胶体金法和胶体金免疫层析法的区别

食品检测FOOD INSPECTION食品安全问题一直是国家和社会关注的重点问题，因此，相关部门一定要高度重视食品安全检测，并注重新技术的引入，比如胶体金免疫层析技术。

胶体金免疫层析技术可以有效发挥食品检测的作用，更好地保障食品安全，提高人们的生活质量，促进社会的稳定发展。

一、胶体金及免疫层析技术的含义1.胶体金技术。

胶体金技术是指氯金酸在某种环境下的一种变化反应而形成的胶体溶液。

其反应过程首先要用的是还原剂，通常有白磷和柠檬酸钠等，在其作用下将氯金酸按相关要求聚合成固定大小的金颗粒，然后再由静电作用将其凝聚成稳定的胶体溶液。

胶体状态下的金颗粒具有高电子密度的特性，其密度一般能达到107个/mm2，呈圆形的斑点，颜色一般为粉红色，其大小肉眼刚好可见，在检测中常用作一种标记物，对实验结果的影响十分重大。

2.免疫层析技术。

免疫层析技术是一种免疫分析技术，主要是根据抗原和抗体的反应来进行检测。

通常包括两大类，一类是非竞争性免疫层析，一类是竞争性免疫层析。

非竞争性免疫层析技术主要针对一些大分子蛋白质的检测。

首先，将采用胶体金标记后的样品与等待检测抗原中的特异性抗体进行结合，这两类物质结合后会出现沉淀现象，此时需要注意将其沉积物放到结合区域中。

其次，将待检测的样品材料放到样品区位置，再利用毛细管将样品与结合区进行完全融合，其中，带有胶体金标记的样品材料会由于受到张力的作用而不断地向前移动。

此时，样品中已经存在的抗原物质便会自动与带有胶体金标记的样品相互结合，形成一种结合体物质。

紧接着，样品溶液会进行固相化，并在通过固相化后的第一层防线时将含有结合体物质抗体材料进行捕获，然后形成新的结合体复合物材料。

那些没有结合体材料的物质不会被捕获，它们会继续向前移动，然后那些结合体在通过下一道防线时会与另一种抗体结合，形成第三种结合体复合材料。

竞争性免疫层析技术主要针对一些单一抗原的小分子抗原适用，比如兽药残留的检测等。

胶体金免疫层析技术原理胶体金免疫层析技术是一种基于胶体金颗粒的分析方法，常用于生物医学领域的分子检测和诊断。

该技术的原理是利用胶体金颗粒与特定抗原或抗体的高度特异性结合能力，通过可视化或仪器测量的方式实现目标分子的定量或定性分析。

胶体金是一种具有特殊光学性质的纳米材料，其颗粒大小一般在10-100纳米之间。

这种材料具有高度的稳定性和生物相容性，并且在可见光范围内具有强烈的吸收和散射光谱特性。

在胶体金免疫层析技术中，胶体金颗粒表面通常被修饰上特定的抗原或抗体。

在分析过程中，样品中的目标分子与胶体金颗粒表面的抗体结合形成复合物。

这种结合通常是由于抗原与抗体之间的特异性配对引起的。

复合物的形成会导致胶体金颗粒的聚集或分散状态发生变化。

胶体金免疫层析技术通常采用纸条或膜作为载体。

样品在载体上流动时，复合物会在特定位置停留，形成可见的信号线。

这个信号线的强度与目标分子的浓度成正比。

通过测量信号线的长度、颜色强度或使用专门的仪器分析，可以确定目标分子的存在与否以及其浓度。

胶体金免疫层析技术具有以下优点：1. 高度特异性：由于抗原与抗体之间的高度特异性结合，胶体金免疫层析技术可以准确地检测目标分子，避免了其他杂质的干扰。

2. 灵敏度高：胶体金颗粒具有强烈的吸收和散射光谱特性，使得该技术能够检测到非常低浓度的目标分子。

3. 快速简便：胶体金免疫层析技术通常只需要几分钟到几小时的时间完成分析，操作简单，不需要复杂的仪器设备。

4. 可视化结果：该技术可以通过肉眼观察或简单的仪器测量获得结果，无需复杂的数据处理。

胶体金免疫层析技术在临床诊断、食品安全监测、环境污染检测等领域具有广泛应用。

例如，在临床诊断中，可以利用该技术检测血液中的肿瘤标志物、病原体和药物残留等；在食品安全监测中，可以检测食品中的致病菌和有害物质；在环境污染检测中，可以检测水体、土壤和大气中的污染物。

