微生物酯酶的分离纯化技术及应用研究进展

微生物阿魏酸酯酶的研究进展许　晖,孙兰萍,张　斌,石亚中(蚌埠学院食品与生物工程系,安徽蚌埠,233030)摘　要:阿魏酸酯酶能水解阿魏酸甲酯、低聚糖阿魏酸酯和多糖阿魏酸酯中的酯键,将阿魏酸游离出来的一种酶,在农业、食品和制药工业等具有广阔的应用前景。

该文介绍了阿魏酸酯酶的微生物来源和生产、理化性质、结构特征、酶活力测定等方面的国内外研究进展。

关　键　词:阿魏酸酯酶;微生物发酵法;研究进展中图分类号:Q55 文献标识码:A 文章编号:0254-5071(2008)10-0011-05Advance research on feruloyl esterases produ ced by microbesXU Hui,SUN Lanping,ZHAN G Bin,SHI Y azhong(Department of Food and B ioengineering,Bengbu College,Bengbu233030,China)Abstract:Ferulic acid esterases(FAE)is a new enzyme,which can hydrolyze methyl ferulate,oligosaccharides ferulate and polysaccharides ferulate to ferulic acid (FA),and therefore play a major role in the degradation of plant biomass1It also shows perspective application in agriculture,food and pharmaceutical industries1 This paper reviewed the research progress and trend in recent studies related to main enzyme2producing microorganisms,physicochemical properties,molecular structure,catalysis characteristics,production techniques and assay of microbial FAE1K ey w ords:ferulic acid esterase;microbial fermentation method;research advance阿魏酸(ferulic acid)的化学名称为42羟基232甲基222苯丙烯酸,是植物界普遍存在的一种酚酸,其在植物细胞壁结构中起着重要的作用,可以在植物细胞壁的木质素与木质素之间、木质素与半纤维素之间、半纤维素与半纤维素之间形成交接,从而构成一个骨架结构,使得整个细胞壁变得坚硬。

微生物脂肪酶的纯化方法概述摘要：脂肪酶是一种重要的工业用酶，广泛应用于食品、精细化工、医药和能源等领域。

脂肪酶最主要的来源是通过微生物发酵生产。

本文综述了脂肪酶性质及应用，微生物脂肪酶的常规纯化方法和新型纯化方法，并展望了脂肪酶分离纯化的研究方向及前景。

关键词：微生物脂肪酶；纯化；常规分离纯化技术；新型分离纯化技术1.脂肪酶概述脂肪酶是一类特殊的酞基水解酶，其天然底物是油脂，主要水解由甘油和12碳原子以上的不溶性长链脂肪酸形成的甘油三酯，生成脂肪酸、甘油和甘油单酯或二酯。

同时还催化其他一些水不溶性酯类的水解、醇解、氨解、酯化、转酯化以及酯类逆向合成反应。

1.1脂肪酶的结构与性质在现代生物工程技术的参与下，人们对脂肪酶的结构研究也不断深入。

研究表明，脂肪酶是一种“丝氨水解酶”。

其活性中心都存在His-X-Y-Gly-Z-Ser-W-Gl或Y-Gly-His-Ser-W-Gly(W、X、Y、Z指非特异性氨基酸)相同或相似的一级结构氨基酸序列，在此基础上，His、Ser与另一种氨基酸残基(如CCL和GCL的Glu、RML和hPL的Asp等)一起构成脂肪酶催化活性中心的三元组；从结构功能的角度，脂肪酶中的丝氨酸-OH基既具有底物结合作用，又具有催化作用。

与大多数酶一样，脂肪酶的本质仍然是蛋白质，其氨基酸组成数目从270-641kd 不等，分子量处于25一100kd之间，等电点(Pl)在4-5之间不等。

脂肪酶的催化性质主要表现在催化甘油三酯的水解、催化酯交换和催化拆分手性化合物三个方面。

在催化油脂水解的反应中，脂肪酶表现出一定的脂肪酸特异性，其主要催化带12个碳原子以上的长链脂肪酸的甘油三酷，该反应可逆。

此外，来源不同的脂肪酶在催化油脂水解时还具有明显的轻基位置特异性。

1.2产脂肪酶微生物微生物脂肪酶的发现是在20世纪初，而国内直到60年代才开始了这方面的研究与开发，其中具有代表性的报道是，1967年中科院微生物所筛选得到解脂假丝酵母菌株，并于1969年制成酶制剂供应市场。

