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氯霉素眼药水的高效液相色谱分析法.ppt

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高效液相色谱法单波长切换测定复方氯霉素醇溶液中水杨酸、氯霉素的含量

高效液相色谱法单波长切换测定复方氯霉素醇溶液中水杨酸、氯霉素的含量
Ｇ ｅ ｎ ｅ ｒ ａ ｌ Ｈ ｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ｏ ｆ Ｂ ｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ Ｍｉ ｌ ｉ ｔ ａ ｒ ｙ Ａ ｒ ｅ ａ Ｃ ｏ ｍｍ ａ ｎ ｄ ， Ｂ ｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ １ ０ １ １ ４ ９， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ； ２ ．Ｄ ｅ ｐ ａ ｔ ｒ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍａ ｃ ｙ ， Ｇ ｅ ｎ ｅ ｒ ａ ｌ Ｈｏ ｓ —
［ Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ］ Ｏｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ａ ｈ ｉ ｇ ｈ ｐ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｎ ｃ ｅ ｌ ｉ ｑ ｕ ｉ ｄ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ａ ｔ ｏ ｇ ｒ ａ ｐ ｈ ｙ（ ＨＰ Ｌ Ｃ）ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｗ ｉ ｔ ｈ ｓ ｉ ｎ ｇ ｌ ｅ
ｗａ ｖ ｅ ｌ ｅ ｎ ｇ ｔ ｈ ｓ ｗｉ ｔ ｃ ｈ ｉ ｎ ｇ ｉ ｎ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｃ ｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ｓ ｏ ｆ ｓ ａ ｌ ｉ ｃ ｙ ｌ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ａ ｎ ｄ ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ａ ｍｐ ｈ ｅ ｎ ｉ ｃ ０ ｌ ｉ ｎ ｃ ｏ ｍｐ ｏ ｕ ｎ ｄ ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ａ ｍｐ ｈ ｅ ｎ ｉ ｃ ０ ｌ ａ ｌ —
［ 关键 词 】 复方氯霉素醇 ； 高 效 液 相色 谱 法 ； 单波长切换 ； 含量 测 定 ［ 中国图书资料分类号］ Ｒ ９ ４ ３ ． ３ ［ 文献 标 志 码 ］ Ａ ［ 文章编 号］ ２ ０ ９ ５ － １ ４ ０ Ｘ（ ２ ０ １ ３ ） ０ ８ － ０ ０ ８ ８ － ０ ３
Ｂ ｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ １ ０ ０ ７ ０ ０， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ； ４ ． Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｃ ｏ ｒ ｐ ， ７ ３ ０ ８ ９ Ｔ ｒ ｏ ｏ ｐ ｓ ，Ｘ ｕ ｚ ｈ ｏ ｕ ， Ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ｓ ｕ ２ ２ １ ０ ０ ４ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）

氯霉素眼药水的高效液相色谱分析PPT学习教案

氯霉素眼药水的高效液相色谱分析PPT学习教案
1、依次打开检测器、泵的开关 2、打开电脑主机，打开操作界面 3、排气泡 4、设置色谱条件，打开泵开关 5、让流动相冲洗色谱系统，至色谱基线水平，约半小时 6、基线调零，填写数据文件名及信息 7、单次运行，进样并记录数据 8、数据处理及打印报告 9、关氘灯，冲洗色谱系统约半小时，关机。
第20页/共23页
第21页/共23页
实验报告
1、实验目的 2、原理 3、步骤 4、数据处理 5、结果讨论
实验结束后原始报告单要签字。 同一组的同学交实验报告的时候放在一起，原始报告 单附在末尾。
第22页/共23页
11
第10页/共23页
常用的高效液相色谱仪
LC-15C
美国Agilent
美国Waters
第11页/共23页
日本岛津
4.2.2 高效液相色谱主要部
(1) 泵输液系统
件
主要部件之一，压力：15～35MPa。提供高压流动相
应具有压力平稳，脉冲小，流量稳定可调，耐腐蚀等特性。
第12页/共23页
(2) 进样装置
第16页/共23页
氯霉素
外标一点法
样品 20uL
成份 A
眼药水稀 释液
峰面积A样品
色谱定量： 峰面积与样品浓度 成正比。
对照品 20ul
已峰面积A对照
A样品 A对照 C样品 C对照
条件：需要已知浓度的标准样品 待测成分与杂质间分离良好
第17页/共23页
氯霉素含量的测定
流动相 固定相
固体(solid,S) 液体(liguid,L) 化学键合相 (bonded phase,BP)
气体 (gas,G)
GSC GLC
GBPC
液体
超临界流体

