Tris-硼酸电泳缓冲液(5×TBE, RNase free)

PCR 各种缓冲液的配方1. 电泳缓冲液50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液终浓度配制1L溶液成分2mol/L Tris碱 242g1mol/L 冰乙酸 57.1 mlEDTA （pH＝8.0） 18.622g （200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0））水补足1L2. 5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris碱54g445 mmol/L 硼酸盐 27.5g 硼酸10 mmol/L EDTA 20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）水补足1L染料1％溴酚蓝（bromophenol blue）加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。

1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF）溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。

10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide）小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。

用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。

3. 凝胶上样液（gel loading solutions）6×碱性凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.3 N 氢氧化钠 300ul 10N 氢氧化钠6 mmol/L EDTA 120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）18％聚蔗糖（400型） 1.8g0.15％溴甲酚绿 15mg0.25％二甲苯青FF 25mg水 10ml4. 6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15％溴酚蓝 1.5ml 1％溴酚蓝0.15％二甲苯青FF 1.5ml 1％二甲苯青FF5 mmol/L EDTA 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）15％聚蔗糖（400型） 1.5g水补足到10ml5.6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.25％溴酚蓝 2.5ml 1％溴酚蓝0.25％二甲苯青FF 2.5ml 1％二甲苯青FF15％聚蔗糖（400型） 1.5g水补足到10ml6.6×甘油凝胶上样液（4℃贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15％溴酚蓝 1.5ml 1％溴酚蓝0.15％二甲苯青FF 1.5ml 1％二甲苯青FF5 mmol/L EDTA 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）50％甘油3ml水 3.9ml7. 6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15％溴酚蓝 1.5ml 1％溴酚蓝0.15％二甲苯青FF 1.5ml 1％二甲苯青FF5 mmol/L EDTA 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）40％聚蔗糖 4g水补足到10ml8.10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.2％溴酚蓝20mg0.2％二甲苯青FF 20mg200 mmol/L EDTA 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 0.1％SDS 100ul 10％ SDS50％甘油 5ml水补足到10ml。

Tris是什么？有什么作用？Tris-HCl，Tris-EDTA如何配制？Tris：三羟甲基氨基甲烷三羟甲基氨基甲烷（Tris(hydroxymethyl)aminomethane，一般简称为Tris）是一种有机化合物，其分子式为(HOCH2)3CNH2。

Tris被广泛应用于生物化学和分子生物学实验中的缓冲液的制备。

例如，在生物化学实验中常用的TAE和TBE缓冲液（用于核酸的溶解）都需要用到Tris。

由于它含有氨基因此可以与醛发生缩合反应Tris为弱碱，在室温（25℃下，它的pKa为8.1；根据缓冲理论，Tris缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0到9.2之间。

Tris碱的水溶液pH在10.5左右，一般加入盐酸以调节pH值至所需值，即可获得该pH值的缓冲液。

但同时应注意温度对于Tris的pKa的影响。

由于Tris缓冲液为弱碱性溶液，DNA在这样的溶液中会被去质子化，从而提高其溶解性。

人们常常在Tris盐酸缓冲液中加入EDTA制成“TE缓冲液”，TE缓冲液被用于DNA的稳定和储存。

如果将调节pH值的酸溶液换成乙酸，则获得“TAE缓冲液”（Tris/Acetate/EDTA），而换成硼酸则获得“TBE缓冲液”（Tris/Borate/EDTA）。

这两种缓冲液通常用于核酸电泳实验中。

用途：有机合成中间体。

在电泳缓冲液中同甘氨酸构成缓冲体系，稳定电泳过程中的PH值。

在凝胶中也起到稳定PH的作用，只不过是Tris-HCl缓冲体系。

Tris缓冲液不仅被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂，还有许多重要用途。

Tris被用于不同pH条件下的蛋白质晶体生长。

Tris缓冲液的低离子强度特点可用于线虫（C. elegans核纤层蛋白lamin）的中间纤维的形成。

Tris也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一。

此外，Tris 还是制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物的中间物。

Tris也被用作滴定标准物。

1 M Tris-HCl (pH7.4，7.6，8.0)组份浓度 1 M Tris-HCl配制量1L配制方法：1.称量121.1 g Tris置于l L烧杯中。

实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：1 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。

