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分子生物学实验常用试剂缓冲液的配制方法1.常见试剂配制方法：(1)磷酸盐缓冲液（PBS）的配制方法：-配制PBS需要使用NaCl、KCl、Na2HPO4和KH2PO4等化学品。
-以10倍浓度配制PBS的浓缩溶液，然后稀释为需要的浓度。
-例如，1倍浓度的PBS可以通过将1升的10倍浓度PBS溶液加入9升蒸馏水来制备。
(2) 神经元无血清培养基（Neurobasal Medium）的配制方法：- 配制Neurobasal Medium需要使用神经元培养基基本成分及其他补充物质。
-根据制造商提供的配方，按照相应比例将各种化学品溶解在无菌蒸馏水中。
-配制好的培养基可以用于维持和培养神经元体外培养。
(3) 洗涤缓冲液（Washing Buffer）的配制方法：-配制洗涤缓冲液需要使用磷酸盐缓冲液（PBS）及其他添加剂。
- 将PBS溶液中加入适当浓度的Tween-20或者Tris-HCl来制备洗涤缓冲液。
-根据实验需求，可以调整洗涤缓冲液的成分和浓度。
(4) 乙醇（Ethanol）溶液的配制方法：-配制乙醇溶液常用的浓度有70%和100%。
- 70%的乙醇溶液可以通过将70ml无菌蒸馏水加入30ml无水乙醇中配制得到。
-100%的乙醇溶液可以直接使用无水乙醇。
2.常见缓冲液配制方法：(1) Tris/Tricine缓冲液的配制方法：- 配制Tris/Tricine缓冲液需要使用Tris（三羟甲基氨基甲烷）和Tricine（三甘胺酸）等化学品。
- 根据实验要求，在一定PH范围内，按照不同比例混合Tris和Tricine，溶解于适量的蒸馏水中。
(2) 氯化钾缓冲液（KCl Buffer）的配制方法：- 配制KCl Buffer需要使用KCl和其他添加剂。
-将适量的KCl和其他缓冲液成分溶解在蒸馏水中。
-根据实验要求，调整KCl的浓度和缓冲液的PH值。
(3) Tris/Acetate缓冲液的配制方法：- 配制Tris/Acetate缓冲液需要使用Tris和乙酸等化学品。
常用溶液的配制贮存液配方solution Ingredients MW Dose Note 10M/L NaOH NaOH 40.00 4g 搅拌溶解T·H2O 10ml1M/L Tris·ClTris(HOCH2)3CNH2121.14 12.11g 微波炉加热溶解，冷却后浓盐酸调pH至8.0，加三蒸水定容至100ml浓盐酸约5ml T·H2O 80ml0.1M/L EDTA EDTA（C10H6N2O8）292.25 2.92g 微波炉加热溶解，冷却后10M/L NaOH调pH至8.0，加三蒸水定容至100mlT·H2O 80mlRNA酶A母液10mg/ml RNA酶A 100℃加热15分钟,使混有的DNA酶失活。
冷却后用1.5mleppendorf管分装成小份保存于-20℃10mmol/LTris·Cl(pH7.5),15mmol/L NaCl工作液配方solution Ingredients materials Dose Note溶液Ⅰ50mmol/L Glucose Glucose (C6H12O6•H2O)198.170.99g 搅拌溶解后定容至100ml，高压灭菌4℃保存25mmol/L Tris·Cl 1M/L Tris·Cl 2.5ml10mmol/L EDTA 0.1M/L EDTA 10ml T·H2O 50ml溶液Ⅱ1％SDS SDS 1g 分开常温保存，用时临配。
1ml溶液Ⅱ：1%SDS 980μl+10mol/L NaOH20μlT·H2O 100ml0.2mol/L NaOH溶液Ⅲ5 mol/L KAc CH3COOKMW:98.1460ml 定容至100ml, 并高压灭菌。
溶液终浓度：K+3mol/L,Acˉ5mol/L。
冰醋酸11.5mlT·H2O 28.5mlLB液体培养基(Luria-Bertani) 蛋白胨(Tryptone) 10 g 溶于800ml去离子水中NaOH调pH至7.5，加去离子水至总体积1升,高压下蒸气灭菌20分钟酵母提取物(Yeastextract)5 gNaCl 10 gLB固体培养基LB液体培养基100ml 高压灭菌后成凝胶状，用时微波炉加热至100℃以上溶解，加入5mg/mlAmpcillin 1ml（终浓度为50ug/ml），摇匀后倒入培养皿中，冷却凝固即可涂板琼脂粉 1.2g氨苄青霉素(Ampicillin, Amp)工作液Ampcillin（规格0.48g,80万U）1支5mg/ml贮存液（终浓度为50ug/ml）,-20℃保存备用三蒸水100ml溶菌酶溶液(10mg/ml) 溶菌酶溶液0.1g 分装成1ml/小份，保存于-20℃,每一小份一经使用后便予丢弃10mmol/LTris·Cl(pH8.0)10ml3mol/l NaAc (pH5.2) NaAc·3H2O 40.81g 冰醋酸调pH至5.2，加水定容至100ml，分装后高压灭菌,储存于4℃冰箱三蒸水50mlTE缓冲液10mmo/LTris·Cl，1M/LTris·Cl(pH8.0) 0.5ml 加水定容至50ml，高压灭菌后EP管分装备用1mmol/L EDTA 0.1M/LEDTA(pH8.0) 0.5mlT·H2O 49mlTBE 缓冲液(5×)Tris 54g 定容至1000ml硼酸27.5g，0.5M/LEDTA(pH8.0) 20m l上样缓冲液(6×)0.25% 溴酚蓝溴酚蓝0.25g 定容至100ml40% (w/v)蔗糖水溶液蔗糖40g三蒸水80ml0.7％琼脂糖凝胶琼脂糖粉0.14g 微波炉加热溶解。
