微生物实验报告
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实验1 培养基的配制和灭菌一、目的要求1.了解培养基的配制原理和方法,掌握其配制过程。
2.了解几种灭菌方法,掌握高压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。
3.熟悉菌种分离筛选的前期准备工作及操作方法。
4.每2人一组,每人一份实验报告。
二、实验材料1.药品:酵母粉、蛋白胨、氯化钠、琼脂、葡萄糖、KNO3、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O、1N HCl、1N NaOH2.设备:高压蒸汽灭菌锅、紫外线灭菌灯、75%酒精棉。
3.材料:天平、药匙、电炉、pH 试纸、烧杯、量筒、5mL、10mL 注射器、玻璃棒、试管、培养基、吸管、移液器(1mL 0.2mL)、牛皮纸、线绳、标签等。
三、实验内容(一) 培养基的配制1.培养基的配制方法和步骤1)称量:按照配方正确称取所需药品放于烧杯中。
2)溶化:在烧杯中加入所需水量,玻棒搅匀,加热溶解。
3)调pH 值:用1N NaOH 或1N HCl 调pH,用pH 试纸对照。
4)加琼脂溶化:加热过程要不断搅拌,可适当补水。
5)分装:注意不要污染试管塞或纱布。
6)包扎成捆:用记号笔注明何种培养基。
7)灭菌:在高压锅中, 115 °C 高温灭菌30min。
2.培养基的配制A.富集培养基(液体):海水2216E 液体培养基(g/L):蛋白胨5.0,酵母粉1.0,海水1L,pH 8.0。
取50mL 分装250mL 三角瓶后,8 层纱布封口,外包1层牛皮纸,121℃,高温灭菌20min。
B. 2216E 斜面(固体):海水2216E 液体培养基中加入2%的琼脂粉,加热溶化琼脂,每支试管内。
加入3mL,121℃高温灭菌20min,灭菌后摆斜面。
C. 无菌生理盐水和保种液:生理盐水: NaCl 0.85% 蒸馏水配制。
每支试管加入5mL,盖上试管帽、包扎、121°C 高温灭菌20min。
保种液:生理盐水,加25%甘油D. 碳源优化培养基:以海水2216E 液体培养基(蛋白胨0.5%,酵母粉0.1%,磷酸铁0.01%,人工海水,pH7.6)为基础,碳源分别是:葡萄糖、蔗糖、甘油、柠檬酸钠、乳糖,每种碳源的添加量为1%。
一、实验目的1. 掌握显微镜的基本操作方法。
2. 观察微生物的形态和结构。
3. 了解微生物在不同环境下的生长状况。
二、实验原理显微镜是一种利用光学原理放大微小物体的仪器。
通过显微镜,我们可以观察微生物的形态、结构、运动和生长状况,从而了解微生物的生物学特性。
三、实验材料与仪器1. 材料:- 微生物培养液- 微生物纯培养物- 玻片、盖玻片、载玻片- 滴管、酒精灯、镊子2. 仪器:- 显微镜- 照相机(可选)四、实验步骤1. 拿出显微镜,调整光源和焦距,确保视野清晰。
2. 用滴管将微生物培养液滴在载玻片上,盖上盖玻片。
3. 将载玻片放置在显微镜的载物台上,调整焦距,观察微生物的形态和结构。
4. 用照相机记录微生物的图像(可选)。
5. 重复以上步骤,观察不同环境下的微生物生长状况。
五、实验结果与分析1. 观察到微生物的形态多样,包括球形、杆形、螺旋形等。
2. 观察到微生物的结构包括细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核等。
3. 观察到微生物在不同环境下的生长状况,如温度、pH值、营养物质等对微生物生长的影响。
六、实验结论1. 显微镜是观察微生物形态和结构的重要工具。
2. 微生物的形态和结构与其生物学特性密切相关。
3. 环境因素对微生物的生长具有重要影响。
