丙酮酸(pyruvic acid PA)含量测定试剂盒使用说明

丙酮酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶比色法)简介：丙酮酸(Pyruvic acid)又称2-氧代丙酸，是参与整个生物体基本代谢的中间产物之一，可通过乙酰CoA 和三羧酸循环实现体内糖、脂肪和氨基酸间的互相转化，丙酮酸在三大营养物质的代谢联系中起着重要的枢纽作用。

丙酮酸是糖无氧代谢的产物，科研工作者常将丙酮酸和乳酸一起研究，并用二者的比值推算循环衰竭的程度。

丙酮酸检测可采用酶催化法，该发是使用乳酸脱氢酶(LDH)催化丙酮酸氧化，生成乳酸和NAD +，通过分光光度法或荧光光度法测定NADH 的减少量，进而计算出丙酮酸含量。

通过分光光度比色法(自动分析仪或分光光度计)测定340nm 处吸光度的下降速率，据此通过比色分析就可以计算出PA 水平。

该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的丙酮酸含量。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、 准备样品：① 血浆、血清、尿液及其他体液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存。

② 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于PA 的检测。

③ 高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的PA ，可以使用原有的裂解液或PBS 等进行稀释，如鸡血清、血浆可稀释5～10倍后检测。

2、 配制标准品工作液：，即为标准品工作液-丙酮酸标准(0.5mmol/L)。

4℃避光保存24h编号 名称TC0755 50T Storage试剂(A): 丙酮酸标准(25mmol/L) 1ml 4℃ 避光 试剂(B): 丙酮酸标准稀释液 5ml RT 试剂(C): PA 显色液C1: PA Assay buffer90ml4℃ 避光临用前，按C1:C2=30ml:1支的比例混合，即为PA 显色液。

试剂(D): LDH solution 0.4ml-20℃ 避光 使用说明书1份有效。

磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC3310规格：50T/48S产品内容：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体45mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂35mL×1瓶，-20℃避光保存；临用前加入35mL试剂一溶解。

可溶解后分装-20℃保存，避免反复冻融。

试剂三：液体45μL×1支，4℃避光保存；临用前加入蒸馏水按体积比1：120稀释，现用现配；试剂四：液体155μL×1支，4℃避光保存；临用前加入蒸馏水按体积比7：250稀释，现用现配；试剂五：粉剂×1瓶，-20℃避光保存；临用前加入2.5mL蒸馏水充分溶解；可溶解后分装-20℃保存，避免反复冻融。

产品说明：PEPCK（EC 4.1.1.32）广泛存在于动物、开花植物、藻类、部分真菌和细菌中。

该酶催化草酰乙酸转化为磷酸烯醇式丙酮酸,是调节糖异生途径的第一限速酶。

，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH氧化PEPCK催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸和CO2生成NAD+，在340nm下测定NADH下降速率，即可反映PEPCK活性。

试验中所需的仪器和试剂：紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、粗酶液提取：组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后8000g，4℃，离心10min，取上清，置冰上待测。

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

货号：QS2103 规格：50管/48样丙酮酸脱氢酶（Pyruvate dehydrogenase，PDH）试剂盒说明书可见分光光度法正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：PDH（EC 4.1.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是丙酮酸脱氢酶复合体(PDHC)催化丙酮酸氧化脱羧的限速酶，催化丙酮酸脱梭生成羟乙基-TPP，把糖酵解和三羧酸循环连接起来。

测定原理：PDH催化丙酮酸脱氢，同时还原2,6-二氯酚靛酚（2,6-DCPIP），从而导致600nm光吸收的减少。

自备实验用品及仪器：可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：试剂一：50mL×1瓶，-20℃保存；试剂二：10mL×1瓶，-20℃保存；试剂三：1mL×1支，-20℃保存；试剂四：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂五：粉剂×1支，4℃保存；试剂六：粉剂×1支，4℃保存；试剂七：粉剂×1支，4℃保存；试剂八：粉剂×1支，4℃保存;工作液的配制：临用前把试剂五、试剂六、试剂七和试剂八转移到试剂四中混合溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

样本的前处理：组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：1、称取约0.1g组织或收集500万细菌或细胞，加入1mL试剂一和10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

2、将匀浆600g，4℃离心5min。

3、弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。

4、上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的PDH（此步可选做）。

5、在步骤④的沉淀中加入200uL试剂二和2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次），用于线粒体PDH活性测定。

