致病菌检验肉毒梭菌.ppt

三、检验方法
1、检验标准：GB 4789.12-2003
2、培养基和试剂 培养基： 庖肉培养基、卵黄琼脂培养基、明胶磷酸盐缓冲液。 试剂： 肉毒分型抗毒诊断血清、胰酶（活力1:250）、革兰 氏染色液。 另需实验动Байду номын сангаас（小白鼠）。
3、检验程序
①报告(一)：检样中有无肉毒毒素以
及有何型肉毒毒素。(如仅为了肉毒中 毒诊断，即可结束检验) ②报告(二)：对增菌产毒培养物，一
2、培养特性
最严格的厌氧菌 生长最适温度：28 ℃ ～37 ℃ ：pH为6.8~7.6，产毒的最适pH为7.8 ~8.2。 产毒培养温度：不同菌型产毒的最适培养温度不完全相同。C、D型 温度高些为宜，35℃ 培养3d即可，而E型菌低温度长时间培养效果较好。 对营养要求不高 ：在普通培养基上都能生长。
致病菌检验——
肉毒梭菌
肉毒梭状芽孢杆菌检验
一、肉毒梭状芽孢杆菌的生物学特性 1、形态与染色 肉毒梭菌属于厌氧性梭状芽胞杆菌属，革兰氏染色阳性， 约为4×1μm的大杆菌， 多单在，偶见成双或短链，两侧平行， 两端钝圆，直杆状或稍弯曲，芽胞为卵圆形，大于菌体宽度， 位于次极端，使菌体呈匙形或网球拍状，偶有位于中央，常 见很多游离芽胞。 有4~8根周生鞭毛，运动迟缓，无荚膜。
中毒方式
• 食物媒介 • 吸入：极罕见的中毒类型 • 创伤感染：肉毒梭菌污染创伤部位，在局 部发芽繁殖，产生毒素，引起肉毒中毒。 • 肠道感染：根据肉毒梭菌能否在肠道内产 毒而引起人的都读中毒。
临床症状
• 肉毒中毒的潜伏期短着仅2h，长者可达10 天左右，通常约12-18h • 前期症状可能出现头昏、头痛、恶心、甚 至呕吐、腹泻等。 • 基本属于神经麻痹表现，最早是视觉障碍， 继而全身无力、呛噎、眼睑下垂、伸舌和 张口困难、抬头费力、瞳孔散大、咀嚼障 碍、不能下咽、胸内烦闷、有恐惧感、重 者晚期呼吸困难，最后死于呼吸麻痹。

2、培养特性
5.在含有肉渣的液体或者半流动培养基中，肉毒梭菌生 长旺w盛el且co产me生t大o u量se气th体e，seAP、owBe、rPFo三in型t t表em面pl浑at浊es，, N底ew部 有粉C状on和te颗nt粒de状si沉gn淀, 1，0 并ye能ar消s e化xp肉er块ie，nc变e 黑有臭味；而 C、D、E三型表明清亮，絮片状生长，粘贴于管壁。 6.在葡萄糖鲜血琼脂平板上，菌落较小，扁平，颗粒状 。中央低落，边缘不规则，有的菌落还有大的溶血环。 7.在卵黄琼脂平板上生长，菌落及其培养基周围表面覆 盖着特有的彩虹样薄层，但G型没有
抵抗力：
A型毒素经60℃2分钟加热，差不多能被完全破坏，而B 、E二型毒素要经70℃2分钟才能被破坏；C、D二型毒 素对热的抵抗更大些；C型毒素要经过90℃2分钟加热 才能完全破坏，不论如何，只要煮沸1分钟或75℃加热 5~10分钟，毒素都能被完全破坏。肉毒毒素对酸性反 应比较稳定，对碱性反应比较敏感。某些型的肉毒毒 素在适宜条件下，毒性能被胰酶激活和加强。
二． 致病机理
肉毒毒素是一种神经麻痹毒素，主要抑制神经末 梢释放乙酰胆碱，引起肌肉松弛麻痹，特别是呼 吸肌麻痹导致死亡。
肉毒毒素的毒性极强，是目前已知在天然毒素和 合成毒剂中毒性最强的生物毒素，据称，精制毒 素1克能杀死400万吨小白鼠，一个人的致死量大 概1微克左右。
三、检验方法
培养基：庖肉培养基、卵黄琼脂培养基、明胶磷 酸盐缓冲液。
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4.2.7 肉毒梭菌
本节主要内容：
肉毒梭菌的主要特征 肉毒梭菌致病机理 肉毒梭菌的检验
一、生物学特性：
1.形态及染色
肉毒梭菌属于厌氧性梭状芽胞杆菌属，革兰氏染色阳性(老龄菌 是阴性），约为4×1μm的大杆菌， 多单在，偶见成双或短链， 两侧平行，两端钝园，直杆状或稍弯曲，芽胞为卵圆形，大于 菌体宽度，位于次极端，使菌体呈匙形或网球拍状，偶有位于 中央，常见很多游离芽胞。 有4~8根周生鞭毛，运动迟缓，无荚 膜。

