产品初始污染菌检测记录

深圳市麦瑞科林科技有限公司初始污染菌校正因子确认报告文件编号：___________版本号：___________受控状态：___________分发编号：___________持有部门：___________2010-06-03发布2010-06-10实施编制：审核：批准：目录1 概述2确认依据4 确认过程3．1洗脱液的制备3．2 营养琼脂培养基的制备3．3 接种3．4 培养3．5 菌落计数5 校正因子的计算6 确认结论7 再确认1 概述公司制定的《初始污染菌检测作业指导书》是用于描述产品中的活微生物群体。

但准确地确定初始污染菌是不可能的，因此，在实践中，采用校正因子将活菌计数转换成产品中初始污染菌评估，此因子用于补偿洗脱效率。

2 确认依据ISO 11737.1-2006医疗器械的灭菌微生物方法第1部分：产品上微生物总数的测定方法进行测定。

3 确认过程3．1 洗脱液的制备：分别选取三支新制备的样品一次性使用采血针、宫颈采样拭子，在净化工作台上，用无菌剪刀将每支样品剪碎，称重，放入事先灭菌的具塞三角瓶中，加入约（样品重量×10）ml的pH7.0 氯化钠-蛋白胨灭菌洗脱液，加塞，充分震荡，使样品得到充分的洗脱，然后将洗脱液转移到另一个无菌的具塞三角瓶中，立即盖好备用。

3．2 营养琼脂培养基的制备：将市售的营养琼脂培养基产品按说明书要求进行配制，然后在121℃高压蒸气消毒器内灭菌15min，放入50℃左右的水浴中备用。

3．3 接种：在净化工作台上，用移液管吸取1ml上述制备的洗脱液注入经过灭菌的平皿内，将约15-20ml已融化的45℃左右的营养琼脂培养基倾注到平皿中，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。

同样方法每组洗脱液做12个平行试验，同时另用一个平皿只倾注1ml灭菌洗脱液于营养琼脂培养基内作为空白对照。

3．4 培养：待上述培养基冷却凝固后，翻转平皿，使低面朝上，置于36±1℃恒温箱中培养48±2h。

初始污染回收率测定记录生产批号：型号规格：样品数量：培养皿个数样品号培养皿编号空白对照阴性对照平均菌落数（cfu/ml）初始污染菌（cfu/件）（平均菌落数÷SIP）回收率1 2 3 4 51-1 1-2 1-3 1-4 1-5 2-1 2-2 2-3 2-4 2-5 3-1 3-2 3-3 3-4 3-54-14-24-34-44-55-15-25-35-45-5平均回收率修正系数初始污染菌检测原始记录生产批号：型号规格：样品数量：培养皿个数样品号培养皿编号阴性对照空白对照平均菌落数（cfu/SIP）初始污染菌（cfu/件）1 2 3 4 51 2 3 4 5 6 7 8 91011121314151617181920平均初始污染菌各样品平均菌落——————数总和÷样品数校正后初始污染菌————（平均初始污染菌*校正因子）注：1、在对照的平板中，“+”表示长菌，“－”表示不长菌，“±”表示可疑长菌2、阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。

否则，试验无效。

初始污染检测记录文件编号：样品名称：生产批号：型号规格：样品数量：培养皿个数样品号空白对照阳性对照培养皿编号平均菌落数（cfu/SIP）初始污染菌（cfu/件）1 2 3 4 512345678910平均初始污染菌（cfu/件）校正后初始污染菌注：1、在对照的平板中，“+”表示长菌，“－”表示不长菌，“±”表示可疑长菌2、阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。

否则，试验无效。

产品初始污染菌1、目的检测清洗包装后的产品初始污染菌是否符合要求2、适用范围适用于需灭菌产品清洗、包装后的检验3、检验依据EN1174-1996医疗器械灭菌产品中微生物数量的评估GB14233。

2-1993医用输液、输血、注射器具检验方法第二部分：生物试验方法GB15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准GB7918。

