实验三植株磷素的测定钼蓝法(精)

钢铁中磷的测定磷钼蓝吸光光度法公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N]钢铁中磷的测定——磷钼蓝吸光光度法实验报告班级：应121-2姓名：曲红玲学号：3222同组人：王双孙艺指导老师：王美兰老师一、实验目的1、了解钢铁中磷的测定意义。

2、掌握钢铁中磷的测定方法。

3、掌握溶液的定量转移配制，称量等基本操作。

二、实验原理1、磷的测定是钢铁分析的一个必测指标。

磷是典型的非金属元素,它在钢铁及合金中主要以固熔体的磷化铁(Fe2P、Fe3P)形式存在,还有少量的磷酸盐等夹杂物,其来源一般从矿石带入。

磷是钢铁的有害元素,它使钢铁发生冷脆,降低冲击韧性和影响锻接,一般钢材P控制不大于%,高级的合金钢在%以下,在某些特殊钢中,为提高其耐磨性而只允许达%左右,因此,钢铁及合金中磷的测定是一项必不可少的项目。

2、工厂实用分析方法有：滴定法，分光光度法。

分光光度法有钒钼黄和钼蓝法两类。

钒钼黄是磷酸与钒酸、钼酸作用形成磷钒钼黄杂多酸直接测定。

钼蓝法是将磷钼杂多酸还原成钼蓝后进行测定，所用还原剂有氯化亚锡、抗坏血酸、硫酸联胺和亚硫酸盐等。

3、分析方法4、本实验采用磷钼蓝吸光光度法试样用王水溶解，高氯酸冒烟以氧化磷，加钼酸铵使磷转化为磷钼配合离子。

用氟化物掩蔽铁离子，以氯化亚锡还原成钼蓝．分光光度法测定。

主要反应：3Fe3P+41HNO3→9Fe(NO3)3+3H3PO4+14NO↑+16H2OFe3P+13HNO3→3Fe(NO3)3+3H3PO3+4NO↑+5H2O4H3PO3+HClO4→4H3PO4+HClH 3PO4+12H2MoO4→H3(P(MoO10)4)+12 H2OH 3(P(MoO10)4)+8H++4Sn2+→（）+4Sn4++4H2生成的磷钼蓝络合物的蓝色深浅与磷的含量成正比，据此可比色测定磷的含量。

三、仪器与试剂1、实验仪器721分光光度计，分析天平，移液管（10ml，5ml，2ml，1ml），吸耳球，烧杯（100ml 5个，400ml 1个，500ml 1个），50ml容量瓶4个，100ml容量瓶2个，玻璃棒，电炉，量筒（10ml 4个，50ml 1个），秒表，滤纸，洗瓶。

实验报告钢铁中磷的测定——磷钼蓝吸光光度法班级：应091-4姓名：任晓洁学号：200921501428指导老师：王美兰老师一．实验目的：1.通过本实验了解测定钢铁中P的意义。

