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罗汉果皂苷 V 在人工胃液中的稳定性和体外代谢研究卢凤来;黄振聪;颜小捷;陈月圆;徐风;蔡少青;李典鹏【摘要】为了研究罗汉果皂苷 V 在胃肠道中的稳定性及体外代谢特征，该研究首先考察罗汉果皂苷 V 在人工胃液中的稳定性，然后在体外模拟人肠内环境，研究人肠内细菌对该成分的代谢作用，并采用 LCMS/IT-TOF 液质联用仪分析了培养液中的化学成分，考察了罗汉果皂苷 V 在人工胃液和人肠道菌群培养液中的变化。
结果表明：罗汉果皂苷 V 在人工胃液条件下，迅速发生酸水解反应，分别脱去3个糖苷、4个糖苷、5个糖苷及2个氢转化为二糖苷、一糖苷与脱氢苷元，其脱糖反应随着时间的延长而反应越完全，反应4 h 后就只剩下苷元；该化合物在人的肠道菌群作用下经过脱糖反应转化为四糖苷、三糖苷、二糖苷、一糖苷，经过糖苷化反应转化成六糖苷。
通过体外实验，初步了解罗汉果皂苷 V 在胃液和肠道环境中的降解规律，该研究结果为今后探讨罗汉果皂苷在人体内的代谢与生物转化规律提供了物质和技术基础。
%In order to evaluate the stability of mogroside V in gastrointestinal tract and study its in vitro metabolism, mogroside V was incubated with artificial gastric juice and human intestinal bacteria,and a liquid chromatography/mass spectrometry method by LCMS/IT-TOF was applied to analyze the products of mogroside V in artificial gastric juice and human intestinal bacteria culture medium.The results indicated that mogroside V was degraded quickly in artificial gas-tric juice to be secondary glycosides with two glycosyls or one glycosyl and mogrol without glycosyl.And the longer time it was incubated,the more completely it was degraded,its product was mogrol while the incubation time was 4 h.While in culture medium of human intestinal bacteria,mogroside V wastransformed to mogroside IV(isomer)mogroside III(i-somer),mogrosideII(isomer)and mogroside I(isomer)by deglycosylation reaction,as well as to glycoside with six gly-cosyls,by glucosylation reaction.Therefore,a general knowledge on the degradation of mogroside V was obtained after this experiment,which would shed light on the further exploitation of mogroside V and Siraitia grosvenorii .【期刊名称】《广西植物》【年(卷),期】2015(000)006【总页数】4页(P792-795)【关键词】罗汉果皂苷 V;人肠道菌群;人工胃液;液相色谱-质谱联用【作者】卢凤来;黄振聪;颜小捷;陈月圆;徐风;蔡少青;李典鹏【作者单位】广西植物功能物质研究与利用重点实验室广西植物研究所，广西桂林 541006;贺州市人民医院药剂科，广西贺州 542800;广西植物功能物质研究与利用重点实验室广西植物研究所，广西桂林 541006;广西植物功能物质研究与利用重点实验室广西植物研究所，广西桂林 541006;北京大学药学院，北京100191;北京大学药学院，北京 