一个与肾素（原）相结合有关的细胞外部分、一个跨膜信号区和一个短的胞质部分。目前研究认为其有３种不同的分子形式： ① 完整形式的跨膜蛋白； ② 只由跨膜段和胞内段组成的蛋白； ③ 溶解形式的ＰＲＲ（ｓＰＲＲ），存在于血浆及尿液中 ’ 。有研究表明，人体中的ＰＲＲ在心脏、大脑、胎盘中均有较高表达，肝脏、胰腺、肾脏中表达较少，肺部和骨骼肌中表达最少 … 。而在大鼠肾脏中，肾小球的系膜细胞、足细胞、近端小管、远端小管等均发现有ｅｄＲｅｓ．Ｊｕｌ２０１３．Ｖｏ１．４２Ｎｏ．７
肾素（原）受体及其与肾脏疾病相关的研究进展
杜然丁国华
肾素一血管紧张素系统（ｒｅｎｉｎ—ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ
、
肾素（原）受体
ＰＲＲ是由ＡＴＰ６ＡＰ２（ＡＴＰａｓｅ６ａｃｃｅｓｓｏｒｙ

糖尿病大鼠肾脏肾素及其受体表达改变

ＭｅｈｄＴｗｅｖｌＷｉｔｒｒｔｒａｄｍｌｓｉｎｄｔｏｍａｏｔｏｒｕ（＝６ｇｏｐＮ）ｎｉｂｔｃｇｏｐｎ６，ｒｕｔｏｓｌｅｍａｅｓａａｓｗｅｅｒｎｏｙａｓｇｅｏｎｒｌｎｒｌｏｐｎｃｇ，ｒｕａｄｄａｅｉｒｕ（＝ｇｏｐ
Ｔｈｒｔｉｕｉｎｌｍｅｕａ］ｒｎｅｎｄａｅｉｒｔｒｉｎｆａｔｎｒａｅｅｏａｅｏｔｏｅｉｏｍａａｓａｅｐｏｅｎｒａａｄｇｏｒｌｒｉｕｙｉｄｘｉｉｂｔａｓｗｅｅｓｇｉｃｎｌｉｃｅｓｄｗｈｎｃｍｐｒｄｔｈｓｎｎｒｌｒｔｔｎｃｉｙ
心脏取血检测血糖、血肌酐、钠、血血钾；肾脏行Ｐ取ＡＳ染色观察病理改变；疫组化检测肾脏肾素和肾素受体表达水平；ＴＰＲ免Ｒ —Ｃ
检测肾脏肾素和肾素受体ｍＲＮ表达水平。结果ＤＭ组４周始相同时间段尿蛋白较Ｎ组升高（ＡＰ＜００）８周时Ｄ组２．１，Ｍ４ｈ
ＤＭ）Ｓｒｐｏｏｏｉ（０ｍｇｋ）ｓａｍｉｉｔａｅｎｒｐｒｔｎａｌｏｉｄｃｉｂｔｓＵｒｎｒａｉｉｅａｄｐｏｅｎｒａｗｅｅｍｅｓ．ｔｅｔｚｔｃｎ６／ｇｗａｄｎｓｒｔｄｉｔａｅｉｅｌｔｎｕｅｄａｅｅ．ｉｅｃｅｔｎｎｎｒｔｉｕｉｒａ — ｏｙ
ＧＡ０ＺｈａＲＥＮｏ，Ｚｈｉｌｎｇ，ＩＧ —ｏＤＮＧｕｏｈ，ｔａ１ — ｕａｅ．