生物质分解酶的分离纯化及其应用研究生物质分解酶是一类能够降解生物质的酶，包括纤维素酶、木质素酶等。

这些酶在生物质转化和利用中起着重要的作用。

因此，生物质分解酶的分离纯化及其应用研究具有重要的理论和应用价值。

1.生物质分解酶的分离纯化方法生物质分解酶的分离纯化是生物质转化和利用研究的关键。

常用的分离纯化方法包括离子交换、凝胶过滤、亲和层析等。

这些方法在细胞外酶的分离纯化和酶的结构研究中得到了广泛应用。

离子交换色谱是目前应用最广泛的生物质分解酶分离纯化方法之一。

离子交换色谱是基于官能团固定在固相材料上的吸附作用，从混合物中分离出酶分子的一种方法。

通常使用弱酸性或弱碱性离子交换树脂，结合pH值控制，实现了酶的分离纯化。

研究表明，离子交换色谱可以分离出很多生物质分解酶，并实现了较高的分离纯度和活力。

与离子交换色谱不同，凝胶过滤是基于酶分子对分子筛的分子大小的选择性吸附，从混合物中分离出酶分子的方法。

凝胶过滤也被广泛应用于分离纯化生物质分解酶。

研究表明，凝胶过滤可以分离出分子量较大的酶分子，如木质素酶等。

2.生物质分解酶的应用研究生物质分解酶的应用研究是生物质转化和利用研究的关键。

生物质分解酶可以应用于生物质转化和利用中的多个领域，如纸浆、纺织、食品、农业、医药等。

纸浆工业是生物质分解酶应用的一个主要领域。

纤维素酶是纸浆生产中必不可少的酶，可以使木质纤维素变成纤维素微纤维，提高纸浆的可加工性。

研究表明，适当添加纤维素酶可以提高纸浆生产效率，减少能耗，且对纸浆质量没有负面影响。

木质素酶是生物质分解酶应用的另一个重要领域。

木质素酶具有分解木质素的能力，可以降低木质素含量，提高生物质的可降解性。

研究表明，木质素酶可以应用于木材防腐、纸浆漂白、酒类发酵等领域，有很高的应用前景。

另外，生物质分解酶还可以应用于食品、农业、医药等领域。

例如，添加纤维素酶可以提高饲料的营养价值，应用于畜牧业中；添加木质素酶可以降解农作物秸秆，解决污染问题，应用于农业中；生物质分解酶可以应用于医药中，如制备生物质基高分子材料、酶替代治疗等领域。

产酶微生物的分离、纯化与选育实验目的1、学习从自然界中分离蛋白酶产生菌并纯化；2、通过实验观察紫外线和亚硝基胍等理化因素对微生物的诱变效应，并掌握基本方法；实验原理许多细菌和霉菌产生蛋白酶，细菌中的芽孢杆菌是常见的蛋白酶产生菌。

本实验将土壤样品（或其他样品）悬液加热处理，杀死非芽孢细菌及其他微生物后进行划线分离得到芽孢杆菌，将其接种到酪蛋白平板进行培养，根据酪蛋白平板的水解圈作初筛。

也可直接将细菌或霉菌接种到酪蛋白平板进行培养，分离筛选其他蛋白酶产生菌。

基因突变可分为自发突变和诱发突变。

许多物理因素、化学因素和生物因素对微生物都有诱变作用，这些能使突变率提高到自发突变水平以上的因素称为诱变剂。

紫外线（UV）是一种最常用的物理诱变因素。

它的主要作用是使DNA双链之间或同一条链上两个相邻的胸腺嘧啶间形成二聚体，阻碍双链的分开、复制和碱基的正常配对，从而引起突变。

紫外线照射引起的DNA损伤，可由光复活酶的作用进行修复，使胸腺嘧啶二聚体解开恢复原状。

因此，为了避免光复活，用紫外线照射处理以及处理后的操作应在红光下进行，并且照射处理后的微生物放在暗处培养。

试剂距离地面十公分的土壤、酪素培养基实验器材恒温培养箱、恒温水浴锅、酒精灯、培养皿×8、试管×11、玻璃棒、移液管、量筒、三角瓶、烧杯、滴管、涂布器、血细胞计数板、移液枪、显微镜、紫外线等（15W）、磁力搅拌器、台式离心机、震荡混合器等实验方法与步骤1、酪素培养基的配置：牛肉膏3g、NaCl 5g，酪素 10g，琼脂 20g，水1000mL， pH 7.6-8.0。

配制方法：称取酪素4g，先用少量2%NaOH润湿，玻璃棒搅动，再加适量的蒸馏水，在沸水浴中加热并搅拌，至完全溶解，补足水量至1000mL，加入其他成分，调整pH值，灭菌备用。

2、菌悬液的制备取土壤20g，加水200ml，即梯度为10ˉ1的菌悬液，取1ml10ˉ1的菌悬液，加9ml的蒸馏水，即梯度为10ˉ2的菌悬液，按上述的方法步骤制作梯度为10ˉ3、10ˉ4、10ˉ5的菌悬液。