七、注意事项1. 操作显微镜时要轻柔,避免损坏镜头。
2. 保持显微镜的清洁,避免污染。
3. 观察微生物时要保持耐心,仔细观察。
八、实验拓展1. 尝试观察其他微生物,如细菌、真菌、藻类等。
2. 研究微生物的生长规律和环境适应性。
3. 利用显微镜观察微生物的繁殖过程。
九、实验总结通过本次实验,我们掌握了显微镜的基本操作方法,观察了微生物的形态和结构,了解了微生物的生长规律和环境适应性。
实验过程中,我们深刻体会到显微镜在微生物学研究中的重要作用。
第1篇一、实验目的1. 熟悉细菌培养的基本原理和方法。
2. 学习观察细菌的生长特征。
3. 掌握无菌技术操作,提高实验技能。
二、实验原理细菌是单细胞微生物,具有繁殖速度快、形态多样等特点。
在适宜的培养基和条件下,细菌可以生长繁殖,形成肉眼可见的菌落。
通过细菌培养,可以观察其生长特征,为后续研究提供基础。
三、实验材料1. 培养基:牛肉膏蛋白胨培养基、营养肉汤培养基等。
2. 细菌:金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等。
3. 实验仪器:恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、移液器、无菌操作台等。
4. 实验试剂:无菌水、无菌棉签、无菌生理盐水等。
四、实验方法1. 培养基制备:按照说明书配制牛肉膏蛋白胨培养基和营养肉汤培养基,高压蒸汽灭菌后备用。
2. 细菌接种:将金黄色葡萄球菌和大肠杆菌分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基和营养肉汤培养基中。
3. 恒温培养:将接种后的培养基放入恒温培养箱中,分别于37℃和30℃下培养24小时。
4. 观察记录:观察细菌在培养基上的生长情况,记录菌落形态、大小、颜色等特征。
5. 无菌技术操作:在无菌操作台中,进行接种、移液等操作,防止污染。
五、实验结果1. 金黄色葡萄球菌在牛肉膏蛋白胨培养基上生长良好,形成圆形、金黄色、表面光滑的菌落。
2. 大肠杆菌在营养肉汤培养基上生长良好,形成乳白色、浑浊的菌液。
六、实验分析1. 通过本次实验,掌握了细菌培养的基本原理和方法。
2. 观察到金黄色葡萄球菌和大肠杆菌在不同培养基和温度下的生长特征,为后续研究提供了基础。
3. 在实验过程中,注意无菌技术操作,防止污染。
七、实验讨论1. 细菌在不同培养基和温度下的生长情况有何差异?2. 如何提高细菌培养的效率?3. 在实验过程中,如何避免污染?八、实验总结通过本次细菌培养实验,我们了解了细菌的基本特征和生长规律,掌握了无菌技术操作,为后续研究奠定了基础。
在实验过程中,我们要注重细节,严格按照操作规程进行,确保实验结果的准确性。
微生物学实验报告(格式标准)(生命科学专业)教师:黎勇目录索引实验一油镜的使用与细菌的简单染色法 3实验二细菌的革氏染色与芽孢染色 5实验三常用培养基的配制7实验四酵母菌霉菌的形态结构观察及酵母死活细胞的鉴别8实验五、微生物大小的测定与显微计数10实验六环境中微生物的检测与分离纯化11实验七细菌鉴定中常用的生理生化反应12实验八(综合实验)化能异养微生物的分离与纯化13课程名称: 微生物学实验班级:化生系生命科学本科实验日期: 指导教师:黎勇实验一油镜的使用与细菌的简单染色法〔目的要求〕学习并熟练掌握油镜的使用技术;观察细菌的基本形态;学习观察细菌的运动性的基本方法。
〔基本原理〕1、 N·A=n·sinα2、 D=λ/2N、A3、目镜可提高放大倍数,但有效放大率取决于镜口率。
已经分辨的物体不放大瞧不清,未分辨物放得再大也瞧不清。
4、用悬滴法或凹玻片法观察细菌的运动性时,可以通过真运动能定向地由一处快速运动来区别于颗粒的布朗运动。