(推荐课件)常见眼药水知识PPT幻灯片

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滤过性病毒感染引起的角膜炎、结膜炎，眼睛分 支杆菌感染、眼部的真菌感染禁用，角膜异物未完 全去除者禁用。
10
抗病毒类———更昔洛韦滴眼液
适应症：
广谱抗疱疹病毒药，单纯疱疹病毒性角膜炎。
注意事项：
禁忌：严重中性粒细胞减少或严重血小板减少的患者禁用。 贮藏：10℃以上密闭保存。
11
抗病毒类———更昔洛韦眼用凝胶
细菌性结膜炎、角膜炎、角膜溃疡、泪囊炎、术后感染等外眼感染。
注意事项：
本品不宜长期使用。使用中出现过敏症状，应立即停止使用。 当药品性状发生改变时禁止使用。 启用最多可使用4周。
4
抗生素类———加替沙星滴眼液
适应症：泪囊炎、结膜炎、角膜炎、角膜溃疡等症。 不良反应：偶有一过性的刺激症状。 禁忌：对加替沙星及其他喹诺酮类药物过敏者禁用，糖尿病患者禁用。
适应症：
单纯疱疹病毒性角膜炎。
注意事项：
不良反应：治疗中可能发生短暂的眼痒、灼热感，针刺感及轻微视 力模糊，但很快消失，不影响治疗。
禁忌症：同更昔洛韦滴眼液。 贮藏： 10℃以上密闭保存。打开药 管后其保存期不得超过4周。
12
抗病毒类———阿昔洛韦滴眼液
适应症：
抗病毒药。用于单纯疱疹性角膜炎。
以及青光眼滤过术后促进滤过泡形成等。
8
激素类———复方妥布霉素滴眼液（典舒）
适应症：
主要用于传染性结膜炎，可以减轻水肿和炎症， 同时也适用于慢性前葡萄膜炎、化学性、放射性、灼伤性及穿透性角 膜损伤及白内障等眼科手术后的炎症。
注意事项：
长期应用可引起眼压升高及白内障 。 戴接触镜者禁用本品，但角膜屈光术后暂时配戴治疗
性亲水软镜者除外。 开启后最多可使用4周。

液相色谱串联质谱法检测乳制品中氯霉素的方法研究

液相色谱串联质谱法检测乳制品中氯霉素的方法研究

乙酸 乙酯对样 品进行提取 ，再对３ 种 固相萃取柱净化效
（ 以上实际均为色谱纯 ，科密欧 ）；超纯水。
果进 行 比较 ，最终 确 定 适合 奶 制 品中氯 霉 素测 定 的最 佳 １ ． ２ 色谱 务件
净化方式。该方法样品处理简单 、准确度高 ，在针对奶 粉、婴幼儿配方奶粉 、液态奶等奶制品中氯霉素的检测
固相 萃 取 仪 ；分 析 天 平 ；旋 转 蒸 发 仪 ；氮 吹 仪 ；碎 裂 电压 ：１ ２ ５ Ｖ；氯 霉 素定 性 离 子对 ：ｍ／ ｚ ３ ２ １ ／ ２ ５ ７（ 碰 撞 电压 ５ Ｖ ），ｍ／ ｚ
国 ９ 卞 圈 ｔ Ｊ 奶 Ａ 斗 Ｉ １ ２ … ０ Ｉ １ Ｙ ３ ・ １ Ａ ０ Ｎ Ｄ Ｓ Ａ Ｆ Ｔ ｇ
口口 液相色谱 串联质 谱法检测乳制
口
厂 ＋ １
氯霉 素 的方法研 究
邢宇 ，郭丽娜 ，孙伟
（ 黑龙江省质量监督检测研 究院，哈尔滨 １ ５ ０ ０ ５ ０ ）
中图分类号 ：Ｔ Ｓ ２ ５ ２ ． ７ 文献标识码 ：Ａ 文章编号 ：１ ０ ０ ４ — ４ ２ ６ ４（ ２ ０ １ ３）１ ０ — ０ ０ ４ ６ — ０ ３
摘
要 ：本研 究建立 了液 态奶 、全脂奶粉 、婴 幼儿配方奶粉 中氯霉素 的液相 色谱 串联 质谱分析 法 ，采 用Ｃ１ ８
分 离柱 （ １ ５ （ ） Ｘ ４ ． ６ ０ ｍｍ ×５ １ ＂ １ ＂ １ ）、 乙腈 ： ０ ． １ ％甲酸 （ ３ ５： ６ ５ ）作为 流动相 ，对不 同的提取 方式 、不 同的净化
效 果 良好 ，可 用于乳 制 品 中氯霉 素 的检验 。
液 相条 件 ： 色 谱 柱 ：分 离 柱 Ｃ１ ８（ １ ５ ０×４ ． ６ ０ ｍｍ ｘ ５ ｕ ｍ，