2.掌握钢铁中P的测定方法。

3.掌握溶液的定量转移配制，称量等基本操作。

二．实验原理：1.磷在钢中以固溶体磷化物存在.有时呈磷酸盐夹杂形式存在。

磷在钢中可以提高钢的抗拉强度和耐大气腐蚀作用，改善钢的切削加工性能；但是，磷在钢中又能降低高温性能和增加脆性，影响钢的塑性和韧性。

一般钢种把磷含量控制在0.05％以下，但易切削钢可达0.4％左右，生铁和铸铁可高达0.5％左右。

2.工厂实用分析方法有：滴定法，分光光度法。

分光光度法有钒钼黄和钼蓝法两类。

钒钼黄是磷酸与钒酸、钼酸作用形成磷钒钼黄杂多酸直接测定。

钼蓝法是将磷钼杂多酸还原成钼蓝后进行测定，所用还原剂有氯化亚锡、抗坏血酸、硫酸联胺和亚硫酸盐等。

3.4.（1）二安替比林甲烷—磷钼酸重量法（2）氯化亚锡还原—磷钼蓝光度法（3）乙酸丁酯萃取光度法5.本实验采用磷钼蓝吸光光度法。

方法要点：试样用王水溶解，高氯酸冒烟以氧化磷，加钼酸铵使磷转化为磷钼配合离子。

用氟化物掩蔽铁离子，以氯化亚锡还原成钼蓝．分光光度法测定。

主要反应：3Fe3P+41HNO3→9Fe(NO3)3+3H3PO4+14NO↑+16H2OFe3P+13HNO3→3Fe(NO3)3+3H3PO3+4NO↑+5H2O4H3PO3+HClO4→4H3PO4+HClH3PO4+12H2MoO4→H3(P(MoO10)4)+12 H2OH3(P(MoO10)4)+8H++4Sn2+→（2Mo2.4MoO3）2.H3PO4+4Sn4++4H2生成的磷钼蓝络合物的蓝色深浅与磷的含量成正比，据此可比色测定磷的含量。

三．实验仪器及试剂1.实验仪器：721分光光光度计，分析天平，移液管（10ml，5ml，2ml，3ml），吸耳球，烧杯（100ml 5个，400ml 1个，500ml 1个）50ml容量瓶4个，100ml 容量瓶1个，玻璃棒，电炉，量筒（10ml 2个，50ml 1个），秒表，滤纸2.实验试剂：(1)王水(盐酸十硝酸=3+1)，(2)高氯酸(浓)，(3)硫酸(浓)，(4)亚硫酸钠溶液(5％)。

植株全氮、全磷的测定测N仪器操作一、测定方法:1、称样前过100目筛,然后将试管洗净,排号,烘干。

2、称样品0.5000g,并做好记录,称K2SO4 4.5g ,CuSO4*5H2O 0.5g ,或者将两种药品按比例混好过筛后,一次性加入 5 g 混合药品。

不论是先加药品还是称样,都必须在其后将两者摇匀,还要求称好的样全部送至试管底部,加了10 ml 硫酸后继续摇匀,在放到机子上去消煮,否则误差较大。

3、消煮:插上电源后按开关---执行---等40 min后420℃时放样---将水开到最大---打开风机和电动风阀(1 h)。

4、消煮后先放到架子上冷却,再将上面的盖子取下冷却至无白雾。

5、硼酸:1 %:50g溶于5000 ml 水,将配好的35ml甲基红试剂和50ml溴甲酚绿加入5000ml硼酸。

甲基红和溴甲酚绿都是称 1 g溶解到1000ml无水乙醇中。

6、NaOH:一瓶默认500g + 1250ml水。

7、0.1mol/L的标准酸:吸取15ml浓硫酸定容到5000ml,即约为0.0558mol/L的硫酸,换算为标准酸约为0.1116mol/L 的标准酸。

8、标准酸的标定:取少许无水碳酸钠于烧杯,在180--200℃下烘4—6小时,取出放干燥瓶冷却至室温,然后称取约0.22 g 于250毫升锥形瓶中,加50毫升水溶解,各加1--2滴甲基红和溴甲酚绿指示剂,用配好的标准酸滴定,在出现红色后加热一些、冷却,反复直至红色不退去为止,记录用量V。

滴定做三个重复还有一个空白。

标准酸浓度计算:C=0.22/(0.05299*V)标定好的标准酸浓度约为0.1115---0.1117mol/L的H+浓度,开机后可以按右上方的∟● 键,输入计算好的标准酸浓度即可。

二、仪器操作:1、开机按钮:按回车键等几分钟,机子自检完成---self-fest-按手型设置键----定到Receiver---回车键,等颜色(中间瓶)与硼酸颜色相同时将机子盖打开。

1概述磷脂是由一分子甘油与两分子脂肪酸，一分子磷酸和一个氨基醇残基所组成的复杂的含磷类脂化合物。

它能在含水很少的油脂中溶解。

磷脂不稳定比油脂更易氧化，其氧化产物会加速油脂氧化速度和程度。

高温下磷脂会产生黑色絮状沉淀，同时磷脂是一种乳化剂，使油脂易产生包络空气而产生泡沫，在加工过程中产生溢锅现象，磷脂的主要成分脑磷脂、卵磷脂，既具有油溶性又具有亲水性。