与其他细菌性食物中毒症状的 鉴别：如沙门氏菌、副溶血性 弧菌等。
与神经肌肉系统疾病鉴别：如 重症肌无力、神经肌肉病等。
与呼吸系统、循环系统等疾病 鉴别：如肺炎、心肌炎等。
03
CATALOGUE
肉毒梭菌的预防与控制
肉毒梭菌的流行病学特点
01
02
03
广泛存在于土壤中
肉毒梭菌在土壤中存活并 繁殖，通过污染食物传播 给人类。
介绍新型疫苗的研究现状，如重组蛋白疫苗、基因工程 疫苗等。
疫苗接种策略与展望
探讨肉毒梭菌疫苗接种策略及未来研究方向。
THANKS
感谢观看
肉毒梭菌的毒素检测方法
动物试验
将肉毒梭菌毒素注射到动物体 内，观察动物是否出现神经麻 痹、肌肉松弛等症状，以检测
毒素的毒性。
细胞试验
将肉毒梭菌毒素加入到细胞培 养液中，观察细胞形态、生长 情况等指标，以检测毒素对细
胞的毒性作用。
免疫学方法
利用特异性抗体检测肉毒梭菌 毒素，如ELISA、免疫荧光等方 法，具有快速、敏感、特异性
肉毒梭菌PPT课 件
目录
• 肉毒梭菌简介 • 肉毒梭菌中毒症状及诊断 • 肉毒梭菌的预防与控制 • 肉毒梭菌的实验室检测方法 • 肉毒梭菌的研究进展与展望
01
CATALOGUE
肉毒梭菌简介
肉毒梭菌的分类与命名
分类
肉毒梭菌属于梭菌属，是一种革兰氏阳性厌氧芽胞杆菌。
命名
肉毒梭菌得名于其引起的肉毒中毒，是一种广泛存在于土壤 、动物粪便、动物尸体及人类环境的细菌。
消化系统症状
恶心、呕吐、腹痛、腹泻等。
呼吸系统症状
呼吸困难、咳嗽、气促等。
神经系统症状

分布与传播
分布
肉毒梭菌广泛分布于自然界和人类环境中，特别是在土壤、动物粪便、食品和加工制品中。
传播
肉毒梭菌的传播主要通过食物链，如被污染的食品和水源等。此外，该菌还可通过人与人之间的接触传播，如 伤口感染等。
02
肉毒梭菌中毒症状
食物中毒
摄入大量污染食物是本病的主要病因。 临床表现为急性胃肠炎症状，如恶心、呕吐、腹痛、水样腹泻等。 发病后24小时内可出现严重的水电解质紊乱和脱水症状。
对食品进行加热和冷藏
为了杀灭肉毒梭菌，应对食品进行充分的加热和冷藏。一般情况下，肉毒梭菌在高温下容易死亡，冷藏可抑制其生长。
免疫接种
接种疫苗
针对肉毒梭菌的疫苗包括 A型、B型、E型三种，可 有效预防肉毒梭菌感染。
接种对象
疫苗接种对象主要是从事 食品加工、餐饮业、卫生 行业等职业人群，以降低 职业感染风险。
02
微生物学检查
将采集的标本接种于肉汤培养基中进 行微生物学检查，以分离和鉴定肉毒 梭菌。
03
毒素检测
采用免疫学方法检测患者标本中的肉 毒毒素，以确定中毒的诊断。
鉴别诊断
食物中毒
与其他食物中毒症状相似，需要 进行鉴别诊断。
神经肌肉疾病
部分神经肌肉疾病也可能引起眼 肌麻痹、吞咽困难等症状，需要 加以鉴别。
05
肉毒梭菌病例报告
病例一：长期便秘患者
患者主诉
长期便秘症状严重，服用泻药效果不佳。
诊断
对患者进行神经传导速度检测和肌肉活检，发现患者存在肉毒中毒症状。
治疗
对患者进行支持和对症治疗，包括静脉输液、维持电解质平衡、预防感染等措施，同时对患者进行心理治疗以减轻其心理 负担。
病例二：老年痴呆症患者

