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初始污染菌检验操作规程文件编号：版本：编制/日期：审核/日期：批准/日期：受控状态:8批准实施1 目的为了规范产品初始污染菌检验操作，编制本规程。
2 适用范围本规程适用于产品初始污染菌检验操作。
3 职责3.1 检验室负责对产品初始污染菌检验操作的取样和化验，并填写检验报告；3.2 品管部经理负责签发检查报告。
4 工作程序（《中国药典》2020年版）4.1 供试品数量成品：灭菌前产品至少取3个单位以上。
4.2 供试液制备和接种4.2.1 取样品至少10个，以无菌操作方法移入灭菌的50ml 0.9%NaCl震摇洗脱备用。
4.2.2 用无菌吸管取上述样品洗脱液混合物2ml，分别注入两个灭菌平皿内，每平皿1ml。
另取1ml 注入到9ml灭菌洗脱液中，用手振荡80次充分混匀，使成1:100稀释液，另取一支吸管吸取2ml，分别注入两个灭菌平皿内，每平皿1ml。
4.2.3 将熔化并冷却至45℃左右的大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）倾注于平皿内，每平皿约15ml，另倾注一个不加样品的灭菌空平皿，作空白对照。
随即转动平皿，使样品与培养基充分混合均匀，待琼脂凝固后，翻转平皿，在37±1℃恒温培养48小时，观察结果。
4.3结果观察4.3.1 先用肉眼观察计数菌落，然后再用5-10倍放大镜检查，以防遗漏。
记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。
若其中一个平板有较大片状菌苔生长时，则不应采用，而应以无片状菌苔生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。
若片状菌苔的大小不到平板的一半，而其余的一半菌落分布又很均匀时，则可将此一半的菌落数乘2以代表全平板的菌落数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。
4.3.2 首先选取平均菌落数在30—300之间的平板，作为菌落总数测定的范围。
当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数。
4.3.3 若有两个稀释度，其平均菌落数在30—300之间，则应求出两者菌落总数之比值来决定。
初始污染回收率测定记录生产批号：型号规格：样品数量：培养皿个数样品号培养皿编号空白对照阴性对照平均菌落数（cfu/ml）初始污染菌（cfu/件）（平均菌落数÷SIP）回收率1 2 3 4 51-1 1-2 1-3 1-4 1-5 2-1 2-2 2-3 2-4 2-5 3-1 3-2 3-3 3-4 3-54-14-24-34-44-55-15-25-35-45-5平均回收率修正系数初始污染菌检测原始记录生产批号：型号规格：样品数量：培养皿个数样品号培养皿编号阴性对照空白对照平均菌落数（cfu/SIP）初始污染菌（cfu/件）1 2 3 4 51 2 3 4 5 6 7 8 91011121314151617181920平均初始污染菌各样品平均菌落——————数总和÷样品数校正后初始污染菌————（平均初始污染菌*校正因子）注：1、在对照的平板中，“+”表示长菌，“－”表示不长菌，“±”表示可疑长菌2、阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。
否则，试验无效。
初始污染检测记录文件编号：样品名称：生产批号：型号规格：样品数量：培养皿个数样品号空白对照阳性对照培养皿编号平均菌落数（cfu/SIP）初始污染菌（cfu/件）1 2 3 4 512345678910平均初始污染菌（cfu/件）校正后初始污染菌注：1、在对照的平板中，“+”表示长菌，“－”表示不长菌，“±”表示可疑长菌2、阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。
否则，试验无效。
附表1
初始污染菌方法适用性试验记录
产品名称生产批号
生产日期检验日期
检验依据中国药典四部2020版
标准要求0.5≤试验组菌落数-供试品对照组菌落数/菌落对照组菌落数≤2.0
细菌菌落计数
培养温度：培养时间：
菌株金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌
试验组
菌液对照组
供试品对照组
阴性对照
计算结果
霉菌、酵母菌菌落计数
TSA培养温度：培养时间：
SDA培养温度：培养时间：
菌株白色念珠菌黑曲霉白色念珠菌黑曲霉
培养基胰酪大豆胨琼脂培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基
试验组
菌液对照组
供试品对照组
阴性对照
计算结果
结论：采用平皿法试验，试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值结果均在0.5～2范围内，符合中国药典四部2020版1105要求。
检验人/日期
复核人/日期。
初始污染菌检验报告模板
检验单位信息
•检验单位名称：
•联系人：
•联系方式：
•检验日期：
化验样品信息
•样品名称：
•样品编号：
•生产日期：
•检验日期：
•样品数量：
•检验人员：
检验依据和方法
•检验依据：
•检验方法：
•检验标准：
检验结果
菌种CFU/g 结果
菌名1
菌名2
菌名3
菌名4
菌名5
结论和建议
本次检验样品存在菌落总数超标的现象，请及时采取措施解决。
建议对生产环节进行进一步检测，找出问题根源并进行解决。