大黄酸对糖尿病大鼠肾脏还原型辅酶Ⅱ基因表达的影响

大黄酸对糖尿病大鼠肾脏还原型辅酶Ⅱ基因表达的影响黄娟;陈文莉;黄云芳;牛力【摘要】Objective To observe the effect of Rhein on oxidative stress of kidney in diabetic rats. Methods Streptozotocin ( STZ) -induced diabetic nephropathy rats were randomly divided into model group and treatment group. Malondialdehyde (MDA) content and superoxide dismutase (SOD) activity in the rat renal tissues of the two groups were compared six weeks after the treatment. At the same time, blood glucose, serum creatinine, blood urea nitrogen, and 24 h urine protein quantitation were detected. Expression of p22phox and p47phox was determined by RT-PCR. Results Urinary albumin, urea nitrogen level and kidney hypertrophy index were significantly improved in the treatment group, as compared with the model group. Kidney MDA content was decreased significantly ( P<0. 05 ) , and the activity of SOD increased significantly (P<0. 05). As compared with the control group, mRNA expression levels of p47phox and p22phox in the model group were increased significantly, and the expression levels were significantly reduced after Rhein intervention. Conclusion Rhein plays a protective role in type 2 diabetic nephropathy probably through inhibition of oxidative stress in the diabetic rats. Down-regulating p22phox andp47phox expression in type 2 diabetic model rat kidney can protect rat kidney.%目的观察大黄酸对糖尿病大鼠肾脏氧化应激的影响.方法链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病大鼠模型随机分为模型组与治疗组,治疗6周后,比较各组大鼠肾组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,同时检测各组大鼠血糖、血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量等.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测p22 phox及p47phox的表达.结果治疗组较模型组明显改善尿清蛋白、尿素氮水平和肾脏肥大指数.肾脏MDA含量明显下降(P＜0.05),SOD活性显著上升(P＜0.05).与对照组比较,模型组p47phox和p22phox mRNA表达明显增多,大黄酸干预使其表达明显降低.结论大黄酸对2型糖尿病肾脏病变有一定的保护作用,其机制可能是通过抑制氧化应激反应,下调糖尿病大鼠p22phox及p47 phox的表达对2型糖尿病模型大鼠肾脏产生保护作用.【期刊名称】《医药导报》【年(卷),期】2012(031)010【总页数】4页(P1285-1288)【关键词】大黄酸;还原型辅酶Ⅱ氧化酶;糖尿病肾病;氧化应激【作者】黄娟;陈文莉;黄云芳;牛力【作者单位】武汉市中心医院肾内科,430014;武汉市中心医院肾内科,430014;武汉市中心医院肾内科,430014;武汉市中心医院肾内科,430014【正文语种】中文【中图分类】R965糖尿病肾病(Diabetic nephropathy，DN)是2型糖尿病(diabetes mellitus，DM)最常见和最严重的并发症之一，为糖尿病患者病死的主要原因，也是终末期肾衰竭的主要原因。

肾素血管紧张素系统新成员功能与疾病的研究进展

肾素血管紧张素系统新成员功能与疾病的研究进展王俊峰;景兴慧;方晓晓(综述);高原(审校)【摘要】肾素血管紧张素系统（RAS）在机体可以产生一系列的级联效应，共同调控着血压和体液平衡。

其主要成员血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)可在不同的组织中发挥作用，但在肾脏的功能是最主要的，新成员AngⅡ衍生肽在某些酶的催化下不仅与AT1、AT2受体结合，也能与新的受体如MAS和AT4等结合，使经典RAS的走向发生改变。

对于RAS的老成员如肾素、肾素原、血管紧张素转换酶(ACE)等，以前认为它们只具有酶的活性，其实它还能作为由外而内的信号传导分子激活细胞内信号通路。

而且，RAS在不同的组织中不仅具有内分泌功能，它还进行自分泌、旁分泌和细胞内分泌并调控局部AngⅡ的合成，在肾内主要以这些方式调节血压和肾脏的功能。

近年发现，ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴等有很多的保护效应，这将为相关疾病的治疗和新药的开发提供新的前景。