胶体金免疫层析技术是一种快速、准确、简便且可视化的分析方法。

胶体金是一种常用的标记技术，是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术，有其独特的优点。

近年已在各种生物学研究中广泛使用。

在临床使用的免疫印迹技术几乎都使用其标记。

同时在流式、电镜、免疫、分子生物学以至生物芯片中都可能例用到。

1971年Faulk和Taytor将胶体金引入免疫化学，此后免疫胶体金技术作为一种新的免疫学方法，在生物医学各领域得到了日益广泛的应用。

目前在医学检验中的应用主要是免疫层析法(immunochromatogra-phy)和快速免疫金渗滤法(Do t-immuogold filtration assay DIGFA)，用于检测HBsAg、HCG和抗双链DNA抗体等，具有简单、快速、准确和无污染等优点。

免疫胶体金技术的基本原理：胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。

胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。

胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PHA、ConA 等。

根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。

胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。

吸附机理可能是胶体金颗粒表面负电荷，与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。

用还原法可以方便地从氯金酸制备各种不同粒径、也就是不同颜色的胶体金颗粒。

这种球形的粒子对蛋白质有很强的吸附功能，可以与葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽缀合物等非共价结合，因而在基础研究和临床实验中成为非常有用的工具。

胶体金是一种常用的标记技术，是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术，有其独特的优点。

近年已在各种生物学研究中广泛使用。

在临床使用的免疫印迹技术几乎都使用其标记。

同时在流式、电镜、免疫、分子生物学以至生物芯片中都可能例用到。

1971年Faulk 和Taytor将胶体金引入免疫化学，此后免疫胶体金技术作为一种新的免疫学方法，在生物医学各领域得到了日益广泛的应用。

目前在医学检验中的应用主要是免疫层析法(immunochromatogra-phy)和快速免疫金渗滤法(Dot-immuogold filtration assay DIGFA)，用于检测 HBsAg、HCG 和抗双链ＤＮＡ抗体等，具有简单、快速、准确和无污染等优点。

免疫胶体金技术的基本原理：胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。

胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。

胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PHA、ConA 等。

根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。

胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。

吸附机理可能是胶体金颗粒表面负电荷，与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。

用还原法可以方便地从氯金酸制备各种不同粒径、也就是不同颜色的胶体金颗粒。

这种球形的粒子对蛋白质有很强的吸附功能，可以与葡萄球菌Ａ蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽缀合物等非共价结合，因而在基础研究和临床实验中成为非常有用的工具。

纳米颗粒在免疫层析技术中的应用纳米颗粒又称为超微颗粒，是指颗粒大小为1-100nm的粒子。

纳米颗粒具有大的比表面积，从而导致其光、热、磁敏感特性和表面稳定性不同于正常的粒子，因而在生物和医疗领域有广阔的应用前景。

目前已经用于免疫层析标志物的纳米材料包括胶体金、镧系元素、量子点、荧光乳胶、荧光微球、磁珠等几类。

免疫层析技术是通过标记物来得到结果分析信号的，因此，一种灵敏度高、稳定性好的标记物，可以大幅度提高其检测性能。

目前应用和研究的热点主要是胶体金免疫层析技术、荧光免疫层析技术、磁珠免疫层析技术等。

1胶体金免疫层析技术胶体金免疫标记技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体反应的一种免疫标记技术。

胶体金，又称为胶体纳米金，金纳米颗粒在水溶液中呈胶体状，因此称为胶体金。

胶体金颗粒具有纳米材料所特有的三大效应：表面效应、小尺寸效应和宏观量子隧道效应，具有很大的比表面积，独特的光学、导电、导热等物理特性以及良好的生物相容性，对蛋白质有较强的吸附能力，可以与免疫球蛋白、毒素、酶、糖蛋白、抗生素、激素、牛血清白蛋白、多肽化合物等非共价结合，同时，胶体金具有高电子密度特性，即金标物在相应配体处大量聚集，肉眼可见红色或粉色斑点，因而，目前多用于定性或半定量的快速免疫检测方法。

优点：简单、快速、准确、无污染、检测不依赖昂贵的激光检测仪器，只需普通光学仪器，甚至肉眼即可辨别。

目前，市场上已经有检测各种成分(如各种病原体、标志物等)的胶体金免疫层析试纸条试剂盒。

缺点：这灵敏度不高，主要用于定性或半定量，对一些肿瘤标志物、神经性肽、心血管疾病标志物的检测，其灵敏度是远远不够。

2荧光免疫层析技术荧光纳米材料由于其独特的结构和光、电、磁性质，使其在标记检测方面有着极大的应用价值。

荧光免疫层析技术结合了荧光免疫技术和层析技术的优点，是当前研究的热点2.1 量子点层析技术量子点（QuantumDots，QDs）又称无机纳米半导体晶体，是主要由ⅡB族～ⅥA族（如CdSe，CdTe，CdS，ZnSe等）或ⅢA族～ⅤA族（InP，InAs等）元素构成的能够产生荧光的半导体纳米颗粒。

