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氯霉素眼药水的含量测定实验报告思考题【摘要】参考中国药典2010年版氯霉素滴眼液含量测定方法，对 HPLC梯度洗脱时间程序进行调整并进行方法验证，结果表明该方法分离度好、准确度高。
【关键词】氯霉素滴眼液;高效液相色谱法:含量1材料与方法1.1仪器液相色谱仪:SHIMADZU LC-20A;色谱工作站: Lcsolution:检测器:SPD-20A紫外检测器。
1.2试剂庚烷磺酸钠、磷酸二氢钾、三乙胺、磷酸等均为分析纯:甲醇为色谱纯:氯霉素对照品（批号:130555-200602)、氯霉素二醇物对照品（批号:130436-200704)、对硝基苯甲醛对照品（批号:130562-200902)、羟苯乙酯对照品（批号:100847-200501）均由中国药品生物制品检定所提供;氯霉素滴眼液由本公司车间提供。
1.3色谱条件色谱柱:SHIMADZUvP-ODs ( 250mm*4.6mm. 5um):流动相A: 0.01molL庚烷磺酸钠缓冲溶液（取磷酸二氢钾6.8g，用0.0lmolL庚烷磺酸钠溶液溶解并稀释至1000ml，再加三乙胺 5ml，混匀，用磷酸调节pH值至2.5)，流动相B为甲醉;检测波长为277nm，按下表进行线性洗脱。
结果2.1专属性试验取除氯霉素外的其他各辅料，按处方比例称取，加水溶解后摇匀，作为空白溶液，按“1.6”项下方法制备空白供试品溶液，进样20pul，结果表明:辅料对氯霉素含量测得无干扰。
2.2线性关系考察精密称取25.0mg氯霉素对照品置50ml量瓶中，加流动相A-B(62:38）浴解并稀释至刻度,摇匀,作为对照储备液,精密量取0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml对照储备液至10ml量瓶中，用上述流动相稀释至刻度，摇匀，各精密量取20ul，注入液相色谱仪，记录色谱图。
以峰面积积分值（Y)与进样浓度(X: ugml)进行线性回归，回归方程为Y-50356.91X-9470.5，r-0.9998 (n-5)。
•药剂.氯霉素滴眼液的稳定性研究阮艺静鲁方圆谢峻2,韩晓东3,汪强姜泽慧14（1-马鞍山市食品药品检验中心，安徽马鞍山243302；2.马鞍山市师范高等专科学校食品工程系，安徽马鞍山233300；.内蒙古自治区植物逆境生理与分子生物学重点实验室，内蒙古呼和浩特010018）摘要：目的研究氯霉素滴眼液稳定性的影响因素。
方法设置不同的光照时间、温度和氧化剂浓度，对氯霉素滴眼液进行处理后按法定方法检测。
结果光照使氯霉素含量下降，对硝基苯甲醛含量升高，pH值下降，溶液颜色改变；温度升高使氯霉素含量下降，氯霉素二醇物含量升高；过氧化氢溶液使氯霉素含量下降。
结论光照、高温及氧化均会使氯霉素滴眼液含量下降，有关物质改变。
关键词：氯霉素滴眼液;稳定性；高效液相色谱法中图分类号：R94文献标识码：A文章编号：1006-3765（2021）-00-0000-04Research on Stability of Chloramphenicol Eye DropsRUAN Yi-jing1,LU Fang-yuan1,XIE Jun2,HAN Xico-dong3,WANG Qicng1,JIANG Ze-hul1*(0Ma'anshan Food and Drag Aspectlon CenteaMa'anshan233300,Chlna；2.Department of Food Engineeclng,Ma'ans-han Teacher's College,Ma'anshan243000,China；3.I nner Mongolic Key Laboratoc of Plont Stress PhysC ology and Moloculot Biology,Hohhot010010,China)ABSTRACT：OBJECTIVE To study factora affectina thu stdbility of caioramppeuicol eyu daps.METHODS Stirs staniarn methoPs were rseU to evalraic cOlorampPeuicol eyu yaps aftun beina treuteU with differeui light time, temperatrra ani oxiCaat coaceutatioa.RESULTS Sanlight decreuseU thu couteut of cOlorampPeuicol and pH,ia・creuseU thu cooteut of nitroUeuzaldeUyUe