因此，检测毛油和成品油中的磷脂含量，对于掌握生产操作和保证油脂质量是不可缺少的。

2检测方法①280℃加热试验法（见第十二节）②浊度仪测磷脂：（1）通电自检。

（2）精炼厂各工序出来的油品，先摇匀，然后按如下表称量油样于干净比色皿中。

表33工段名称转换公式（PPM）样品重量指标控制（PPM）脱臭P=（1.72×NTU）-0.528 5.01g<5脱色P=（1.27×NTU）-0.225 5.01g<10中和油P=（8.26×NTU）-4.49 1.002g<10四级豆油P=（5.89×NTU）+316.40.198g<200a、加丙酮至刻度线，上盖。

b、摇匀，滴一滴硅硐油于比色皿外表面，用擦镜纸擦匀。

c、装入浊度仪，按ENTER键，稳定5min后，读取结果。

d、计算出油品实际浊度，NTU=NTU1-NTU0，脱色，脱臭浊度按公式计算，D001查表（NTU0为丙酮的空白浊度）。

e、用丙酮清洗比色皿。

③钼蓝比色法:(1)实验原理：将含磷脂的试样加氧化锌一起灼烧，使有机磷转变为无机磷，以磷酸盐的形式留在灰分中，在将灰分加酸溶解，使磷酸根离子与钼酸钠作用生成磷钼酸钠，遇硫酸联氨被还原成蓝色的络合物——钼蓝。

含磷脂的试样＋ZnO→Zn3(PO4)2+CO2+NO2+H2OZn3(PO4)2＋HCl→ZnCl＋H3PO4H3PO4+Na2MoO4+H2SO4→ (Na3PO4*12MoO3)+ Na2SO4+H2SO4+H2ONa3PO4*12MoO3→(MoO2*4MoO3)*H3PO4*4H2O（2）仪器和用具：瓷坩锅或石英坩锅、紫外分光光度计、移液管（5 ml、10ml）、电炉高温炉、漏斗、容量瓶：100,500,1000ml、表面皿、烧杯、量筒、恒温水浴锅、坩锅、试剂瓶等（3）试剂：a、 50%氢氧化钾溶液/盐酸、硫酸、氧化锌、滤纸、0.015%硫酸联氨溶液；b、 2.5%钼酸钠稀硫酸溶液：量取140ml硫酸注入300ml水中,摇匀,冷却至室温，加入12.5g钼酸钠,溶解后加水至500ml,摇匀,静置24小时备用。

植物体内全氮、磷、钾的测定一、实验原理作物体中的氮、磷、钾通过硫酸和H2O2消化，使有机氮化物转化成铵态氮，各种形态磷化物转化成磷酸，N、P、K均转变成可测的离子态（氮转化为NH4+，磷转化为H3PO4，钾为K+）。

然后采用相应的方法分别测定。

磷的测定原理（钒钼黄比色法）：在酸性条件下，溶液中的磷酸根与偏钒酸盐和钼酸盐作用形成黄色的钒钼酸盐。

黄色深浅与溶液中磷浓度呈正比。

此法要求酸度0.04—1.6N（以0.5—1.0N最好）；测磷浓度范围0—20mg/kg，比色波长460—490nm，磷浓度低时选用较短的波长，反之可选较长的波长。

钾的测定原理（火焰光度法）：含钾溶液雾化后与可燃气体（如：汽化的汽油等）混合燃烧，其中的钾离子（基态）接受能量后，外层电子发生能级跃迁，呈激发态，由激发态变成基态过程中发射出特定波长的光线（称特征谱线）。