%The renin-angiotensin system (RAS) can produce a series of cascade effects in the body thatregu-lates blood pressure and fluid balance. It's main member angiotensinⅡ(AngⅡ) can play a role in different tissues, but the functionin the kidney is the most important. AngⅡ-derived peptides, a new member of RAS, can bind not only AT1, AT2 receptor, but also the new receptors such as MAS and AT4 under the catalysis of some enzymes, thus changing the routes of RAS. The older members of RAS such as renin, prorenin, angiotensin converting enzyme (ACE), previously considered only having enzyme activity, are able to activate intracellular signaling pathways, acting as an outside-in sig-nal transduction molecule. Moreover, the RAS not only possesses an endocrine function, but also has the ability of auto-crine, paracrine and intracrine in different organizations. Mainly in these ways, it regulate local AngⅡsynthesis in t he kidneys and further regulate blood pressure and renal function. Recently study suggests thatACE2/Ang-(1-7)/Mas axis has a lot of protective effects, which will provide a new prospect for the treatment of related diseases and the develop-ment of new drugs.【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2017(028)002【总页数】4页(P263-266)【关键词】肾素血管紧张素系统;AngⅡ衍生肽;受体;信号通路;治疗【作者】王俊峰;景兴慧;方晓晓(综述);高原(审校)【作者单位】遵义医学院珠海校区生理教研室，广东珠海 519041;遵义医学院珠海校区生理教研室，广东珠海 519041;遵义医学院珠海校区生理教研室，广东珠海 519041;遵义医学院珠海校区生理教研室，广东珠海 519041【正文语种】中文【中图分类】R33肾素血管紧张素系统（RAS）曾经被认为是一个简单的系统，随着经典的生理学、药理学方法与现代基因学、组织化学方法的联合应用，人们对RAS的认识也不断深入，发现它是一个复杂的庞大家族，具有广泛的生物学功能。

中药活性成分调控mTOR信号通路干预糖尿病肾病的研究进展

中药活性成分调控mTOR信号通路干预糖尿病肾病的研究进展Δ贾慧雨1＊，冯志海2 #（1.河南中医药大学第一临床医学院，郑州　450046；2.河南中医药大学第一附属医院内分泌科，郑州　450003）中图分类号 R285文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2023）13-1656-05DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2023.13.22摘要糖尿病肾病（DN）是引起终末期肾病的主要病因之一，发病机制尚不完全清楚，目前认为与高糖条件下自噬紊乱、氧化应激、炎症反应等多种因素介导的肾脏损伤关系密切。

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路是参与蛋白质合成及调节自噬过程的核心通路，在DN的发生发展中起着重要作用。

近年来，中医药防治DN的研究取得了关键性进展。

大量证据表明，中药活性成分可通过调节mTOR信号通路提高自噬水平，改善氧化应激和炎症反应，抑制细胞的凋亡及异常增殖，从而缓解足细胞损伤、肾小球基底膜增厚、系膜组织异常及肾小管功能障碍等肾脏病理改变，减少蛋白尿并改善肾功能，对延缓DN进展具有重要意义。