〔器材用具〕显微镜、载玻片、凹玻片、盖玻片、接种环、香柏油、二甲苯、凡士林、吸水纸、擦镜纸;细菌、放线菌等固定装片;培养18小时左右的B、subtilis、 S、arueus 菌斜面培养物;无菌水、生理盐水。
〔方法步骤〕:(一) 油镜的使用镜检装片在中倍(或高倍镜)下找到目的物,并使位于视野正中聚光镜上升到最高位置,虹彩光圈开到最大,镜头转开成八字形在玻片的镜检部位(光斑处)滴一滴香柏油油镜转入正下方侧视小心上升载物台(缩短镜头与装片距离,镜头浸入油中,至油圈不扩大为止镜头几与装片接触) 粗调器徐徐下降载物台(密切注视视野,当捕捉到物像时,立即用细调器校正) 仔细观察并绘图取出装片,清洗油镜:擦镜纸拭去镜头上的香柏油擦镜纸沾少许二甲苯擦去残留(用手指辅助,迅速拭擦一、二次) 用清洁擦镜纸仔细擦干二甲苯(2-3次)。
(二) 细菌的简单染色法:涂片干燥火焰固定染色水洗干燥油镜观察(三) 细菌运动性的观察取洁净盖玻片,四周涂上凡士林滴加一小滴菌悬液凹玻片的凹窝向下盖于盖玻片上翻转观察〔结果分析〕1、画一圆圈表示视野,选取所观察的微生物绘图,注意特殊结构、形状与排列。
微生物的分布实验报告篇一:微生物实验报告微生物实验报告一环境中的微生物的检测和分离纯化实验目的:1 学习并掌握无菌操作技术原理和方法2 学习用稀释涂布法分离微生物3 认识微生物存在的普遍性,体会无菌操作的原理实验材料:1 土样溶液0.5ml,无菌生理盐水2 取液器(1000μL一支,100μL一支),培养箱,培养皿(12个),无菌有帽试管,三角瓶,无菌涂棒,接种环,1000μL无菌吸头若干,记号笔,酒精灯,火柴,试管架实验步骤:A培养基的制备(已提前制备好)B周围环境中的微生物的检测,在牛肉膏蛋白胨培养基平板上作如下实验1 取三个平板,用100μL的取液器分别吸取100μL的河水、豆浆、豆奶,均匀加在三个培养基上,并用无菌玻璃涂棒涂布均匀(要多涂几次,时间约1-2分钟,使细菌均匀分布)。
2 再取三个平板,三个同学分别用手指(未洗过)在培养基上涂抹几秒钟,一个同学对应一个平板。
3 再取一个平板,其中一个同学将手用肥皂洗过后,再在培养基上涂抹。
4 再取一个平板,打开皿盖,一个同学对着培养基咳嗽,使口腔中的气流和飞沫落到培养基上。
5 再取一个平板,打开皿盖,在空气中放置10min左右,关上皿盖。
6 将上述9个平板放置在35℃的培养箱中培养24h。
C土壤中分离微生物1 采土样,制备土壤稀释液(已准备好)2 取三个平板,每个培养基上用取液器添加100μL的土壤稀释液,并用无菌玻璃涂棒涂布均匀(要多涂几次,时间约1-2分钟,使细菌均匀分布)。
3 将平板依旧放在35℃的培养箱中培养24h。
D菌落计数培养24h后,取出培养平板,算出每个平板上的菌落数量。
其中,土样中的微生物含量可用以下式子计算土壤中的细菌含量(个/g土壤)=菌落平均数×10×稀释倍数实验结果及数据:实验结果如附图。
开盖10min 手指直接按压手指直接按压手指直接按压1号的手指经肥皂洗后按压对着培养基咳嗽豆奶河水土壤溶液土壤溶液豆浆土壤溶液实验讨论及感想:1根据你对周围环境中微生物存在的观察,你认为无菌操作要注意什么?在进行无菌操作的时候,应该要注意始终在明火旁边操作,既不能离得太远,也不能离得太近。
一、实验目的1. 了解微生物在自然界中的分布情况;2. 掌握微生物采集、分离、培养的基本方法;3. 培养无菌操作意识,提高实验技能。
二、实验原理微生物是自然界中广泛分布的一类生物,它们在土壤、水体、空气、生物体等多种环境中均有存在。
微生物的分布与各种环境因素密切相关,如温度、湿度、pH值、营养物质等。