100191;广西植物功能物质研究与利用重点实验室广西植物研究所，广西桂林 541006【正文语种】中文【中图分类】R285Key words:mogroside V;human intestinal bacteria;artificial gastric juice;liquid chromatography/mass spectrometry罗汉果(Siraitia grosvenorii)为有名的药食两用植物,其干燥果实对呼吸系统和消化系统具有多种药理作用,能保肝降酶、治疗糖尿病和预防其并发症,具有调节免疫功能、活血化瘀、抑制变形链球菌、抗癌、清除自由基及抗氧化等作用(王勤等,1999;张宏等,2011)。
通过中药成分的肠内细菌生物转化和/或代谢研究中药北京大学药学院·天然药物及仿生药物国家重点实验室杨秀伟一、肠内细菌与人和中药自古以来，中医用药的特色之一是以汤剂的形式口服用药。
实际上，这种经口服用的传统汤剂（复方）在发挥药效作用之前，除了在炮制、煎煮过程中会产生动态变化而外，进入机体后亦要发生动态变化。
这种变化的第一个过程是在消化道内被消化液和人肠内细菌生物转化和/或代谢。
前者包括胃液、十二指肠液，等等。
后者包括构成人肠内微生态环境的细菌。
现代科学研究证明人和动物的肠内菌丛99％是厌氧性细菌，亚种和血清型水平以下的细菌达 100种以上。
不同个体肠内菌丛构成不同，但总的趋势是类同的，同一个体相对稳定。
在人的胃内，链球菌和乳杆菌为优势菌群；在十二指肠，韦荣球菌、乳杆菌和链球菌为优势菌群；在回肠，韦荣球菌、乳杆菌、链球菌、双岐杆菌和消化链球菌为优势菌群；在盲肠和直肠，拟杆菌科细菌、链条杆菌、双岐杆菌和消化链球菌为优势菌群。
根据肠内细菌与宿主之间的关系，可将其分为共生性细菌和病原性细菌以及介于两者之间的细菌。
这些细菌产生各种各样的酶，可将诸如食物、食品、中药等中的化学物质转换为变异原性物质或致癌物质等，使药物失活。
同时，它们亦可使无活性型药物转换为活性型药物，即所谓“药物活化”，使有害物质无毒化。
在维持人体健康、增强机体免疫力、预防老年疾病等方面起着十分重要的作用。
已有研究证明：以干粉形式吞服的中药，这些干粉细胞在消化液和肠内菌作用下破壁后向消化道释放出内含化学物质；而以汤剂形式口服的中药，化学物质直接进入消化道。
这些化学物质包括分子态或离子态、大分子或小分子、结合型或游离型。
由于中药基源复杂→成分复杂→性质复杂→作用复杂（多系统、多途径、多成分、多靶点→整体效应）→生物效应复杂；有肠内发生的，有体液和组织中发生的；有物理性相互作用，有化学性相互作用，更有生物性相互作用，因此，以化学物质为基础、以生物效应为现象，组成了庞大而复杂的体系。
龙胆苦苷的肠内菌群代谢研究杨肖锋,宋纯清(上海中医药大学中药研究所,上海 200032) [摘要] 目的:研究体外培养的大鼠肠内菌对龙胆苦苷的代谢及大鼠灌服龙胆苦苷经体内肠菌代谢后血清中的药物成分变化。
方法:用HPL C法测定肠内菌培养液中和大鼠灌服龙胆苦苷后血清中的龙胆苦苷及其代谢产物龙胆碱、龙胆醛的含量。
结果:血清中第2天检测到龙胆碱和龙胆醛,而龙胆苦苷的含量在第3天呈下降趋势;肠内菌体外培养液中龙胆苦苷含量的下降和龙胆碱与龙胆醛含量的上升呈同步变化。
结论:龙胆碱和龙胆醛是龙胆苦苷体内代谢的重要生物活性产物。
[关键词] 龙胆苦苷;肠内菌代谢;龙胆碱;龙胆醛;高效液相色谱[中图分类号]R969.1 [文献标识码]B [文章编号]1001-5302(2000)11-0673-03 龙胆苦苷是常用中药龙胆的主要有效成分,有保肝、利胆、抗炎等作用[1,2]。
龙胆苦苷遇氨水易转化为龙胆碱、龙胆醛等[3],文献报道龙胆苦苷转化生成的生物碱具有较强的生物活性[4,5]。
龙胆苦苷是否在体内通过类似的转化途径生成活性生物碱而起作用,至今尚无深入的研究报告。
本文以龙胆苦苷、龙胆碱和龙胆醛作为检测指标,用HPLC法观察了体外培养环境下大鼠肠内菌对龙胆苦苷的代谢及大鼠灌服龙胆苦苷后血清中的药物成分变化。
1 材料和方法1.1 仪器HP1100高效液相色谱系统:四元泵,在线脱气机,自动进样器,柱温箱,二极管阵列检测器(DAD);色谱柱ODS Supelcosil TM(5μm,150mm×4.6 mm);HP1100化学工作站。
Beckman Avanti TM-30台式离心机;Beckman Avanti TM-J25高速离心机。
1.2 试剂标准品龙胆苦苷、龙胆碱、龙胆醛由本所自制,经m p,UV,IR,1H NM R,13C NM R,M S鉴定;纯度经HPLC检查,龙胆苦苷98%以上,龙胆碱和龙胆醛99.5%以上。