新华网东京４月６日专电日本最近再度发生病原性大肠 杆菌Ｏ１５７集体感染事件，到５日为止，东京、千叶、埼 玉、神奈川、茨木、群马等地已有１２５人受到感染。
这次集体感染于３月１２日首先在千叶县柏市被发现。 诊断和调查结果表明，患者是由于食用了一些工厂生产的不 洁净的食品而被感染的。
日本曾于５、６年前首次发生病原性大肠杆菌Ｏ１５７ 集体感染事件。患者有发烧、恶心、呕吐等症状。
操作步骤
将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内， 接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐 发酵管；1mL及1mL以下者，用单料乳 糖胆盐发酵管，每一稀释度接种3管，置 36+1℃温箱内，培养24+2小时，如所有 乳糖胆盐发酵管均不产气，则可报告为 大肠菌群阴性。如有产气者，按下列程 序进行。
操作步骤
(二)分离培养
食品中细菌数量越少，食品存放的时间 越长。如：
0℃时菌落数为105cfu/cm2的牛肉，可存 放7d；菌落数为102cfu/cm2时， 可存放 18d。
0℃时菌落数为105cfu/cm2的鱼可存放6d， 菌落数为103cfu/cm2时， 可存放12d。
菌落(colony)：生长在固体 培养基上，来源于一个细胞， 肉眼可见的细胞群体。
待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培 养48±2h，取出计算平板内菌落数目，乘以稀 释倍数，即得每克（每毫升）样品所含菌落总数。
计数和报告 选取菌落数在30~300之间的平板作为菌落
总数测定标准。
我国饮用水卫生标准： ≤ 100个细菌总数/1mL饮水
第二节 食品中大肠菌群的测定
一、大肠菌群与食品卫生质量 大肠菌群系指一群在37℃能发酵乳糖、产酸、
引起中毒的主要是 动物源性食品。
本菌对热、消毒药及 外界环境的的抵抗力 不强。60℃，20-30min

2．细菌分离鉴定 利用本菌芽孢耐热性强的特性， 接种检验材料悬液于疱肉培养基，于80℃加热30min，置 30℃增菌产毒培养5～10d，对上清液进行毒素检测。
五、防治
在动物肉毒中毒多发地区，可用明矾沉淀类毒素做预防 注射，有效免疫期可持续半年至一年，也可用氢氧化铝或 明矾菌苗接种。
人畜一旦出现肉毒中毒症后，可立即用多价抗毒素血清 进行治疗。若毒素型别已确定，则应用同型抗毒素血清。 预防肉毒梭菌食物中毒，主要是要加强食品卫生管理和监
厌氧性病原梭菌-肉毒梭菌
主要内容
一、概述 二、生物学特性 三、致病性 四、微生物学诊断 五、防治
一、概述
肉毒梭菌是一种腐生菌，广泛分布于土壤、海洋和湖 泊的沉积物、哺乳动物和鱼等动物的肠道、饲料和食品中。 此菌不能在活的机体内生长繁殖，即使进入人畜消化道，亦 随粪便排出。当有适宜营养且获得厌氧环境时，即可生长繁 殖并产生肉毒毒素，人畜食入含此毒素的食品、饲料或其他 物品，即可发生中毒。
二、生物学特性
1.形态与培养 肉毒梭菌多呈直杆状，单在或成双，革兰氏染色阳性。周 鞭毛，能运动。芽孢椭圆形，大于菌体宽度，位于偏端，使
菌体呈汤匙状或网球拍状。
本菌专性厌氧生长，在血液琼脂平板上菌落较大且不规则 ，有β溶血现象。在疱肉培养基中，能消化肉渣，使之变黑 并有腐败恶臭 。
2. 抵抗力 肉毒梭菌的芽孢抗力很强，干热180℃5～15min， 湿热100℃5h，但肉毒毒素不耐热，煮沸30min或75～ 85℃10～15min即被破坏 。
督，定期进行食品安全检查。
三、致病性
肉毒梭菌可产生毒性极强的肉毒毒素，该毒素是目前已 知毒素中毒性最强的一种。
在自然条件下，家畜对肉毒毒素很敏感，家畜中毒后， 出现特征性临诊症状，引起运动肌麻痹，从眼部开始，表现 为斜视，继而咽部肌肉麻痹，咀嚼吞咽困难，膈肌麻痹，呼 吸困难，心力衰竭而死亡。