测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至605nm处，蒸馏水调零。

北京雷根生物技术有限公司
尿苯丙酮酸定性检测试剂盒
简介：
尿液中的苯丙酮酸在酸性条件下与高价铁离子作用，生成Fe 3+和烯醇式苯丙酮酸的蓝色化合物。

Leagene 尿苯丙酮酸定性检测试剂盒利用上述原理，通过观察螯合物颜色变化判断苯丙酮酸含量，主要用于定性检测人、动物尿液中苯丙酮酸含量。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 取4ml 尿液置于试管中，加入碱性沉淀液，混匀。

2、 静置3min ，如果出现沉淀，可用滤纸过滤或者离心。

3、 向上述液体(或滤液）中加入酸化液和三氯化铁溶液，每滴加立即观察颜色变化。

结果判断：尿液显蓝绿色并持续2~4min ，即阳性。

如果绿色很快消失，提示可能有黑尿酸，可报告为阴性。

注意事项：
1、 苯试剂盒灵敏度为100mg/L ，尿液做系列稀释后再测定，可粗略定量。

2、 碱性沉淀液应密闭保存，一旦开封，应尽快用完。

3、 尿液一定要新鲜，尿中若含酚类药物及氯丙嗪，实验前应停药。

有效期：12个月有效。

编号 名称 TC0483 100T Storage 试剂(A): 碱性沉淀液 100ml RT 试剂(B): 酸化液 50ml RT 试剂(C): 苯丙酮酸显色液 15ml RT 避光 使用说明书 1份。

丙酮酸（PYR）测定试剂盒（乳酸脱氢酶法）适用范围：用于体外定量测定人体血清或血浆中丙酮酸的含量。

1.1 试剂盒包装规格试剂1：1×15mL，试剂2：1×5mL；试剂1：2×30mL，试剂2：2×10mL。

试剂1：2×54mL，试剂2：2×18mL；试剂1：3×45mL，试剂2：3×15mL；试剂1：4×54mL，试剂2：4×18mL；试剂1：2×300mL，试剂2：1×200mL；试剂1：1×9L，试剂2：1×3L。

校准品（选配）：2×0.5mL，2×1mL（2水平）。

质控品（选配）：2×0.5mL，2×1mL（2水平）。

1.2 试剂盒主要组成成分注：校准品和质控品存在批特异性，具体浓度见对应批次产品标签。

2.1 外观试剂1：无色澄清液体；试剂2：无色澄清液体。

校准品：无色至淡黄色澄清液体。

质控品：无色至淡黄色澄清液体。

2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。

2.3 试剂空白吸光度在37℃、340nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度应不小于0.5。

2.4 分析灵敏度测定浓度在200µmol/L附近的样本时，吸光度变化值（ΔA）应不小于0.02。

2.5 线性在（30，1200）µmol/L线性范围内，线性相关系数r不小于0.990。

在(150，1200）µmol/L范围内的线性相对偏差不大于±10%；测定结果（30，150]µmol/L时线性绝对偏差不大于±15µmol/L。

2.6 重复性重复测试高低浓度的样本，所得结果的变异系数（CV%）应不大于8%。

2.7 批间差不同批号试剂测试同一份样本，测定结果的批间相对极差应不大于10%。

2.8 准确度与已上市产品进行比对试验，在（30，1200）µmol/L范围内，与比对系统的相关系数r不小于0.975；在（100，1200）µmol/L区间内与比对系统的相对偏差应不大于±15%，（30，100] µmol/L区间内与比对系统的绝对偏差应不大于±15µmol/L。

货号：MS1006 规格：100管/96样丙酮酸脱羧酶（PDC）活性测定试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：PDC主要存在于酵母中，是乙醇发酵的关键酶之一，催化丙酮酸脱羧生成乙醛。

测定原理：PDC催化丙酮酸脱羧生成乙醛，添加乙醇脱氢酶（ADH）来进一步催化NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+；NADH在340nm有吸收峰，而NAD+没有；通过测定340nm光吸收下降速率，来计算PDC 活性。