2-1987化妆品微生物标准检测方法：细菌总数测定4、仪器、设备细菌培养箱、洁净工作台、电子天平、PH计、压力蒸汽灭菌器、4。

C冰箱。

酒精灯、3000ml 的三角烧瓶，无菌棉签，无菌镊子，试管架，9mm细菌养皿，放大镜。

5、检验方法5．1普通肉汤琼脂培养基的制备5．1．1所用试剂胨10g氯化钠5g琼脂15-20g肉浸液1000ml5．1．2制备取牛肉浸膏3 g加水1000 ml，配成肉浸液。

将胨、氯化钠、琼脂加入肉浸液中，加热溶解，调节PH为7。

2，置入压力蒸汽灭菌器内，灭菌后于超净工作台内装在9 mm的细菌培养皿中（15-20ml/每个平皿），于4。

C保存备用。

5．2抽样从每个清洗批次的产品中随机抽样。

同一批次产品数<50件，抽取3件；同一批次产品数为50~100件，抽取5件；同一批次产品数>100件，抽取10件。

5．3取样于微生物实验室超净工作台内，将浸有无菌生理盐水的无菌棉签在检品的外表面依次擦拭，然后用无菌镊子将棉签上的棉球取下，放入含有1ml无菌生理盐水试管内振摇数次，静止5分钟，即获得擦拭棉球浸提液；以同样的方法擦拭检品内表面。

获取检品内表面擦拭棉球浸提液。

5．4接种将上述检品内、外表面擦拭棉球浸提液倒入普通肉汤琼脂平板，水平旋摇使之均匀布在培养皿表面，在超净止放置至培养皿表面浸液十后进入下一步操作。

5．5培养接种后的培养皿倒置于细菌培养箱中，以未接种肉汤琼脂培养基为阴性对照，以金黄色葡萄球菌（北京生物制品检定所）作阳对照，37。

C培养48暗时后观察结果。

初始污染菌检验报告模板
检验单位信息
•检验单位名称：
•联系人：
•联系方式：
•检验日期：
化验样品信息
•样品名称：
•样品编号：
•生产日期：
•检验日期：
•样品数量：
•检验人员：
检验依据和方法
•检验依据：
•检验方法：
•检验标准：
检验结果
菌种CFU/g 结果
菌名1
菌名2
菌名3
菌名4
菌名5
结论和建议
本次检验样品存在菌落总数超标的现象，请及时采取措施解决。

建议对生产环节进行进一步检测，找出问题根源并进行解决。

备注
•检验人员需要进行个人身体健康检查。

•检验过程中需要掌握正确的检验方法和操作流程，确保检验结果真实可靠。

•所有检验结果仅适用于样品本身，不代表其他样品的检验结果。

初始污染菌校正因子确认报告1.概述公司制定的《初始污染菌检验规程》是用于描述产品中的活微生物群体。

但准确地确定初始污染菌是不可能的，因此，在实践中，采用校正因子将活菌计数转换成产品中初始污染菌评估，此因子用于补偿洗脱效率。

2.检验依据ISO 11737.1-2006医疗器械的灭菌微生物方法第1部分：产品上微生物总数的测定方法进行测定。

中国药典2015版第四部 1105 非无菌产品微生物限度3.实验过程3．1 洗脱液的制备：分别选取三支新制备的样品，在净化工作台上，用无菌医用钳将每支样品剪碎，称重10g，放入事先灭菌的具塞三角瓶中，加入约（样品重量×10）ml的pH7.0 氯化钠-蛋白胨灭菌洗脱液，加塞，充分震荡，使样品得到充分的洗脱，然后将洗脱液转移到另一个无菌的具塞三角瓶中，立即盖好备用。

3．2 营养琼脂培养基的制备：将营养琼脂培养基按说明书要求进行配制，在121℃高压蒸气灭菌锅内灭菌15min，放入50℃左右的水浴中备用。

3．3 接种：在净化工作台上，用移液管吸取1ml上述制备的洗脱液注入经过灭菌的平皿内，将约15-20ml已融化的45℃左右的营养琼脂培养基倾注到平皿中，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。

同样方法每组洗脱液做10个平行试验，同时另用一个平皿只倾注1ml灭菌洗脱液于营养琼脂培养基内作为空白对照。

3．4 培养：待上述培养基冷却凝固后，翻转平皿，使低面朝上，置于36±1℃恒温箱中培养48±2h。

3．5 菌落计数：记录各平皿中的菌落数，取平均值，然后再乘以洗脱液总体积数（ml），即得到洗脱液中的全部菌落数。

重复3.1-3.5步，分别进行第二次、第三次、第四次、第五次洗脱，其中第五次洗脱为直接将四次洗脱后的产品接种于培养基内，将五次洗脱后所得的菌落数分别填入数据表1、表2。