微生物对中药化学的代换作用可避免的与肠道菌群接触。
肠道菌群对中药有效成分的代谢途径主要是以水解和还原反应为主。
很多中药成分都是借助肠道细菌的作用转化为有效成分而达到治疗作用，尤其是具有水溶性糖部分的葡萄糖苷成分。
这类化合物通常在肠道内难以吸收，生物利用度低，肠内滞留时间较长而易受到肠道菌群的作用，其原形物药理活性较小，经肠菌代谢后被水解生成苷元而发挥其药理作用，被认为是“天然前体药物”［1］。
此外在促动中药研究的规范化和现代化上，杨秀伟［2］提出了中药化学成分的人肠道内细菌生物转化模型和肠菌代谢实验的标准操作规程，用于研究和评价中药化学成分在肠道的生物转化。
本文就肠道菌群在中药有效成分代谢和指导临床中西药物合用方面研究实行综述。
1肠菌代谢的研究内容肠道菌群对中药成分的代谢作用研究主要有以下4个方面。
1．1口服与非口服药的比较比较服药前后血液、尿中的物质及其含量，初步分析代谢途径与机制。
若两种给药方法药效作用不同，肠道菌群则可能在代谢中起关键作用。
Dreessen发现小鼠静注番泻苷40mgkg－1无泻下作用，而口服则有很强的泻下作用，进一步研究表明其代谢产物大黄酸蒽酮的致泻作用最强［3］。
1．2使用无菌或伪无菌、悉生动物和普通动物实行比较对药物在肠道内容物、粪便、血样及尿样中代谢产物实行分析，进一步明确肠道菌群在中药有效成分代谢转化过程中的作用。
Yang研究芍药苷的肠菌代谢情况，分别给无菌大鼠和普通大鼠灌胃一定剂量的芍药苷，观察其血药浓度变化。
无菌大鼠中，芍药苷可迅速入血并维持较高的血药浓度;普通大鼠中，芍药苷在10min达峰后迅速消除，前者的药动学参数AUC比后者高2倍多。
证明口服芍药苷确能被肠内菌实行结构转化且占给药量的一半以上［4］。
1．3筛选主要代谢作用的菌种(或菌株)研究药物成分特性，分析与其代谢相关的酶，并对该种酶的菌种实行研究。
Hasegawa等从人粪便中分离出厌氧菌Eubateriumsp．A-44，并从菌种中提纯出特异性葡萄糖醛酸酶，实验得出该酶对人参皂苷成分有代谢作用［5］。
罗汉果醇抗肿瘤活性及其作用机制研究符毓夏;王磊;李典鹏【摘要】Mogrol is the aglycone of mogrosides, and it is reported that Mogroside V has good cancer prevention and an-ti-cancer efficacy. This study was to explore the inhibitroy effects of mogrol against proliferation of human nasopharyngeal cancer CNE1 cells, and the molecular mechanism of apoptosis induced by mogrol. The inhibitory activities of different tumor cells were assessed by MTT assay. The concentration-dependent inhibition by mogrol on the most sensitive CNE1 cells were further studied. Cell clonogenicity was detected by colonyforming assay to further verification the inhibition of mogrol on the proliferation of CNE1 cells. And the apoptosis was examined by Annexin V/PI double staining. To further analyze the apoptosis mechanism of cell apoptosis, we detected the Caspase-3, Survivin, Bax and Bcl-2 mRNA expres-sion levels in CNE1 cells after treating with mogrol by real time-PCR. The results showed that mogrol could significantly inhibit the proliferation of DU145, HepG2, A549, CNE1, CNE2 cells, the