实验室常用试剂和缓冲液配方实验室中常用的试剂和缓冲液配方有很多种，下面将介绍一些常用的试剂和缓冲液的配方：一、试剂的配方1. Tris缓冲液：- 3 M Tris-Cl，pH 7.4（准备方法：将121.1 g Tris粉末溶解在800 mL去离子水中，使用HCl调节pH值至7.4，并将溶液体积加至1 L）2.NaCl溶液：-5MNaCl（准备方法：将287.7gNaCl溶解在800mL去离子水中，并将溶液体积加至1L）3.验血试剂：-4%NaOH溶液（准备方法：将40gNaOH溶解在900mL去离子水中，并将溶液体积加至1L）-5%CuSO4溶液（准备方法：将50gCuSO4溶解在900mL去离子水中，并将溶液体积加至1L）-2%K4[Fe(CN)6]溶液（准备方法：将20gK4[Fe(CN)6]溶解在900mL去离子水中，并将溶液体积加至1L）4.PBS缓冲液（磷酸盐缓冲液）：-10×PBS缓冲液（准备方法：将80gNaCl，2gKCl，11.5gNa2HPO4，2gKH2PO4溶解在800mL去离子水中，并将溶液体积加至1L。
pH值可以调节至7.4左右）5. Tris-EDTA缓冲液（TE缓冲液）：- 10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，pH 8.0（准备方法：将12.1 gTris溶解在800 mL去离子水中，然后加入0.37 g EDTA，使用HCl调节pH值至8.0，并将溶液体积加至1 L）二、缓冲液的配方1. Tris-HCl缓冲液：- 50 mM Tris-HCl，100 mM NaCl，1% Triton X-100，pH 7.4（准备方法：将6.05 g Tris，5.8 g NaCl，0.1 g Triton X-100溶解在800mL去离子水中，使用HCl调节pH值至7.4，并将溶液体积加至1 L）2. Tris-Borate缓冲液（TBE缓冲液）：- 89 mM Tris，89 mM boric acid，2 mM EDTA，pH 8.3（准备方法：将10.81 g Tris，5.49 g boric acid，3.72 g EDTA溶解在800 mL去离子水中，使用NaOH或HCl调节pH值至8.3，并将溶液体积加至1 L）3. Tris-Glycine缓冲液：- 25 mM Tris，192 mM glycine，0.1% SDS，pH 8.3（准备方法：将3.03 g Tris，14.35 g glycine溶解在800 mL去离子水中，使用HCl调节pH值至8.3，并将溶液体积加至1 L）4. Tris-Acetate缓冲液（TAE缓冲液）：- 40 mM Tris，20 mM acetic acid，1 mM EDTA，pH 8.3（准备方法：将4.84 g Tris，1.86 g acetic acid，0.37 g EDTA溶解在800 mL去离子水中，使用NaOH或HCl调节pH值至8.3，并将溶液体积加至1 L）5. Phosphate缓冲液：- 100 mM sodium phosphate，pH 7.0（准备方法：根据目标pH值使用磷酸二氢钠和磷酸氢二钠调节溶液pH至7.0，并将溶液体积加至1 L）以上只是一些常用的试剂和缓冲液的配方，并不是全部。
实验室常用技术参数资料一、核酸及蛋白质常用数据1．核苷三磷酸的物理常数2．常用核酸的长度与分子量3．常用核酸蛋白换算数据（1）重量换算1μg=10-6g1pg=10-12g1ng=10-9g 1fg=10-15g（2）分光光度换算：1A260双链DNA=50μg/ml1A260单链DNA=30μg/ml1A260单链RNA=40μg/ml（3）DNA摩尔换算：1μg 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol末端1μg pBR322 DNA=0.36pmol1pmol 1000bp DNA=0.66μg1pmol pBR322=2.8μg1kb双链DNA（钠盐）=6.6×105道尔顿1kb单链DNA（钠盐）=3.3×105道尔顿1kb单链RNA（钠盐）=3.4×105道尔顿（4）蛋白摩尔换算：100pmol分子量100，000蛋白质=10μg100pmol分子量50，000蛋白质=5μg100pmol分子量10，000蛋白质=1μg氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿（5）蛋白质/DNA换算：1kb DNA=333 个氨基酸编码容量=3.7×104MW蛋白质10，000MW蛋白质=270bp DNA30，000MW蛋白质=810bp DNA50，000MW蛋白质=1.35kb100，000MW蛋白质=2.7kb DNA4．