HPLC法测定氯霉素滴眼液中氯霉素及其氯霉素二醇物含量

HPLC法测定氯霉素滴眼液中氯霉素及其氯霉素二醇物含量
・
药 品鉴 定 ・
２ｔ ９ 第 卷 ２ ０年 月 ８ 第６ １ 期
Ｈ Ｌ 法测 定 氯霉 素 滴 眼液 中氯霉 素 ＰＣ 及 其 氯霉 素 二 醇 物 含 量
倪 晓 霞 ． 绍 忠 郑
解放 军第 一七 五 医院 药剂 科 ， 建漳 州 ３ ３ ０ 福 ６０ ０ 【 要】目的 ： 立 反 相 高效 液 相 色 谱 （ Ｌ 法 测 定 氯 霉素 滴 眼液 中氯霉 素及 其 分 解 产物 氯 霉 素 二 醇物 含 量 的 方 摘 建 ＨＰ Ｃ） 法 。 法 ： 用 Ｅ ｌ ｓ Ｄ — １柱 （ ｍ，． ｍｘ ５ 方 采 ｃｉ ｅＸ Ｂ Ｃｇ ５Ｉ ４６ｍ ｌ ０ｍｍ）流 动相 ： ｐ ｘ ； 乙腈一 一 醋酸 （００６ ．：５ ； 水 冰 ４ ．：０００ ） 流速 ：． ｍｌ ｎ； ． １ ／ ０ ｍｉ
基 一 ，一 １３ 丙二 醇 （ 简称 氯霉 素二 醇 物 ）致 使 抗 菌 活 性 降 低 。 ，
２ １ 版《 ０ ０年 中国药 典》 采用 ＨＰ Ｃ法 测定 氯霉 素含 量 ， 方法 Ｌ 但 复杂 ， 重现 性不 理 想 。笔 者 根据 文献 【— 】采 用 Ｒ — Ｌ １３， Ｐ ＨＰ Ｃ法
０９ ９ ５ ．Ｃｏ ｃｕ ｉｎ：Ｔ ｅ ｍｅｈ ｄ ｉ ｇ ｏ ｎ ｔｅ ａ ｐ ｃ ｆｒｓ ｌｔｏ ， ｅ ｒ ｄ ｃｂｌ ｙ ａ ｄ ｓｎ ｉｖｔ．Ｉ ｓ ｒｃ ｍｍｅ ｄ ｄ ．９ １ ｎ ｌ ｓｏ ｈ ｔ ｏ ｓ ｏ ｄ ｉ ｈ ｓ ｅ ｔｏ ｅ ｏｕ ｉｎ ｒ ｐ ｏ ｕ ｉ ｉｔ ｎ ｅ ｓｔ ｉ ｉ ｉ ｙ ｔｉ ｅ ｏ ｎ ｅ ｔａ ｈ ｔ ｏ ａ ｅｕ ｅ ｏｄ ｔｒ ｉｅｔ ｅｃ ｎ ｅ ｔｏ ｌｒｍｐ ｅ ｉｏ ｎ ｌｃ ｌ ｎ Ｃｈｏａ ｈ ｎｃ ｌｅ ｅｄｏ ｓ ｈ ｔｔｅｍｅｈ ｄ ｃ ｎ ｂ ｓｄ ｔ ｅｅ ｎ ｈ ｏ ｔｎ ｆＣｈｏａ ｈ ｎｃ ｌａ ｄ ｇｙ ｏｓｉ ｌｒｍｐ ｅ ｉｏ ｙ ｒ ｐ ． ｍ