ant cOanaeU thu coloa of solutioa.Thu cooteut of caloramppeuicol decreuseU ant thu couteut of cOloramppeuicol glycol iacreuseU with thu incadso of temperatnrUi Thu couteut of cOloramppeuicol decreuseU with UyUrooeu peroxine solution.CONCLUSION Snnlight,Uigh temperatnre ant oxicatioo lean I o thu droppini of couteut of cOloramppeuicol ant cOanae relateU sunstaaceSlKEY WORDS:Chlorampheaicci Eye Droos;Stanility；HPLC氯霉素滴眼液为眼用处方药，主要用于治疗由大肠杆菌、流感嗜血杆菌、克雷伯菌属、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和其他敏感菌所致眼部感染，比如沙眼、结膜炎、角膜炎、眼睑缘炎等。
高效液相色谱法测定氯霉素滴眼液的含量氯霉素滴眼液是一种常见的眼科用药，主要用于治疗由敏感细菌引起的眼部感染。
为了确保其质量和疗效，准确测定氯霉素滴眼液中氯霉素的含量至关重要。
高效液相色谱法（HPLC）作为一种高效、准确、灵敏的分析方法，在药物含量测定中得到了广泛的应用。
一、氯霉素滴眼液简介氯霉素滴眼液中的氯霉素是一种广谱抗生素，对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有抑制作用。
然而，氯霉素的使用需要严格控制剂量，因为过量使用可能会导致一些不良反应，如骨髓抑制等。
因此，准确测定氯霉素滴眼液中氯霉素的含量对于保障药物的安全性和有效性具有重要意义。
二、高效液相色谱法的原理和优势高效液相色谱法是在经典液相色谱法的基础上发展起来的一种色谱分析技术。
它基于混合物中各组分在固定相和流动相之间的分配系数不同，从而实现分离。
与其他分析方法相比，高效液相色谱法具有许多优势。
首先，它具有很高的分离效率，能够在短时间内将复杂混合物中的各组分分离出来。
其次，它的灵敏度高，可以检测到微量的物质。
此外，该方法的重复性好，准确度高，适用于各种类型的化合物分析。
三、实验部分（一）仪器与试剂1、高效液相色谱仪：配备紫外检测器、输液泵、进样器等。
2、色谱柱：选用适合氯霉素分离的反相色谱柱。
3、试剂：氯霉素标准品、甲醇（色谱纯）、水（超纯水）等。
（二）色谱条件1、流动相：通常采用甲醇水或乙腈水的混合溶液，通过优化比例以获得最佳分离效果。
2、流速：根据色谱柱的规格和实验要求，设定合适的流速。
3、检测波长：根据氯霉素的紫外吸收特性，选择合适的检测波长。
（三）标准溶液的制备精密称取适量的氯霉素标准品，用流动相溶解并定容，配制成一系列不同浓度的标准溶液。
（四）样品溶液的制备准确吸取一定量的氯霉素滴眼液，用流动相稀释至适当浓度。
（五）进样与测定将标准溶液和样品溶液分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图。
根据标准溶液的浓度和峰面积，绘制标准曲线。
通过样品溶液的峰面积，在标准曲线上查得样品中氯霉素的浓度，并计算其含量。
附件3消毒产品中氯霉素（chloromycetin ）测定-液相色谱-串联质谱法Method for determination of chloromycetinin disinfestion product-LC-MS-MS method1 范围本方法规定了膏霜类消毒产品中氯霉素残留量液相色谱-串联质谱测定方法。
本方法适用于膏霜类消毒产品中氯霉素残留量的测定。
取样量为0.2g时，本方法氯霉素的检出限0.03mg/kg。
2 规范性引用文件3 原理试样中氯霉素用甲醇提取，提取液经0.45μm滤膜过滤，用C8柱分离后，用液相色谱-串联质谱仪测定，负离子扫描，离子对定性，峰面积定量。
4 试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为不含有机物的纯水，纯水中干扰物的浓度需低于方法中待测物的检出限。
4.1甲醇：农药残留级。
4.2标准品：氯霉素标准品购自北京利科生化科贸有限公司，纯度≥99%。
4.3标准溶液：准确称取适量的氯霉素标准品，用甲醇（4.1）配制成10.0mg/mL 标准贮备溶液。
准确量取上述标准贮备溶液适量，用甲醇稀释配制成浓度为500µg/mL的标准中间溶液，将标准中间溶液转移到安瓿瓶中于4 C保存。