单色器或滤光片将其分离出来，由光电池或光电管将特征谱线具有的光能转变为电流。

用检流计测出光电流的强度。

光电流大小与溶液中钾的浓度呈正比，通过与标准溶液光电流强度的比较求出待测液中钾的浓度。

二、仪器与试剂仪器：分析天平（0.0001）、分光光度计、容量瓶（50ml）移液管（5、10、20ml）测P、K试剂：1．钒钼酸试剂：25.0克钼酸铵〔（NH4）2Mo7O2•4H2O〕溶于400ml水中，另取1.25克偏钒酸铵（NH4VO3）溶于300ml沸水中，冷却后加入250ml浓HNO3，冷却后，将钼酸铵溶液慢慢地混入偏钒酸铵溶液中，边混边搅拌，用水稀释至1升。

2．2，4—二硝基酚指示剂：0.25克2，4—二硝基酚溶于100ml乙醇中。

3．磷标准液：准确称取KH2PO4（1100C烘两小时）2.1968g溶于水，定容至1000ml，此为含磷500mg/L的磷标准液。

取上液准确稀释10倍得到磷为50 mg/L标准液，用于制作标准曲线。

三、测定步骤植物样品的消化：称取磨细干样品0.1—0.2克(精确到0.0001克)放入100毫升消煮管内,加浓H2SO45毫升,使样品和浓H2SO4混匀，放入消化炉上加热，文火微沸5分钟，取出消煮管，冷却，加30%H2O25滴，温度升至200度再煮，30分钟后取下冷却再加30% H2O25滴，温度升至300度继续消煮（不能超过320度），至消化液清亮透明为止。

2011年第卷第期141基金项目：安徽科技学院自然科学课题资助项目（ZRC2007156）。

[收稿日期]2010-07-05[作者简介]桑宏庆（1971-），男，硕士，副教授，主要从事食品分析与检验教学和研究。

摘要：将氯化亚锡与亚硫酸钠混合溶液作为磷钼蓝分光光度法中的还原剂，分别测定样品中的总磷和无机磷，从而得到样品中有机磷的含量。

该方法的最大吸收波长为740nm ，磷在0～30μg 范围内符合比耳定律，标准曲线的回归方程为y =0.1972x -0.0234，相关系数R 2=0.9955，摩尔吸收系数为1.53×105L ·mol -1·cm -1，相对标准偏差为1.85%～4.11%，回收率为96.16%～103.06%。

关键词：分光光度法；磷钼蓝；氯化亚锡；亚硫酸钠；有机磷中图分类号：O657.3文献标识码：Bdoi ：10.3969/j.issn.1007-7871.2011.01.007磷钼蓝分光光度法测定果蔬中有机磷桑宏庆，于天宇，安乐（安徽科技学院，安徽凤阳233100）果蔬是饮料生产的重要原料。