常用蛋白质分子量标准参照物5．常用DNA分子量标准参照物续上表二、常用缓冲液1．分子克隆常用缓冲液2．磷酸缓冲液（1）25℃下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制※（2）25℃下0.1mol/L磷酸钠缓冲液的配制※※:用蒸馏水将混合的两种1mol/L贮存液稀释至1000ml，根据Henderson-Hasselbalch方程计算其pH 值：pH=pK’+1g([质子受体]/[质子供体])在此，pK’=6.86(25℃)。
3．电泳缓冲液测序凝胶加样缓冲液98%去离子甲酰胺10mol/L EDTA(pH8.0)0.025%二甲苯青FF0.025%溴酚蓝甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。
各种缓冲液的配制方法缓冲液（Buffer）在生物化学和分子生物学实验中起到了至关重要的作用，它可以维持溶液的稳定性，调节pH值，同时还提供所需的离子环境。
这是一个关于不同类型缓冲液的配制方法的综合指南。
1. Tris缓冲液Tris缓冲液是实验室中最常用的缓冲液之一、以下是Tris缓冲液的配制方法：- 配制0.1 M Tris缓冲液（pH 7.4）：a. 在100 mL去离子水中加入12.11 g Tris（Tris(hydroxymethyl)aminomethane）粉末。
b.用盖住容器的滤纸纸带覆盖容器，并将其放在磁力搅拌器上。
c.用盖住容器的锡纸覆盖容器，加热至溶解。
搅拌以加速溶解过程。
d.继续搅拌，使其冷却至室温。
e.使用0.1MHCl或0.1MNaOH调节pH值至7.4，直到所需的pH值稳定。
f.用去离子水稀释至总体积100mL。
2.PBS缓冲液PBS缓冲液是生物学实验中常用的缓冲液之一、以下是PBS缓冲液的配制方法：-配制10×PBS缓冲液：a.在1L去离子水中加入80gNaCl，2gKCl，14.4gNa2HPO4，2.4gKH2PO4b.使用10MNaOH或10MHCl调节pH值至7.4c.用去离子水稀释至总体积1L。
-配制1×PBS缓冲液：a.取10×PBS缓冲液100mL，用去离子水稀释至总体积1L。
3.TAE缓冲液TAE缓冲液常用于琼脂糖凝胶电泳。
以下是TAE缓冲液的配制方法：-配制50×TAE缓冲液：a. 在1 L去离子水中加入242 g Tris base，57.1 mL 0.5 M EDTA，100 mL冰醋酸。
b.用10MNaOH或10MHCl调节pH值至8.3c.用去离子水稀释至总体积1L。
-配制1×TAE缓冲液：a.取50×TAE缓冲液20mL，用去离子水稀释至总体积1L。
4. Tris-HCl缓冲液Tris-HCl缓冲液常用于DNA或RNA的酶切反应。
分子生物学实验常用试剂配制分子生物学实验常用试剂配制(1) 0.01M PBS缓冲液：一袋粉制PBS缓冲液（中杉有售）加1000ml蒸馏水。
0.01M 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。
(2) 0.01M枸橼酸盐缓冲液：一袋粉制枸橼酸盐缓冲液（中杉有售）加1000ml蒸馏水。
0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠3g，柠檬酸0.4g。
(3)1mol/L的TBS缓冲液（pH8.0）：在800ml水中溶解121gTris碱，用1N的HCl 调至pH8.0,加水至1000ml。
(4) 1‰DEPC水：1mlDEPC加入1000ml新鲜三蒸水中，剧烈震荡20分钟使充分混匀，37o C至少放置2h或过夜，HIRAYAMA HV-50高压灭菌器高温高压30分钟降解DEPC，4℃保存。
(5) 1%琼脂糖凝胶：取琼脂糖0.2g置烧杯中，加入20ml的1×TAE缓冲液，封闭锥形瓶口，放入微波炉内加热，不时摇动，使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液，待琼脂糖全部熔化后取出摇匀，冷却至60℃左右，加入10mg/ml溴化乙锭（EB）1μl，EB的终浓度为0.5μg/ ml，充分混匀。
将温热的凝胶倒入已经放好梳子的凝胶槽中，厚度约为3-5mm，注意不要有气泡，将凝胶放置室温待其自然凝固。
凝固后从胶槽中轻轻取出梳子。
(6)0.5mol/L EDTA缓冲液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O，用10 mmol/L NaOH调至pH8.0，加水至1000ml。
(7) 50×TAE缓冲液：Tris碱242g，17.4mol/L冰乙酸57.1ml，0.5mol/L EDTA (PH8.0)100ml加蒸馏水至1000ml。
一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。