本文系统总结了中药皂苷类、黄酮类、多酚类、生物碱类、萜类等活性成分通过mTOR信号通路干预DN的研究进展，可为进一步的基础研究和临床新药开发提供一定参考。

关键词糖尿病肾病；中药活性成分；哺乳动物雷帕霉素靶蛋白；信号通路Research progress of active ingredients of traditional Chinese medicine in the intervention of diabetic nephropathy by regulating mTOR signaling pathwayJIA　Huiyu1，FENG　Zhihai2（1. First College of Clinical Medicine，Henan University of Chinese Medicine，Zhengzhou 450046，China；2. Dept. of Endocrinology，the First Affiliated Hospital of Henan University of Chinese Medicine，Zhengzhou 450003，China）ABSTRACT Diabetic nephropathy （DN）has become one of the main causes of end-stage renal disease，and its pathogenesis is still unclear. Currently，it is believed to be closely related to kidney injury mediated by various factors such as autophagy disorder under the condition of high glucose，oxidative stress and inflammation. Mammalian target of rapamycin （mTOR）signaling pathway is crucial for protein synthesis and autophagy regulation，which plays an important role in the occurrence and development of DN. In recent years，the research on the prevention and treatment of DN with traditional Chinese medicine （TCM）has made important progress. Plenty of evidence has shown that the active ingredients of TCM can enhance autophagy，improve oxidative stress and inflammation，inhibit cell apoptosis and abnormal proliferation by regulating mTOR signaling pathway，so as to relieve pathological changes in the kidney such as podocyte injury，glomerular basement membrane thickening，mesangial tissue abnormalities and renal tubule dysfunction，thereby reducing proteinuria and improving renal function. All of the above are of great significance for delaying the progression of DN. This article systematically summarizes the research progress of saponins，flavonoids，polyphenols，alkaloids，terpenoids and other active ingredients of TCM intervening in DN through mTOR signaling pathway，in order to provide some reference for further basic research and the development of new drugs.KEYWORDS diabetic nephropathy；active ingredients of traditional Chinese medicine；mammalian target of rapamycin；signaling pathway糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）是糖尿病最常见和最严重的微血管并发症之一，以持续性的蛋白尿排泄增加，伴或不伴有肾小球滤过率下降为主要临床特征。

肾素(原)受体在大鼠肾小球系膜细胞和肾脏的表达

Ｂｙｕｓｎｇｉｈｅｔｐｒｏｅｎｒｉｎｈａｎｄｌｅｅｇｒｉｏｎｐｅｐｔｉｄｅ（Ｉ－ＩＲＰ）ｓａａｄｃｏｅｙｐｃｐｔｉｄｅｏｆｈｅｔＲｎＲ，ｗｅｏｂｓｅｒｖｄｔｅｈｅｉｓｄｔｒｉｂｕｉｔｏｎｏｆｈｅｔＨＲＰ－ＲｎＲｃｏｍｐｌｅｘ
ＨＥＭｉｎｇ，ＨＵＡＮＧＹａ－Ｌｉｎ２，ＺＨＡＮＧＬｉｎ３，ＹＡＯＴａｉ，ＬＵＬｉ－Ｍｉｎ ’
ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙａｎｄＰａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｙ；ｇＮａｔｉｏｎａｌＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＮｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，ＳｈａｎｇｈａｉＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，ＦｕｄａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓａｎｈｇａｉｈ２０００３２，Ｃｈｉａ；ｎ ’ ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｆＰｏｈｙｓｉｏｌｏｙ，ｇＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅｆＳｏａｎｈｇａｉｈＪｉａｏｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｙｔ，Ｓｈａｎｇ－
ｍｅｈｏｔｄｔｏｉｄｅｎｉｔｆｙｗｈｅｈｅｔｒｎｄａｗｈｅｅｔｒｈｅＲｎＲｅｘｐｅｓｒｓｅｄｉｎｃｕｌｔｕｒｅｄｒａｔｒｅｎａｌｍｅｓａｎｇｉａｌｃｅＨｓ（ＭＣｓ）ｎｄｒａａｔｋｉｄｎｅｙ

环氧合酶的研究进展_朱辉

环氧合酶的研究进展*朱辉1,2杨增明1(1东北农业大学生命科学学院,哈尔滨150030;2哈尔滨医科大学生理学教研室,哈尔滨150086)摘要环氧合酶(C OX)是由花生四烯酸合成前列腺素的关键酶。

COX-1和COX-2结构相似,但在反应底物、抑制剂,以及细胞内定位都有明显不同。

C OX-1和COX-2催化产生的各种前列腺素可调节机体的生理和病理活动。

本文主要就C OX-1和C OX-2两种同工酶在生化结构、基因表达的调节,以及生理和病理功能等方面的进展作一简要介绍。

关键词环氧合酶;前列腺素;环氧合酶抑制剂中图分类号Q492环氧合酶(cyclooxygenase,COX)是合成各种前列腺素(prostaglandins,PGs)的关键酶。