inhibitory effect of CNE1 cells was the mostsignificant and in a dose-dependent manner, the IC50 was (81.48 ± 4.73) μmol·L-1. The colonyforming assay also veri-fied that mogrol could inhibit the proliferation of CNE1 cells. Apoptosis of CNE1 cells was examined by Annexin V/PI double staining, the apoptosis rate was increased with concentration. Real time-PCR showed that mogrol could promote the expression of Caspase-3, Bax genes and inhibit the expressionof survivin, Bcl-2 genes. Therefore, mogrol can proba-bly induce the apoptosis of tumor cells, and result in anti-tumor activity, by promotingthe expression of Caspase-3, Bax and other pro-apoptotic genes and inhibiting the expression of survivin Bcl-2 and other anti-apoptotic genes.%罗汉果醇是罗汉果皂苷的苷元，有研究报道罗汉果皂苷V具有防癌抑癌作用。
515125X 2X 3-4.176667X 23表3 响应面分析因素水平表Table 3 Lis t of levels and factors水平编码因素-10+1X 1葡萄糖(%) 1.8 2.0 2.2X 2酵母膏(%) 1.8 2.0 2.2X 3玉米浆(%)3.84.04.2表4 响应面试验设计及结果Table 4 Experi ment design and result of response surface analysi s 编码X 2X 3X 5酶活实际值(U P mL)酶活预测值(U P mL)11-10152.54151.452-110160.78160.1331-10179.54178.244110182.56183.3750-1-1160.45158.6560-11177.98178.56701-1174.76174.668011170.24171.079-10-1153.18154.981010-1177.43176.7711-101170.96171.0912101178.46177.4613000180.43184.2514000181.12181.8915179.54178.28式中Y 是赖氨酸脱羧酶的酶活(U P mL),X 1、X 2、X 3分别为葡萄糖、酵母膏和玉米浆添加量。
从该方程的方差分析表(表略)可知,本试验所采用的模型高度显著,Radj 2值为0.9165,表明酶活的91.65%的变异分布在方程的9个因子中,总变异中仅有8.35%不能由模型解释,R 2值为97.02%,表明酶活的预测值和实际值之间具有较好的拟合度。
该模型可用于预测蜂房哈夫尼菌的赖氨酸脱羧酶酶活的实际情况。
将回归方程(1)分别对其自变量(X 1、X 2、X 3)求一阶偏导并均令其为0,即可得到一个三元一次方程组,通过借此方程组得到比酶活的最大值和对应的极值点。
极值点为X 1=01035,X 2=0.4013,X 3=-0.05515,相当于三者的最适浓度分别为葡萄糖1.84%,酵母膏2.20%,玉米浆3.66%。
罗汉果皂苷的微波提取
黎海彬
【期刊名称】《食品科学》
【年(卷),期】2007(028)003
【摘要】中药罗汉果是广西特产,本文采用微波辅助提取技术,从罗汉果中提取罗汉果皂苷,并优化出最佳的微波提取功率、微波辐射时间、固液比及原料的粉碎度.结果表明,最佳的微波辐射时间是5 min、微波功率是495 W、原料的粉碎度为不小于0.15 mm及固液比为1:30,和传统的加热提取相比较,微波辅助提取的提取时间短,但具有较高的提取率.微波辅助提取的提取时间为5 min时,提取率达76.56%,而传统的加热提取时间为2 h时,提取率为68.46%.