第３２卷　第３期广东第二师范学院学报Ｖｏｌ．３２　Ｎｏ．３２０１２年６月Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ　Ｊｕｎ．２０１２微生物酯酶的研究进展张敏文，刘　悦，李　荷（广东药学院基础学院生化与分子生物系，广东广州５１０００６） 摘要：微生物酯酶是一种广泛应用于食品、医药、精细化工等领域的工业化酶，特别是近年来随着手性化合物的深入研究，酯酶作为手性化合物拆分的高效催化剂，而微生物的来源又十分广泛，因此微生物酯酶成为研究热点．从组成及来源、产酯酶微生物的筛选、微生物酯酶的基因克隆以及微生物酯酶的应用等几方面对微生物酯酶进行综述，微生物酯酶已经在食品加工、精细化工、手性化合物拆分、环境治理中有所应用，随着研究的深入，酯酶的工业化生产及其在各领域的应用将会逐步实现．关键词：微生物酯酶；应用；手性拆分中图分类号：Ｑ　５５６　文献标识码：Ａ　文章编号：２０９５－３７９８（２０１２）０３－００６６－０６０　引言酯酶（Ｅｓｔｅｒａｓｅｓ，ＥＣ　３．１．１．Ｘ）是一种催化酯键水解和合成的酶的总称，水解时催化酯键产生甘油和脂肪酸；合成时，把酸的羧基与醇的羟基脱水缩合，产物为酯类及其他香味物质．它广泛存在于动物、植物和微生物中．动物胰脏酯酶和微生物酯酶是酯酶的主要来源．１８３４年Ｅｂｅｒｌｅ在兔胰脏中首次发现脂肪酶，微生物酯酶则以１９３５年Ｋｉｒｓｈ发现产脂肪酶的草酸青霉（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　Ｏｘａｌｉｃｕｍ）为最早．由于微生物资源丰富，同时利用微生物发酵产酶具有便于工业化生产等优点，微生物酯酶得到关注，并且已经广泛应用于农业、食品酿造、医药化学、污水处理和生物修复等领域，又由于酯酶的酶促反应具有较高的底物专一性、区域选择性或者对映选择性，它是合成手性化合物（如手性药物，农药等）的高效生物催化剂，微生物酯酶已成为研究热点．１　微生物酯酶的组成及来源１．１　酯酶的组成酯酶主要包括脂肪酶（Ｌｉｐａｓｅ，ｔｒｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ　ｈｙｄｒｏｌａｓｅｓ，ＥＣ　３．１．１．３）和羧酸酯酶收稿日期：２０１１－１１－２５基金项目：国家自然科学基金资助项目（３０５７００５５）；广东省科技攻关项目（２００９Ｂ０２０３１３００５）；广东省自然科学基金博士启动基金资助项目（９４５１０２２４０１００３８７３）；广东药学院博士启动基金资助项目（２００６ＪＣＸ０６）作者简介：张敏文，女，湖北武汉人，广东药学院基础学院生化与分子生物系，微生物学硕士研究生；通讯作者：李荷，女，黑龙江绥化人，广东药学院基础学院生化与分子生物系教授，微生物学博士，微生物与生化药学硕士生导师．（ｃａｒｂｏｘｙｌｅｓｔｅｒａｓｅｓ，ａｒｂｏｘｙｌ　ｅｓｔｅｒ　ｈｙｄｒｏｌａｓｅｓ，ＥＣ　３．１．１．１）［１－２］，两者在生化方面没有本质区别，只是在底物特异性上，羧酸酯酶倾向于水解酰基链长度小的底物（≤１０），而脂肪酶倾向于水解酰基链长度大的底物（≥１０）［３－４］，在结构上，酯酶属于α／β水解酶超家族，具有Ｓｅｒ－Ｈｉｓ－Ａｓｐ构成的催化中心三组合（ｃａｔａｌｙｔｉｃｔｒｉａｄ），其中Ｓｅｒ通常位于具有保守的Ｇｌｙ－Ｘａａ－Ｓｅｒ－Ｘａａ－Ｇｌｙ五肽结构内［１－２］．细菌脂肪酶又包括八大家族：ｔｒｕｅ　ｌｉｐａｓｅ，ＧＤＳＬ，Ｆａｍｉｌｙ　ＩＩＩ，ｔｈｅ　ｈｏｒｍｏｎｅ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ｌｉｐａｓｅ（ＨＳＬ），Ｆａｍｉｌｙ　Ｖ－ＶＩＩＩ，其中ｔｒｕｅ　ｌｉｐａｓｅ又包括７个亚族Ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　Ｉ．１－Ｉ．７［２，５］．阿魏酸酯酶（Ｆｅｒｕｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｅｓｔｅｒａｓｅ，ＥＣ．３．１．１．７３）又称为肉桂酸酯酶，是最近分离出一种酯酶，它是羧酸酯水解酶的一个亚类，它能水解阿魏酸甲酯、低聚糖阿魏酸酯和多糖阿魏酸酯中的酯键［６］．１．２　微生物酯酶的来源在自然界中能产生酯酶的微生物资源是非常丰富的，从分类上看主要是真菌，真菌中主要是青霉、链孢霉、红曲霉、黑曲霉、黄曲霉、根霉、毛霉、酵母菌、犁头霉、须霉、白地霉和核盘菌等１２属２３种；其次是细菌，在细菌中主要是芽孢杆菌属、假单胞菌属以及伯克霍尔德菌属等；另外，放线菌中的个别种类也能产生一定量的酯酶．２　产酯酶微生物的筛选及酶活力的测定一般筛选流程为：样品→富集培养→平板分离→平板初筛（观察透明圈）→摇瓶复筛（测酶活力大小），三油酸甘油酯是产酯酶微生物初筛加入培养基中的常用底物，因为初筛选用平板培养基，而在培养基中存在不互溶的油、水两相，所以要对它们先进行乳化，乳化剂可选用聚乙烯醇或者吐温．溴甲酚紫由于反应后ｐＨ变化显色，而Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ　Ｂ由于可以和分解后的物质结合形成显色物质，它们被用作常用指示剂加入培养基内［７］．对于酯酶活力的测定，常见方法有以下几种：酯酶活力比色法，即以对硝基苯酚为底物，分光光度计测定４００ｎｍ处吸光度值［７］；酯酶活力滴定法，以ＮａＯＨ滴定三醋酸甘油酯在酯酶作用下释放的醋酸来测定；α－乙酸萘酯比色法，即先绘制α－萘酚标准曲线，然后在ｐＨ１０的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液中，以α－乙酸萘酯为底物和粗酶液反应，在５９５ｎｍ处测其吸光度值［８］．３　微生物酯酶与基因克隆随着分子生物学和宏基因组学的发展，越来越多的研究人员从不同环境样品中筛选产酯酶微生物，克隆酯酶基因，构建高产的基因工程菌为进行后续的工业化生产打下基础．其中的环境样品的主要来源是土壤以及海洋，特别是海洋环境样品，因为海洋环境包括低温、高温、高静水压、强酸、强碱以及营养条件极为贫乏的各种极端环境，微生物要在这样的环境中生存，生理结构、代谢方式等都会发生一系列改变，所以从海洋中筛选到的微生物可能具备某些特殊的代谢产物，另外低温酯酶的研究也十分广泛，近年来已纯化或克隆表达了从南北极、深海、高山冻土中分离到的低温微生物产生的低温脂肪酶，如菌株Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｆｒａｇｉ　ＩＦＯ３４５８（ＰＦＬ），Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ．