24葡萄糖(Glu)测定己糖激酶法

葡萄糖（GLU）测定试剂盒（己糖激酶法）适用范围：用于体外定量测定人体血清中葡萄糖的含量。

1.1 试剂盒包装规格试剂1：1×25ml，试剂2：1×5ml；试剂1：2×60ml，试剂2：2×12ml；试剂1：3×40ml，试剂2：3×8ml；试剂1：4×60ml，试剂2：4×12ml；试剂1：2×400ml，试剂2：1×160ml；试剂1：2×40ml，试剂2：2×8ml。

校准品（选配）：1×1ml；1×3ml。

1.2 试剂盒主要组成成分2.1 外观试剂1：无色澄清液体；试剂2：浅黄色澄清液体。

校准品：无色至淡黄色澄清液体。

2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。

2.3 试剂空白吸光度在37℃、340nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度应不大于0.3。

2.4 分析灵敏度测定浓度为5.55mmol/L样本时，吸光度变化值（ΔA）应在（0.2，0.4）范围内。

2.5 线性范围在（0.5，38.9）mmol/L线性范围内，线性相关系数r不小于0.996。

在[5，38.9）mmol/L范围内的线性相对偏差不大于±10%；测定结果（0.5，5）mmol/L时线性绝对偏差不大于±0.5mmol/L。

2.6 重复性重复测试两份高低浓度的样本，所得结果的变异系数（CV%）应不大于5%。

2.7 批间差不同批号试剂测试同一份样本，测定结果的批间相对极差应不大于6%。

2.8 准确度当参考物质浓度在（0，4.16）mmol/L时，实测值与标示值偏差不应超过±0.833mmol/L；当参考物质浓度在[4.16，38.9）mmol/L时，实测值与标示值偏差应在±20%范围内。

2.9校准品溯源性依据GB/T 21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求，校准品溯源至中国计量科学研究院生产的有证参考物质（GBW10062）。

己糖激酶法测定葡萄糖参数的正确设置葡萄糖相关研究是一项十分重要的专业，因为葡萄糖是重要的热量来源，在生物体内起着重要的作用。

因此，对葡萄糖参数的准确测定就显得尤为重要。

己糖激酶法是测定葡萄糖参数最常用的方法之一，但是测定过程较为复杂，需要合理安排参数，以得到准确的测定结果。

一、己糖激酶法的原理和测定步骤己糖激酶法是一种通过利用葡萄糖氧化本身的特性来测定葡萄糖含量的方法，该法是利用己糖氧化生成糖醛酸，随后糖醛酸被糖醛酸酶氧化消除成乙醇和乙酸，乙醇和乙酸随后反应生成醛酸，醛酸再通过反应变成氧化酶进行测定，可以根据吸光度求出葡萄糖含量。

具体的测试步骤为：（1）准备样本：样本分离，浓缩，配制到给定的体积，然后放置恒温器中。

（2）加入反应液：将糖醛酸酶、己糖氧化酶和其他辅助酶加入样本中，使反应液的体积配制到给定的鼓泡液中。

（3）加入标准溶液：将经过稀释的反应液倒入干净的烧杯中，然后加入标准溶液，使样本和标准溶液中的葡萄糖含量得到恒定。

（4）测定反应体系：用分光光度计测定反应液中的吸光度，可以根据吸光度大小来判断样本中的葡萄糖含量。

二、己糖激酶法的参数设置在测定葡萄糖含量参数的过程中，己糖激酶法的参数设置至关重要，以确保最终的测试结果是准确可靠的。

（1）反应温度：反应温度一般在30-40°C，温度过高或过低会影响激酶活性，使反应速率受到影响。

（2）反应时间：一般反应时间为1.5-2小时，反应时间较短则测定结果偏低，反应时间较长可以抑制非葡萄糖物质以获得较准确的结果。

（3）pH值：反应的pH值一般在7-8之间，较高的pH值会影响糖醛酸酶活性，从而使反应时间变长。

（4）酶用量：糖醛酸酶和己糖氧化酶用量应根据浓度适当调整，过多或过少都会影响测定结果的准确性。

（5）测定溶液体积：测定溶液的体积应控制在给定的比例，以确保测定的精准度。

三、结论由上文可以看出，己糖激酶法是一种测定葡萄糖含量的重要方法，但是要想得到准确的测定结果，就必须正确设置测定的参数，包括反应温度、反应时间、pH值、酶用量等，这样才能保证得到准确可靠的测定结果。

