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QuEChERS-高效液相色谱串联质谱法测定花生中的烯草酮
作者：董榕贵 陈朝欢 马凯
来源：《食品安全导刊·下旬刊》2019年第02期
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摘 要：建立一种高效液相色谱串联质谱法测定花生中烯草酮，样品采用QuEChERS前处理，C18色谱柱分离，多反映监测（MRM）正离子模式扫描，外标法定量，在1～500ng/mL范围内，相关系数为0.9997，添加浓度在10、20、100μg/kg范围内时，回收率在90.2%～106.2%，相对标准偏差RSD在3.7%～6.2%。
关键词：QuEChERS;烯草酮;除草剂;高效液相色谱串联质谱;花生
烯草酮（Clethodim）是美国Chevron化学公司开发的一种除草剂，做为茎叶除草剂，有优良的选择性，对禾本科杂草有很强的杀伤作用，对双子叶作物安全[1]，适用于多种阔叶植物，如花生、大豆等。烯草酮对眼睛和皮肤有轻微刺激性，有报道称烯草酮抑制乙酰辅酶A羧化酶的活性[2]。
花生是我国重要的粮油和经济作物之一，我国的花生和花生油总产量在世界上遥遥领先，为花生出口大国。因此建立一种高通量、快速检测花生中烯草酮的方法有重要的现实意义。
目前烯草酮的检测方法有国家标准GB 23200.9-2016[3]、GB/T 20770-2008[4]，行业标准SN/T 2325-2009[5]，但是以上标准前处理过程繁琐，试剂消耗量大，样品量较大的时候可操作性不强，本研究对花生中烯草酮的检测前处理方法進行优化，通过QuEChERS（quick，easy，cheap，effective，rugged，safe）前处理、净化，结合液相色谱-串联质谱仪，建立一种花生中烯草酮的快速测定方法。该方法操作简便、快捷，科学可靠，净化效果好，适用于花生中烯草酮留量的测定。
1 材料和方法
液相色谱-串联质谱法快速测定水生动物药材中硝基呋喃类代谢物残留量
发布时间：2021-08-17T08:28:29.380Z 来源：《科技新时代》2021年5期 作者： 张朝云[导读] 随着我国中药现代化项目的实施，中药材的安全性越来越受到关注。
养生堂药业有限公司 570216
摘 要：建立水生动物药材样品中4 种硝基呋喃类代谢物残留快速检测的高效液相色谱-串联质谱法。方法:硝基呋喃类代谢物经过二硝基苯甲醛衍生化（超声波辅助），用乙酸乙酯提取，经液相色谱分离，串联四极杆质谱多反应监测(MRM) 模式检测，内标法定量。结果: 4种硝基呋喃类代谢物线性范围为0.0~20.0 ng/mL,相关系数均大于0.99，线性范围良好，方法检出限为0.5μg/kg，在不同质量浓度的添加水平下，4种代谢物的平均回收率在94.3%~115.3%之间，相对标准偏差<10%。试验对比了快速衍生和恒温振荡衍生的效果，两种方法所测得的含量偏差<10%，本方法相较于恒温振荡衍生法更为简便、快速，显著缩短样品前处理时间，且灵敏度和准确度较高，适合对水生动物药材中硝基呋喃类代谢物残留量的检测。
关键词：高效液相色谱-串联质谱法（LC-MS-MS）；超声辅助衍生；水生动物药材；硝基呋喃类代谢物。
引言
随着我国中药现代化项目的实施，中药材的安全性越来越受到关注。硝基呋喃类药物作为广谱抗菌药，曾在养殖业中被广泛应用于预防和治疗由沙门氏菌和埃希氏菌引起的胃肠道疾病。但后来的研究发现，硝基呋喃类药物及其代谢物具有遗传毒性和致癌性，我国农业部于2002年颁布禁止使用硝基呋喃类抗生素的禁令。但在实际生产实践中，该类药物以抗菌效果好、抗菌谱宽、价格低等特点，使得该类药物在畜禽养殖业和水产养殖业中仍然存在违法使用的可能性，给人类健康造成威胁。硝基呋喃类药物进入动物体内后迅速代谢，无法直接检测动物组织中的原型药物，药物代谢后形成相应的代谢产物，分别为AMOZ、AOZ、SEM、AHD，代谢产物与动物机体蛋白质紧密结合形成稳定的化合物，因此，常以检测其代谢物作为残留标志物。