或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。
或称取186.1g的Na2EDTA•2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。
1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH （6.8-8.2），然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
各种缓冲液的配制方法缓冲液是一种用于调节溶液酸碱度（pH值）的溶液，它可以稳定溶液的pH值，满足实验的需要。
不同实验需要使用不同pH值的缓冲液，因此配制方法也会有所不同。
下面将介绍常见的几种缓冲液的配制方法。
1.磷酸盐缓冲液：磷酸盐缓冲液是最常用的一种缓冲液，在生物化学和分子生物学实验中广泛应用。
配制方法：-0.2M磷酸盐酸（pH2.5）：用稀磷酸（H3PO4）溶液调节酸度至所需pH值。
-0.2M磷酸盐盐（pH2.5）：用0.2M磷酸钠（Na2HPO4）溶液调节碱度至所需pH值。
-混合上述两种液体，按体积比例混合即可配制所需pH值的磷酸盐缓冲液。
2.乙酸缓冲液：乙酸缓冲液常用于酶催化反应的研究和生物制剂的稳定。
配制方法：-0.1M乙酸酸（pH3.6）：用浓烧碱（CH3COOH）溶液调节酸度至所需pH值。
-0.1M乙酸盐（pH3.6）：用0.1M乙酸钠（CH3COONa）溶液调节碱度至所需pH值。
-混合上述两种液体，按体积比例混合即可配制所需pH值的乙酸缓冲液。
3.碳酸氢盐缓冲液：碳酸氢盐缓冲液常用于生命科学实验中。
配制方法：-0.1M碳酸酸（pH6.0）：用稀碳酸（H2CO3）溶液调节酸度至所需pH 值。
-0.1M碳酸盐（pH6.0）：用0.1M碳酸氢钠（NaHCO3）溶液调节碱度至所需pH值。
-混合上述两种液体，按体积比例混合即可配制所需pH值的碳酸氢盐缓冲液。
4. Tris缓冲液：Tris缓冲液是一种多用途的缓冲液，在生物化学和分子生物学研究中广泛应用。
配制方法：- 0.1 M Tris酸（pH 8.0）：用三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液调节酸度至所需pH值。
- 0.1 M Tris盐（pH 8.0）：用0.1 M Tris盐溶液调节碱度至所需pH值。
- 混合上述两种液体，按体积比例混合即可配制所需pH值的Tris缓冲液。
配制缓冲液时需要准备所需浓度的酸液和盐液，然后根据所需pH值逐渐调整酸度和碱度至目标值。
实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：1 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
值。
4.将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2)10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量：1 L配制方法：2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。
3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存。
3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8)组份浓度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
4)3 M 醋酸钠(pH5.2)组份浓度：3M 醋酸钠配制量：100ml配制方法：1.称量40.8g NaAc·3H2O（或者24.6g无水NaAc）置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。
5)PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量：1 L配制方法：2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
实验室常用试剂和缓冲液配方PBS（磷酸盐缓冲液）是一种常用的生物化学缓冲液，用于洗涤和稀释生物化学试样。
配方：-NaCl：8g-KCl：0.2g-Na2HPO4：1.42g-KH2PO4：0.24g将上述物质溶解在1升蒸馏水中，调节pH值至7.4、用1M（摩尔浓度）盐酸或1M氢氧化钠进行调节。
2. Luria-Bertani (LB) 培养基配方LB培养基是微生物学研究中常用的培养基，适用于大多数细菌和酵母菌的培养。
配方：- 水解酪蛋白（tryptone）：10 g- 酵母粉（yeast extract）：5 g-NaCl：10g将上述物质溶解在1升蒸馏水中，用1M盐酸或1M氢氧化钠调节pH 至7.0。
可以选择添加洗涤剂Tween-20（0.1%）以提高溶解度。