【总页数】5页(P143-147)
【作者】黎海彬
【作者单位】广州城市职业学院生物与环境工程系,广东,广州,510405
【正文语种】中文
【中图分类】Q946.83
【相关文献】
1.连续动态逆流提取罗汉果皂苷V的工艺参数研究 [J], 杨文国;李送军;邱丽凰;杨美英;赵军;陈雪玲
2.罗汉果中罗汉果皂苷提取工艺的优化及其止咳祛痰作用 [J], 陈敏;王翠红
3.浅析罗汉果皂苷的提取方法及药用功能 [J], 关红艳;付晶晶;孙健;唐昭
4.罗汉果皂苷提取物对INS-1胰岛β细胞糖脂毒性的保护作用研究 [J], 喻柯柯;刘
合生;张境;杨文康;曹少谦;陈秋平;戚向阳
5.罗汉果皂苷提取物对实验性糖尿病大鼠的血管保护作用及机制 [J], 白玉鹏;李娜;顾晔
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大连工业大学《生物转化及资源化利用》文献综述学生姓名黄君所在院系生物工程学院专业2015级生物学学号15107100002029成绩《生物转化及资源化利用》——文献综述2015级生物学专业黄君15107100002029 苷类中药肠道细菌生物转化的研究进展黄君（大连工业大学生物工程学院辽宁大连116034）摘要：苷类中药生物利用度低，摄入后需经肠道细菌代谢成苷元而发挥其药理作用．由于人群中不同个体的肠道茵群对同一苷类中药成分具有不同的生物转化作用，不同菌株的生物转化底物及代谢产物亦不相同。
造成不同个体苷类中药的药效差异．因此，筛选出具有生物转化苷类中药活性的特异性肠道细菌茵属和菌株，将之与苷类中药同时摄入，将有助于消除苷类中药在人群中应用的个体差异．本文就苷类中药生物转化与肠内吸收的关系、特点及应用的研究进展加以综述。
关键词：苷类；中药；生物转化；生物利用度Advances in biotransformation of glycosides from Chinese medicinaI by human intestinaI Bacteria(Biological Engineering, Dalian University of Technology, Dalian 116034) Abstract:The bioavailability of glycosides from Chinese medicinal is low．Glycosides are metabolized Into aglycons in presence of intestinal bacteria before they are absorbed．As there is individual difference in bioavailability Of glycoside，and there are also difference in substrate and metabolite among bacterial strains，drug effect difference is thus observed among individuals．Therefore，screening the specific bacterial genus or strains and using them as additive of glycosides should remove individual difference in bioavailability of glycosides．This article reviewed the recent advances in relationships，featlures and application in biotransformation of glycosides from Chinese medicinal．Key Words：GIycoSide；Chinese medicinaI；Biotransformation ；BioavailabiIity引言苷(glycosides)，又称配糖体，是由糖或糖的衍生物，如氨基酸､糖醛酸等与另一非糖物质通过糖的端基碳原子连接而成的化合物，其中非糖部分称为苷元(ag1ycone)或配基.苷的药效由苷元决定的，苷元与糖结合成苷后，其理化性质改变，影响了药代动力学过程､药效强度和持续时间.药代动力学研究证明，苷类成分肠道内难以吸收､生物利用度低､肠内滞留时间较长而易受到肠道菌群的作用.苷经肠道细菌代谢后被水解，生成苷元而发挥其药理作用[1-4].因此，将苷类中药转化成苷元，提高其生物利用度的研究是有效提高其药效的一个重要方法，此方面研究已经成为国内外研究热点｡目前研究的转化方法主要有化学法，如日本Hayashibara橙皮研究所[5]采用糖基化方法制成糖基化橙皮苷｡在强烈的化学反应中苷类物质的结构和构型会发生改变，导致其产物不稳定或药效消失｡酶解法，如瑞士雀巢研究中心[6]采用酶修饰方法，用橙皮苷酶水解橙皮苷获得橙皮素[7]｡糖苷.但酶解法转化苷类中药是以苷提取物为作用底物，使用糖苷水解酶作为催化剂，工艺过程复杂，不利于工业化生产｡生物转化法的本质是由微生物产生的一种或几种特殊胞外或胞内酶作为生物催化剂对外源性底物进行的一种或几种化学反应｡生物转化既可增加目标产物产量，克服化学合成的缺点，又因其大多数是在室温､中性环境中作用，减少了产物分解､异构､消旋和重排反应，因此具有位置选择性和立体选择性，和无毒､无污染､低成本､高收率､环境友好等特点[8]｡本文将围绕苷类中药生物转化与肠内吸收的关系､特点及应用加以综述｡1.生物转化生物转化(biotransformation)是以微生物或酶作为催化剂，以可再生资源取代化石资源，大规模生产人类所需的化学品、医药、能源、材料等，是解决人类目前面临的资源、能源和环境危机的有效手段。