ＫＢ７００Ａ，Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ．Ｂ１１－１，Ａｅｒｏｍｏｎａｓ　ｓｐ．ＬＰＢ４的脂肪酶［９－１２］．郑鸿飞等［１３］从青岛前海和胶州湾海区样品中分离到１株产酯酶活力和稳定性较高的菌株ＥＢ２１；邵铁娟等［１４］从２０００多份渤海海区海泥样品中分离出一株新型脂肪酶高产菌株ＢｏｈａｉＳｅａ－９１４５，经鉴定为适冷性海洋酵母（Ｙａｒｒｏｗｉａ　ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）；张金伟等［１５］从南极普里兹湾深海沉积物中筛选到一株产低温脂肪酶的菌株７１９５；林学政等［１６］从南大洋普里兹湾的水样中筛选到一株产低温脂肪酶的深海嗜冷菌２５１０１；Ｊｅｏｎ　ＪＨ等［１７］从南韩江华岛潮汐平原沉淀物宏基因文库中分离到一种耐盐的酯酶基因亚型；一个新的酯酶基因·７６·２０１２年第３期 张敏文，等：微生物酯酶的研究进展 ｅｓｔＤＬ３０从冲积土宏基因组文库中被筛出，它由１５２４个核苷酸组成，编码的蛋白质又５０７个氨基酸组成，这个酯酶蛋白属于ｆａｍｉｌｙ　ＶＩＩ［１８］；一个超表达的阿魏酸酯酶基因ｅｓｔＦ２７从土壤宏基因组文库中被筛出［１９］．４　微生物酯酶的应用４．１　在食品加工方面的应用酯酶主要通过酯交换［２０］、水解［２１，２２］及合成化合物等方式应用于食品加工方面．固定化脂肪酶现在已用于芳香酯的合成，而低分子量芳香酯多呈天然水果味，它们广泛应用于食品、饮料等食品工业，Ｍｅｌｏ等［２３］研究用Ｒｈｉｚｏｐｕｓ　ｓｐ．脂肪酶合成香茅醇芳香酯优化条件；利用酯酶使乳制品增香［２４］，在酿酒和食用醋的生产中，利用酯酶提高乙酸乙酯、乳酸乙酯等酯类的含量，使口感有明显提高；食用油脂精炼工艺中，借助微生物酯酶在一定条件下能催化脂肪酸与甘油之间的酯化反应，从而把油中的大量游离脂肪酸转变成中性甘油酯，提高了食用油的价值；脂肪酶在面包专用粉中还有面团调理的功能，使面包质地柔软，颜色更白；酯酶催化合成单甘脂［２５］是使用量最大的食品乳化剂；阿魏酸是天然抗氧化剂，也是近年来国际认知的防癌物质，广泛应用于食品原料中，目前已使用阿魏酸酯酶与其他酶协同从各种农作物副产品中提取阿魏酸［２６］，并且阿魏酸作为合成天然香兰素的前体，利用微生物方法产生香兰素，具有毒性低、安全性高的特点，应用于食品中．４．２　在精细化工中的应用表面活性剂在化妆品、洗涤用品中有重要用途，传统的化学生产具有选择性差、需要高温等缺点，酶法克服了这些缺点，酯酶催化糖酯等生物表面活性剂的合成，而糖酯是一种重要的生物表面活性剂；酯酶还有提高表面活性剂的释放［２７］的作用；在洗涤剂中添加碱性脂肪酶，可以提高去污力，降低三聚磷酸钠等的用量，减少污染；酯酶的底物特异性及高度立体专一性可合成具有应用价值的精细化工产品，如化妆品的长链脂肪酸酯等．４．３　在手性化合物中的应用由于酯酶酯化反应具有高底物专一性、区域选择性、对映选择性等优点，因此酯酶是有机合成中重要的生物催化剂，而且催化效率比化学试剂高出很多．手性化合物是指分子量、分子结构相同，但左右排列相反，如实体与镜中的映体的化合物，而医药领域很多药物都是手性化合物，而近年来酶拆分已经成为手性化合物拆分的研究热点，酯酶又是酶拆分中研究最为广泛的一种．ＷＥＮ　Ｓ等［２８］考察了实验室自制的Ｌｉｐａｓｅ　ＣＡＮ、Ｌｉｐａｓｅ　ＲＨ两种酯酶对α一苯乙胺的拆分效果，并与几种商品酶做了对照，结果表明Ｎｏｖｏｚｙｍｅ４３５这种商品酶的拆分效果最好．Ｇｏｄｉｎｈｏ　ＬＦ等［２９］用酯酶高效的对１，２－Ｏ异亚丙基甘油酯进行拆分，其中对映体过量值可达到７２％～９４％；研究人员改良不同介质中固定化脂肪酶拆分手性化合物，如任梦远等［３０］以自制的平均粒径为４．５μｍ磁性高分子微球为载体，采用离子交换法固定化Ｃａｎｄｉｄａ　ｒｕｇｏｓａ脂肪酶，催化（±）－薄荷醇的酯化反应，所制备的固定化脂肪酶在离子液体［ｂｍｉｎ］ＰＦ６中催化拆分（±）－薄荷醇的效果最佳，与游离酶相比固定化脂肪酶的立体选择性有很大的提高，对映体过量值可达９３％，对映体选择值为３５．Ｚｈｅｎｇ等［３１，３２］利用纯化后的重组后酯酶（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ．ＢＬ２１）对薄荷醇进行转酯化拆分，结果显示，底物／酶质量比Ｓ／Ｃ≥５０条件下，相对于丙烯酸、正丁酸酯化剂，乙酸酯化剂的效果最好（酯酶对乙酸薄荷酯的Ｅ＞１００），且通过回收，固定化酶重复使用次数达４－５次．戴大章等［３３］采用改性Ｕｌｔｒａｓｔａｂｌｅ－Ｙ分子筛固定化Ｐ．ｅｘｐａｎｓｕｍ　ＰＥＤ－０３脂肪酶（ＰＥＬ），利用固定化ＰＥＬ在微水相中对（Ｒ，Ｓ）－２－辛醇进行拆分，在以正己烷为溶剂，含水量为０．８％的体系中，于５０℃反应２４ｈ的转化率（ｃ）可达到理论值的９７．６８％，对映体过量值（ｅ．ｅ．）可达到９８．７５％．对于手性药物，是手性化合物中的研究热点，研究人员利用酯酶对其进行拆分，如（Ｒ）－氟比洛芬［３４］、酮基布洛芬［３５］等，使对映体过量值得到提高，提高了药物的有效值．·８６·　广东第二师范学院学报第３２卷４．４　在环境治理方面的应用随着农业生产中农药的大量使用，农药污染、残留等问题也日趋严重，而农药中菊酯类杀虫剂广泛应用于果蔬、果树、花卉、林木等，由于其自然条件下难以快速降解，农药残留带来潜在的食品安全和环境污染问题．研究表明，菊酯类杀虫剂具有类固醇结合活性，可能影响人体激素正常水平［３６］．研究人员对菊酯类杀虫剂的降解进行了大量研究［３７，３８］，而利用微生物降解农药是一条重要途径，研究表明从环境样品中筛选出的微生物对拟除虫菊酯［３９］，包括氯氰菊酯［４０］、丙烯菊酯［４１］等有高效降解作用，随着分子生物学技术的发展，许多研究人员已经克隆到酯酶基因［４２，４３］，而利用基因克隆和酯酶的定向化技术，构建产酯酶的高效基因工程菌也已经成为环境保护的一个发展趋势．５　展望近年来，随着宏基因组文库、基因工程、定向进化技术、固定化技术的发展，以及界面酶促过程等技术的深入开展，微生物酯酶的研究已经进行到分子层面，高效产酯酶菌株的筛选、诱变育种、基因克隆及其定向进化构建高效基因工程菌的研究取得了长足发展，随着人们生活水平的提高，食品、医药、化妆品等中的添加天然成分将受到广泛关注，特别是天然底物的生物合成和手性化合物的酶拆分，因此，微生物酯酶在食品、医药、精细化工等领域具有广泛的应用前景．由于微生物酯酶广泛的应用前景，本实验室最近从红树林土壤样品中通过宏基因组文库的方法筛选到一新型低温耐碱酯酶基因，已经提交到Ｇｅｎｂａｎｋ，其登录号码为（ＪＱ７０１７００）．实验室成员正在进行深入研究，酯酶的工业化生产及其在各领域的应用将会逐步实现．