氯霉素的药物分析PPT课件

氯霉素的药物分析PPT课件

● 本品分子中的硝基经锌粉还原成羟胺衍生物，在乙酸钠存在下 与苯甲酰氯进行苯甲酰化，再在弱酸性溶液中与高铁离子生成 紫红色的络合物。
例：ChP(2010) 取本品10mg,加稀乙醇1ml溶解后加1%氯化钙溶液 3ml与锌粉50mg置水浴上加热10分钟，倾取上清液，加苯甲酰
● 取氯霉素1ml，加氢氧化钠的乙醇溶液2ml， 再加硝酸2ml，加硝酸银3滴，生成白色沉 淀，沉淀加氨试液溶解，再加硝酸银5滴， 沉淀复生（氯离子的鉴别）。
分离度应符合要求，取对照品溶液顶空进样，计
算数次连续进样结果，相对标准偏差不得过 5.0%。取供试品溶液与对照溶液分别顶空进样， 记录色谱图，用标准加入法以峰面积计算，均应 符合规定。
四 含量测定
氯霉素的含量测定主要 用的是HPLC，除此之外还可 以用UV、TLC、LC/MS等方法
高效液相色谱
• 色谱条件
三 检查
• 结晶性
取本品少许，依法检查（附录IX D），应
符 合规定。
• 酸碱度
取本品，加水制成每1ml中含25mg的混悬
液，依法测定（附录 VI H），pH值应为4.5—7.5。
• 比旋度
取本品精密称定，加无水乙醇溶解并定
量稀释制成每1ml中约含50mg的溶液，依法测定（附
录 VI E），比旋度为+18.5◦至+21.5◦。
• 有关物质
目前各国药典均采用HPLC法检测 精密称取本品适量，加甲醇适量（每10mg氯霉素
加甲醇1ml）使溶解后，用流动相定量稀释制成每1ml 中含0.5mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液；另精密 称取氯霉素二醇对照品与对硝基苯甲醛对照品适量， 加甲醇适量（每10mg氯霉素二醇物加甲醇1ml）使溶 解，用流动相定量稀释制成每1ml中含氯霉素二醇物 5µg与对硝基苯甲醛3µg的混合溶液，作为杂质对照品 溶液。

氯霉素眼药水的含量测定实验报告思考题

氯霉素眼药水的含量测定实验报告思考题【摘要】参考中国药典2010年版氯霉素滴眼液含量测定方法，对 HPLC梯度洗脱时间程序进行调整并进行方法验证，结果表明该方法分离度好、准确度高。

【关键词】氯霉素滴眼液;高效液相色谱法:含量1材料与方法1.1仪器液相色谱仪:SHIMADZU LC-20A;色谱工作站: Lcsolution:检测器:SPD-20A紫外检测器。

1.2试剂庚烷磺酸钠、磷酸二氢钾、三乙胺、磷酸等均为分析纯:甲醇为色谱纯:氯霉素对照品（批号:130555-200602)、氯霉素二醇物对照品（批号:130436-200704)、对硝基苯甲醛对照品（批号:130562-200902)、羟苯乙酯对照品（批号:100847-200501）均由中国药品生物制品检定所提供;氯霉素滴眼液由本公司车间提供。

1.3色谱条件色谱柱:SHIMADZUvP-ODs ( 250mm*4.6mm. 5um):流动相A: 0.01molL庚烷磺酸钠缓冲溶液（取磷酸二氢钾6.8g，用0.0lmolL庚烷磺酸钠溶液溶解并稀释至1000ml，再加三乙胺 5ml，混匀，用磷酸调节pH值至2.5)，流动相B为甲醉;检测波长为277nm，按下表进行线性洗脱。

结果2.1专属性试验取除氯霉素外的其他各辅料，按处方比例称取，加水溶解后摇匀，作为空白溶液，按“1.6”项下方法制备空白供试品溶液，进样20pul，结果表明:辅料对氯霉素含量测得无干扰。