世界最新医学信息文摘 2016年 第16卷 第104期223·医学检验·己糖激酶法与酶电极法测定葡萄糖的方法学比较薛建，徐俊，黄辉（苏州大学附属儿童医院 检验科，江苏 苏州 215000）摘要：目的评价己糖激酶法与酶电极法测葡萄糖的可靠性、相关性及临床意义。

方法在日立7600生化分析仪用己糖激酶法与在Nova CCX血气分析仪用酶电极法进行精密度实验、线性范围实验及方法比较实验。

结果①精密度实验：己糖激酶法：4.5 mmol/L浓度的质控品，批内CV=0.92%，批间CV2.33%；15.80mmol/L浓度的质控品，批内CV=1.03%，批间CV=2.40%。

酶电极法：4.5mmol/L浓度的质控品，批内CV=0.95%，批间CV2.53%；15.80mmol/L浓度的质控品，批内CV=1.26%，批间CV=2.88%。

②线性范围实验：己糖激酶法线性范围为1~50mmol/L，酶电极法线性范围为1~40mmol/L。

③方法比较实验：回归方程Y=0.4530+0.8940X，r=0.9946，两种方法相关性良好。

结论己糖激酶法具有精密度好，线性范围宽，系统误差小等优点，而酶电极法精密度和线性范围与己糖激酶法相比稍差，但两种方法相关性好，已能满足临床常规使用。

关健词：己糖激酶法；酶电极法；葡萄糖中图分类号：R-331 文献标识码：B DOI：10.3969/j.issn.1671-3141.2016.104.1900　引言在许多大中型医院中，同一个实验常同时使用不同厂家、不同型号的分析仪，因仪器与测定方法的不同，出现不同结果，给临床医师诊断、分析病情带来误导，给评估、解释带来困难。

为此，就日立7600生化分析仪与Nova CCX血气分析仪分别采用己糖激酶法与酶电极法测定葡萄糖，现按标准操作规程进行测定，计算准确性、精密度及回归方程，进行方法学比较。

己糖激酶法现已经广泛投入临床使用，是检测葡萄糖的一种成熟方法；酶电极法应用电化学原理，通过直接测定溶液中离子的浓度，测定结果快速，但是后者准确性、精密度如何，线性范围怎样，系统误差是大是小，与己糖激酶法相关性如何，结果可靠与否，现就以己糖激酶法为参考方法，对酶电极法测定葡萄糖作一方法学比较评价。

血清葡萄糖（GLU）己糖激酶（HK法）测定法1.实验原理己糖激酶紫外比色测定法。

HK葡萄糖+ ATP -------------﹥G-6-P+ ADPMg2+G6PDHG-6-P + NAD+-------------﹥6-磷酸葡萄糖+NADH + H+2. 标本：2.1 病人准备：12小时禁食。

2.2 类型：血清或血浆（EDTA，肝素或氟化钠），标本最好不要溶血。

迅速分离血清或血浆，减少红细胞糖酵解时葡萄糖的损失。

随机收集尿样。

3. 标本存放：血清、血浆应在血液采集1小时内，尽早分离。

加入糖分解抑制剂（NaF，KF）后的稳定性：15～25℃保存可稳定1天,4～8℃保存可稳定7天。

血清中的葡萄糖，无溶血，无细菌污染，没有添加的防腐剂，在25℃下可稳定8个小时，在4℃下可稳定72小时。

尿样应保存在2～8℃下并尽快进行分析。

脑脊髓液如果避免蒸发可在2～8℃下稳定至少5天，5天内不检验的标本应在收集后立即储存在-20℃的条件下。

4. 标本运输：常温条件下保存运输。

5. 标本拒收标准：细菌污染、超时送检的的标本。

6. 实验材料6.1 试剂申能血糖测定试剂盒（141 2517170 1 试剂1 6×64ml＋试剂2 6×16ml）6.1.1 试剂组成试剂1：Tris缓冲液pH7.8 80mmol/LMg2+4mmol/LATP 1.7mmol/LNAD 1.7mmol/L试剂2：Mg2+4mmol/L己糖激酶>1500U/L葡萄糖-6-磷酸脱氢酶>1500U/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂不可冰冻。