细胞膜中的磷脂在磷脂酶A2催化下释放出花生四烯酸,后者在COX催化下形成PGH2。

PGH2又分别在相应PG异构酶作用下合成PGE、PGF、PGD、PGI等。

COX有两种同工酶,即组成型酶C OX-1和诱导型酶C OX-2。

一、C OX-1和COX-2的生化特性(一)基因结构C OX-1和C OX-2分别由位于不同染色体上的独立基因编码。

人类COX-1基因位于9号染色体q32-q33.3,长22kb,由11个外显子和10个内含子构成,mRNA长2.8kb(Inoue等.1995)。

COX-1基因启动子第-111/-105和-610/-604两个位点存在Sp1顺式调节元件,无论哪个位点缺失都会导致转录减少50%,而两个都缺失则减少大约75%。

人类C OX-2基因位于1号染色体q25.2~ q25.3,长8.3kb,含有10个外显子和9个内含子, mRNA长4.0kb(Masferrer等.1994)。

C OX-2在其翻译起始位点上游5.侧翼区有一个30bp保守的TATA盒,而C OX-1在同一区域无此结构。

COX-2基因包含许多调节位点,如c AMP反应元件、IL-6反应元件、CC AAT/EBP、AP-2、NF-J B、Sp-1、GATA-1和糖皮质激素反应元件(Wu等.1995)。

大鼠肾衰实验报告

大鼠肾衰实验报告
《大鼠肾衰实验报告》
在本次实验中，我们使用大鼠作为实验对象，研究了肾衰的发展过程以及可能的治疗方法。

肾衰是一种严重的疾病，如果不及时治疗，可能导致患者死亡。

因此，对于肾衰的研究具有重要的临床意义。

首先，我们在实验大鼠身上诱导了肾衰的模型，通过给予大鼠高蛋白饮食以及利尿剂，模拟了肾衰的发生过程。

随着实验的进行，我们观察到大鼠出现了尿量减少、血尿素氮升高、肾小球滤过率下降等肾功能损伤的表现，证实了我们成功建立了肾衰模型。

接下来，我们对肾衰大鼠进行了不同治疗方法的实验。

我们分别给予大鼠肾上腺素受体拮抗剂、血管紧张素转换酶抑制剂以及肾上腺皮质激素等药物，观察它们对肾功能的影响。

结果显示，这些药物可以减轻肾衰大鼠的尿量减少、血尿素氮升高等症状，证实了它们在治疗肾衰方面的潜力。

通过本次实验，我们不仅成功建立了肾衰大鼠模型，还发现了一些潜在的治疗方法，为肾衰的临床治疗提供了新的思路。

希望我们的研究能够为肾衰患者带来希望，为医学研究领域做出贡献。

瘦素受体在大鼠肾小管间质纤维化模型中表达的观察

￡ｌ
中存在的瘦素受体结合而发挥作用。肾脏存在大量瘦素短型受体（ｂＲ）ｏ＿ａ和少量瘦素长型受体（ｂＲ）并且是少数ｏ—ｂ，
表达ｏ－的外周组织之一… 但其功能不详。ｂＲｂ１，肾小管问质纤维化是肾脏疾病进展至终末期肾功能衰竭的共同病理表现。近来研究认为，小管问质纤维化较肾
２２免疫组织化学结果：素受体在肾脏的表达见表１．瘦。瘦素受体主要在肾小管上皮细胞表现为阳性染色，肾小球及血管系统未观察到阳性染色。阳性细胞呈棕黄色，在胞
质有着色。ＵＵＯ大鼠患肾阳性细胞明显增加，且随纤维并化程度的增强表达进行性增加。ＵＵＯ各组之间差异均有
２结果
．
瘦素是肥胖基因的产物，主要由脂肪细胞分泌，是关系
到营养吸收和能量代谢的重要激素。瘦素与肾脏疾病的关
系，既往的研究集中在瘦素与肾脏疾病患者的营养上。而近来的研究提示，高瘦素血症（肥胖、２型糖尿病）肾小球是硬化和小管问质纤维化的独立危险因素。瘦素通过与组织
小球硬化与肾小球滤过率更具相关性Ｊ。本研究中，们我
２１病理结果：．假手术组各时间点肾脏病理未兜明显变
化。ＵＵＯ组术后３ｄ可见肾间质水肿，远端小管扩张，而近端小管扩张不明显，远端小管上皮细胞扁平、间质增宽，失去“ 背靠背 ” 特征，小管问质内有散在炎细胞浸润，但小球