2.2线性关系考察精密称取25.0mg氯霉素对照品置50ml量瓶中，加流动相A-B(62:38）浴解并稀释至刻度,摇匀,作为对照储备液,精密量取0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml对照储备液至10ml量瓶中，用上述流动相稀释至刻度，摇匀，各精密量取20ul，注入液相色谱仪，记录色谱图。

以峰面积积分值（Y)与进样浓度(X: ugml)进行线性回归，回归方程为Y-50356.91X-9470.5，r-0.9998 (n-5)。

氯霉素眼药水的高效液相色谱分析

靠性。
通过高效液相色谱分析，可 以建立氯霉素眼药水产品的 质量标准和控制方法，为产 品的注册和上市提供科学依 据和技术支持。
THANKS
感谢观看
氯霉素眼药水一般采用滴眼的方式给药，使用时需遵医嘱，避免长期使用或滥用 ，以免产生耐药性和副作用。
高效液相色谱分析简介
高效液相色谱分析是一种常用的分离和检测方法，具有分离效果好、灵敏度高、应用范围广等优点。 它通过高压泵将不同成分的混合物注入色谱柱，利用不同成分在固定相和流动相之间的分配系数差异 进行分离，再通过检测器进行检测和定量分析。
氯霉素眼药水的高效液相 色谱分析
• 引言 • 氯霉素眼药水的制备 • 高效液相色谱分析方法 • 氯霉素眼药水的HPLC图谱分析 • 结果与讨论 • 结论
01
引言
氯霉素眼药水简介
氯霉素眼、 角膜炎等。氯霉素具有抗菌谱广、作用强等特点，对于革兰氏阳性菌和革兰氏阴 性菌都有较好的抑制作用。
回收率和线性范围
通过添加不同浓度的氯霉素标准品到 氯霉素眼药水中，可以测定方法的回 收率和线性范围，从而评估该方法在 实际应用中的适用性和可靠性。
与其他方法的比较
与微生物学方法的比较
将高效液相色谱法与微生物学方法进行比较，可以评估两种方法在测定氯霉素眼药水中的氯霉素含量时的准确性 和可靠性。
与其他色谱方法的比较
通过不断优化制备工艺，可以提高氯霉素眼药水的生产效率和产品质量， 降低生产成本，提升市场竞争力。
对质量控制的意义
高效液相色谱分析为氯霉素 眼药水提供了有效的质量控 制手段，可以确保产品的质
量和安全性。
分析结果可以用于监控生产 过程中的质量控制情况，及 时发现并解决潜在的质量问 题，保证产品的稳定性和可

氯霉素眼药水的高效液相色谱分析法.ppt

霉素
AR
甲醇
GR
氯霉素眼药水
普通市售
用量 200 mg 100 mg 适量
1支
三实验原理
1. 内标法 其方法是精密称取一定量的样品和内标物，制成适当溶液后进样分析，根据样品和
内标物的重量及其相应的峰面积（或峰高），求出某组分的含量。原理如下： 根据物质的重量与其峰面积（或峰高）成正比，有
在绝对校正因子法( )中：
在相对校正因子（ ）法中：
当峰形对称，峰窄时还可以用峰高代替峰面积来定量。 内标法可以消除仪器与操作或制备样本时带来的误差。
三 实验原理
2. 外标法 又称校正法或定量进样法。该法要求能准确地定量进样。其方法
是配制一系列已知浓度的标准液，在同一操作条件下，取相同量注入 色谱仪，测量其峰面积(或峰高)，作峰面积(或峰高)与浓度的标准曲 线。然后在相同条件下，注入同量样品溶液，测量待测组分的峰面积( 或峰高)，根据标准曲线，计算样品中待测组分的浓度。
分别吸取氯霉素标准贮备液1、2、3、4、5 mL，置5个l0 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，各进样20 μL，以峰面 积或峰高对浓度作图，得标准曲线。
三 操作方法
(四) 外标法测定氯霉素的含量 2. 样品的测定
精密吸取眼药水适量(约相当于氯霉素2.5 mg)，置l0 mL容量瓶中，用 甲醇稀释至刻度，摇匀，进样20 μL，得色谱图，根据峰面积或峰高从标准
氯霉素眼药水 高效液相色谱分析法
课程：药品检验技术
一 实验目的
1.学习掌握内标法测定组分含量的原理与操作方法； 2.熟悉外标法在测定组分的含量中的应用； 3.学习高效液相色谱仪的结构及正确使用方法； 4.了解氯霉素眼药水的含量测定方法。
二仪器与试药