G+大杆菌，有鞭毛，芽胞椭圆形，粗于菌体，位于极端，网球拍
状菌体 ▪ 严格厌氧，普通平板生长R型菌落，可消化肉渣，变黑腐败 ▪ 抵抗力
▪ 芽胞强，100℃3-5h，180 ℃5-15min ▪ 肉毒毒素：不耐热，100 ℃1min破坏
耐酸，胃酸24h不破坏
致病性
▪ 致病物质——肉毒毒素:是一种强烈的神经外毒素，是目前已 知毒素中毒力最强者，对人的致死剂量是0.1μg。
▪ 肉毒毒素作用机制（嗜神经毒素） ▪ 作用部位
—脑神经核 —外周神经—肌肉神经接头处 阻止乙酰胆碱的释放 —自主神经末梢 →运动神经末梢功能失调→肌肉松弛性麻痹（软瘫）
❖ 所致疾病
毒素性食物中毒（肉毒中毒） 食品：罐头、香肠、腊肠、发酵豆制品
潜伏期短 临床表现
❖无胃肠道症状，为神经末梢麻痹症状、乏力、头痛 ❖眼肌（复视、斜视、眼睑下垂） ❖喉肌（吞咽困难、咀嚼不灵、语言障碍） ❖膈肌（呼吸困难、死亡率高20-70%）
微生物学检查与防治
❖ 检测毒素——动物试验 ❖ 加强相关食品的卫生监督和管理，发病后尽早注射肉毒多价
抗毒素
肉毒素美容
❖ 肉毒素可以阻断神经与肌肉间的神经冲动，使过度收缩的小 肌肉放松，进而达到除皱的效果。或者是利用其可以暂时麻 痹肌肉的特性，使肌肉因失去功能而萎缩，来达到雕塑线条 的目的，也就是通常所说的去皱和瘦脸。

肉毒梭菌在肠道中的定植和传播机制已经明确，为其感染的预防和治疗提供了理论 支持。
针对肉毒梭菌的特异性诊断试剂和疫苗已经进入临床试验阶段，有望为肉毒梭菌的 防治提供新的手段。
肉毒梭菌的研究热点和争议
肉毒梭菌的毒素如何与神经细胞 结合并导致肌肉麻痹的详细机制
尚不明确，需要进一步研究。
对于肉毒梭菌的传播和感染机制 仍有许多细节需要深入探讨，例 如其在肠道中的生存条件、传播
肉毒梭菌是一种革兰氏阳性菌 ，属于梭菌属，具有芽孢和鞭 毛，可在厌氧条件下生长繁殖 。
肉毒梭菌在食品中污染可导致 食源性疾病，即肉毒中毒症。
肉毒梭菌的致病机理
肉毒梭菌在肠道中释放毒素，导 致肠麻痹和肌肉麻痹，从而引起
一系列症状。
肉毒梭菌产生的毒素称为肉毒毒 素，有强烈的神经毒性作用，可 阻断神经肌肉接头处的兴奋传递
途径等。
目前尚无针对肉毒梭菌感染的特 效药物，因此开发新的药物和治
疗方法是未来的研究重点。
肉毒梭菌的未来趋势和展望
随着基因组学、蛋白质组学等技术的发展，对肉毒梭菌的毒素产生、传播和感染机制等的研 究将更加深入。
基于毒素结构和作用机制的研究，将有望开发出更加有效的肉毒梭菌疫苗和特异性治疗药物 。
随着诊断技术的进步，肉毒梭菌的诊断将更加准确和快速，有助于及时诊断和治疗肉毒梭菌 感染。
CHAPTER 03
肉毒梭菌的流行病学和公共卫生意 义
肉毒梭菌的流行病学研究
01
02
03
肉毒梭菌的分布
肉毒梭菌广泛分布于土壤 、水和动物粪便中，特别 是在卫生条件较差的环境 中更为常见。
传播途径
肉毒梭菌主要通过食物传 播，尤其是发酵食品，如 豆制品、面制品等。
人群易感性