非奈利酮治疗慢性肾脏疾病作用机制研究进展

非奈利酮治疗慢性肾脏疾病作用机制研究进展廖文建1，罗雍航1，陈秋宇1，钟莉萍1，苏勇21 广东医科大学第一临床医学院，广东湛江524023；2 广东医科大学附属阳江医院肾内科摘要：慢性肾脏病（CKD）是一种持续进展性疾病，以肾功能进行性下降和细胞外基质过多蓄积为特征，引起肾小球硬化和肾小管间质纤维化。

研究显示，盐皮质激素受体过度活化导致炎症和纤维化是CKD进展的关键驱动因素。

另外，内皮功能障碍、氧化应激、血压控制不佳、肥胖也是影响CKD预后的重要因素。

非奈利酮是一种高选择性非甾体盐皮质激素受体拮抗剂。

多项研究表明，非奈利酮能通过抗炎和抗纤维化、减轻蛋白尿、逆转内皮功能障碍、调控血压及改善代谢参数等多重机制来延缓肾脏疾病的进展并减少心血管事件的发生率，并且对血钾影响小，无性激素相关不良反应，有望成为延缓肾脏疾病进展的新手段。

关键词：非奈利酮；非甾体盐皮质激素受体拮抗剂；慢性肾脏病doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2023.32.025中图分类号：R692 文献标志码：A 文章编号：1002-266X（2023）32-0105-04糖尿病是全球慢性肾脏病（CKD）的主要病因。

目前，约36%的糖尿病患者存在不同程度的白蛋白尿和肾小球滤过率降低，而白蛋白尿和肾小球滤过率降低与心血管病死率、心力衰竭发生风险独立相关［1］。

钠—葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂（SGLT2i）和肾素—血管紧张素—醛固酮系统阻滞剂作为治疗2型糖尿病肾病的主力药物，虽然能够减少尿蛋白并延缓肾脏疾病进展，但肾衰竭及心血管疾病死亡的风险仍持续存在［2］。

盐皮质激素受体（MR）属于类固醇激素受体，是激活细胞内受体和核转录因子的核受体亚家族。

肾脏MR过度激活通过介导促炎因子及促纤维化因子如肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和转化生长因子β1的产生和蛋白激酶1、转录因子核因子κB、激活蛋白1等信号蛋白的表达增加，促进组织炎症和纤维化［3。

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生理学报 Acta Physiologica Sinica , December 25, 2007, 59 (6): 796-804796Received 2007-05-16 Accepted 2007-06-08This work was supported by the National Natural Science Fundation of China (No. 30470627).*Corresponding author. Tel: +86-21-54237716; Fax: +86-21-64171179; E-mail: lulimin@肾素(原)受体在大鼠肾小球系膜细胞和肾脏的表达贺明1，黄娅林2，张琳3，姚泰1，陆利民1,*复旦大学上海医学院1生理学与病理生理学系；2医学神经生物学国家重点实验室，上海 200032; 3上海交通大学医学院生理学系，上海 200025摘要：近年发现的肾素(原)受体(renin/prorenin receptor, RnR)已被证明具有生物学功能，在心、肾及多种细胞表达。

本文旨在观察RnR 在体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cells, MCs)和肾脏中是否表达，及其表达的细胞部位，并用RnR 的多肽阻断剂肾素原“柄区肽” (handle region peptide, HRP)与RnR 结合后观察受体复合物进入细胞的过程与定位。