在果蔬生产中，有机磷农药残留已成为一个非常严重的问题。

有机磷等农药在我国农业上的应用占据着重要地位，目前，我国使用的有机磷农药包括杀虫剂、除草剂和杀菌剂等。

种类有敌敌畏、乐果、氧乐果、对硫磷、甲基对硫磷等。

中国年生产约40万吨农药，其中有机磷杀虫剂占农药总量的70％[1，2]。

有机磷农药残留检测技术可分为化学检测、生化检测和生物检测三大类，目前这三类中研究较多的有仪器分析法、酶抑制法、生物传感器法、免疫分析法、活体检测法等[3]。

食品中有机磷的测定，一般需要特定的仪器设备，测定方法也较繁琐，如气相色谱法、液相色谱分离、电感耦合等离子体质谱法。

目前常规检验指标中测定的都是总磷，并不能确定其中有机磷的含量[4]。

磷钼蓝分光光度法测定磷含量因具备准确、快速、简便的优点已被应用于磷化工工业及其他行业中磷的分析测定[5，6]。

钼蓝比色法测定磷的原理
钼蓝比色法测定磷的原理：
①方法基于磷酸根离子与钼酸盐在酸性条件下反应生成黄色的杂多酸随后被还原为蓝色的钼蓝络合物；
②反应体系中加入抗坏血酸或者硫代硫酸钠作为还原剂将生成的杂多酸还原为钼蓝该过程迅速且完全；
③形成的钼蓝在特定波长下具有最大吸收峰通常为660至800纳米范围内吸光度与磷浓度呈线性关系；
④样品处理时需要将待测物中各种形态的磷转化为可检测的形式例如有机磷化合物需经水解矿化；
⑤样品溶液与试剂混合后需放置一段时间使反应充分进行达到平衡状态此时测定吸光度最为准确；
⑥使用分光光度计或者比色计在选定波长下测量溶液吸光度值与空白对照比较扣除背景干扰影响；
⑦通过绘制标准曲线即已知浓度磷溶液的吸光度值与浓度关系图可以快速查出未知样品中磷含量；
⑧标准曲线制作时需配制一系列浓度梯度的磷酸盐溶液按照同样步骤处理后测定并绘制成图；
⑨实验过程中需严格控制条件如pH值温度反应时间等确保每次测量条件一致提高结果重现性；
⑩干扰因素如其他还原性物质重金属离子等需预先分离排除以免影响钼蓝生成干扰测定结果；
⑪对于复杂基质样品预处理尤为重要常用方法有过滤离心萃取等手段去除杂质浓缩目标分析物；
⑫最后根据测得吸光度值查阅标准曲线计算得出样品中磷的实际浓度并根据需要换算为其他表达形式。

磷钼蓝⽐⾊法测定植物组织中磷的含量检测原理在⼀定的酸度和钼酸铵浓度下，溶液中的磷与钼酸铵作⽤⽣成黄⾊的磷钼酸，其反应如下：(NH4)2MoO4+2HCl→H2MoO4+2NH4ClH3PO4+12H2MoO4→H3［P(Mo3O10)4］+12H2O⽣成的磷钼酸，在⼀定量的氯化亚锡作⽤下，使部分钼(六价钼)被还原，形成蓝⾊的复杂化合物—磷钼蓝。

在⼀定含磷浓度范围内，溶液蓝⾊的深浅与磷含量成正⽐。

根据蓝⾊的深浅与标准⾊阶相⽐较，即可求出磷的含量。

测定步骤制备标准⾊阶和供试液中磷含量的测定，可同时在⽐⾊盘中，按下表顺序进⾏。

磷测定步骤操作步骤⽤量单位标准⾊阶浓度(mg/L)供试液⽤量（滴）0.5124812制备显⾊⽤准系列取混合标准液浓度2mg/L滴124000416mg/L滴000123滴3203211．加2.1%钼酸铵盐酸液滴11111112．搅匀由低⾄⾼浓度逐⽳搅匀3．加0.1%氯化亚锡溶液滴11111114．搅匀由低⾄⾼浓度逐⽳搅匀5．⽐⾊读数5～15分钟内与标准⾊阶⽐较记下读数6．计算结果⽆机磷(mg/L)=读数*稀释倍数注意事项0.1%氯化亚锡在临⽤前由2%氯化亚锡⽢油贮备液稀释制备当天有效，每次少配。

3—2.5植物组织中钾的测定(四苯硼钠⽐浊法)溶液中的钾离⼦与四苯硼钠Na［B(C6H5)4］作⽤，⽣成难溶的四苯硼钾⽩⾊沉淀，使溶液呈现浑浊、其反应如下：K++Na[B(C6H5)4]→K[B(C6H5)4]↓+Na+在⼀定含钾浓度范围内，其混浊度与钾含量成正⽐，根据混浊程度与标准钾的浊度相⽐较，即可求出钾的含量。

测定步骤制备标准⽐浊系列与供试液中钾的测定，可同时在⼩试管(19×70毫⽶)中，按下表顺序进⾏。

有效钾测定步骤操作步骤⽤量单位标准浊度系列浓度(mg/L)供试液⽤量（滴）510204060801．制备⽐浊⽤标准系列取混合标准液浓度20mg/L滴2480004160mg/L滴000234加蒸馏⽔滴6406542．加3％EDTA碱性溶液滴1111111 3．加37％甲醛滴1111111 4．搅匀逐管搅匀5．加2％四苯硼钠溶液滴22222226．搅匀逐管搅匀7．⽐浊读数5～15分钟内与标准浊度系列⽐浊8．计算结果有效钾(mg/L)=读数值*稀释倍数注意事项试液中产⽣⼲扰作⽤的离⼦，主要有铵离⼦及其它⼀些三价、⼆价⾦属离⼦(如钙、镁、铁、铝等)须加⼊EDTA⼆钠盐及甲醛来掩蔽，以消除⼲扰。