本实验通过采集不同环境中的微生物样本,进行分离、培养和观察,了解微生物的分布规律。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:土壤、水体、空气、植物表面等;2. 仪器:无菌操作台、无菌棉签、无菌试管、培养皿、显微镜、恒温培养箱等;3. 试剂:无菌生理盐水、营养琼脂、无菌水等。
四、实验步骤1. 微生物采集(1)土壤样品:用无菌铲子取适量土壤,放入无菌试管中;(2)水体样品:用无菌吸管吸取水体样品,放入无菌试管中;(3)空气样品:将无菌棉签在无菌生理盐水中蘸湿,在空气中滚动,收集空气中的微生物;(4)植物表面样品:用无菌棉签在植物表面滚动,收集植物表面的微生物。
2. 微生物分离与培养(1)将采集的样品进行适当稀释;(2)将稀释后的样品涂布在营养琼脂平板上;(3)将平板倒置放入恒温培养箱中培养。
3. 微生物观察(1)观察培养皿上生长的微生物菌落;(2)用无菌接种环挑取菌落,进行纯培养;(3)在显微镜下观察微生物的形态。
五、实验结果与分析1. 土壤样品:在培养皿上观察到较多的微生物菌落,菌落形态多样,有圆形、椭圆形、不规则形等;2. 水体样品:培养皿上菌落较少,菌落形态与土壤样品相似;3. 空气样品:培养皿上菌落较少,菌落形态与土壤样品相似;4. 植物表面样品:培养皿上菌落较多,菌落形态与土壤样品相似。
实验结果表明,微生物在自然界中广泛分布,土壤、水体、空气、植物表面等环境中均存在大量的微生物。
微生物的形态和数量与采集环境有关,土壤中的微生物种类和数量最多,其次是植物表面和水体,空气中微生物数量最少。
六、实验结论1. 微生物在自然界中广泛分布,与各种环境因素密切相关;2. 通过微生物的采集、分离、培养和观察,可以了解微生物的分布规律;3. 无菌操作在微生物实验中至关重要,可以有效防止污染。
一、实验目的1. 学习微生物分离和纯化的基本方法。
2. 掌握微生物形态观察和简单生理生化试验的方法。
3. 熟悉微生物鉴定的一般程序。
二、实验原理微生物分离与鉴定是微生物学的基本实验技术。
通过纯化培养,可以得到单一种类的微生物,便于对其进行观察和研究。
微生物鉴定则是对纯化后的微生物进行分类和命名。
三、实验材料与仪器1. 材料:土壤样品、牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂、生理盐水、革兰氏染色液、显微镜、酒精灯、接种环等。
2. 仪器:高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、酒精灯、显微镜等。
四、实验步骤1. 微生物分离(1)土壤样品采集:取适量土壤样品,置于无菌试管中。
(2)土壤样品处理:将土壤样品加入适量的生理盐水,振荡混匀,制成土壤悬液。
(3)稀释涂布平板法:将土壤悬液进行10倍系列稀释,取适量稀释液涂布于牛肉膏蛋白胨琼脂平板上,37℃恒温培养24小时。
(4)挑取单菌落:用接种环挑取单个菌落,转接至新的牛肉膏蛋白胨琼脂平板上,37℃恒温培养24小时。
2. 微生物形态观察(1)革兰氏染色:将纯化后的菌落涂片,进行革兰氏染色,观察菌体的形态和染色特性。
(2)显微镜观察:将菌落制成临时涂片,在显微镜下观察菌体的形态、大小、排列等特征。
3. 微生物生理生化试验(1)糖发酵试验:将纯化后的菌落接种于糖发酵管中,37℃恒温培养24小时,观察菌落是否产生气泡。
(2)V-P试验:将纯化后的菌落接种于V-P试剂中,37℃恒温培养24小时,观察菌落是否产生红色沉淀。
4. 微生物鉴定根据微生物的形态、生理生化特征,结合已知的微生物分类学知识,对纯化后的微生物进行鉴定。
五、实验结果与分析1. 微生物分离:成功分离出多个单菌落,菌落呈圆形、光滑、湿润、乳白色。
2. 微生物形态观察:革兰氏染色结果显示,菌体为革兰氏阳性菌,呈杆状。
3. 微生物生理生化试验:糖发酵试验结果显示,该菌能发酵葡萄糖,产生气泡;V-P试验结果显示,该菌能产生红色沉淀。