临用前，再根据需要用甲醇配制成不同浓度的标准使用溶液。
4.3 0.45μm滤膜。
5 仪器5.1 液相色谱一串联质谱联用仪：HP1100高效液相色谱仪(Agilent) - API 4000质谱仪(Applied Biosystems) ，电喷雾离子化源(ESIMS，NI/PI模式)。
5.2 分析天平：感量0.1mg和0.001g。
5.3实验室纯水机：Barnstead纯水机。
5.4涡旋振荡器：Scientific Industries 涡流振荡器。
5.5 具塞试管：10mL。
6 试样的制备与保存6.1 试样的制备取有代表性样品5g，搅拌均匀，制成实验室样品。
6.2 试样保存制备好的试样置于室温保存。
氯霉素及分析方法氯霉素（Chloramphenicol）是一种广谱抗生素，对多种细菌有抑制作用。
它属于静菌抑制剂，能够使细菌停止生长和繁殖，从而起到杀菌的作用。
氯霉素主要用于治疗感染性疾病，如肺炎、泌尿系统感染等。
然而，由于其潜在的副作用和耐药性问题，目前在许多国家已经不再作为一线药物使用。
氯霉素的化学结构为4-(4-氨丁氧基)-2-二氯乙酰氨基苯酚，其分子式为C11H12Cl2N2O5，结构如下所示：ClClH3C—CH2—C—CH2—C—CH2—N（CH2）2—OH氯霉素分析方法主要包括物理化学法和生化法两大类。
物理化学方法主要包括高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）、红外光谱法（IR）等。
其中HPLC是一种常用的分离和定量氯霉素的方法。
该方法利用样品中氯霉素与固定相发生相互作用，通过控制流动相以及柱温等参数的变化，通过检测吸收峰的强度或峰面积，可以定量测定样品中的氯霉素浓度。
相比其他方法，HPLC方法具有操作简便、准确度高、灵敏度高的优点。
气相色谱法（GC）可以通过样品中氯霉素的升华或蒸发，使其从液相转移到气相进行分析。
通过不同的柱温和流动相的条件，可以分离和测定氯霉素的含量。
GC方法在氯霉素的分析中灵敏度较高，但需要样品预处理和分离，操作要求较高。
红外光谱法（IR）可以通过测量样品吸收红外光的能力，分析样品中的氯霉素含量。
该方法由于无需溶解或其他复杂的样品处理步骤，因此操作简单、快速，但灵敏度相对较低。
生化方法主要是基于氯霉素在生物体内所存在的特殊生物学活性。
其中包括聚合酶链式反应（PCR）、免疫荧光法、酶联免疫吸附试验（ELISA）等。
聚合酶链式反应（PCR）是一种在体外扩增DNA片段的方法，通过特定引物选择性扩增目标DNA序列，包括携带了氯霉素耐药基因的细菌等。
该方法特异度高、灵敏度高，但需要特定实验条件和较长时间。
免疫荧光法是一种利用荧光染料标记的抗氯霉素抗体识别和检测氯霉素的方法。
附件3消毒产品中氯霉素(Chloromycetin )测定-液相色谱-串联质谱法Method for determ in ati on of chloromycet inin dis in festi on product-LC-MS-MS method1范围本方法规定了膏霜类消毒产品中氯霉素残留量液相色谱-串联质谱测定方法本方法适用于膏霜类消毒产品中氯霉素残留量的测定。
取样量为0.2g时，本方法氯霉素的检出限0.03mg/kg。
2规范性引用文件3原理试样中氯霉素用甲醇提取，提取液经0.45 yrn滤膜过滤，用C8柱分离后，用液相色谱-串联质谱仪测定，负离子扫描，离子对定性，峰面积定量。
4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为不含有机物的纯水，纯水中干扰物的浓度需低于方法中待测物的检出限。
4.1甲醇：农药残留级。
4.2标准品：氯霉素标准品购自北京利科生化科贸有限公司，纯度》99%。
4.3标准溶液：准确称取适量的氯霉素标准品，用甲醇( 4.1)配制成10.0mg/mL标准贮备溶液。
准确量取上述标准贮备溶液适量，用甲醇稀释配制成浓度为500 pg/mL的标准中间溶液，将标准中间溶液转移到安瓿瓶中于4C保存。
临用前，再根据需要用甲醇配制成不同浓度的标准使用溶液。
4.3 0.45 p m 滤膜。
5 仪器5.1液相色谱一串联质谱联用仪：HP1100高效液相色谱仪（Agilent） - API 4000质谱仪（Applied Biosystems）,电喷雾离子化源（ESIMS , NI/PI 模式）。
5.2分析天平：感量0.1mg和0.001g。
5.3实验室纯水机：Barnstead纯水机。
5.4涡旋振荡器：Scientific Industries 涡流振荡器。
5.5 具塞试管：10mL。
6 试样的制备与保存6.1 试样的制备取有代表性样品5g，搅拌均匀，制成实验室样品6.2 试样保存制备好的试样置于室温保存。