结果显示，RnR 主要存在于大鼠肾脏皮质肾小球系膜区和体外培养的MCs 的细胞核周围胞浆和细胞膜。

将FITC 标记的HRP (FITC-HRP)加入细胞培养液后30 s 到30 min 期间，可观察到FITC-HRP 由培养液转移到胞浆内并进入细胞核。

用免疫荧光和激光共聚焦技术观察到，HRP 与RnR 的共定位主要位于细胞膜和细胞核周围胞浆；在30 min 时，一部分HRP 已进入细胞核，而RnR 没有进入细胞核内，仍主要位于细胞核周围胞浆。

上述结果提示，RnR 与其配基结合后进入细胞内并发挥生物学效应。

关键词：肾素(原)受体；肾素原“柄区肽”；系膜细胞；肾素-血管紧张素系统中图分类号：R 334+.1Expression of renin/prorenin receptor in rat kidney and cultured mesangial cellsHE Ming 1, HUANG Ya-Lin 2, ZHANG Lin 3, YAO Tai 1, LU Li-Min 1,*1Department of Physiology and Pathophysiology; 2 National Key Laboratory of Medical Neurobiology, Shanghai Medical College,Fudan University, Shanghai 200032, China; 3 Department of Physiology, Medical College of Shanghai Jiaotong University, Shang-hai 200025, ChinaAbstract: The renin/prorenin receptor (RnR) has recently been cloned and demonstrated to exist in different cells in the cardiovascular and renal systems, playing an important role in physiological and pathophysiological situations. In the present study, we used immunofluorescence method to identify whether and where the RnR expressed in cultured rat renal mesangial cells (MCs) and rat kidney.By using the prorenin handle region peptide (HRP) as a decoy peptide of the RnR, we observed the distribution of the HRP-RnR complex in the MCs. Our results showed that the RnR was localized in the perinuclear zone and plasma membrane of the MCs. At the organ level, the RnR was observed in the mesangium of cortical glomeruli in rat kidney. The FITC-labeled HRP (FITC-HRP) translocated from cell culture medium into the cytoplasm within 30 s. Colocalization of the HRP and RnR was observed mainly on the cell membrane and in the perinuclear zone of cytoplasm by using immunofluorescence and confocal microscopy. At 30 min the FITC-HRP was mainly observed in the nucleus while the RnR remained in the perinuclear zone of cytoplasm. Taken together, our results confirm the expression of RnR in the renal MCs. It is suggested that internalization of the RnR after binding with its ligand is at least one of the pathways through which the RnR exerts its biological actions.Key words: renin/prorenin receptor; handle region peptide of prorenin prosegment; mesangial cells; renin-angiotensin system797贺明等：肾素(原)受体在大鼠肾小球系膜细胞和肾脏的表达自从Tigerstedt 和Bergman 发现肾素以来，对肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system, RAS)的研究已经进行了100多年，RAS 家族不断有新的成员被发现。

最近20年来，对RAS 研究的热点集中在血管紧张素II (angiotensin II, Ang II)受体亚型(AT 1R 和AT 2R)及受体激动后的跨膜信号转导途径。

运用免疫组织化学及分子生物学技术发现，除全身循环中存在RAS 外，RAS 的所有成分广泛存在于脑、心、肾等组织中，称为局部或组织RAS [1]。

组织RAS 的发现，使人们对RAS 的经典观点发生了根本性的变化。

以前认为，在Ang II 上游的RAS 成员是没有受体的；但随着研究的深入进行，人们发现循环中肾素的浓度为皮摩尔级水平，而在一些器官的组织内(特别是在组织液中)肾素的浓度是循环血液中的100倍以上[2]。

由于组织中的固有细胞不能产生如此多的肾素，因此推测可能存在某些可以与肾素结合的蛋白或受体，后者可从血液中捕获肾素，从而使局部组织中的肾素水平升高，并引起一定的生物学效应。