4. 微生物鉴定:根据以上实验结果,该菌为葡萄球菌属。
微生物大小与数量的测定实验报告一、实验目的本次实验旨在掌握使用显微镜测量微生物大小的方法,以及学会运用血球计数板对微生物数量进行测定。
通过实验操作和数据处理,深入了解微生物的形态特征和种群密度,为后续的微生物学研究打下基础。
二、实验原理(一)微生物大小的测定微生物细胞的大小是微生物的基本特征之一。
使用显微镜测微尺可以较为准确地测量微生物细胞的长度、宽度和直径等参数。
显微镜测微尺包括目镜测微尺和镜台测微尺。
目镜测微尺是一块可放在目镜内的圆形小玻片,上面刻有刻度;镜台测微尺是一块特制的载玻片,中央有精确的刻度,用于校正目镜测微尺。
(二)微生物数量的测定血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物数量的工具。
它由一块特制的厚玻璃片制成,玻片上有四个槽构成三个平台。
中间的平台又被一短横槽隔成两半,每半边上面各刻有一个方格网。
方格网上刻有 9 个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室。
计数室的刻度一般有两种规格,一种是一个大方格分成 16 个中方格,而每个中方格又分成 25 个小方格;另一种是一个大方格分成 25 个中方格,而每个中方格又分成 16 个小方格。
但无论哪种规格,每个大方格的边长均为 1 毫米,盖上盖玻片后,计数室的容积是一定的。
因此,在一定体积的菌液中,通过计算微生物在计数室中的数量,就可以换算出菌液中微生物的数量。
三、实验材料与仪器(一)材料枯草芽孢杆菌、酿酒酵母的菌悬液。
(二)仪器显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、血球计数板、盖玻片、滴管、擦镜纸、吸水纸等。
四、实验步骤(一)微生物大小的测定1、安装目镜测微尺将目镜测微尺装入目镜的隔板上,注意有刻度的一面朝下。
2、校正目镜测微尺(1)将镜台测微尺置于载物台上,先用低倍镜观察,找到镜台测微尺的刻度线。
(2)移动镜台测微尺,使镜台测微尺与目镜测微尺的刻度线平行,并使两者的“0”刻度线重合。
(3)换用高倍镜观察,找出两尺再次重合的刻度线。
分别记录目镜测微尺和镜台测微尺在重合线段内各自的格数。
一、实验目的1. 探究不同环境因素对微生物生长的影响;2. 分析微生物生长过程中的形态变化;3. 了解微生物生长周期及影响因素。
二、实验材料与仪器1. 实验材料:牛肉膏、酵母膏、葡萄糖、琼脂、牛肉汁、蒸馏水、pH试纸、培养皿、移液器、酒精灯、恒温培养箱、显微镜等;2. 实验仪器:高压蒸汽灭菌器、电子天平、pH计、恒温水浴锅等。
三、实验方法1. 培养基制备:称取牛肉膏、酵母膏、葡萄糖、琼脂等,加入蒸馏水,搅拌均匀,分装于培养皿中,在高压蒸汽灭菌器中灭菌,备用;2. 菌种接种:取适量牛肉汁,加入少量琼脂,搅拌均匀,倒入培养皿中,待冷却后,用移液器吸取菌液,均匀涂布于培养基表面;3. 环境因素设置:将培养皿放置于不同温度(25℃、37℃、50℃)、pH值(4.0、6.0、8.0、10.0)的培养箱中培养;4. 观察与记录:每隔24小时观察并记录微生物的生长情况,包括菌落形态、颜色、大小等;5. 数据分析:对实验数据进行统计分析,得出结论。
四、实验结果与分析1. 温度对微生物生长的影响:实验结果显示,在不同温度下,微生物的生长情况存在差异。
在25℃和37℃条件下,微生物生长旺盛,菌落形态规则,颜色鲜艳;而在50℃条件下,微生物生长缓慢,菌落形态不规整,颜色暗淡。
这表明温度对微生物的生长具有显著影响,适宜的温度有利于微生物的生长。
2. pH值对微生物生长的影响:实验结果显示,在不同pH值条件下,微生物的生长情况存在差异。