糖化血红蛋白液相色谱串联质谱ifcc法
糖化血红蛋白（HbA1c）是一种反映血糖控制情况的重要指标。血糖长期高于正常水平时，血红蛋白分子将与葡萄糖发生共价连接，形成糖化血红蛋白。因此，测量血中糖化血红蛋白的含量可以反映一个人近3个月的血糖平均水平。随着糖尿病的流行率不断增加，HbA1c的测量也变得越来越重要。目前，常用的测定方法有高效液相色谱和质谱联用法(IFCC法)。
IFCC法是测定糖化血红蛋白的国际标准方法之一，该方法结合了液相色谱和质谱两种技术，能够更精确地测定HbA1c的含量，对于评估糖尿病患者的血糖控制状况具有重要的临床意义。本文将重点介绍糖化血红蛋白液相色谱串联质谱IFCC法的原理、操作流程、分析结果和临床应用。
一、糖化血红蛋白液相色谱串联质谱IFCC法的原理
IFCC法主要包括三个步骤：血红蛋白的提取、酶解和检测。首先是血样的预处理，血液中的红细胞被破坏，释放出血红蛋白。其次是对血红蛋白进行酶解，将糖化血红蛋白中的多肽链切割成小肽链，使其更容易与色谱柱分离。最后是利用液相色谱串联质谱技术对样品进行分离和检测，根据糖化血红蛋白与非糖化血红蛋白的不同特性进行定量测定。
二、糖化血红蛋白液相色谱串联质谱IFCC法的操作流程
1、血样处理：将患者采集的静脉全血标本置于抗凝管中，密封，轻轻颠倒数次混匀。在4°C下离心10min，取上清离心液，转移到新管中，并储存于-80°C以下。
2、血红蛋白的提取：取充分混匀的血红蛋白样本，用甲醇进行沉淀后离心，弃上清，将样品再次溶解，并再次离心，取上清液备用。
3、酶解：用特定酶对血红蛋白样本进行酶解，将多肽链切割成小肽链。
4、色谱分离和检测：利用液相色谱串联质谱技术对样品进行分离和检测，根据糖化血红蛋白与非糖化血红蛋白的不同特性进行定量测定。
三、糖化血红蛋白液相色谱串联质谱IFCC法的分析结果 IFCC法测得的糖化血红蛋白含量以百分比（%）表示，正常人群的糖化血红蛋白含量在4%~6%之间，糖尿病患者的糖化血红蛋白含量明显高于正常水平。在临床应用中，通过测定糖化血红蛋白的含量，可以评估一个人在过去3个月内的血糖控制情况，指导医生调整治疗方案和患者控制饮食、运动等。
40 | 陇科学股份有限公司)；甲酸、乙酸铵(HPLC 级，美国Fluka公司)；无水硫酸钠(分析纯，西陇科学股份有限公司)；十八烷基硅烷(C18)(上海安谱实验科技股份有限公司)；Na2EDTA·2H2O(分析纯，广东光华科技股份有限公司)；磷酸氢二钠、一水合柠檬酸(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；实验室用水为一级水(18.2 MΩ·cm)。2 实验方法2.1 溶液配制标准储备液：对于固体标，分别称取相当于标准品10 mg (精确至0.01mg)置于10.0mL容量瓶中，用乙腈溶解后定容至刻度，配制为浓度为1000mg/L的标准储备液，-18℃避光保存。标准工作溶液：准确吸取适量标准储备液，用乙腈逐级稀释配制成系列标准工作溶液，现用现配。基质空白标准工作溶液：准确吸取适量标准储备液加入6份空白样品，同2.2.2处理配制成系列基质空白标准溶液，现用现配。Na2EDTA-Mcilvaine 缓冲溶液(0.1 mol/L):准确称取37.2 g Na２EDTA·2H2O、10.9g磷酸氢二钠和12.9g柠檬酸于烧杯内，加入一级水约900mL，搅拌使其溶解，使用1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至4.0，定容至1000mL容量瓶，摇匀即可。