SSC缓冲液广泛用于核酸杂交实验等生物学研究中。
配方：-NaCl：175.3g- Na3Citrate·2H2O：88.2 g-EDTA：37.2g将上述物质溶解在1升蒸馏水中，调节pH值至7.0-7.2、可以选择添加DEPC（二硫酰二甲酯）处理，增强其功能。
4.甲醛溶液甲醛溶液常用于生物样品固定以及染色实验。
配方：-甲醛：37%-PBS或水将适量的甲醛加入PBS或水中，制备所需浓度的甲醛溶液。
5. β-羟丁酸钠（β-Hydroxybutyrate）溶液β-羟丁酸钠是一种常用的减少剂，用于生物化学实验中。
配方：-β-羟丁酸钠：1M根据需求将适量的β-羟丁酸钠溶解在合适的溶剂中。
这里只是列举了几个常见的试剂和缓冲液配方，实验室试剂和缓冲液种类丰富多样，具体使用取决于研究目的和实验要求。
在进行实验之前，建议仔细阅读相关文献和制造商提供的说明书，并按照正确的比例和步骤配制试剂和缓冲液。
实验室常用技术参数资料一、核酸及蛋白质常用数据1．核苷三磷酸的物理常数2．常用核酸的长度与分子量3．常用核酸蛋白换算数据（1）重量换算1μg=10-6g1pg=10-12g1ng=10-9g 1fg=10-15g（2）分光光度换算：1A260双链DNA=50μg/ml1A260单链DNA=30μg/ml1A260单链RNA=40μg/ml（3）DNA摩尔换算：1μg 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol末端1μg pBR322 DNA=0.36pmol1pmol 1000bp DNA=0.66μg1pmol pBR322=2.8μg1kb双链DNA（钠盐）=6.6×105道尔顿1kb单链DNA（钠盐）=3.3×105道尔顿1kb单链RNA（钠盐）=3.4×105道尔顿（4）蛋白摩尔换算：100pmol分子量100，000蛋白质=10μg100pmol分子量50，000蛋白质=5μg100pmol分子量10，000蛋白质=1μg氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿（5）蛋白质/DNA换算：1kb DNA=333 个氨基酸编码容量=3.7×104MW蛋白质10，000MW蛋白质=270bp DNA30，000MW蛋白质=810bp DNA50，000MW蛋白质=1.35kb100，000MW蛋白质=2.7kb DNA4．常用蛋白质分子量标准参照物5．常用DNA分子量标准参照物续上表二、常用缓冲液1．分子克隆常用缓冲液2．磷酸缓冲液（1）25℃下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制※（2）25℃下0.1mol/L磷酸钠缓冲液的配制※※:用蒸馏水将混合的两种1mol/L贮存液稀释至1000ml，根据Henderson-Hasselbalch方程计算其pH 值：pH=pK’+1g([质子受体]/[质子供体])在此，pK’=6.86(25℃)。
3．电泳缓冲液测序凝胶加样缓冲液98%去离子甲酰胺10mol/L EDTA(pH8.0)0.025%二甲苯青FF0.025%溴酚蓝甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。
不过，一旦略呈黄色，则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与Dowex XG8混合床树脂共同搅拌1小时进行去离子处理，并用Whatma n 1号滤纸过滤2次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存于-70℃。
常用的电泳缓冲液说明：①TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液，出现沉淀后则予以废弃。
以片都以1×TBE作为使用液（即1：5稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电泳。
但0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。
目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1：10稀释的贮存液作为使用液。
进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，故通过缓冲液的电流量通常较大，需要使用1×TBE以提供足够的缓冲容量。
②碱性电泳缓冲液应现用现配。
③Tris-甘氨酸缓冲液用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
2×SDS凝胶加样缓冲液：100mmol/L Tris·HCl(6.8)200mmol/L二硫苏糖醇（DTT）4%SDS（电泳级）0.2%溴酚蓝20%甘油不含DTT的2×SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温，应在临用前取1mol/L贮存液现加于上述缓冲液中。