4.校正因子的计算用第一次洗脱液得到的菌落数除以五次洗脱得到的总菌落数，得到第一次冲洗去除率，取三个样品的第一次冲洗去除率的平均值，平均值的倒数即为校正因子。

产品初始污染菌检验规范1 目的本规范规定了产品初始污染菌的检验方法。

2 参考标准GB/T19973.1-2005 《医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的估计》中华人民共和国药典ENISO11737:2006 《医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的测定》3 操作前准备3.1 主要仪器设备数个90mm双蝶平皿、三角烧瓶，电炉、电热恒温鼓风干燥箱、电热恒温培养箱、蒸汽消毒器、0.9%氯化钠溶液、刻度吸管数支、超净工作台3.2 试剂0.9%氯化钠溶液、营养琼脂培养基。

3.3 试验前准备3.3.1 将Ф90mm的培养皿、试管等与试验接触的所有器具，放入棉布袋或用棉布包好，置压力蒸气灭菌器内121℃灭菌30min后备用排出蒸汽，稍微冷却，取出用具。

3.3.2 按脱水营养琼脂培养基说明书上的要求称取培养基，加纯化水加热溶解，加塞，和0.9%氯化钠溶液同置1210C灭菌30min后备用。

3.3.3 将消好的平皿、刻度吸管，放入电热干燥箱内1600C干燥2小时，当温度降低至70ºC以下时进行无菌存放。

3.3.4 打开超净工作台上的电源、照明、风机、紫外线灯30分钟开关。

3.3.5 将实验所需的物品通过传递窗紫外线灯消毒，然后进入洁净室内，开启洁净室紫外线照射30min以上灭菌。

3.3.6 洗手、更衣后，进入无菌室，用消毒液对手进行消毒。

4 试验方法4.1 供试品数量灭菌前样品至少取3个。

4.2 供试液制备和接种4.2.1 把采取的样品送入无菌净化工作台内，用无菌操作法分别在每条产品上剪样5g，取样品至少3个（一份试验、一份留样、一份复测），将5g样品剪碎，放入100 ml灭菌0.9%NaCl的三角烧瓶中振荡80次，形成1次10倍稀释液。

4.2.2 用无菌吸管取上述样品洗脱液混合物2ml，分别注入两个灭菌平皿内，每平皿1ml。

另取1ml 注入到9ml灭菌洗脱液中，用手振荡80次充分混匀，使成1:100稀释液，另取一支吸管吸取2ml，分别注入两个灭菌平皿内，每平皿1ml，如样品含菌量高，还可以再稀释1:1000、1:10000等，每个稀释度应换一支移液管。

分析人： 校对人： 审核人：食品微生物常规菌检验原始记录样 品 名 称 样 品 编 号 受 检 单 位样 品 批 号 检 测 环 境 温度（T ）： ℃ ；相对湿度（RH ）： % 接 样 日 期年 月 日检 测 地 点 □净化室1 □净化室2□净化室3 □生物安全实验室 检测起止日期 年 月 日～ 月 日检 测 依 据□GB/T4789.3-2012第一法 □GB/T4789.39-2013 □GB/T4789.2-2010 □GB/T4789.38-2012第一法 □GB/T4789.15-2010检 测 仪 器□恒温培养箱（型号： ）(编号: ) □霉菌培养箱（型号： ） (编号: )□隔水式培养箱（型号 ）(编号: ） □电子天平（型号： ） (编号: ）□均质器 （型号： ） (编号: ) 培 养 基 □PCA □EMB 平板 □LBN □营养琼脂 □LST 肉汤 □BGLB 肉汤 □EC 肉汤样 品 制 备 固体和半固体样品：无菌称取25g ，置于盛有225ml 生理盐水的无菌灭菌袋内，进行均质处理。

