致病菌检验-肉毒梭菌.

食品安全国家标准食品微生物学检验肉毒梭菌及肉毒毒素检验1 范围本标准规定了食品中肉毒梭菌（Clostridium botulinum）及肉毒毒素（botulinum Toxin）的检验方法。

本标准适用于食品中肉毒梭菌及肉毒毒素的检验。

2 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：a）冰箱：2℃～5℃、-20℃;b）天平：感量0.1g;c）无菌手术剪、镊子、试剂勺；d）均质器或无菌乳钵；e）离心机：3000 rpm、14000 rpmf）厌氧培养装置；g）恒温培养箱：35℃±1℃、28℃±1℃；h）恒温水浴箱：37℃±1℃、60℃±1℃、80℃±1℃；i）显微镜：10倍×100倍j）PCR仪；k）电泳仪或毛细管电泳仪；l）凝胶成像系统或紫外检测仪；m）核酸蛋白分析仪或紫外分光光度计；n）可调微量移液器：0.2µL～2µL、2µL～20µL、20µL～200µL、100µL～1000µL；o）无菌吸管：1.0mL、10.0 mL、25 .0mL；p）无菌锥形瓶：100 mL；q）培养皿：直径90mm；r）离心管：50mL、1.5mL；s）PCR反应管；t）无菌注射器：1.0mL；u）小鼠：15g～20g，每一批次试验应使用同一品系的KM或ICR小鼠。

3 培养基和试剂除另有规定外，PCR试验所用试剂为分析纯或符合生化试剂标准，水应符合GB/T6682中一级水的规格。

3.1 庖肉培养基：见附录A中A.1。

3.2 胰蛋白酶胰蛋白胨葡萄糖酵母膏肉汤（TPGYT）：见附录A中A.2。

3.3 卵黄琼脂培养基：见附录A中A.3。

3.4 明胶磷酸盐缓冲液：见附录A中A.4。

3.5 革兰氏染色液：见附录A中A.5。

3.6 10%胰蛋白酶溶液：见附录A中A.6。

食品中的致病菌检测食品安全一直是人们关注的焦点，而其中，致病菌的检测是保障食品安全的重要环节之一。

致病菌的存在可能导致食物中毒等严重后果，因此，食品生产和销售环节对致病菌的检测非常重视。

一、致病菌的常见类型食品中的致病菌种类繁多，常见的包括大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌等。

这些菌种在食品中的存在和繁殖可能导致食物中毒，对人体健康造成威胁。

二、致病菌检测的重要性1. 保障人体健康致病菌检测可以及时发现食品中的致病菌，防止其进入人体，减少食物中毒的发生，保障人体健康。

2. 降低食品安全风险通过致病菌检测，可以及时发现并淘汰存在问题的食品，降低食品安全风险，提高食品质量。

3. 维护食品生产经营者声誉食品生产经营者对食品安全负有法律和道德责任。

通过致病菌检测，可以更好地控制食品的质量，降低面临的法律风险，并保持良好的声誉。

三、常见的致病菌检测方法1. 快速检测方法快速检测方法主要包括PCR技术、免疫学方法等。

这些方法具有操作简便、检测速度快的特点，可以迅速确定食品中是否存在致病菌。

2. 传统检测方法传统的致病菌检测方法包括培养方法、生化方法等。

这些方法需要较长时间进行培养和分析，但其结果准确可靠，被广泛运用于食品行业。

3. 进口食品的检测对于进口食品，通常需要进行更加严格的致病菌检测。

相关部门会对进口食品进行抽样检测，并进行详细的化验，以确保进口食品的质量安全。

四、致病菌检测的挑战与前景1. 检测方法的不断创新随着科技的发展，致病菌检测方法也在不断创新。

例如，近年来，利用基因测序技术进行检测逐渐成为趋势，其可以快速准确地鉴定致病菌的种类和特性。

2. 食品链追溯的完善食品链追溯体系的完善可以帮助快速找出食品中的致病菌来源，减少食品中毒事件发生的可能性，提高人们对食品安全的信任度。

3. 国家层面监管力度的加强近年来，国家层面对食品安全的监管力度不断加强。

加强对食品生产和销售环节的监管，提高对致病菌检测的要求，有助于构建更加安全的食品生产和供应体系。

食品中肉毒杆菌检测中国科学院广州化学研究所分析测试中心卿工--189--3394--6343肉毒梭菌是一种生长在缺氧环境下的致病菌，全称肉毒梭状杆菌，在罐头食品及密封腌渍食物中具有极强的生存能力，它在繁殖过程中所分泌的肉毒毒素具有极强的毒性，是KCN毒性的一万倍。