#论著#罗汉果皂苷Ó的人肠内细菌生物转化杨秀伟1,2v,张建业1,徐 嵬1(北京大学1.药学院天然药物学系,2.天然药物及仿生药物国家重点实验室,北京 100083)[摘 要]目的:探讨人肠内细菌对中药罗汉果中罗汉果皂苷Ó结构的生物转化,确定转化产物的结构,为原形化合物罗汉果皂苷Ó在肠内吸收的评价提供科学依据。
方法:采用人肠内细菌与罗汉果皂苷Ó在厌氧条件、37e 共温孵培养的方法对其结构进行生物转化,通过硅胶柱色谱技术分离、纯化生物转化产物,应用红外光谱(i nfra -red spectrom etry ,I R )、核磁共振波谱(nuc lea r m agnetic resonance spectrome try ,NM R )和质谱(m ass spectroscopy ,M S)等技术方法确定生物转化产物的结构。
结果:罗汉果皂苷Ó可由人肠内细菌依次脱去C -3葡萄糖基和C -24龙胆二糖基转化产生罗汉果皂苷ÒA1和罗汉果醇。
结论:罗汉果皂苷Ó可被人肠内细菌进行生物转化,产生次级苷罗汉果皂苷ÒA1及其苷元罗汉果醇。
[关键词]罗汉果;皂苷类;肠;细菌;生物转化[中图分类号]R 282171[文献标识码]A [文章编号]1671-167X (2007)06-0657-06B iotransform ation of m ogroside Óby hu m an intestinal bacteriaYANG X i u -w e i 1,2v ,Z HANG Jian -ye 1,XU W e i 1(1.D epart ment of N atura lM edic i nes ,2.State K ey Labo ra t o ry of N atura l&B i om i m etic D rug s ,P ek i ng U n i versity Schoo l o f Phar m aceutical Sciences ,Be iji ng 100083,Ch i na)AB STRACTObjective :To i n vesti g ate the b i o transfor m ation ofm ogrosi d e Ó,one of t h e m a i n che m ical constituent in the fru its of M o m ord ica gro s venori Sw i n g le ,by the cr ude enzy m es of hum an i n testi n al bacte -ria ,and deter m ine the str ucture o f biotransfor m ation products and prov ide scientific basi s for absorpti o n e -va l u ation o f pri m ary m og r oside Ói n hum an i n testi n e .M e t hods :The m ogrosi d e Ów as i n cubated w ith cr ude enzy m es o f hum an i n testi n a lbacteria under t h e anaerob ic env ironm ent and 37e conditi o n to trans -f o r m m og r oside Ó.The b i o transfor m ati o n products w ere iso lated and purified by silica ge l co l u m n chr o -m atography ,and struct u ra ll y deter m ined by i n fra -red (I R )and nuclear m agnetic resonance (NMR )spectro m etry and m ass spectroscopy (M S)techn i q ues .Results :M ogrosi d e Ów as converted to m og r o -si d e ÒA1and m ogrol by successive deglycosylati o n a tC -3o f t h e glucosy l group and C -24o f the gentiob i o -syl group .Conclusion :The hu m an i n testi n al bacteria sho w ed potent ability to transfor m m ogrosi d e Óto re lease secondary g l y coside m ogrosi d e ÒA1and ag l y cone m ogro.l K EY W ORDS M o m or d ica grosvenori ;Saponins ;I ntesti n es ;B acter i a ;B i o transfor m ation罗汉果为葫芦科植物罗汉果M o m or d ica grosve -nori Sw i n g le [S iraitia grosvenorii (Sw i n gle )C .Jeffrey]的干燥成熟果实,为历版5中国药典6收载的法定中药,亦为保健果品和我国的传统出口商品,赢得国内外的赞誉。