4．凝胶加样缓冲液使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以确保DNA均匀进入样品孔内；使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。
溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍，而与琼脂糖浓度无关。
以0.5×TBF作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同，而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。
在琼脂糖浓度为0.5%～1.4%的范围内，这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。
选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。
但是，对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料，因为在碱性pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。
5．各种pH值的Tris缓冲液的配制某一特定pH值的0.05mol/L Tris缓冲液的配制：将50ml 0.1mol/L Tris碱溶液与上表所示相应体积（单位：ml）的0.1ml/L HCl混合，加水将体积调至100ml（2）温度对50mmol/L Tris·HCl液pH值的影响（6）常用缓冲液的pKa值a：三羟甲基氨基甲烷；b：N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磷酸；c：3-（N-吗啉代）丙磺酸；d：N，N’-双（2 -乙磺酸）哌嗪；e：2-（N-吗啉代）乙磺酸。
7．温度对常用缓冲液pH的影响三、常用酶的配制1．溶菌酶用水配制成50mg/ml的溶菌酶溶液，分装成小份并保存于-20℃。
每一小份一经使用后便予丢弃。
2．蛋白水解酶类a：链霉蛋白酶是从链球菌（Streptomyces griseus）中分离到的一种丝氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。
b：自消化可消除DNA酶和RNA酶的污染，经自消化的链酶蛋白酶的配制方法如下：把该酶的粉末溶解于10mmol./l Tris·HCl(pH7.5)、10mmol/l NaCl中，配成20mg/ml浓度，于37℃温育1h。
经消化的链霉蛋白酶分装成小份放在密封试管中，保存-20℃。
c：蛋白酶K是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，从林伯氏白色念球菌（Tritirachium album Limber）中纯化得到。
该酶有两个Ca2+结合位点，它们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。
然而，如果从该酶中除去Ca2+，由于出现远程的结构变化，催化活性将丧失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。
所以，蛋白酶K消化过程中通常加入EDTA（以抑制依赖于Mg2+的核酸酶的作用）。
但是，如果要消化对蛋白酶K具有较强耐性的蛋白，如角蛋白一类，则可能需要使用含有1mmol/l Ca2+而不含EDTA的缓冲液。
在消化完毕后、纯化核酸前要加入EGT（pH8.0）至终浓度为2mmol/L,以鳌合Ca2+。
3．无DNA酶的RNA酶将胰RNA酶（RNA酶A）溶于10mmol/l Tris·HCl(pH7.5)、15mmol/l NaCl中，配成10mg/ml的浓度，于100℃加热15min，缓慢冷却至室温，分装成小份保存于-20℃。
四、常用抗生素溶液a：以水为溶剂的抗生素贮存液通过0.22μm滤器过滤除菌。
以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。
所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。
b：镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基（如LB培养基）。
五、常用贮存液的配制1．30%丙烯酰胺溶液【配制方法】将29g丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。
加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。
用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于室温。
【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。