超高效液相色谱法-串联质谱法测定牛奶中的氯霉素残留


摘
要： 应用超 高效液相 色谱 一串联 质谱 法建立 了牛 奶 中的 氯霉素 的检 测方 法。样 品经 乙酸 乙酯提取后 ， 用正 已烷
除脂 ， Ｃ ８固相 萃取 小柱 富集纯化后 ， Ｃ ８反 相柱 为分析柱 ， 经 １ 以 １ 乙腈 一 ． ｍｍ ｌＬ乙酸铵溶 液为流 动相 ， ０５ ｏ ／ 采用 电喷 雾 负电离源（ Ｓ 一） 多反应监测模式（ Ｒ ， ＥＩ ， Ｓ Ｍ） 用内标法 定量检 测。该方 法提 高 了检 测灵敏性 和分析 结果的 可靠性 ，
能 够适 应 大规 模 样 品 的分 析 要 求。
关键词 ： 高效液相 色谱 一串联质谱 ； 超 氯霉素 ； 残留
中 图分 类号 ０ ４ ６６ 文献 标 识 码 Ａ 文 章 编 号 １０ ７ ３ （０ ２ ｌ ０７— ７ １ ２ ｌ ）９…１５ Ｏ ７ ２
Ｄｅ ｅ ｍ ｉ ａ ｉ ｎ ｏ ｌ ｒ ｍｐ ｅ ｉｏ ｓ ｕ ｓ ｉ ｉ ｙ ＵＩＬＣ —Ｍ ｓ Ｍ Ｓ ｔ ｒ ｎ ｔｏ ｆ Ｃｈ ｏ ａ ｈ ｎ ｃ ｌＲｅ ｉ ｅ Ｍ ｌ ｂ ． ｄ ｎ ｋ ／
Ｗ ｕ Ｘｕａｎ ｅ １ ｔ ａ．
（ ｈｎｑｎ ｎｍ ｌ ｉ ａｅＣ ｎ ｏ ｅｔｒ Ｃ ｏｇｉｇ ０ ０， Ｉｎ ） Ｃ ｏｇ ｉ Ａ ｉａ Ｄｓ ｓ ｏｔ ｌ ｎｅ， ｈ ｎｑｎ １２ Ｃｌ ａ ｇ ｅ ｒ Ｃ ４ １ ｉ
Ａｂ ｔａ ｔ Ａ ｔｏ ｏ ｅ ｄ ｔ ｍｆ ａｉｎ ｏ ｈ ｏ ａ ｈ ｎｃ ｌ ｎ ｍｉ ａ ｅ ｅ ｏ ｅ ｙ Ｕｌ ａＰ ｒ ｍａ ｎ ｅ“ｑｌ ｒ ｍａｏ — ｓ ｒ ｃ ： ｍｅｈ ｄ ｆｒｔ ｅ ｅ ｉ ｔ ｆ ｌ ｒｍｐ ｅ ｉｏ ｌ ｗ ｓｄ ｖ ｌ ｐ ｄ ｂ ｔ ｅ ｆ ａ ｃ ｈ ｎ ｏ ｃ ｉ ｋ ｒ ｏ ｌ ｄ Ｃｈ ｏ ｔｇ ｉ
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三 操作方法
(三) 内标法测定氯霉素的含量
2. 样品含量测定 精密吸取眼药水适量 (约相当于氯霉素500 mg，标示量为2.5 mg/ mL)，
置l0 mL容量瓶中，并加入对硝基苯酚的贮备液2.5 mL，用甲醇稀释至刻度， 摇匀，进样20 μL，得色谱图。按下式计算标示量的百分含量
三 操作方法
(四) 外标法测定氯霉素的含量 1. 标准曲线的绘制
原料名称
规格
对硝基苯酚
AR
氯霉素
AR
甲醇
GR
氯霉素眼药水
普通市售
用量 200 mg 100 mg 适量
1支
三实验原理
1. 内标法 其方法是精密称取一定量的样品和内标物，制成适当溶液后进样分析，根据样品和
内标物的重量及其相应的峰面积（或峰高），求出某组分的含量。原理如下： 根据物质的重量与其峰面积（或峰高）成正比，有
分别吸取氯霉素标准贮备液1、2、3、4、5 mL，置5个l0 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，各进样20 μL，以峰面 积或峰高对浓度作图，得标准曲线。