参考文献：［１］ＢＯＲＮＳＣＨ　ＥＵＥＲ　Ｕ　Ｔ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｃａｒｂｏｘｙｌ　ｅｓｔｅｒａｓｅｓ：ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ａｎｄ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｂｉｏ－ｃａｔａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．ＦＥＭＳ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　Ｒｅｖｉｅｗｓ，２００２，２６（１）：７３－８１．［２］ＡＲＰＩＧＮＹ　Ｊ　Ｌ，ＪＡＥＧＥＲ　Ｋ　Ｅ．Ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｌｉｐｏｌｙｔｉｃ　ｅｎｚｙｍｅｓ：ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌ，１９９９，３４３：１７７－１８３．［３］ＷＵ　Ｃ，ＳＵＮ　Ｂ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｏｖｅｌ　ｅｓｔｅｒａｓｅ　ｆｒｏｍ　ｍｅｔａｇｅｎｏｍｉｃ　ｌｉｂｒａｒｙ　ｏｆ　ｙａｎｇｔｚｅ　ｒｉｖｅｒ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　Ｍ　ｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，１９（２）：１８７－１９３．［４］ＳＯＲＯＲ　Ｓ　Ｈ，ＶＥＲＭＡ　Ｖ，ＲＡＯ　Ｒ，ｅｔ　ａｌ．Ａ　ｃｏｌｄ－ａｃｔｉｖｅ　ｅｓｔｅｒａｓｅ　ｏｆ　Ｓｔｒｅｐｔ　ｏｍｙｃｅｓ　ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ　Ａ３（２）：ｆｒｏｍ　ｇｅｎｏｍｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｔｏ　ｅｎｚｙｍｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　Ｍ　ｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｔ　ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，３４（８）：５２５－５３１．［５］ＪＡＥＧＥＲ　Ｋ　Ｅ，ＥＧＧＥＲＴ　Ｔ．Ｌｉｐａｓｅｓ　ｆｏｒ　ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ［Ｊ］．Ｃｕｒｒｅｎｔ　ｏｐｉｎｉｏｎ　ｉｎ　ｂｉｏｔ　ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００２，１３（４）：３９０－３９７．［６］ＣＲＥＰＩＮ　Ｖ　Ｆ，ＦＡＵＬＤＳ　Ｃ　Ｂ，ＣＯＮＮＥＲＴＯＮ　Ｉ　Ｆ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ＦｅｒｕｌｏｙｌＥｓｔｅｒａｓｅｓ［Ｊ］．Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００４，６３：６４７－６５２．［７］季祥，白立志，王勇，等．产脂肪酶细菌的筛选和酶活力研究方法的探讨［Ｊ］．天津化工，２００８，２２（１）：９－１３．［８］许学勤，徐斐，吴燕雯，等．固定化对动植物酯酶性质的影响［Ｊ］．食品与发酵工业，２００４，３０（７）：３８－４２．［９］ＡＬＱＵＡＴＩ　Ｃ，ＧＩＯＩＡ　Ｌ　Ｄ，ＳＡＮＴＡＲＯＳＳＡ　Ｇ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｃｏｌｄ－ａｃｔｉｖｅ　ｌｉｐａｓｅ　ｏｆ　Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｆｒａｇｉ：Ｈｅｔ－ｅｒｏｌｏｇｏｕｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｏｄｅｌｉｎｇ［Ｊ］．ＦＥＢＳ，２００２，２６９：３３２１－３３２８．［１０］ＲＡＳＨＩＤ　Ｎ，ＳＨＩＭＡＤＡ　Ｙ，ＥＺＡＫＩ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．Ｌｏｗ－ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｌｉｐａｓｅ　ｆｒｏｍ　ｐｓｙｃｈｒｏｔｒｏｐｈｉｃ　Ｐｓｅｕｄｏ－ｍｏｎａｓ　ｓｐ　ｓｔｒａｉｎ　ＫＢ７００Ａ［Ｊ］．Ａｐｐｌｉｅｄ　ａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００１，６７（９）：４０６４－４０６９．［１１］ＳＵＺＵＫＩ　Ｔ，ＮＡＫＡＹＡＭＡ　Ｔ，ＣＨＯＯ　Ｄ　Ｗ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｌｏｎｉｎｇ，ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｒｅｎａｔｕｒａｔｉｏｎ，ａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｃｏｌｄ－ａｄａｐｔｅｄ　ｅｓｔｅｒａｓｅ　ｗｉｔｈ　ｕｎｉｑｕｅ　ｐｒｉｍａｒｙ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｆｒｏｍ　ａ　ｐｓｙｃｈｒｏｔｒｏｐｈ　Ｐｓｅｕｄ－·９６·２０１２年第３期 张敏文，等：微生物酯酶的研究进展 ｏｍｏｎａｓ　ｓｐ　ｓｔｒａｉｎ　Ｂ１１－１［Ｊ］．ＰｒｏｔｅｉｎＥｘｐｒ　Ｐｕｒｉｆ，２００３，３０（２）：１７１－１７８．［１２］ＬＥＥ　Ｈａｎ－ｋｉ，ＡＨＮ　Ｍｉｎ－ｊｕｎｇ．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｏｌｄ　ａｃｔｉｖｅ　ｌｉｐａｓｅ　ｆｒｏｍ　Ｐｓｙｃｈｒｏｔｒｏ－ｐｈｉｃ　Ａｅｒｏｍｏｎａｓ　ｓｐ．ＬＰＢ　４［Ｊ］．Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００３，４１（１）：２２－２７．［１３］郑鸿飞，孙谧，王跃军，等．产酯酶海洋微生物的筛选、鉴定及系统发育分析［Ｊ］．渔业科学进展，２００９，３０（３）：６８－７３．［１４］邵铁娟，孙谧，郑家声，等．Ｂｏｈａｉｓｅａ－９１４海洋低温碱性脂肪酶研究［Ｊ］．