2. 参加约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 按下表量参加浓盐酸调节所需要的pH值。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2)10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA 配制量：1 L配制方法：1. 量取以下溶液，置于1 L烧杯中。

3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。

4. 室温保存。

3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8)组份浓度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。

2. 参加约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。

4. 将溶液定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

4)3 M醋酸钠(pH5.2)组份浓度：3M醋酸钠配制量：100ml配制方法：1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，参加月40ml的去离子水搅拌溶解2.参加冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。

5)PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4 配制量：1 L配制方法：1. 称量以下试剂，置于1 L烧杯中。

1）RNA 提取采用试剂Trizol Reagent (购自invitrogen 公司)2）氯仿；异丙醇；70 % 乙醇；0.1 % DEPC；DEPC 处理的超纯水(2) 聚合酶链式反应（PCR）、核酸电泳试剂1) Tris-硼酸储存（5×TBE）缓冲液：54g Tris 碱，27.5 g 硼酸，20 ml 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)溶于1000 ml 水。

2) 溴化乙啶（10 mg/ml）:100 ml 水中加入1 g 溴化乙啶，磁力搅拌数小时至溶解，避光保存3）点样缓冲液Loading buffer(10×): 0.25 %溴酚蓝，40 %甘油。

4）Ex Taq DNA Polymerase（TaKaRa），琼脂糖DNA 胶回收试剂盒(北京天根生物公司)5）DNA Makers：DL2000，DNA Maker Ⅲ6) 特异引物（上海生工合成）7) 5'RACE 试剂盒购置大连宝生物工程有限公司(3) 目的基因鉴定、培养基及培养液1）液体培养基：胰蛋白胨10.0g，酵母提取物5.0 g，NaCl 10.0g，调pH 至7.0，定容至1L，高压灭菌。

2）固体培养基：加琼脂15g/L，高压灭菌。

3）氨苄50μg/mL；IPTG 25 mg/mL；X-Gal 25 mg/mL 溶于DMF 中4）5×KCM 溶液3.73 g KCl，2.21 g CaCl2，5.08 g MgCl2，定容至100 ml。

总RNA 的提取实验用品的处理：离心管、枪头等塑料制品用0.1 % DEPC于37 ℃浸泡2h，和0.1 %的DEPC 水高压灭菌30min，研体、剪刀、镊子、容量瓶等180℃烘烤6h。

1）称取100 mg小麦叶片，液氮研磨至粉末状，迅速转入含1mL Trizol的1.5 ml离心管中，混匀，室温下静置5 min。

2）加0.2 ml氯仿，剧烈振摇15 sec，20 ℃静置3 min。

各种pH值的Tris缓冲液的配制某一特定pH的0.05mol/L Tris缓冲液的配制：将50ml 0.1mol/L Tris 碱溶液与上表所示相应体积（单位：ml）的0.1mol/L HCl混合，加水将体积调至100ml。

Tris-buffered saline (TBS) (25 mM Tris) (1 liter)1.Weigh out 8 g NaCl, 0.2 g KCl and 3 g Tris base.2.Add 800 ml distilled water to dissolve.3.Add 0.015g phenol red.4.Adjust to pH 7.4 with HCl.5.Make up volume to 1 liter with distilled water.6.Dispense into aliquots and sterilize by autoclaving (20 minutes at15 lb in-2 on liquid cycle).<STORAGE> Store at room temperature.TrisTris中文品名: 三羟甲基氨基甲烷; 氨基丁三醇; 缓血酸胺英文品名: Tris; Tris(Hydroxymethyl)aminomethane英文别名: 2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediolTHAM; Tris base; Trometamol通用CAS : 77-86-1产品纯度: 100%(USP药典级) / 99.9%(实验室技术级)产品级别: USP药典级,符合USP/EP/cGMP对药物赋形剂的要求分子式: NH2C(CH2OH)3分子量: 121.14使用用途: 生物制药,体外诊断,个人护理及化妆品原料等保存温度: 常温密封避光保存TRIS是一种最常用的生物缓冲液，常配成PH值为6.8，7.4，8.0，8.8。