酸化乙腈(含1%甲酸的乙腈溶液，V/V)：准确吸取1mL甲酸于100mL容量瓶中，用乙腈定容，混合均匀。2.2 样品前处理称取5.0g(精确至0.1 g)样品于50mL具塞塑料离心管中，加入100μL 50μg/L内标溶液(MG-D5和LMG-D6)，加入2mL 0 引言近年来，水产品的消费呈逐年递增趋势[1]，三苯甲烷类染料、氯霉素类、磺胺类、氟喹诺酮类和四环素类等是目前水产品养殖环节常用的病虫害防治药物。按照我国相关食品安全标准，三苯甲烷类染料、氯霉素类由于毒性较强目前已经禁止在水产品养殖等环节使用。按照《GB 31650—2019食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》，磺胺类、氟喹诺酮类、四环素类为限制使用药物[2］。本研究针对水产品中重点监控的兽药残留种类，采用液相色谱－串联质谱检测技术结合分散固相萃取方法实现了5类41种渔用药物残留的同时前处理并检测，方法简单快速，为水产品药物残留的有效监控提供了快捷的方法。1 实验部分1.1 材料与方法1.1.1 仪器与试剂Agilent 6470三重串联四极杆液相色谱/质谱联用仪(带有鞘气装置的电喷雾离子源)(美国Agilent公司)；IKA-T18型均质器(德国IKA公司)；BUCHI R-3型旋转蒸发器(瑞士BUCHI公司)；MS 204S 分析天平(梅特勒－托利多仪器(上海)有限公司)；JJ1000型常量天平(常熟双杰电子有限公司)；TGL-16M型高速冷冻离心机(湖南湘仪)；ELGA-Micrae+Purelab 纯化水系统(英国ELGA公司)。41种药物的标准品及孔雀石绿苦味酸盐-D5(MG-D5，纯度98.0%)无色(隐性)孔雀石绿-D6标准品(LMG-D6，纯度96.4%)，购自德国Dr. Ehrenstorfer公司。乙腈和正己烷(HPLC级，德国Merk公司)；甲醇(HPLC级，西液相色谱-串联质谱法 同时检测水产品中41种兽药残留梁任佳 李学劲 梁光纤 王华 蒙丽琼* (中国检验认证集团广西有限公司，广西 北海 536000)摘要：目的建立了同时测定水产品中磺胺类、氟喹诺酮类、四环素类、氯霉素类和三苯甲烷类5 类共41 种兽药药物残留的高效液相色谱-串联质谱分析方法。方法样品经Na2EDTA-Mcllvaine 缓冲溶液(pH=4)和1%甲酸乙腈提取，无水硫酸钠脱水，C18吸附剂分散固相萃取净化，乙腈饱和的正己烷进一步除脂。采用Zorbax Eclipse Plus C18色谱柱，以乙腈和10mmol/L乙酸铵(含0.1%甲酸) 水溶液为流动相梯度洗脱分离，使用电喷雾离子(ESI)源，在多反应监测(MRM)扫描模式，正负离子扫描方式下进行定性和定量分析。其中2种兽药采用内标法定量，其余39种采用外标法定量。结果 4种三苯甲烷类染料线性范围为0.5～10.0ng/mL，检出限均为0.2μg/kg，回收率为76.0%～115.0%；19 种磺胺类化合物、11 种氟喹诺酮类化合物、3种氯霉素类和4 种四环素类化合物线性范围的线性范围为5.00～100.0ng/mL，19 种磺胺类化合物检出限为0.1～2.0μg/kg，回收率为64.0%～138.2%，11种氟喹诺酮类化合物检出限为0.1～2.0μg/kg，回收率为66.1%～128.7%；3种氯霉素类化合物检出限为0.1～0.3μg/kg，回收率为73.4%～126.7%，4种四环素类化合物检出限为5.0～10.0μg/kg，回收率为80.1%～124.8%，相对标准偏差(RSD)在0.87%～20.09 %之间。结论该方法操作简便，成本低，环保，可用于水产品中5 类常见兽药药物残留的快速测定。关键词：水产品；兽药多残留；分散固相萃取；液相色谱-串联质谱