6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

6.1.5 注意事项：此试剂为体外诊断用。

不要入口，吞下有害。

保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如排向下水道请用大量的水冲洗。

血清中葡萄糖含量检测的方法研究进展【摘要】血清葡萄糖含量是临床生化检验中重要的指标，其的准确测定对糖尿病等疾病的诊断、治疗都有重大意义。

本文介绍了近几年血清中葡萄糖含量检测的主要方法以及这些方法的一些研究结果。

【关键词】血清；葡萄糖；检测方法血清中葡萄糖是人体内各组织细胞活动所需的物质。

人体内的血糖必须保持一定的水平才能维持体内各器官和组织的需要。

正常人在空腹血糖浓度为3.9～6.0mmol/L。

空腹血糖浓度超过6.0mmol/L称为高血糖而血糖浓度低于3.9mmol/L 称为低血糖。

血清中葡萄糖是临床生化检验中的重要指标，可以为糖尿病、高血压以及心脑血管系统等疾病的诊断、治疗用药、病情监测以及疾病预防等方面提供客观依据。

因此，对其进行准确的测定具有极其重要的意义。

1血清中葡萄糖的主要检测方法目前，血清中葡萄糖的检测方法主要有：葡萄糖氧化酶（GOD-POD）法、己糖激酶法（HK法）、葡萄糖脱氢酶法（GDH法）、气相色谱-同位素稀释质谱法（GC-IDMS法）以及无创血糖测量法等。

下面就对以上方法进行简要的介绍。

1.1葡萄糖氧化酶（GOD-POD）法葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)将葡萄糖氧化成葡萄糖酸，同时释放过氧化氢。

过氧化物酶(peroxidase，POD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。

红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。

通过测定吸光度就能计算出血液中葡萄糖的含量。

该法的优点有：操作简便，用血量少，成本低，多见于便携式血糖仪，是我国卫生部推荐的血糖测定的常规方法。

但缺点是：过氧化酶的特异性较差，尿酸、维生素C、胆红素等可与色原性物质竞争过氧化氢而抑制反应，引起结果偏低。

且该法线性范围较窄（0.1~20.0mmol/L）。

同时，葡萄糖氧化酶对β-D-葡萄糖高度敏感，而新配制的葡萄糖标准溶液主要为α-D-葡萄糖，为使检测结果准确，需静置溶液2h以上（最好过夜）待其完全转化为β-D-葡萄糖再使用。

葡萄糖测定试剂盒（己糖激酶法）适用范围：用于体外定量测定人血清中葡萄糖的含量。

1.1包装规格1）试剂1：60mL×8 、试剂2：48mL×2；2）试剂1：65mL×3 、试剂2：39mL×1；3）试剂1：50mL×4 、试剂2：20mL×2；4）试剂1：50mL×1 、试剂2：10mL×1；5）试剂1：100mL×2 、试剂2：20mL×2。

1.2组成成分试剂1：缓冲液 100mmol/L三磷酸腺苷>1.0mmol/L氧化型辅酶Ⅰ>1.0mmol/L试剂2：己糖激酶>750KU/L葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 >1KU/L2.1 试剂装量应不低于瓶签标示装量。

2.2 外观试剂1：无色澄清液体；试剂2：无色澄清液体。

2.3 试剂空白吸光度测定温度：37℃；测定波长：340nm；比色杯光径：1.0cm；其空白吸光度应＜0.2。

2.4 准确度测试国家标准物质GBW09175，偏差应不超过±15%。

2.5 精密度2.5.1重复性重复测定高、中、低三个水平浓度的血清样品或质控样品，其结果变异系数（CV）应不超过5.0％。

2.5.2批间差重复测定血清样品或质控样品，其结果相对极差R不超过10％。

2.6 线性在[0.5,50.0]mmol/L范围内，线性回归的相关系数应不低于0.99, [0.5,5.0]mmol/L浓度的线性绝对偏差不超过±3.0mmol/L，(5.0，50.0]mmol/L浓度的线性相对偏差应不超过±15%。

2.7 分析灵敏度0.5mmol/L葡萄糖样本的吸光度差值为:0.005≤△A≤0.1。

2.8 稳定性原包装试剂盒在2℃～8℃条件下贮存达到18个月，性能指标应符合2.2、2.3、2.4、2.5.1、2.6、2.7之规定。