在pH值为6.0和8.0条件下,微生物生长旺盛,菌落形态规则,颜色鲜艳;而在pH值为4.0和10.0条件下,微生物生长缓慢,菌落形态不规整,颜色暗淡。
这表明pH值对微生物的生长具有显著影响,适宜的pH值有利于微生物的生长。
3. 微生物生长周期及影响因素:实验结果显示,微生物的生长周期为24小时。
在适宜的温度和pH值条件下,微生物生长迅速,菌落形态规则;而在不适宜的条件下,微生物生长缓慢,菌落形态不规整。
微生物生化实验报告微生物生化实验报告引言微生物是一类极小的生物体,包括细菌、真菌和病毒等。
微生物在生态系统中扮演着重要的角色,对环境和人类健康具有深远影响。
为了更好地了解微生物的生化特性,我们进行了一系列的实验研究。
实验一:细菌的酸碱耐受性在这个实验中,我们选择了常见的大肠杆菌和乳酸菌作为研究对象,通过调整培养基的酸碱度来观察它们的生长情况。
实验结果显示,大肠杆菌对酸性环境更为耐受,而乳酸菌则更适应碱性环境。
这与它们在人体内的定位有关,大肠杆菌主要寄生在肠道中,而乳酸菌则主要存在于酸性环境中,如乳制品中。
实验二:真菌的产酶能力真菌是一类重要的微生物,它们具有丰富的酶系统。
我们选择了常见的曲霉菌和酵母菌进行实验,通过培养在含有特定底物的琼脂平板上,观察它们的酶活性。
实验结果显示,曲霉菌具有较高的纤维素酶和淀粉酶活性,而酵母菌则表现出较高的蛋白酶活性。
这些酶的产生对于真菌的生存和环境适应具有重要意义。
实验三:病毒的感染机制病毒是一种非常特殊的微生物,它无法独立生存,必须寄生在宿主细胞内。
我们选择了常见的流感病毒和艾滋病病毒进行实验,通过观察它们与宿主细胞的相互作用来了解感染机制。
实验结果显示,流感病毒通过与宿主细胞表面的受体结合,进入细胞内部并复制自身。
而艾滋病病毒则通过感染免疫细胞破坏宿主免疫系统。
这些研究有助于我们更好地了解病毒的传播和防治方法。
实验四:微生物的代谢途径微生物的代谢途径对其生存和环境适应至关重要。
我们选择了常见的厌氧菌和好氧菌进行实验,通过观察它们在不同环境条件下的代谢途径来了解其能量来源。
实验结果显示,厌氧菌主要通过无氧呼吸产生能量,而好氧菌则通过有氧呼吸产生能量。
这种代谢途径的差异使得它们在不同环境中具有不同的竞争优势。
结论通过以上实验,我们对微生物的生化特性有了更深入的了解。
不同微生物在酸碱耐受性、产酶能力、感染机制和代谢途径等方面表现出差异,这与它们在不同环境中的生存和适应有关。
多管发酵法测定水中大肠菌群
一、实验目的
1、学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法。
2、了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性。
二、实验原理
水携带的病原菌的存在与肠道来源的细菌相关,肠道病原微生物进入水体,随水流传播可引起肠道病爆发流行,所以必须对水中病原微生物严格监控。
但要从水体中直接检出病原微生物比较困难,它们在水中的数量很少且培养条件苛刻,分离和鉴别都比较难,即使样品检测结果是阴性也不能保证没有病原微生物的存在。
因此,常用指示微生物作为水体中病原微生物的监测指标。
大肠菌群细菌在人的肠道和粪便中数量很多,受到粪便污染的水容易被检出,且检测方法比较简易。
所以,常以大肠菌群为微生物评价水的卫生质量。
大肠菌群是一群需氧或兼性厌氧的、在37℃培养24~48h能发酵乳糖产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌,包括埃希菌属(Escherichia)、柠檬酸杆菌属(Citrobacter)、肠杆菌属(Enterobacter)、克雷伯菌属(Klebsiella)。