纯化结晶的肉毒毒素1mg能杀死2亿只小鼠，对人的致死剂量约0.1μg。

它通过阻断人体神经接头，导致全身麻痹、瘫痪，严重时能引起人呼吸肌麻痹，导致无法呼吸，最终死亡。

目前报道新西兰恒天然浓缩乳清蛋白粉大批量被肉毒梭菌污染，多家产品被卷入其中。

食品中肉毒梭菌检测(PCR检测方法)一、实验原理本中心结合国标GB/T4789.12-2003食品中卫生微生物学检验肉毒梭菌及内毒素检验和SN/T2525-2010食品中肉毒梭菌的PCR检测方法对食品中肉毒杆菌进行检验。

将样品经增菌后划平板分离单菌落，挑取可疑菌落到胰蛋白胨葡萄糖酵母浸膏肉汤(TPGY)培养基培养，对培养物用DNA提取试剂盒抽提DNA，进行PCR扩增，用琼脂糖凝胶电泳检验PCR产物中是否含有肉毒梭菌的的特征条带，从而对食品中是否污染肉毒梭菌进行快速检测。

二、仪器和试剂Heraeus Multifuge X1R高速台式冷冻离心机，Bio-RAD ALS1296PCR仪器，Tanon-3500凝胶成像分析系统，YQX-Ⅱ厌氧培养箱，恒温水浴锅。

三、试验方法1、样品的增菌培养取庖肉培养基2管和TPGY培养基2管，煮沸10min~15min（为了排除溶解于培养基中的氧，切勿摇动），迅速冷却。

每15ml培养基中接种1g~2g固体食品或1ml~2ml液体食品（缓慢地将接种物接入肉汤液面下）。

将样品接种2管庖肉培养基（35±1℃下培养）和2管TPGY培养基（28±1℃下培养），均厌氧培养5天。

观察培养物的浊度、产气、肉粒的消化和产生的气味。

若有生长继续以下操作，若无生长，则继续培养10天。

食品安全事故常见致病因子的临床表现、潜伏期及生物标本采集要求一般为10~20 分钟由腌制不当或变质蔬菜引起的中毒一般为1~3 小时，最长可达20 小时口唇、耳廓、舌及指(趾)甲、皮肤黏膜等出现不同程度发绀，可伴有头晕、头痛、乏力、恶心、呕吐；中毒明显者可出现心悸、胸闷、呼吸困难、视物模糊等症状；严重者可出现嗜睡、血压下降、心律失常，甚至休克、昏迷、抽搐、呼吸衰竭亚硝酸盐血液定，采样量约10ml，抗凝剂以肝素为佳，禁用草酸盐，应冷藏保存，如长时间运输，可冷冻呕吐物胃内容物采样量50g~100g，使用具塞玻璃瓶或聚乙烯瓶密闭盛放应冷藏保存，保存和运输条件同上尿液采样量300ml~500ml，使用具塞玻璃瓶或聚乙烯瓶盛放，保存和运输条件同上1~6 小时（平均2~4 小时）恶心，剧烈地反复呕吐，腹痛，腹泻金黄色葡萄球菌及其肠毒素粪便或肛拭子新鲜粪5g，置于无菌、干燥、防漏的容器内。

或采样拭子沾满粪便插入Cary—Blair运送培养基1，冷藏运送至实验室呕吐物采取呕吐物置无菌采样瓶或采样袋密封送检, 冷藏运送至实验室皮肤病变拭子鼻拭子采样拭子插入Cary—Blair运送培养基1内保存，冷藏运送至实验室0.5~5小时以恶心、呕吐为主，并有头晕、四肢无力蜡样芽孢杆菌（呕吐型）粪便或肛拭子新鲜粪便5g，置于无菌、干燥、防漏的容器内。

或用采样拭子沾满粪便插入Cary—Blair运送培养基1内保存，冷藏运送至实验室4~24小时恶心、呕吐、轻微腹泻、头晕、全身无力，严重者出现黄疸、肝肿大、皮下出血、血尿、少尿、意识不清、烦躁不安、惊厥、抽搐、休克；一般无发热椰毒假单胞菌酵米面亚种（米酵菌酸）粪便或肛拭子新鲜粪便5g，置于无菌、干燥、防漏的容器内。