三 操作方法
(四) 外标法测定氯霉素的含量 2. 样品的测定
精密吸取眼药水适量(约相当于氯霉素2.5 mg)，置l0 mL容量瓶中，用 甲醇稀释至刻度，摇匀，进样20 μL，得色谱图，根据峰面积或峰高从标准
四 操作方法
（一）实验条件 色谱仪 高效液相色谱仪 色谱柱 反相C18柱 温度 室温 流动相 内标法 甲醇: 水(60: 40)
外标法 甲醇: 水(80: 20) 流速 0.7 mL/min 检测器 UV检测器
三 操作方法
（二）标准贮备液的制备 1. 1mg / mL氯霉素标准贮备液的配制
精密称取氯霉素约100 mg置100 mL容量瓶中，以甲醇溶解，并稀释至刻 度，摇匀，即得。 2. 2mg/ mL对硝基苯酚 (内标)标准贮备液的配制
在绝对校正因子法( )中：
在相对校正因子（ ）法中：
当峰形对称，峰窄时还可以用峰高代替峰面积来定量。 内标法可以消除仪器与操作或制备样本时带来的误差。
三 实验原理
2. 外标法 又称校正法或定量进样法。该法要求能准确地定量进样。其方法
是配制一系列已知浓度的标准液，在同一操作条件下，取相同量注入 色谱仪，测量其峰面积(或峰高)，作峰面积(或峰高)与浓度的标准曲 线。然后在相同条件下，注入同量样品溶液，测量待测组分的峰面积( 或峰高)，根据标准曲线，计算样品中待测组分的浓度。
曲线上查得相应的浓度，并计算标示量的百分含量。
四 注意事项
1. HPLC使用的流动相必须经滤膜过滤及脱气处理。 2. 严格防止气泡进入色谱系统。 3. 色谱分析完成后，必须马上清洗柱子。本实验的流动相中含有醋酸盐缓冲液， 故测定完毕后，要先用水冲洗柱子至基线平稳（约0~60min以上），再用含水的 甲醇溶液或纯甲醇溶液冲洗30~60min。 4. 标准贮备液的配制应精密称定重量，先用少量甲醇溶解后，再用甲醇稀释至刻 度，否则因部分未溶导致浓度不准确。
五 思考题
1. 怎样选择流动相？ 2. 内标物应具备哪些条件？ 3. 变换溶剂时，直接将一种互不相溶的溶剂替换前一种溶剂，对色谱行为有 何影响?如何消除这种影响?
谢 谢！
氯霉素眼药水 高效液相色谱分析法
课程：药品检验技术
一 实验目的
1.学习掌握内标法测定组分含量的原理与操作方法； 2.熟悉外标法在测定组分的含量中的应用； 3.学习高效液相色谱仪的结构及正确使用方法； 4.了解氯霉素眼药水的含量测定方法。
二仪器与试药
1.仪器
容量瓶，移液管，高效液相色谱仪。
2. 试药
精密称取对硝基苯酚约200mg置l00 mL量ห้องสมุดไป่ตู้中，以甲醇溶解，并稀释至 刻度，摇匀，即得。
三 操作方法
(三) 内标法测定氯霉素的含量 1. 相对校正因子的测定
分别精密加入氯霉素标准贮备液1，2，3，4，5 mL，置5个l0 mL容量 瓶中，再分别精密吸取对硝基苯酚标准贮备液各2.5 mL用甲醇稀释至刻度， 摇匀。待色谱仪基线平稳后，分别进样20 μL，得色谱图。测量对硝基苯酚 及氯霉素峰面积或峰高，按公式计算相对校正因子，本实验中，由于峰形较 窄，可采用峰高法。