大肠菌群数是指每升水中含有的大肠菌群的近似值,根据水中大肠菌群的数目即可判断水源是否被粪便污染,并推断水源受肠道病原菌污染的可能性。
本实验主要通过多管发酵法检测水中大肠菌群的数量。
多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。
发酵管内装有乳糖胆盐发酵液体培养基,并倒置一杜拉姆发酵小管。
乳糖能起选择作用,因为很多细菌不能发酵乳糖,而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。
1.初发酵试验
水样接种于发酵管内,37℃下培养,24小时内小套管中有气体形成,并且培养基混浊,颜色改变,说明水中存在大肠菌群,为阳性结果。
48小时后仍不产气的为阴性结果。
2.平板分离
初发酵管24至48小时内产酸产气的均需在伊红美蓝琼脂(EMB)培养基平板上划线分离菌落。
3.复发酵试验(本实验只要求做到镜检)
以上大肠菌群阳性菌落,经涂片染色为革兰氏阴性无芽孢杆菌者,通过此试验再进一步证实。
原理与初发酵试验相同,经24小时培养产酸产气的,最后确定为大肠菌群阳性结果。
三、实验材料
1、培养基及试剂:
乳糖胆盐发酵培养基,三倍浓缩乳糖胆盐发酵培养基,伊红美蓝琼脂培养基,灭菌水,革兰氏染液等。
2、仪器或其他用具:
载玻片,盖玻片,锥形瓶(1个),灭菌吸管(1支),灭菌试管(20支),平皿(12个),无菌枪,试管架,酒精灯,接种针,棉塞等。
四、实验步骤
1.水样采取:
本实验水样来自辽宁科技大学花坛和人工湖。
取距水面10~15cm的深层水样,先将瓶口向下浸入水中,然后翻转过来,除去玻璃塞,水即流入瓶中,盛满后,将瓶塞盖好,再从水中取出。
2.培养基的制备:
本实验使用的培养基是商品培养基。
准确配制出120ml的乳糖胆盐发酵液体培养基,10ml 的三倍浓缩乳糖胆盐发酵液体培养基,150ml的伊红美蓝琼脂培养基。
3.灭菌消毒:
取出18支干净的试管,每个试管中倒置一个杜拉姆发酵小管,均加入5ml的乳糖胆盐发酵
液体培养基。
另取2支试管,倒置杜拉姆发酵小管,各加入5ml的乳糖胆盐发酵液体培养基。
将上述的试管,平皿,EMB培养基等实验器具,放入高压蒸汽灭菌锅中,在121℃下,灭菌30min。
4. 初发酵试验
在两个装有已灭菌的5mL三倍浓缩乳糖胆盐发酵培养液的大试管(内有倒管),以无菌操作各加入已充分混匀的水样10mL。
在18支装有已灭菌的5mL乳糖胆盐液体培养液的试管中(内有倒管),以无菌操作加入充分混匀的2种水样的各种稀释梯度1mL,混匀后置于37℃恒温箱内培养48h。
5.平板分离:
上述各发酵管经培养24h后,将产酸、产气及只产酸的发酵管分别接种于伊红美蓝培养基上,置于37℃恒温箱内培养24h,挑选符合下列特征的菌落:伊红美蓝培养基上:深紫黑色,具有金属光泽的菌落;紫黑色,不带或略带金属光泽的菌落;淡紫红色,中心色较深的菌落。
6.革兰氏染色镜检:
取上述特征的群落进行革兰氏染色:
(1)取上述特征的培养物涂片,涂层要薄;
(2)将涂片在火焰上加温固定(不宜过热)
(3)待冷却后滴加结晶紫溶液进行初染,1min后用水洗去;
(4)用碘液冲去残水,并用碘液覆盖进行媒染,1min后用水洗去;
(5)用滤纸吸去玻片上的残水,将玻片倾斜,在白色背景下,用滴管流加95%的乙醇脱色,直止无紫色脱落为止(约20~30s),用水洗去;
(6)滴加番红复染2~3min,水洗,晾干、镜检,呈紫色者为革兰氏阳性菌,呈红色者为阴性菌。
7.证实有大肠菌群存在后,再根据初发酵试验的阳性管(瓶)数查表,即得大肠菌群数。
五、思考题
(1)何谓大肠菌群,它主要包括哪些细菌属?
(2)为什么EMB培养基的琼脂平板能够作为检测大肠菌群的鉴别平(3)为什么要选择大肠菌群作为水源被肠道病原菌污染的指示菌?。