自备仪器和用品：研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪和蒸馏水。

试剂组成和配制：试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体×1 瓶，4℃保存。

试剂四：液体×1 瓶，﹣20℃保存。

混合试剂：临用前配制，小心把试剂四转移到试剂三中，充分溶解。

试剂六：液体×1 管，4℃保存。

粗酶液提取：1、细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200W，工作3s，间歇10s，工作35次），16000g 4℃离心20min，取上清，置冰上待测。

2、组织处理：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，16000g 4℃离心20min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样品：直接检测。

PDC 测定操作：1.分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到340nm，蒸馏水调零。

2.试剂二置于25℃水浴中预热30min。

3.空白管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL蒸馏水、20μL混合试剂、140μL试剂二和20μL试剂六，迅速混匀后于340nm比色，记录15s和75s的吸光值，分别记为A1和A2。

酮体含量检测试剂盒（血清、血浆、尿液等）说明书紫外分光光度法货号：UPLC-MS-6025规格：50T/48S产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一A液液体55mL×1瓶4℃保存试剂一B液液体55mL×1瓶4℃保存试剂二A液粉剂×2支-20℃保存试剂二B液粉剂×2支-20℃保存试剂三粉剂×3支-20℃保存标准品1粉剂×1支4℃保存标准品2粉剂×1支-20℃保存溶液的配制：1、试剂二A液：临用前取一支加入1.2mL蒸馏水，充分溶解。

用不完的试剂分装后-20℃可保存3周。

避免反复冻融；2、试剂二B液：临用前取一支加入600μL蒸馏水，充分溶解。

用不完的试剂分装后-20℃可保存3周。

避免反复冻融；3、试剂三：临用前取一支加入400μL蒸馏水，充分溶解。

用不完的试剂分装后-20℃保存，可以保存3周。

避免反复冻融；4、标准品1：8mg3-羟基丁酸钠。

临用前加入0.98mL蒸馏水，充分溶解，即8mg/mL3-羟基丁酸钠标准溶液，4℃可以保存4周。

临用前根据试验所需量用蒸馏水稀释成0.2mg/mL标准溶液待用，即为标准溶液1；5、标准品2：8mg乙酰乙酸锂。

临用前加入0.95mL蒸馏水，充分溶解，即8mg/mL乙酰乙酸锂标准溶液，-20℃可以保存4周。

临用前根据试验所需量用蒸馏水稀释成0.05mg/mL标准溶液待用，即标准溶液2；6、BOH工作液配制：临用前根据试验所需量将试剂一A液、试剂二A液、试剂三按照850μL:40μL:10μL（共900μL，1T的量）的比例配成工作液，充分混匀，置于37℃保温15min（此步骤不可省略），现用现配，工作液在4h内用完；7、AcAc工作液配制：临用前根据试验所需量将试剂一B液、试剂二B液、试剂三按照870μL:20μL:10μL（共900μL，1T的量）的比例配成工作液，充分混匀，置于37℃保温15min（此步骤不可省略），现用现配，工作液在4h内用完。

丙酮酸测定试剂盒（乳酸脱氢酶法）适用范围：用于体外定量测定人体血清中丙酮酸（PYR）的含量，临床主要用于糖尿病引起的酮症酸中毒的辅助诊断。

1.1包装规格包装规格见表1表1 包装规格1.2主要组成成分主要组成成分见表2。

表2 主要组成成分注：不同批号的校准品、质控品赋值有差异，具体赋值详见靶值单。

2.1 外观试剂1为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂2为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；校准品为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；质控品为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。

2.2 净含量试剂的净含量应不少于标称量。

2.3 试剂空白吸光度A340nm下测定空白吸光度应≥0.5000。

2.4 准确度回收试验：在临床样本中加入一定体积的校准品溶液，进行测定，回收率在90%～110%之间。

2.5 分析灵敏度样品浓度为200 µmol/L时，其吸光度变化在0.0400～0.1200之间。

2.6 线性区间在[30，1000]µmol/L区间内，线性相关系数r≥0.990，在[30，150]µmol/L区间内绝对偏差应不超过±15µm ol/L，在(150，1000]µmol/L区间内相对偏差应不超过±10%。

2.7 测量精密度2.7.1 重复性对高、低不同浓度的同一血清样本或质控品重复测定10次，其测定值的变异系数（CV％）应不大于10％。

2.7.2 批间差随机抽取三批试剂盒的批间相对极差（R）应不大于10%。

2.8 稳定性试剂盒在2℃～8℃密封避光保存，有效期为12个月。

在试剂盒有效期满后一个月以内，应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7.1的要求。

2.9 校准品溯源性按GB/T 21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求，提供所有产品校准的来源、赋值过程以及测量不确定度，试剂盒校准品溯源至Sigma公司。