胶体金免疫层析法原理什么是胶体金免疫层析法？胶体金免疫层析法是一种常用于生物医学研究和临床诊断的分析技术。

它利用胶体金颗粒与特定抗原或抗体之间的特异性反应，通过观察胶体金颗粒的聚集或分散现象来判断样品中是否存在特定的抗原或抗体。

胶体金的特性在探讨胶体金免疫层析法的原理之前，我们先来了解一下胶体金的特性。

胶体金是一种粒径很小的金颗粒，通常在10到100纳米之间。

它具有很高的稳定性、表面活性、可溶性等特点。

这些特性使得胶体金在生物学研究中具有广泛的应用。

胶体金免疫层析法的原理胶体金免疫层析法的原理可以分为两个步骤：免疫反应和观察。

免疫反应在胶体金免疫层析法中，我们首先需要将胶体金颗粒与特定抗原或抗体进行结合。

这种结合是通过将抗原或抗体与胶体金颗粒表面的配体进行共价结合实现的。

这样，在胶体金颗粒表面就存在了特定的抗原或抗体。

当与这些抗原或抗体相匹配的检测样品加入时，免疫反应就会发生。

观察观察是判断免疫反应是否发生的关键步骤。

在胶体金免疫层析法中，当样品中存在与胶体金颗粒表面的抗原或抗体相匹配的分子时，胶体金颗粒会发生聚集现象，从而改变了光学性质。

这种聚集现象可以通过肉眼观察或光谱分析来判定。

胶体金免疫层析法的应用领域胶体金免疫层析法在生物医学研究和临床诊断中具有广泛的应用。

以下是一些常见的应用领域：1.免疫诊断：胶体金免疫层析法被广泛应用于各种疾病的诊断，如感染性疾病、肿瘤标志物的检测等。

它具有快速、简便、灵敏度高等优点。

2.生物学研究：胶体金免疫层析法在细胞学、分子生物学等领域的研究中起着重要作用。

它可以用于检测细胞表面分子的表达、分析蛋白质的相互作用等。

3.药物检测：胶体金免疫层析法可以用于检测药物的含量、分布和代谢过程，对药物的研究和开发具有重要意义。

胶体金免疫层析法的优点和局限性优点•快速：胶体金免疫层析法可以在短时间内得出结果，适用于快速诊断和分析。

•灵敏度高：胶体金颗粒的粒径小，表面积大，对抗原或抗体具有高度的灵敏度，可以检测低浓度的分子。

免疫层析法检测原理分类介绍作者：佚名文章来源：艾康生物技术（杭州）有限公司点击数：88 更新时间：2005-10-16双抗体夹心·以 hCG试剂为例金标为鼠源性抗β-hCG单克隆抗体与胶体金的复合物，测试线包被羊抗α-hCG多克隆抗体，控制线包被羊抗鼠多克隆抗体。

妇女受孕的“指示剂” hCG是一种肽，包含一条和FSH（促卵泡成熟激素），FLH 具有同源性的α链和一条高度特异的β链。

当待测尿液或血清中含有一定量的hCG时，样本通过层析作用到达金标位置hCG的β链和单抗β-hCG发生免疫反应，再层析到测试线位置，hCG的α链和多抗α-hCG 发生免疫反应，这样就把金标通过hCG桥连到测试线上，达到一定量后，金标显色为肉眼可见的水平，多余的金标继续泳动到控制线位置，由于多抗鼠和鼠源性抗β-hCG 单抗发生免疫反应，从而桥连胶体金显色，这样就得到阳性结果。

当尿液或血清中不含 hCG时，金标和测试线抗体不发生桥连，而控制线则显色，这样就得到了阴性结果。

当测试线和控制线均不显色时，表示试剂盒无效。

该产品检验灵敏度25mIU/ml hCG。

测HbsAg的HbsAg产品的检测原理是双抗体夹心。

竞争反应原理·以 MOP 为例（BSA 为牛血清白蛋白）金标为鼠源性抗体Morphine单抗和胶体金的复合物，T线（为取得较强的免疫应答，故免疫原采用Morphine-BSA 偶联物）包被Morphine-BSA。

C 线包被羊抗鼠抗体。

当待测尿液中含一定量以上的 Morphine时，样本到达金标位置，和单抗Morphine-BSA发生免疫反应并完全饱和之，再层析到T线位置时，由于单抗Morphine-BSA lgG胶体金复合物已无空余的位点和测试线上的Morphine-BSA结合，故T线不显色，C线显色，这样得到的是阳性结果。

当待测尿液中不含 Morphine时，样本与金标不反应，再层析到T线位置时，固定在NC膜上的Morphine-BSA会“捕捉”单抗 Morphine-BSA胶体金复合物，故T线显色，C线也显色，得到阴性结果。

猪伪狂犬抗体到底该怎么检测？猪伪狂犬病是由猪伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PrV）引起的猪的急性传染病。