1997年，有人发现心肌细胞和内皮细胞中的6-磷酸甘露糖(mannose-6-phosphate, M6P)受体可以与肾素或肾素原结合[3]。

后来知道，M6P 受体的作用是与肾素或肾素原结合后发生内化，进入细胞内，再通过细胞内的酶降解肾素或肾素原；M6P 受体本身并没有其它的细胞内或细胞外效应[4,5]。

2002年，Nguyen 等首次报道了人肾素(原)受体(renin/prorenin receptor, RnR)的存在，并且克隆了该受体[2]。

最近的一些初步研究表明，RnR 具有生物学功能，在机体的一些功能调节，特别是在心血管疾病和糖尿病肾病的发病中起着重要的作用。

近年来在治疗肾脏纤维化方面的重大突破之一是RAS 的两种抑制剂的应用，主要是血管紧张素转化酶抑制剂(angiotensin converting enzyme inhibitor,ACEI)和AT 1R 拮抗剂。

这两类药物可以不同程度地改善终末期肾病患者的肾脏功能[6,7]。

这一临床证据说明RAS 在肾病的发病过程中可能起重要作用。

但是，最近几年的动物实验和临床研究表明，上述两种药物只能部分缓解终末期肾脏功能衰竭的进程而不能完全逆转肾脏的形态和功能改变[8-10]。

此外，这两种药物的使用均可使血浆肾素活性明显增加。

这些研究提示，肾素可能还有不依赖于Ang II 的促纤维化作用，即直接通过RnR 促进肾脏纤维化。

Ichihara 等合成了一种RnR 的多肽阻断剂，它是一个包含肾素原柄区氨基酸序列的十肽，称为“柄区肽” (handle region of peptide, HRP)[11]。

他们证实，肾素原可通过与RnR 结合参与心血管疾病和肾脏疾病的发病过程，而HRP 则可以与RnR 发生竞争性结合，从而抑制糖尿病肾病和心脏纤维化的发展[11,12]。

但是，HRP 在细胞和分子水平的作用机制还有待于进一步的研究。

在本实验中，我们观察在体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cells, MCs)和正常Sprague-Dawley (SD)大鼠肾脏中是否表达RnR ，如有表达，则进一步观察它在细胞和肾脏的表达部位；另外，我们用HRP 作为外源性配基，使之与RnR 结合，从而观察RnR 在MCs 中的表达部位。

1 材料与方法1.1 材料雄性SD 大鼠，体重150~180 g ，购自上海斯莱克实验动物中心。

DMEM 低糖培养基、胰蛋白酶购自Sigma 公司，小牛血清购自杭州四季青生物工程材料公司，TRIzol Reagent 购自Invi-trogen 公司(美国)，Taq DNA polymerase 和prestained protein ladder (10-180 kDa)购自Fermentas 公司，M -M LV 逆转录酶购自Promega 公司，PCR 引物由Invitrogen 公司合成，RNA 酶抑制剂、Oligo(dT)18Primer 、4×dNTPmix 购自上海申能博彩生物科技有限公司；山羊抗人RnR 多克隆抗体购自Abcam 公司；兔抗山羊辣根过氧化物酶标记IgG 抗体购自Santa Cruz 公司；兔抗山羊FITC 标记IgG 抗体和兔抗山羊TRITC 标记IgG 抗体购自KPL 公司；蛋白酶抑制剂购自Upstate 公司；BCA-100蛋白质定量试剂盒购自上海申能博彩生物科技有限公司；SuperSignal West Pico Chemiluminescent Substrate 购自Pierce 公司；HRP 和FITC 标记的HRP (FITC-HRP)由上海吉尔生化公司合成(其中H RP 是按照序列NH 2-RILLKKMPSV-COOH 化学合成的十肽，利用C-18 reverse-phase column 对HRP 进行纯化，纯度为99.6%，分子量为1185.7)。