或用采样拭子沾满粪便插入Cary—Blair运送培养基1内保存，冷藏运送至实验室呕吐物采取呕吐物置无菌采样瓶或采样袋密封送检, 冷藏运送至实验室12~48 小时（中位36 小时）恶心，呕吐，水样无血腹泻，脱水诺如病毒粪便或肛拭子、呕吐物新鲜粪便10g（10ml）或呕吐物，置于无菌、干燥、防漏的容器内。

致病菌检测
2.17检测方法检测标准
致病菌（Pathogenic bacteria)能引起疾病的微生物称为病原微生物或致病菌。

病原微生物包括细菌、病毒、螺旋体、立克次氏体、衣原体、支原体、真菌及放线菌等。

一般所说的致病菌指的是病原微生物中的细菌。

细菌的致病性与其毒力、侵入数量及侵入门户有关。

虽然绝大多数细菌是无害甚至有益的，但是相当大一部分可以致病。

条件致病菌只在特定条件下致病，如有伤口可以允许细菌进入血液，或者免疫力降低时。

例如，金黄色葡萄球菌和链球菌也是正常菌群，常可以存在于体表皮肤，鼻腔而不引起疾病，但可以潜在引起皮肤感染，肺炎（pneumonia），脑膜炎（meningitis）败血症（sepsis)
常见的致病菌有：葡萄球菌、链球菌、结核菌、炭疽芽孢杆菌、鼠疫杆菌、肉毒梭菌、破伤风梭菌、幽门螺杆菌、李斯特菌、痢疾杆菌、结核分枝杆菌、
检测项目：致病性检测、形态检测、分离和生化试验
检测标准：GB4789.4-2010（09）。

第十三章肉毒梭菌（Clostridium botalinum）毒素的形成（生物危害）本指南代表了美国食品药品管理局（FDA）在这一领域的最新思考。

它没有赋予任何人任何权利，也没有束缚FDA或公众。

如果有其他方法满足了应适用的法律及法规的要求，您可以选择该替代方法。

若您想讨论其他的替代方法，请联系负责实施本指南的FDA工作人员。

若您无法确定合适的FDA工作人员，请拨打列于本指南首页的电话号码。

了解潜在危害肉毒梭菌毒素（C. botalinum）的形成能使消费者发病和死亡。

这都是由于肉毒梭菌毒素的原因。

在美国，考虑所有来源，每年大约要暴发10次左右的食物源性肉毒梭菌中毒。

症状包括：虚弱，头晕，视力重影，说话、吞咽及呼吸困难，腹部胀痛，便秘，瘫痪甚至死亡。

在食用18到36小时内，可出现以上症状。

每个人都会受到肉毒梭菌毒素的影响。

只有几微克的毒素便可导致一个健康成年人的疾病。

死亡率高；没有抗毒素和呼吸帮助的话，极可能发生死亡。

这一章讲述在加工、贮存以及分销过程中由于时间/温度控制不当会导致肉毒梭菌生长和产生毒素。

控制致病菌生长策略在鱼类和水产品中，有众多的控制致病菌生长的策略，包括：·控制产品（见酸化食品法规，21 CFR 114，对耐贮存酸化产品，及本章中冷冻酸化产品）中的酸度（pH值）；·控制产品中盐或防腐剂的数量，例如亚硝酸盐（见本章）；·通过计算，控制产品中有利于致病菌生长（水活性）的水分含量（见本章）；·通过干燥，控制产品中有利于致病菌生长（水活性）的水份含量（见14章）；·控制经巴氏杀菌工艺后和经蒸煮后立即进行减少氧气包装之前致病菌的介入（见18章）；·控制软体贝类源头和空气中暴露的时间（例如通过收获或退潮）来冻结控制收获区域的致病菌（见14章）；·管理好食品暴露在容易使致病菌生长和毒素产生的温度下的次数（普遍见于12章；肉毒梭菌，见本章；水合物中金黄色葡萄球菌，见15章）；221·通过蒸煮或巴氏杀菌（见16章）或干馏（见低酸食品包装于密封容器条例中的热加工，21CFR113，（以下简称低酸罐头食品（LACF）条例））杀灭致病菌；·通过加工保留原产品特性（见17章）杀死致病菌；·肉毒梭菌（C. botalinum）毒素的形成。