产品初始污染菌检测记录

初始污染回收率测定记录生产批号：型号规格：样品数量：培养皿个数样品号培养皿编号空白对照阴性对照平均菌落数（cfu/ml）初始污染菌（cfu/件）（平均菌落数÷SIP）回收率1 2 3 4 51-1 1-2 1-3 1-4 1-5 2-1 2-2 2-3 2-4 2-5 3-1 3-2 3-3 3-4 3-54-14-24-34-44-55-15-25-35-45-5平均回收率修正系数初始污染菌检测原始记录生产批号：型号规格：样品数量：培养皿个数样品号培养皿编号阴性对照空白对照平均菌落数（cfu/SIP）初始污染菌（cfu/件）1 2 3 4 51 2 3 4 5 6 7 8 91011121314151617181920平均初始污染菌各样品平均菌落——————数总和÷样品数校正后初始污染菌————（平均初始污染菌*校正因子）注：1、在对照的平板中，“+”表示长菌，“－”表示不长菌，“±”表示可疑长菌2、阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。

否则，试验无效。

初始污染检测记录文件编号：样品名称：生产批号：型号规格：样品数量：培养皿个数样品号空白对照阳性对照培养皿编号平均菌落数（cfu/SIP）初始污染菌（cfu/件）1 2 3 4 512345678910平均初始污染菌（cfu/件）校正后初始污染菌注：1、在对照的平板中，“+”表示长菌，“－”表示不长菌，“±”表示可疑长菌2、阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。

否则，试验无效。

初始污染菌校正因子确认报告1.概述公司制定的《初始污染菌检验规程》是用于描述产品中的活微生物群体。

但准确地确定初始污染菌是不可能的，因此，在实践中，采用校正因子将活菌计数转换成产品中初始污染菌评估，此因子用于补偿洗脱效率。

2.检验依据ISO 11737.1-2006医疗器械的灭菌微生物方法第1部分：产品上微生物总数的测定方法进行测定。

中国药典2015版第四部 1105 非无菌产品微生物限度3.实验过程3．1 洗脱液的制备：分别选取三支新制备的样品，在净化工作台上，用无菌医用钳将每支样品剪碎，称重10g，放入事先灭菌的具塞三角瓶中，加入约（样品重量×10）ml的pH7.0 氯化钠-蛋白胨灭菌洗脱液，加塞，充分震荡，使样品得到充分的洗脱，然后将洗脱液转移到另一个无菌的具塞三角瓶中，立即盖好备用。

3．2 营养琼脂培养基的制备：将营养琼脂培养基按说明书要求进行配制，在121℃高压蒸气灭菌锅内灭菌15min，放入50℃左右的水浴中备用。

3．3 接种：在净化工作台上，用移液管吸取1ml上述制备的洗脱液注入经过灭菌的平皿内，将约15-20ml已融化的45℃左右的营养琼脂培养基倾注到平皿中，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。

同样方法每组洗脱液做10个平行试验，同时另用一个平皿只倾注1ml灭菌洗脱液于营养琼脂培养基内作为空白对照。

3．4 培养：待上述培养基冷却凝固后，翻转平皿，使低面朝上，置于36±1℃恒温箱中培养48±2h。

3．5 菌落计数：记录各平皿中的菌落数，取平均值，然后再乘以洗脱液总体积数（ml），即得到洗脱液中的全部菌落数。

重复3.1-3.5步，分别进行第二次、第三次、第四次、第五次洗脱，其中第五次洗脱为直接将四次洗脱后的产品接种于培养基内，将五次洗脱后所得的菌落数分别填入数据表1、表2。

4.校正因子的计算用第一次洗脱液得到的菌落数除以五次洗脱得到的总菌落数，得到第一次冲洗去除率，取三个样品的第一次冲洗去除率的平均值，平均值的倒数即为校正因子。

起草人/日期 审核人/日期批准人/日期 分发部门 品质部1、目的检测产品灭菌前实际带菌（活的微生物群）的数目。

2、适用范围适用于本公司产品初始污染菌的检测。

3、职责由品管部负责执行实施。

4、检测程序4.1检验频次：车间生产的产品三个月做一次初始污染菌检验，至少抽取3个批次进行检测，对不同车间和材质的产品进行轮流循环抽样。

标准作业规程标准要求4.2取样方法4.3试验方法4.3.1配制洗脱液4.3.1.1称量4.3.1.2溶解4.3.1.3洗脱液分装用电子太平准确称取9gNaCl 。

用灭菌镊子于同一个批次三个大包装（三个以上员工的产品）中至少随机抽取90g 或抽取12个最小销售包装样品，1/3样品用于检测,1/3样品用于留样，另1/3样品(可就地封存)必要时用于复检。

装入无菌的塑料袋中，立即密封好（塑料袋上应标示产品的生产日期、定单编号、规格、生产车间、员工姓名、产品代号）并立即送检，送检中不得打开塑料袋，三分之一用于测试，三分之一用于留样，三分之一必要复试。