磷钼蓝分光光度法测定无机磷的含量磷是一种常见的无机元素，广泛存在于自然界中的土壤、水体和生物体中。

磷在农业生产和环境科学中具有重要的意义，因此准确测定无机磷的含量对于农业生产和环境研究都具有重要意义。

磷钼蓝分光光度法是一种常用的测定无机磷含量的方法，本文将对其原理和应用进行详细介绍。

磷钼蓝分光光度法是基于磷酸与钼酸反应生成磷钼蓝络合物的原理。

在酸性条件下，磷酸与钼酸在存在还原剂的作用下发生反应生成磷钼蓝络合物，该络合物在可见光区域有特征性的吸收峰，通过测量其吸光度可以间接测定磷的含量。

具体实验操作如下：首先，将待测样品溶解在酸性介质中，然后加入还原剂（一般为亚硫酸盐），使钼酸逐渐还原为蓝色的磷钼酸酸化物。

接下来，使用紫外可见分光光度计，在特定波长下测量溶液的吸光度，并与标准曲线进行比对，从而确定样品中磷的含量。

磷钼蓝分光光度法具有以下优点：首先，该方法具有灵敏度高、准确度高的特点，可以测定较低浓度的磷。

其次，该方法操作简便，分析速度快，特别适合于大批量样品的测定。

此外，该方法不受其他物质的干扰，具有较好的选择性。

然而，磷钼蓝分光光度法也存在一些局限性：首先，该方法只能测定无机磷的含量，对于有机磷的测定不适用。

其次，该方法在高浓度下易出现吸光度饱和现象，因此需要进行合适的稀释。

此外，该方法对于样品的前处理要求较高，需要去除样品中的有机物和其他干扰物质。

磷钼蓝分光光度法在农业生产和环境科学中具有广泛的应用。

在农业生产中，磷是植物生长和发育的重要营养元素，准确测定土壤和肥料中的磷含量对于科学施肥和提高农作物产量至关重要。

在环境科学中，磷是水体富营养化的主要原因之一，准确测定水体中的磷含量可以评估水体的富营养化程度，为环境保护和水资源管理提供科学依据。

磷钼蓝分光光度法是一种常用的测定无机磷含量的方法，具有灵敏度高、准确度高、操作简便等优点。

该方法在农业生产和环境科学中具有广泛的应用前景，对于科学施肥和环境保护具有重要意义。

钼蓝法测磷的方法
钼蓝法是一种常用于测定磷含量的方法。

下面是钼蓝法测磷的步骤：
1. 取适量待测样品并进行预处理。

如果样品中的磷为无机磷，可以进行直接测定；如果样品中的磷为有机磷，则需要将有机磷转化为无机磷，通常采用酸化和氧化等方法进行转化。

2. 将处理后的样品加入酸钼混合液中，酸钼混合液可以通过将酒石酸钠、醋酸钠和硫酸混合而成。

3. 在加入样品后，通常需要加热样品溶液，使其达到适当的温度。

加热可以促进反应的进行。

4. 在反应完成后，可以观察到溶液变为深蓝色，这是由于钼蓝络合物的形成。

5. 使用分光光度计测定溶液的吸光度。

吸光度与磷的浓度成正比。

6. 根据标准曲线或计算公式，计算出样品中磷的浓度。

需要注意的是，钼蓝法可以测定多种样品中的磷含量，但在测定之前，需要根据不同样品的特点进行预处理和适当的改进方法。

此外，钼蓝法有一些局限性，例如在溶液中存在其他干扰物质时可能会影响测定结果。

总的来说，钼蓝法是一种较为常用和简便的方法，可以用于测定不同样品中的磷含量。