该病在猪呈暴发性流行。

可引起妊娠母猪流产、死胎，公猪不育，新生仔猪腹泻、神经症状、大量死亡，育肥猪呼吸困难、生长停滞等，是危害全球养猪业的重大传染病之一。

世界上一些主要伪狂犬病流行国家相继启动了根除计划并已取得了明显成效，首先是英国和丹麦于80年代末公布取得成功，接着荷兰、比利时等欧洲国家基本实现猪伪狂犬病净化，美国也于1989年开始启动为期10年的全国性净化计划，并取得阶段性成果，现在美国的家猪已经无伪狂犬野毒感染。

中国自2011年以来，猪伪狂犬gE阳性率逐年提高，防控压力越来越大。

我国也已经启动猪伪狂犬病净化计划，要求2020年国家核心育种场必须伪狂犬净化。

国外净化是指不免疫PRV伪狂犬gE基因缺失疫苗，中国现阶段要求免疫无疫（用伪狂犬gE基因缺失疫苗，不可以有野毒感染，gE必须阴性），以后净化必定走向不使用PRV伪狂犬gE 基因缺失疫苗。

伪狂犬gE基因缺失疫苗、gE-ELISA鉴别诊断试剂盒使得我们可以应用血清学方法检测gE和gB抗体来鉴别诊断野毒感染和疫苗免疫。

检测伪狂犬抗体一定要同时监测gB、gE两种抗体，因为野毒感染时gB、gE同时阳性，如果没有感染野毒，免疫伪狂犬gE基因缺失疫苗后，gE阴性，gB阳性。

如果只检测gB抗体，检测结果gB抗体水平很高，有可能是野毒感染导致的。

只检测gE，如果有阳性，说明有野毒感染，为了保护易感猪群，还需要检测gB抗体水平来确定如何免疫伪狂犬gE基因缺失疫苗。

按照免疫学理论检测结果gE阳性时，gB一定是阳性。

检测试剂为了兼顾灵敏度、特异性，偶尔会出现gE阳性时，gB阴性。

本作者认为此比例如果超过5%，应怀疑操作误差和试剂盒质量。

现在比较常用的检测gE和gB抗体的检测方法学有：病毒中和试验（科研院所）、ELISA（赛孚生物、爱德仕、金诺、科前、普莱柯、莱普生、中道、康佰德、绿诗源等）、胶体金（滴滴快检、康佰德等）、免疫荧光层析（赛孚生物）等。

荧光免疫层析法和胶体金法区别荧光免疫层析法和胶体金法是两种著名的免疫学技术，它们都可以用来检测和计算抗原特异性的抗体。

由于它们的应用范围不同，它们的实现原理也有所不同。

本文将从技术原理，应用领域和分析结果等几个方面来比较荧光免疫层析法和胶体金法，以便更好地了解这两种技术。

荧光免疫层析法是一种常用的抗体检测技术，它利用免疫反应来检测抗原特异性的抗体。

该技术包括免疫反应，标记和分析等步骤。

首先，抗原将与抗体结合在抗原特异性的抗体吸附板上，然后加入有特殊酶的抗体混悬液，使抗体特异性的抗体结合到抗原上，发生免疫反应。

其次，抗原结合的抗体将标记为特定的抗原特异性抗体，可以用荧光或其他荧光染料进行标记。

最后，将标记过的抗体混悬液涂布在抗原特异性抗体吸附板上，并用荧光免疫分析仪进行荧光检测，以获得抗原特异性的抗体水平。

胶体金法是另一种常用的免疫技术，与荧光免疫层析法相比，它的技术原理有所不同。

它识别抗原的原理相当于荧光免疫层析法，但使用胶体金取代荧光染料作为标记物，可以实现快速、简便的抗体检测过程。

首先，将待检样品和特定抗原结合在抗体吸附板上，然后将标记有胶体金的抗体混合液涂布在抗原特异性抗体吸附板上，使特定的抗原结合到胶体金标记的抗体上。

最后，用特异性的双酶向剂和胶体金杂质检测器对胶体金标记的抗体进行检测，可以快速简便地计算出抗原特异性的抗体水平。

除技术原理外，荧光免疫层析法和胶体金法在应用领域也有所不同。

荧光免疫层析法可以用于抗血清检测，尤其适用于对抗原特异性抗体水平的定量分析，广泛应用于临床诊断和科学研究。

相比之下，胶体金法更适用于抗体定性和定量分析，因为它具有较高的选择性和特异性，可以更准确、精确地检测抗体。

此外，荧光免疫层析法和胶体金法在分析结果上也有所不同。

荧光免疫层析法可以快速灵敏地检测抗原特异性抗体，可以检测到抗体水平非常低的样品，但荧光染料有一定的毒性，存在某些危险，容易引起结果的失真和影响实验结论的准确性。