称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。
可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。
一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。
在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。
2．40%丙烯酰胺【配制方法】把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。
继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。
【注意】见上述配制30%丙烯酰胺的说明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。
3．放线菌素D溶液【配制方法】把20mg放线菌素D溶解于4ml 100%乙醇中，1：10稀释贮存液，用100%乙醇作空白对照读取OD44 0值。
放线菌素D（分子量为1255）纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21，900，故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182，放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中，保存于-20℃。
【注意】放线菌素D是致畸剂和致癌剂，配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作，而不能在开放在实验桌面上进行，谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。
药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。
只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度，这类制品便可用于抑制自身引导作用。
4．0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液【配制方法】在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0，用蒸馏水定容1ml，分装成小份保存于-70℃5．10mol/L乙酸酰溶液【配制方法】把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。
6．10%过硫酸铵溶液【配制方法】把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中，该溶液可在4℃保存数周。
7．BCIP溶液【配制方法】把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐（BCIP）溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃8．2×BES缓冲盐溶液【配制方法】用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N，N-双（2-羟乙基）-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0. 027g Na2HPO4，室温下用HCl调节该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成小份，保存于-20℃。
9．1mol/L CaCl2溶液【配制方法】在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl2·6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃。
【注意】制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml，用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，然后骤冷至0℃。
10．2.5mol/L CaCl2溶液【配制方法】在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl2·6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。
11．1mol/L二硫苏糖醇（DTT）溶液【配制方法】用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。
【注意】DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。