液体样品：吸取25ml 于样品于225ml 生理盐水中，混匀。

液体样品：直接吸原液检验。

检测项目□菌落总数 □大肠杆菌 □霉菌 及酵母菌 □大肠杆菌 □粪大肠菌群菌落总数[ cfu/mL (g ) ] 大肠菌群[ MPN/mL (g ) ] □霉菌 及酵母菌[cfu/mL (g)] 培养温度 ℃，培养时间 h 初发酵温度 ℃，时间 h 复发酵温度 ℃，时间 h 培养温度 ℃，培养时间 d 稀释度 （ ） （ ） （ ） 稀释度 （ ） （ ） （ ）稀释度 （ ） （ ） （ ） （ ） 平板1 初发酵 1 霉菌 酵母菌 平板2 复发酵 2 霉菌 酵母菌空白对照 查表结果 空白对照报告：报告：报告：□霉菌 □酵母菌大肠杆菌 MPN/mL (g ) ]粪大肠菌群[ MPN/mL (g ) ] 初发酵温度 ℃，时间 h 复发酵温度 ℃，时间 h 营养琼脂：□平板 □斜面 培养温度 ℃，培养时间 h 初发酵温度 ℃，时间 h 复发酵温度 ℃，时间 h 稀释度 （ ） （ ） （ ） （ ） 革兰氏染色镜检： 稀释度 （ ） （ ） （ ） （ ）初发酵 IMVIC 反应： 初发酵 复发酵证实阳性管数： 复发酵EMB 平板分离培养温度 ℃，培养时间 h 查表结果 查表结果 观察现象： 报告：报告：备注：。

初始污染菌检测⼀、⽬的检测产成品初始污染菌是否符合要求⼆、适⽤范围适⽤于⾮灭菌的产成品检验三、职责化验室化验员按标准操作规程检测四、仪器、设备⽣化培养箱、洁净⼯作台、电⼦天平、PH 计、压⼒蒸汽灭菌器、4℃冰箱、酒精灯、250Ml 的三⾓烧瓶、30Ml 试管、⽆菌镊⼦、⽆菌剪⼑、试管架、90mm 玻璃培养⽫、放⼤镜。

五、检验⽅法1.普通⾁汤琼脂培养基的制备 1.1所⽤试剂胨10g 氯化钠5g 琼脂15-20g ⾁浸液1000ml2.产品采集与样品处理于同⼀批号的三个运输包装中⾄少抽取200个最⼩销售包装样品，1/4样品⽤于检测，1/4样品⽤于留样，另1/2样品（可就地封存）必要时⽤于复检。

抽样的最⼩销售包装不应有破裂，检验前不得启开。

在100级净化条件下⽤⽆菌⽅法打开⽤于检测的⾄少10个包装，从每个包装中取样，准确称取25g ±1g 样品，剪碎后加⼊到225ml 灭菌⽣理盐⽔中，充分混匀，得到⼀个⽣理盐⽔样液。

液体产品⽤原液直接做样液。

如被检样品含有⼤量吸⽔树脂材料⽽导致不能吸出⾜够样液时，稀释液量可按每次50倍递增，直到能吸出⾜够测试⽤样液。

在计算细菌菌落总数与真菌菌落总数时应调整稀释度。

⽂件号: QS/CKL03B-ZJ-26-A/0 受控状态⽂件名称：初始污染菌检测SOP 版本号编制时间修改状态：审核时间⽣效⽇期批准时间发放号六、细菌菌落总数与初始污染菌检测⽅法本⽅法适⽤于产品初始污染菌与细菌菌落总数（以下统称为细菌菌落总数）检测。

1.操作步骤量取100 Ml的供试液，采⽤滤膜过滤法，⽤供试液冲洗滤膜表⾯，并确保供试液完全覆盖滤膜表⾯。

（滤膜孔径不⼤于0.45um ；直径50mm）取出滤膜，菌⾯朝上贴于营养琼脂培养基上，做两个平⾏对照，同时做⼀个空⽩对照。

倒置于30℃±5℃恒温培养箱内培养3天，观察并记录结果，空⽩应⽆菌⽣长，若空⽩有菌⽣长该试验则视为⽆效。

2.结果报告计算平板上菌落的平均值，再将平均值乘以相应的稀释倍数作为每克（g）/毫升(Ml)样品中平板菌落数。