备注
•检验人员需要进行个人身体健康检查。
•检验过程中需要掌握正确的检验方法和操作流程，确保检验结果真实可靠。
•所有检验结果仅适用于样品本身，不代表其他样品的检验结果。
初始污染菌、回收率试验
近日，科学家们通过试验证实，将初始污染菌与回收率结合起来，可以更好地促进水源的可持续利用。
首先，初始污染菌可以提高水源的回收率，从根本上减少污染物。
因此，使用初始污染菌作为水源的污染物减少的方式，不仅可以提高
水源的回收率，还有利于降低水中污染物的浓度。
初始污染菌的使用，可以在短期内显著地降低水源中的污染物。
其次，回收率可以更好地帮助水源减少流失，促进水源的可持续
利用。
因此，试验表明，将初始污染菌和回收率综合起来，可以更好
地促进水源的可持续利用。
随着初始污染菌的应用，水源的回收率可
以显著提高，有利于将水源的流失降至最低。
最后，科学家们建议，要想促进水源的可持续利用，应该将初始
污染菌和回收率有机地结合起来，充分发挥它们的优势特性。
联合使
用两者，给水源带来更好的可持续利用前景，有助于减少污染物，达
到更高回收率，促进水源的可持续发展。
综上所述，将初始污染菌与回收率通过试验结合起来，将使水源
的可持续利用受到更大的鼓励。
只要我们充分发挥它们的优势特性，
就能够促进水源的更好发展，净化我们周围的环境。
一、目的：为测试灭菌前以及内包装袋的初始污染菌是否符合标准。
二、适用范围：本厂产品以及包装袋。
三、引用标准：GB 15980-1995四、所用的仪器和设备1、高压消毒锅：使用时严格按照仪器说明书操作。
2、恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。
3、培养皿：一般采用90mm×15mm的硼酸玻璃培养皿。
4、生理盐水：浓度为 0.9%5、灭菌规格板：5×5cm；玻璃试管：13×150mm6、培养基：普通肉汤琼脂培养基，其配制方法见试剂说明书五、、操作步骤1、对敷料类可用无菌手续取10g，放入 100mL 灭菌生理盐水中，充分震荡 80 次后。
取各管洗液进行检测。
2、对导管类:选取三套新制备的样品，在净化操作台上，将每套样品用无菌的剪刀剪成大约 1 厘米长的段，放入事先灭菌的具塞三角瓶中，加 50 毫升生理盐水，加塞，充分震荡，使样品的内壁、外壁得到充分的洗脱，然后将冲洗液转移到另一个无菌的具塞三角瓶中，立即盖好备用。
将每一样本洗液充分均匀后，接种2 个平皿，每个平皿加入 1ml 洗液。
当估计含菌量过高时（每个平板生长菌落数超过 300 个），应对洗液进行稀释倍数再接种，一般需 2-3 个不同稀释度，每吸取一个稀释度洗液，更换一支无菌吸管。
3、将凉至45℃普通琼脂培养基，倾注于已加入样液的平皿中，每平皿约 15-20ml 培养基。
4、将培养基与样液小心摇匀，待琼脂凝固后倒置平皿，置37℃培养箱内培养 48h，计算最终结果菌落数。
六、采样数量：各类产品每批随机抽取 10 件样品。
七、结果计算计算公式为：菌数/每件次（或g） = 平均菌数×稀释倍数---------------------(C2)件次或重量（g）初始菌试验报告检品名称生产批号检验日期检验人复核人一、细菌数测定（37±1℃，3 天）初始菌试验报告检品名称生产批号检验日期检验人复核人一、霉菌数测定（27±1℃，3 天）样品天数123评价表示：卫生标准结果判断样品2出现浑浊用“х”没有出现浑浊用“√”100 个/套合格（）不合格（）性照阳对性照阴对31样品天数123评价表示：卫生标准结果判断样品2出现浑浊用“х”没有出现浑浊用“√”100 个/套合格（）不合格（）性照阳对性照阴对31。
初始污染菌校正因子确认报告1.概述公司制定的《初始污染菌检验规程》是用于描述产品中的活微生物群体。
但准确地确定初始污染菌是不可能的，因此，在实践中，采用校正因子将活菌计数转换成产品中初始污染菌评估，此因子用于补偿洗脱效率。
2.检验依据ISO 11737.1-2006医疗器械的灭菌微生物方法第1部分：产品上微生物总数的测定方法进行测定。
中国药典2015版第四部 1105 非无菌产品微生物限度3.实验过程3．1 洗脱液的制备：分别选取三支新制备的样品，在净化工作台上，用无菌医用钳将每支样品剪碎，称重10g，放入事先灭菌的具塞三角瓶中，加入约（样品重量×10）ml的pH7.0 氯化钠-蛋白胨灭菌洗脱液，加塞，充分震荡，使样品得到充分的洗脱，然后将洗脱液转移到另一个无菌的具塞三角瓶中，立即盖好备用。
3．2 营养琼脂培养基的制备：将营养琼脂培养基按说明书要求进行配制，在121℃高压蒸气灭菌锅内灭菌15min，放入50℃左右的水浴中备用。
3．3 接种：在净化工作台上，用移液管吸取1ml上述制备的洗脱液注入经过灭菌的平皿内，将约15-20ml已融化的45℃左右的营养琼脂培养基倾注到平皿中，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。
同样方法每组洗脱液做10个平行试验，同时另用一个平皿只倾注1ml灭菌洗脱液于营养琼脂培养基内作为空白对照。
3．4 培养：待上述培养基冷却凝固后，翻转平皿，使低面朝上，置于36±1℃恒温箱中培养48±2h。
3．5 菌落计数：记录各平皿中的菌落数，取平均值，然后再乘以洗脱液总体积数（ml），即得到洗脱液中的全部菌落数。
重复3.1-3.5步，分别进行第二次、第三次、第四次、第五次洗脱，其中第五次洗脱为直接将四次洗脱后的产品接种于培养基内，将五次洗脱后所得的菌落数分别填入数据表1、表2。
4.校正因子的计算用第一次洗脱液得到的菌落数除以五次洗脱得到的总菌落数，得到第一次冲洗去除率，取三个样品的第一次冲洗去除率的平均值，平均值的倒数即为校正因子。