微生物学报，２００４，４４（６）：７８９－７９３．［１５］张金伟，曾润颖．南极产低温脂肪酶菌株Ｐｓｙｃｈｒｏｂａｃｔｅｒ　ｓｐ．７１９５的选育、发酵条件及酶学性质研究［Ｊ］．生物磁学，２００６，６（１）：６－１０．［１６］林学政，杨秀霞，边际，等．南大洋深海嗜冷菌２－５－１０－１及其低温脂肪酶的研究［Ｊ］．海洋学报，２００５，２７（３）：１５４－１５８．［１７］ＪＥＯＮ　Ｊ　Ｈ，ＬＥＥ　Ｈ　Ｓ，ＫＩＭ　Ｊ　Ｔ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｎｅｗ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　ｏｆ　ｓａｌｔ－ｔｏｌｅｒａｎｔ　ｅｓｔｅｒａｓｅｓｆｒｏｍ　ａ　ｍｅｔａｇｅｎｏｍｉｃ　ｌｉｂｒａｒｙ　ｏｆ　ｔｉｄａｌ　ｆｌａｔ　ｓｅｄｉｍｅｎｔ［Ｊ］．Ａｐｐｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１１Ｊｕｌ　１．［１８］ＴＡＯ　Ｗ，ＬＥＥ　Ｍ　Ｈ，ＷＵ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｆａｍｉｌｙ　ＶＩＩ　ｅｓｔｅｒａｓｅ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｆｒｏｍａｌｌｕｖｉａｌ　ｓｏｉｌ　ｍｅｔａｇｅｎｏｍｉｃ　ｌｉｂｒａｒｙ［Ｊ］．Ｊ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０１１，４９（２）：１７８－８５．［１９］ＳＡＮＧ　Ｓ　Ｌ，ＬＩ　Ｇ，ＨＵ　Ｘ　Ｐ，ｅｔ　ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ，ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｎｏｖｅｌｆｅｒｕｌｏｙｌ　ｅｓｔｅｒａｓｅ　ｆｒｏｍ　ａ　ｓｏｉｌ　Ｍｅｔａｇｅｎｏｍｉｃ　Ｌｉｂｒａｒｙ［Ｊ］．Ｊ　Ｍｏｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０１１，２０（４）：１９６－２０３．［２０］ＨＩＲＯＳＨＩ　Ｕｙａｍａ，ＳＨＩＲＯ　Ｋｏｂａｙａｓｈｉ．Ｅｎｚｙｍｅ　ｃａｔａｌｙｚｅｄ　ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｔｏ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｐｏｌｙｍｅｒｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃａｔａｌｙｓｉｓ　Ｂ：Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ，２００２，１９－２０：１１７－１２７．［２１］ＳＬＩＭ　Ｃｈｅｒｉｆ，ＡＨＭＥＤ　Ｆｅｎｄｒｉ，ＮＡＢＩＬ　Ｍｉｌｅｄ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｒａｂ　ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ　ｌｉｐａｓｅ　ａｃｔｉｎｇ　ａｔ　ｈｉｇｈ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，２００７，８９（８）：１０１２－１０１８．［２２］ＣＨＩＡＲＡ　Ｇｉｕｌｉａ　Ｌａｕｄａｎｉ，ＭＡＪＡ　Ｈａｂｕｌｉｎ，ＺＥＬＪＫＯ　Ｋｎｅｚ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ　ｌｉｐａｓｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｌｏｎｇｃｈａｉｎ　ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ　ｅｓｔｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｄｅｎｓｅ　ｃａｒｂｏｎｄｉｏｘｉｄｅ：ｂｅｎｃｈ－ｓｃａｌｅ　ｐａｃｋｅｄ－ｂｅｄ　ｒｅａｃｔｏｒ　ｓｔｕｄｙ［Ｊ］．ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ　Ｆｌｕｉｄｓ，２００７，４１（１）：７４－８１．［２３］ＭＥＬＯ　Ｌ　Ｌ　Ｍ　Ｍ．，ＰＡＳＴＯＲＥ　Ｇ　Ｍ．，ＭＡＣＥＤＯ　Ｇ　Ａ．Ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｓｙｎｔｈｅｓｉａ　ｏｆ　ｃｉｔｒｏｎｅｌｌｙｌ　ｆｌａｖｏｕｒ　ｅｓ－ｔｅｒｓ　ｕｓｉｎｇ　ｆｒｅｅ　ａｎｄ　ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ　ｌｉｐａｓｅ　ｆｒｏｍ　ｒｈｉｚｏｐｕｓ　ｓｐ．［Ｊ］．Ｐｒｏｃｅｓｓ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００５，４０：３１８１－３１８５．［２４］刘晶，韩清波，张耀广．乳脂酶及其对乳制品品质的影响［Ｊ］．食品工业技，２００６，２７（４）：１９４－１９６．［２５］ＭＯＨ′Ｄ　Ｓａｌａｍｅｈ，ＪＵＥＲＧＥＮ　Ｗｉｅｇｅｌ．Ｌｉｐａｓｅｓ　ｆｒｏｍ　ｅｘｔｒｅｍｏｐｈｉｌｅｓ　ａｎｄ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｆｏｒ　ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　ａｐｐｌｉｃａ－ｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ａｄｖａｎｃｅｓ　ｉｎ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００７，６１：２５３－２８３．［２６］ＥＶＡＮＧＥＬＯＳ　Ｔｏｐａｋａｓ　ＣＶ，ＰＡＵＬ　Ｃｈｒｉｓｔａｋｏｐｏｕｌｏｓ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｐ－ｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｆｅｒｕｌｏｙｌ　ｅｓｔｅｒａｓｅａ．Ｐｒｏｃｅｓｓ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００７，４２：４９７－５０９．