样品最小包装不应有破损,检验前不得开启。

将已称好9gNaCl 溶于1000ml 蒸馏水中，充分搅拌直至完全溶解。

4.3.1.4洗脱液灭菌4.3.2样品处理4.3.2.1样品制备4.3.2.2 样品混匀4.3.2.3吸取样液4.3.2.4平板倾注法称取9gNaCl溶于1000ml蒸馏水中,然后用锥形瓶分装，每瓶100ml（可以根据实验的需要分装不同体积的液体）。

在 100 级净化工作台条件下用无菌方法打开用于检测的至少3个包装，从每个包装中随机取样，准确称取l0g土1g样品.用灭菌剪刀和镊子把样品剪碎.样品剪碎后用灭菌镊子加入到100ml的洗脱溶液中，将装有样品的锥形瓶靠压在旋涡混合器上的施转垫上振荡（2800次/min）2min。

如被检样品是吸水量较高的材料而导致不能吸出足够样液时，洗脱液量可按每次50ml,递增，直至能吸出足够测试在无菌操作台中，待上述生理盐水样液自然沉降后取上清液,用灭菌移液管从锥形瓶中吸取1ml样品的洗脱液转移到无菌平皿。

初始污染菌检测⼀、⽬的检测产成品初始污染菌是否符合要求⼆、适⽤范围适⽤于⾮灭菌的产成品检验三、职责化验室化验员按标准操作规程检测四、仪器、设备⽣化培养箱、洁净⼯作台、电⼦天平、PH 计、压⼒蒸汽灭菌器、4℃冰箱、酒精灯、250Ml 的三⾓烧瓶、30Ml 试管、⽆菌镊⼦、⽆菌剪⼑、试管架、90mm 玻璃培养⽫、放⼤镜。

五、检验⽅法1.普通⾁汤琼脂培养基的制备 1.1所⽤试剂胨10g 氯化钠5g 琼脂15-20g ⾁浸液1000ml2.产品采集与样品处理于同⼀批号的三个运输包装中⾄少抽取200个最⼩销售包装样品，1/4样品⽤于检测，1/4样品⽤于留样，另1/2样品（可就地封存）必要时⽤于复检。

抽样的最⼩销售包装不应有破裂，检验前不得启开。

在100级净化条件下⽤⽆菌⽅法打开⽤于检测的⾄少10个包装，从每个包装中取样，准确称取25g ±1g 样品，剪碎后加⼊到225ml 灭菌⽣理盐⽔中，充分混匀，得到⼀个⽣理盐⽔样液。

液体产品⽤原液直接做样液。

如被检样品含有⼤量吸⽔树脂材料⽽导致不能吸出⾜够样液时，稀释液量可按每次50倍递增，直到能吸出⾜够测试⽤样液。

在计算细菌菌落总数与真菌菌落总数时应调整稀释度。

⽂件号: QS/CKL03B-ZJ-26-A/0 受控状态⽂件名称：初始污染菌检测SOP 版本号编制时间修改状态：审核时间⽣效⽇期批准时间发放号六、细菌菌落总数与初始污染菌检测⽅法本⽅法适⽤于产品初始污染菌与细菌菌落总数（以下统称为细菌菌落总数）检测。

1.操作步骤量取100 Ml的供试液，采⽤滤膜过滤法，⽤供试液冲洗滤膜表⾯，并确保供试液完全覆盖滤膜表⾯。

（滤膜孔径不⼤于0.45um ；直径50mm）取出滤膜，菌⾯朝上贴于营养琼脂培养基上，做两个平⾏对照，同时做⼀个空⽩对照。

倒置于30℃±5℃恒温培养箱内培养3天，观察并记录结果，空⽩应⽆菌⽣长，若空⽩有菌⽣长该试验则视为⽆效。

2.结果报告计算平板上菌落的平均值，再将平均值乘以相应的稀释倍数作为每克（g）/毫升(Ml)样品中平板菌落数。

深圳市麦瑞科林科技有限公司初始污染菌校正因子确认报告文件编号：___________版本号：___________受控状态：___________分发编号：___________持有部门：___________2010-06-03发布2010-06-10实施编制：审核：批准：目录1 概述2确认依据4 确认过程3．1洗脱液的制备3．2 营养琼脂培养基的制备3．3 接种3．4 培养3．5 菌落计数5 校正因子的计算6 确认结论7 再确认1 概述公司制定的《初始污染菌检测作业指导书》是用于描述产品中的活微生物群体。

但准确地确定初始污染菌是不可能的，因此，在实践中，采用校正因子将活菌计数转换成产品中初始污染菌评估，此因子用于补偿洗脱效率。

2 确认依据ISO 11737.1-2006医疗器械的灭菌微生物方法第1部分：产品上微生物总数的测定方法进行测定。

3 确认过程3．1 洗脱液的制备：分别选取三支新制备的样品一次性使用采血针、宫颈采样拭子，在净化工作台上，用无菌剪刀将每支样品剪碎，称重，放入事先灭菌的具塞三角瓶中，加入约（样品重量×10）ml的pH7.0 氯化钠-蛋白胨灭菌洗脱液，加塞，充分震荡，使样品得到充分的洗脱，然后将洗脱液转移到另一个无菌的具塞三角瓶中，立即盖好备用。