一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。

或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。

1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。

3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。

0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。

或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。

1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。

1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：1 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

值。

4.将溶液定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2)10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量：1 L配制方法：2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。

3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。

4. 室温保存。

3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8)组份浓度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。

4. 将溶液定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

4)3 M 醋酸钠(pH5.2)组份浓度：3M 醋酸钠配制量：100ml配制方法：1.称量40.8g NaAc·3H2O（或者24.6g无水NaAc）置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。

5)PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量：1 L配制方法：2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

北京雷根生物技术有限公司
Tris-硼酸电泳粉剂(5×TBE)
简介：
Tris-硼酸电泳缓冲液简称TBE 。

0.5×TBE 工作液中含有45mM Tris-硼酸、1mM EDTA(pH8.0)。

TBE 是常用的DNA 电泳缓冲液。

Tris-硼酸电泳粉剂(5×TBE)是10倍浓缩的TBE 粉剂，主要由450mM Tris-硼酸，10mM EDTA 等组成。

使用时先溶解于1L 蒸馏水或去离子水即为5×TBE 溶液，工作浓度为0.5×TBE 。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、取Tris-硼酸电泳粉剂(5×TBE)充分溶解于700ml 蒸馏水或去离子水中，补水至1000ml 即为5×TBE 溶液。

2、用蒸馏水或去离子水稀释到0.5×后使用。

注意事项：
1、 10×TBE 储存液不稳定，容易产生沉淀，建议采用5×TBE ，因为5×TBE 储存起来更稳定。

2、 工作液使用0.5×TBE ，亦可以使用0.5～1×TBE 工作液，该工作液缓冲能力相对较强。

3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

编号 名称 NA0039 Storage Tris-硼酸电泳粉剂(5×TBE) 1L RT 使用说明书 1份。

RT PCR的具体步骤rt-pcr的具体步骤rt-pcr实验步骤一．实验器具：1.移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2.5μl2.吸头：1ml、200μl、20μl3.匀浆管：5ml4.ep管：1.5ml、500μl、200μl5.试剂瓶：棕色试剂瓶(广口，摆75%乙醇)6.量筒：100ml7.容量瓶：1000ml8.试管架：5ml、1.5ml、20μl9.铝制饭盒：1-2个10.大瓷缸：1个11.锡泊纸：一卷12.卷纸：2卷13.三角烧瓶：外盖，稍大二．实验器具处置1.塑料制品：(包括枪头、ep管、匀浆管等)先将depc水从容量瓶中倒入瓷缸中，将塑料制品逐个浸泡其中(注意：小枪头要充分浸泡，必要时需要针筒打入depc水)，过夜后取出(注意：depc水很难自然晾干，所以建议先将刚取出的depc物品甩干，枪头装入枪头盒后甩干，ep管和匀浆管装入饭盒后甩干，然后在37度孵箱烘干)。

高压后烤干备用。

如果depc处理过的物品时间已超过一个星期，再次使用前应再次高压。

2.玻璃制品：泡酸过夜，冲洗整洁，先泡1‰d epc过夜，再塞锡纸烤干水泵。

3.匀浆器：(包含剪刀、镊子)先晒干后，超音波消毒即可(不须要泡depc)。

三．试剂酿制1．depc水：吸出1mldepc放在1000ml容量瓶中加双蒸水定容至1000ml，配成1‰depc水，并充分振荡混匀备用。

2．75%乙醇：用无水乙醇+depc水分体式，然后摆-20℃留存(depc水需先高压，高压时特别注意：1.装depc水的瓶子在盖子和瓶之间Though上线头；2.高压时间在40-45分钟，所以水要适度多加一点；3.高压完结后，不要私自换气，必须使压力自然上升，不然水会燃烧)。

3．异丙醇：放进棕色瓶中。

4．乙醚：放进棕色瓶中。

5．琼脂糖四．缓冲液配制1．电泳缓冲液(5×tbe储藏液)：tris54g、硼酸27.5g、0.5medta20mlph8.0、加蒸滚水至1000ml。