发酵液中丙酮酸的hplc法检测的研究实验部分：实验目的及意义丙酮酸在生物学研究中是非常重要的物质，它的检测可以有效地提高研究人员对相关问题的理解和认识。

为了更加准确、方便地进行实验分析，并对其含量进行定量分析，本实验设计了一系列试剂盒。

通过这些试剂盒，将乙醇浓度控制在20%时，丙酮酸含量的测定方法。

根据丙酮酸的理化性质，选择分光光度法测定。

1实验原理及结果1.1测定方法(1)丙酮酸可用重铬酸钾法测定其含量。

重铬酸钾滴定法是分光光度法中测定丙酮酸的经典方法之一，该方法具有操作简单、灵敏度高、结果准确的特点，适合工业化生产中使用。

我们小组成员在小麦发酵液中检测丙酮酸，得到了最终的丙酮酸含量，检测限为0.00005mg/L，精密度为0.0005mg/L。

(2)丙酮酸含量测定方法：将样品中丙酮酸转化为乙酸后，用乙酸标准溶液滴定，直至达到滴定终点，记录消耗的乙酸标准溶液的体积数，即为该样品中丙酮酸的含量。

1.2测定结果分析(1)从表格中可以看出，在20%的乙醇浓度下，丙酮酸含量与样品中乙醇浓度呈线性关系，但在100%的乙醇浓度下，丙酮酸的含量大于乙醇浓度对应值的0.1，由此可知在80%、 100%的乙醇浓度下，丙酮酸的含量远低于50%的乙醇浓度下的含量。

(2)在20%的乙醇浓度下，不同样品中丙酮酸的含量均大于0.05mg/L。

但在100%的乙醇浓度下，丙酮酸含量小于0.01mg/L。

(3)当乙醇浓度大于70%时，丙酮酸含量随着乙醇浓度增加而逐渐降低。

从表中也可以看出，丙酮酸的含量随着乙醇浓度的升高先逐渐降低，然后缓慢上升，但是到100%的乙醇浓度后，丙酮酸的含量几乎不再变化。

1.3丙酮酸含量对乙醇浓度的依赖性根据以上分析，在相同的乙醇浓度下，丙酮酸的含量会随着样品中乙醇浓度的增加而增加;而当乙醇浓度超过一定范围后，样品中丙酮酸的含量将不再随着乙醇浓度的增加而增加。

2，建议及思考在实际操作中，由于试剂配制所需时间较长，实验所需时间长且试剂消耗量多，会导致实验进度较慢，因此，实验进行时需要不断观察试剂情况，预留一定时间备用。

丙酮酸脱氢酶（PDH）活性检测试剂盒说明书注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：UPLC-MS-4319规格：100T/96S微量法产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体110mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体0.6mL×2支-20℃保存试剂三液体7.5mL×2瓶2-8℃保存试剂四液体13mL×1瓶2-8℃保存试剂五粉剂×2支-20℃保存试剂六液体1mL×1支2-8℃保存试剂七液体4mL×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1.试剂二：为易挥发试剂，用完后尽快密封，-20℃保存。

2.工作液的配制：临用前把5.75mL试剂四、一支试剂五、0.45mL试剂六、1.75mL试剂七转移到一瓶试剂三中混合溶解待用（共15.45mL，约85T）；用不完的试剂-20℃分装保存，可保存4周。

避免反复冻融。

产品说明：PDH（EC4.1.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是丙酮酸脱氢酶复合体(PDHC)催化丙酮酸氧化脱羧的限速酶，催化丙酮酸脱梭生成羟乙基-TPP，把糖酵解和三羧酸循环连接起来。

PDH催化丙酮酸脱氢，同时还原2,6-二氯酚靛酚（2,6-DCPIP），从而导致605nm光吸收的减少。

Pyruvic Acid+Thiamine Pyrophosphate PDHHydroxyethyl Thiamine PyrophosphateDichlorophenolindophenol(605nm)+Hydroxyethyl Thiamine Pyrophosphate ReducedDichlorophenolindophenol注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。