3．2 营养琼脂培养基的制备：将市售的营养琼脂培养基产品按说明书要求进行配制，然后在121℃高压蒸气消毒器内灭菌15min，放入50℃左右的水浴中备用。

3．3 接种：在净化工作台上，用移液管吸取1ml上述制备的洗脱液注入经过灭菌的平皿内，将约15-20ml已融化的45℃左右的营养琼脂培养基倾注到平皿中，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。

同样方法每组洗脱液做12个平行试验，同时另用一个平皿只倾注1ml灭菌洗脱液于营养琼脂培养基内作为空白对照。

3．4 培养：待上述培养基冷却凝固后，翻转平皿，使低面朝上，置于36±1℃恒温箱中培养48±2h。

【下载本文档，可以自由复制内容或自由编辑修改内容，更多精彩文章，期待你的好评和关注，我将一如既往为您服务】初始污染菌实验方法验证方案产品名称：一次性包皮环切缝合器编制：日期：审核：日期：批准：日期：江西狼和医疗器械股份限有限公司目录初始污染菌实验方法验证方案1．概述2．验证目的3．职责与验证申请4．验证依据5．验证计划6．验证内容初始污染菌实验方法验证方案1.概述：初始污染菌的数量可以反映出车间环境卫生的清洁度，与产品灭菌工艺、成品热原及内毒素有直接关系，故而要对其检测方法进行验证，确认其有效性及检测准确性，从而优化产品灭菌工艺及控制产品热原及内毒素，确保产品的安全性。

2.目的：通过实验验证检测方法的适用性及计数用培养基的适用性。

3.职责与验证申请：3.1质量管理部提供检测项目方案、接收标准、评价等级及相关实验。

3.2生产技术部负责按验证方案生产相关样品初始污染菌实验方法验证申请表4.依据：《中国药典》2015版 5.验证计划：5.1实验操作人员确认；验证组 姓名 职务 单位黄燕 组长 质量管理部经理江西狼和医疗器械股份有限公司龙章宏 组员 化验员 苏俊 组员 化验员 胡梓鹏组员化验员批 准经研究：同意以上成员组成验证小组，按照此方案对本公司的产品的初始污染菌实验方法进行验证。

批准人： 年 月 日5.2实验室实验设备及器材的确认；5.3产品取样及方法确认。

6.验证内容：6.1菌种和菌液制备6.1.1 菌种试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。

6.1.2菌液制备接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30〜35℃培养18〜24小时；接种白色念珠菌的培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20〜25℃培养2-3天，上述培养后的新鲜培养物用PH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌落形成）的菌悬液。

产品初始污染菌检验规范1 目的本规范规定了产品初始污染菌的检验方法。

2 参考标准GB/T19973.1-2005 《医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的估计》中华人民共和国药典ENISO11737:2006 《医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的测定》3 操作前准备3.1 主要仪器设备数个90mm双蝶平皿、三角烧瓶，电炉、电热恒温鼓风干燥箱、电热恒温培养箱、蒸汽消毒器、0.9%氯化钠溶液、刻度吸管数支、超净工作台3.2 试剂0.9%氯化钠溶液、营养琼脂培养基。

3.3 试验前准备3.3.1 将Ф90mm的培养皿、试管等与试验接触的所有器具，放入棉布袋或用棉布包好，置压力蒸气灭菌器内121℃灭菌30min后备用排出蒸汽，稍微冷却，取出用具。

3.3.2 按脱水营养琼脂培养基说明书上的要求称取培养基，加纯化水加热溶解，加塞，和0.9%氯化钠溶液同置1210C灭菌30min后备用。

3.3.3 将消好的平皿、刻度吸管，放入电热干燥箱内1600C干燥2小时，当温度降低至70ºC以下时进行无菌存放。

3.3.4 打开超净工作台上的电源、照明、风机、紫外线灯30分钟开关。

3.3.5 将实验所需的物品通过传递窗紫外线灯消毒，然后进入洁净室内，开启洁净室紫外线照射30min以上灭菌。

3.3.6 洗手、更衣后，进入无菌室，用消毒液对手进行消毒。

4 试验方法4.1 供试品数量灭菌前样品至少取3个。

4.2 供试液制备和接种4.2.1 把采取的样品送入无菌净化工作台内，用无菌操作法分别在每条产品上剪样5g，取样品至少3个（一份试验、一份留样、一份复测），将5g样品剪碎，放入100 ml灭菌0.9%NaCl的三角烧瓶中振荡80次，形成1次10倍稀释液。

4.2.2 用无菌吸管取上述样品洗脱液混合物2ml，分别注入两个灭菌平皿内，每平皿1ml。

另取1ml 注入到9ml灭菌洗脱液中，用手振荡80次充分混匀，使成1:100稀释液，另取一支吸管吸取2ml，分别注入两个灭菌平皿内，每平皿1ml，如样品含菌量高，还可以再稀释1:1000、1:10000等，每个稀释度应换一支移液管。