罗汉果性凉、味甘,入肺、肠二经,有清热润肺、凉血、滑肠通便之功效,中医用于治疗百日咳、慢性气管炎、咽喉炎、便秘、胃肠小疾等。
化学和药理学研究工作表明罗汉果主要含有皂苷类化学成分[1-5];该类成分有镇咳、祛痰、平喘、调节免疫功能、降低血糖、抗病毒和抑制肿瘤细胞生长等药理作用。
在罗汉果总皂苷类化学成分中,罗汉果皂苷(m ogroside)Ó是含量较高的成分之一。
为了更好地开发利用罗汉果皂苷,探讨其生物活性物质基础,以及探讨其在人肠的吸收是原形化合物还是其人肠内细菌生物转化产物,我们首先对罗汉果皂苷Ó结构的人肠内细菌生物转化进行了研究,现将结果报道如下。
同时,本项研究也是在体外模拟人肠内环境,通过研究人肠内细菌对中药化学成分代谢和/或生物转化来寻找其活性成分的一种尝试。
基金项目:国家高技术研究发展计划863重点项目基金(2002AA2Z343C )和北京市科技专项(Z0004105040311)资助Supported by t he N a -ti onalH i gh Technol ogy Research and Devel op m en t /8630Progra m ofCh ina (2002AA2Z343C )and B eiji ngM un i ci pal Speci a-l purpose S ci en ce Foudationof Ch i na (Z0004105040311)v C orres ponding au t hor .s e -m ai ,l x w yang @b j m u .edu .cn#657#北京大学学报(医学版)J OURNAL OF PEK I NG UN I VERS I TY (HEALTH SC I ENCES ) Vo.l 39 No .6 D ec .20071 材料与方法1.1 药品与试剂 参见文献[6,7]。
1.2 主要仪器红外光谱(i n fra -red spectro m etry ,I R )用NEXUS -470FT -I R 型仪器(N ico let 公司)测定,溴化钾(KB r)压片;电子碰撞质谱(electron i m pact m ass spectro m etry ,EI -M S)用TRACE M S 2000型质谱仪(F i n n i g an 公司)测定,E I 电离源,70e V;电喷雾电离飞行时间质谱(e lectrospray ion iza ti o n -ti m e o f fli g ht m ass spectro m etr y ,ESI -TOF-M S )用MDS SC I EX QSTAR 型质谱仪(美国AB I 公司)测定;核磁共振波谱(nuclear m agnetic resonance spectro m etry ,NMR)用I N OVA-500型仪器(V arian 公司)测定,1H 为500MH z ,13C 为125MH z ,吡啶-d 5(py ri d i n e ,py -d 5)为溶剂,三甲基硅烷(tri m ethy lsilane ,TM S)为内标。
其他仪器参见文献[6,7]。
1.3 实验材料和提取分离罗汉果药材购自河北省安国中药材市场,原产地为广西永福县,为国家地理标志产品,经北京大学药学院蔡少青教授鉴定为葫芦科罗汉果M o m ordica gros venori 的干燥成熟果实。
标本存放于北京大学药学院天然药物及仿生药物国家重点实验室。
取罗汉果粗粉8kg ,用50%(体积分数)乙醇加热回流提取4次,合并提取液,浓缩至近干并用水稀释至4L,依次用环己烷、醋酸乙酯和正丁醇萃取,分别得环己烷萃取物16g (收率0.20%)、醋酸乙酯萃取物101g(1.26%)和正丁醇萃取物569g(7.11%)。
正丁醇萃取物经D101大孔吸附树脂柱色谱,依次用水(10L)、20%(体积分数)乙醇(12L)和50%(体积分数)乙醇(12L)洗脱。
将50%乙醇洗脱部分反复经硅胶柱色谱分离纯化,用氯仿-甲醇梯度洗脱,得到4个组分。
组分3反复经硅胶、葡聚糖凝胶(Sephedax)L H-20和聚酰胺柱色谱分离纯化,用氯仿-甲醇和氯仿-甲醇-水洗脱,得到罗汉果皂苷Ó(2g ,0.025%)。
罗汉果皂苷Ó为白色无定型粉末,I R (KBr)M m ax /cm:3419(OH ),1640,1465(C =C ),1382(C H 3),1171,1076(C -O-C 键),1024,630,586;ES I -TOF -M S (positi v e)m /z:963[M +1]-,985[M +Na]-;1H NMR (500MH z ,py -d 5)波谱数据见表1和2;13C NMR (125MH z ,py -d 5)波谱数据见表3;化学结构见图1。