［２７］ＳＥＫＨＯＮ　Ｋ　Ｋ，ＫＨＡＮＮＡ　Ｓ，ＣＡＭＥＯＴＲＡ　Ｓ　Ｓ．Ｅｎｈａｎｃｅｄ　ｂｉｏｓｕｒｆａｃｔａｎｔ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｃｌｏ－ｎｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅ　ｇｅｎｅｓ　ａｎｄ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　ｅｓｔｅｒａｓｅ　ｉｎ　ｂｉｏｓｕｒｆａｃｔａｎｔ　ｒｅｌｅａｓｅ［Ｊ］．２０１１，１０（１）：４９．［２８］ＷＥＮ　Ｓ，ＴＡＮ　Ｔ，ＹＵ　Ｍ．Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ　ｌｉｐａｓｅ　ＹｌＬｉｐ２－ｃａｔａｌｙｚｅｄ　ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ（±）α－Ｐｈｅｎｙｌｅｔｈｙｌ　ａｍｉｎｅ　ｉｎａ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗｉｔｈ　ｏｒｇａｎｉｃ　ｃｏｓｏｌｖｅｎｔ［Ｊ］．Ｐｒｏｃｅｓｓ　Ｂｉｏｃｈｅｍ，２００８，７（４３）：１２５９－１２６４．［２９］ＧＯＤＩＮＨＯ　Ｌ　Ｆ，ＲＥＩＳ　Ｃ　Ｒ，ＴＥＰＰＥＲ　Ｐ　Ｇ，ｅｔ　ａｌ．Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ　ｏｆ　ａｎ　Ｅ．ｃｏｌｉ　ｅｓｔｅｒａｓｅ　ｗｉｔｈ　ｈｉｇｈ　ａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄ　ｅｎａｎｔｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ　ｔｏｗａｒｄｓ　１，２－Ｏ－ｉｓｏｐｒｏｐｙｌｉｄｅｎｅｇｌｙｃｅｒｏｌ　ｅｓｔｅｒｓ［Ｊ］．Ａｐｐｌ　Ｅｎｖｉｒｏｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０１１，７７（１７）：６０９４－６０９９．［３０］任梦远，白姝，孙彦．离子液体中固定化脂肪酶催化拆分（±）－薄荷醇［Ｊ］．生物加工过程，２００９，７（３）：１６－２０．［３１］ＺＨＥＮＧ　Ｇ　Ｗ，ＺＨＡＮＧ　Ｊ　Ｄ，ＸＵ　Ｊ　Ｈ．Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌ－ｍｅｎｔｈｏｌ　ｂｙ　ａ　ｈｉｇｈ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｕｂｓｔｒａｔｅ　ｔｏｌｅｒａｂｌｅ　ｅｓｔｅｒａｓｅ　ｆｒｏｍ　ａ　ｎｅｗｌｙ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｕｂｔｉｌｉｓ　ＥＣＵ０５５４［Ｊ］．Ｊ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００８，１３６（Ｓｕｐｐｌ　１）：Ｓ３６６－Ｓ３８３．·０７·　广东第二师范学院学报第３２卷［３２］ＺＨＥＮＧ　Ｇ　Ｗ，ＰＡＮ　Ｊ，ＹＵ　Ｈ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．Ａｎ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ　ｆｏｒ　ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌ－ｍｅｎｔｈｏｌｗｉｔｈ　ｈｉｇｈ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｓｕｂｓｔｒａｔｅ　ｔｏ　ｃａｔａｌｙｓｔ　ｕｓｉｎｇ　ｗｈｏｌｅ　ｃｅｌｌｓ　ｏｆ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　Ｅ．ｃｏｌｉ［Ｊ］．Ｊ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０１０，１５０（１）：１０８－１１４．［３３］戴大章，夏黎明．微水相中改性Ｕｌｔｒａｓｔａｂｌｅ－Ｙ分子筛固定化脂肪酶拆分（Ｒ，Ｓ）－２－辛醇［Ｊ］．高等学校化学学报，２００７，２８（１２）：２３０７－２３１０．［３４］陈少欣，钱莉莉，史炳照．重组芽孢杆菌脂肪酶拆分制备（Ｒ）－氟比洛芬［Ｊ］．中国医药工业杂志，２００７（３）：１８１－１８４．［３５］刘瑞恩，赵运英，史斐斐，等．拆分获得（Ｒ）－酮基布洛芬酯酶基因的筛选、克隆与表达［Ｊ］．中国生物工程杂志，２０１０，３０（１０）：１－６．［３６］ＬＥＮＧ　Ｇ，ＬＥＮＧ　Ａ，ＫＵＥＨＮ　Ｋ　Ｈ，ｅｔ　ａｌ．Ｈｕｍａｎ　ｄｏｓｅ－ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ　ｓｔｕｄｉｅｓ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｐｙｒｅｔｈｒｏｉｄ　ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄｅｐｒｏｄｕｃｅ　ｃｏｍ　ｐｏｕｎｄｓ　ｗｉｔｈ　ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ［Ｊ］．Ｅ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０００，１９（４）：８０１－８０９．［３７］ＬＩＵ　Ｗｅｉ－ｐｉｎｇ，ＧＡＮ　Ｊｉａｎｙｉｎｇ，ＳＡＮＧＪＩＮ　Ｌｅｅ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｓｏｍｅｒ　ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ａｑｕａｔｉｃ　ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ａｎｄ　ｂｉｏｄｅｇ－ｒａｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｉｆｅｎｔｈｒｉｎ　ａｎｄ　ｐｅｒｍｅｔｈｒｉｎ［Ｊ］．Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００５，２４（８）：１８６１－１８６６．［３８］ＬＩＵ　Ｗｅｉ－ｐｉｎｇ，ＪＡＹ　Ｊ　Ｇａｎ，ＳＵＪＩＥ　Ｑｉｎ．Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｑｕａｔｉｃ　ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ　ｏｆ　ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ　ｐｙ－ｒｅｔｈｒｏｉｄ　ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄｅｓ［Ｊ］．Ｃｈｉｒａｌｉｔｙ，２００５，１７（Ｓ１）：Ｓ１２７－Ｓ１３３．［３９］廖敏，张海军，谢晓梅．降解拟除虫菊酯类农药的缺陷假单胞菌的分离、鉴定及讲解特性研究［Ｊ］．环境科学学报，２００９，２９（７）：１３８８－１３９４［４０］杨芳，姚开，米兰，等．产酸克雷伯氏菌降解氯氰菊酯农药发酵条件的优化［Ｊ］．食品与发酵工业，２０１０，３６（１）：１７－２０．［４１］李玉清．丙烯菊酯农药的微生物生物修复作用研究［Ｊ］．襄樊学院学报，２００８，２９（５）：２７－２９．［４２］ＧＲＡＮＴ　Ｒ　Ｊ，ＤＡＮＩＥＬｌ　Ｔ　Ｊ，ＢＥＴＴＳ　Ｗ　Ｂ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ　ｐｙｒｅｔｈｒｏｉｄ－ｄｅ－ｇｒａｄｉｎｇ　ｂａｃｔｅｒｉａ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００２，９２（３）：５３４－５４０．［４３］张松柏，张德咏，刘勇，等．一株菊酯类农药降解菌的分离鉴定及其降解酶基因的克隆［Ｊ］．微生物学报，２００９，４９（１１）：１５２０－１５２６．Ｔｈｅ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ＥｓｔｅｒａｓｅｓＺＨＡＮＧ　Ｍｉｎ－ｗｅｎ，ＬＩＵ　Ｙｕｅ，ＬＩ　Ｈｅ（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　ＢａｓｉｃＣｏｕｒｓｅｓ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，５１０００６，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ｅｓｔｅｒａｓｅｓ　ｐｌａｙ　ａｎ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｒｏｌｅ　ｉｎ　ｆｏｏｄ　ｉｎｄｕｓｔｒｙ，ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ｉｎｄｕｓｔｒｙ，ｉｎｄｕｓｔｒｙ　ｏｆｆｉｎｅ　ｃｈｅｍｉｃａｌｓ　ａｎｄ　ｓｏ　ｏｎ．Ｉｎ　ｒｅｃｅｎｔ　ｙｅａｒｓ，ｗｉｔｈ　ｔｈｏｒｏｕｇｈ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｆ　ｃｈｉｒａｌ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，ｅｓｔｅｒａｓｅ　ｗａｓ　ａｈｉｇｈ－ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｃａｔａｌｙｓ　ｆｏｒ　ｃｈｉｒａｌ　ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｓｏｕｒｃｅｓ　ｉｓ　ｖｅｒｙ　ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ，ｓｏ　ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｅｓｔｅｒａｓｅｓｂｅｃｏｍｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｆｏｃｕｓ．Ｔｈｉｓ　ｐａｐｅｒ　ｓｕｍｍａｒｉｚｅｄ　ｍａｎｙ　ａｓｐｅｃｔｓ　ｉｎ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｅｓｔｅｒａｓｅｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｔｈｅ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｏｕｒｃｅ，ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｅｓｔｅｒａｓｅ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ　ｓｔｒａｉｎｓ，ｔｈｅ　ｇｅｎｅｃｌｏｎｉｎｇ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｅｓｔｅｒａｓｅｓ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｅｓｔｅｒａｓｅｓ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｅｓｔｅｒａｓｅ　ｈａｄ　ａｌｒｅａｄｙａｐｐｌｉｅｄ　ｉｎ　ｆｏｏｄ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ，ｆｉｎｅ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｉｎｄｕｓｔｒｙ，ｃｈｉｒａｌ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ａｎｄ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｗｉｔｈｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｔｈｅ　ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｅｓｔｅｒａｓｅ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｖａｒｉｏｕｓｆｉｅｌｄｓ　ｗｉｌｌ　ｇｒａｄｕａｌｌｙ　ｒｅａｌｉｚｅ．Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ｅｓｔｅｒａｓｅｓ；ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ；ｃｈｉｒａｌ　ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ·１７·２０１２年第３期 张敏文，等：微生物酯酶的研究进展 。