食品安全——肉毒杆菌
11/26/2019
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1
目录
1 肉毒杆菌中毒案例 5 肉毒中毒判断依据
2 肉毒杆菌简介
6 肉毒中毒治疗措施
3 判断食物中毒理由 7 肉毒中毒预防
4 接诊处理应对措施 8 肉毒中毒调查处理
11/26/案例 5 肉毒中毒判断依据
2 肉毒杆菌简介
6 肉毒中毒治疗措施
肉毒毒素中毒症状
11/26/2019
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10
目录
1 肉毒杆菌中毒案例 5 肉毒中毒判断依据
2 肉毒杆菌简介
6 肉毒中毒治疗措施
3 判断食物中毒理由 7 肉毒中毒预防
4 接诊处理应对措施 8 肉毒中毒调查处理
11/26/2019
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11
接诊——判断食物中毒
中毒途径 消化、呼吸、 皮肤、注射
中毒活动 农药、咬 伤、食物、
• [6] 王馨,祁军.肉毒杆菌毒素中毒[J].口岸卫生控制,2008(05):62.
11/26/2019
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29
谢谢！
11/26/2019
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30
11/26/2019
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15
处理
11/26/2019
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16
食物中毒处理原则——细菌性诊断标准
11/26/2019
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17
确诊
•按相关规范操作 •厌氧培养，检出毒素并定型 •实验室诊断——肉毒免疫胶体金快速检测
肉毒毒素(A/B/E/F 型)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)
11/26/2019
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18
目录
未充分加热和杀灭芽胞
病死率 30%
肉毒 梭菌
G+细菌
缺氧

简介
• 它是一种致命病菌，在繁殖过程中 分泌毒素，是毒性最强的蛋白质之 一。军队常常将这种毒素用于生化 武器。人们食入和吸收这种毒素后， 神经系统将遭到破坏，出现头晕、 呼吸困难和肌肉乏力等症状。肉毒 杆菌的外毒素一旦经肠道吸收后， 它专门侵害神经系统的颅神经核及 神经肌肉相连接的地方，即所谓神 经肌肉接头处以及植物神经末梢， 而胃肠症状并不明显。
临床应用
• 在了解了毒素的结构与功能以及作用机制 后，人类开始用毒素来作为有效药物。肉 毒毒素被助恶治疗眼睑痉挛、痉挛性斜颈、 痉挛性发音困难等疾病 • 美容 • 除皱
• 病初表现为头晕、头痛、全身无力，尤其 以颈部无力最明显，因而抬头困难;继之有 四肢麻木、舌头发硬；接着可发生各种肌 群麻痹，孩子常表现为面部无表情、视物 模糊、睁眼困难，有时还有斜视，眼球运 动也受到限制，面部的这副怪摸样是由于 支配面部和眼睛运动的肌肉麻痹所致。同 时，因负责吞咽的肌肉麻痹，咀嚼、吞咽 也有困难，吃东西时呛咳，说话不清楚， 甚至完全发不出声音。由于口腔分泌物聚 集在咽部，极容易被误吸入呼吸道引起吸 入性肺炎，最终可因呼吸肌麻痹造成呼吸 衰竭，这也是引起本病死亡的主要原因
肉毒杆菌（学名：Clostridium botuli境
• 肉毒杆菌是一种生长在常温、低酸和缺氧 环境中的革兰氏阳性细菌。肉毒杆菌在不 正确加工、包装、储存的罐装的罐头食品 或真空包装食品里，都能生长。肉毒杆菌 广泛分布在自然界各处，比如土壤和动物 粪便中。人体的胃肠道也是一个良好的缺 氧环境，很适于肉毒杆菌居住。
分布
• 肉毒杆菌在自然界分布广泛，土壤中常可 检出，偶亦存在于动物粪便中。根据所产 生毒素的抗原性不同，肉毒杆菌分为A、B、 Ca、Cb、D、E、F、G这8个型，能引起人 类疾病的有A、B、E、F型，其中以A、B型 最为常见