PH0325 Bradford蛋白浓度测定试剂盒使用手册

实验一Bradford法测定蛋白质浓度1.目的：练习标准曲线的制作，比较不同pH值的蛋白质标准溶液对测定的影响。

2.试剂：①显色剂：取100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85%（w/v）磷酸，将溶液用水稀释到1000ml。

②BSA标准溶液（1000µg/ml），分别用0.01N盐酸，去离子水，0.01N NaOH溶液配制，4℃冰箱放置可保存一周。

3.设备与仪器：微量注射器：一支用于专吸BSA；一支用于专吸dH2O岛津UV-265紫外可见光分光光度计4.操作程序：试管号 1 2 3 4 5 6BSA（µl）0 10 20 40 70 100去离子水（µl）100 90 80 60 30 0显色剂（ml） 5 5 5 5 5 5加显色剂混匀，静止2min后测定OD595，建立标准曲线注：①显色液中G-250，出现沉淀不能用。

②定容BSA标准液时，混合次数，以保证混匀。

实验二蛋白质的浓缩（PEG法）1.原理干PEG粉末吸收水分和盐类，大分子溶液即被浓缩。

PEG吸收水分的速度很快，为防止PEG进入蛋白质溶液，最好选用分子量大的PEG。

一般用分子量为20000的PEG。

2.试剂与设备牛血清白蛋白（BSA），聚乙二醇（PEG），玻璃纸，岛津UV-265紫外可见光分光光度计3.操作将一定浓度的BSA溶液20mL放入具有半透膜性质的方形玻璃纸中，用细线扎住口，放入盛有PEG干粉的培养皿中，让盛有BSA溶液的玻璃纸外周涂上PEG；当玻璃纸上的PEG干粉湿透后，抹去PEG，如此反复几次，就可达到浓缩的效果。

当样品浓缩至少于3mL时，进行OD280测值。

4.结果可直接比较浓缩前后OD值的变化；也可制作一个标准曲线，定量描述蛋白质浓度的变化。

表蛋白质浓度的标准曲线管号 1 2 3 4 5 标准BSA溶液（mL） 1 2 3 4 5 蒸馏水（mL） 4 3 2 1 0 蛋白质浓度（mg/mL）0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 ABS280标准BSA溶液的浓度为1mg/mL5.计算求回归方程，并利用该方程计算浓缩前后浓度的变化。

Bradford法测蛋白浓度一、考马斯亮蓝试剂考马斯亮蓝G─250 20mg溶于9.5mL乙醇中，加入17mL 磷酸和173.5ml蒸馏水。

二、标准和待测蛋白质溶液1．标准蛋白质溶液IFN-r紫外扫描定量，用0.15mol/L NaCl配制成1OD280/mL蛋白溶液。

2．待测蛋白质溶液。

DH5a 菌体蛋白和XL－Blue菌体蛋白，使用前用0.15mol/L NaCl稀释。

三、器材DU800四、操作方法1.制作标准曲线取7支离心管，按下表平行操作。

试管编号0123456标准蛋白溶液（mL）00.010.020.030.040.050.06 0.15mol/L NaCl（mL）0.10.090.080.070.060.050.04考马斯亮蓝试剂（mL）5mL摇匀，1h内以0号管为空白对照，在595nm处比色A595nm测定结果如下：蛋白量（ug）580nm 1 580nm 2 580nm平均595nm 1 595nm 2595nm平均10 0.0814 0.0755 0.07845 0.0709 0.0671 0.06920 0.2335 0.2288 0.23115 0.2144 0.2188 0.216630 0.32 0.285 0.3025 0.307 0.2661 0.2865540 0.372 0.389 0.3805 0.3537 0.372 0.3628550 0.443 0.4927 0.46785 0.4196 0.4751 0.4473560 0.6408 0.528 0.5844 0.6224 0.5079 0.56515 实验过程中发现，蛋白与G-250混合后，吸收值不稳定，随时间变化。

2.扫描测试实验1）加20ug IFN-r，混合后扫描595nm吸收变化值，参比：450nm，时间：0——50min，测1次/min ，结果：吸收值随时间逐渐下降，图谱名称:20110321 20 ug2）加60ug IFN-r，混合后扫描595nm吸收变化值，参比：450nm，时间：0——50min，测1次/min，结果：吸收值随时间逐渐下降，10——20min时变化幅度较小，图谱名称:20110321 60ug3）加40ug IFN-r扫描，混合后400——700nm波长扫描，分别在1、2、3、4、5、10、15、20、25、30min时扫描，595nm吸收值随时间逐渐下降，450nm吸收值变化很小，变化值约0.001。

Bradford 法蛋白浓度测定试剂盒 Bradford Protein Assay Kit产品编号：C503031包装规格：200 Assays/1000 Assays+10 Microplates 产品简介Bradford 试剂蛋白定量是一种快速，即用型的总量蛋白光学定量方法，在酸性条件下，考马斯亮兰G-250染料与蛋白质疏水区结合，导致最大吸收峰由465 nm 变为595 nm ，同时颜色也由棕色变为蓝色，该蓝色化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。

将蛋白质样品或稀释的BSA 与Bradford 试剂混合，测量在595 nm 处的吸收值，在建立由一系列稀释的BSA 建立的标准曲线的情况下，蛋白质的浓度可以根据标准曲线而确定。

产品特点 1. 检测速度快，10~20个样品只需不足10 min 即可完成。

2. 灵敏度高，最小检测蛋白量达到0.2 μg ，待测样品体积1~20 μL 。

3. 在10~150 μg/mL 浓度范围内有较好的线性关系。

4.与还原性糖和还原性巯基试剂兼容。

运输和保存条件常温下运输，收到后，将Bradford 试剂和PBS 在2~8°C 环境中保存，5 mg/ml 蛋白质标准液-20°C 保存，保质期两年。

试剂盒组成 组分 C503031 Bradford 试剂200 mL BSA 标准蛋白 5 mg/mL 1 mL1×PBS 10 mL操作步骤A 试剂准备1. 取一定量的BSA 蛋白质标准液(5 mg/ml )，用1X PBS 稀释为终浓度为200 μg/ml 。

2. 将样品用1X PBS 做适当倍数的稀释。

B. 分光光度法 1.取20支1.5 mL 离心管，分为标准组和样品组。

其中16支1.5 mL 离心管，每个标准品设置1个重复，各管分别加入100 μL 相应浓度的标准蛋白质溶液(200 μg/mL)；剩余4支1.5 mL 离心管，分为2个重复组，重复组离心管编号相同。

Bradford法测蛋白质浓度Bradford法测蛋白质浓度Bradford 蛋白检测就是考兰法。

特点1.快速：10分钟既可完成测定。

2.稳定：加样，混匀后 2 分钟既可测定， 1 小时内吸光度变化不超过10%。

3.高敏感度：可精确定量 1～1000 μg/ml 的蛋白样品。

4. 595 nm检测4.不受绝大部分样品中的化学物质的影响。

巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5 mM。

但受略高浓度的表面活性剂影响。

若SDS高于0.1%，TritonX-100高于0.1%，Tween20，60，80高于0.06%，可取少量样品加水稀释到适当浓度，再行测定。

考马斯亮蓝法（Bradford法）测定蛋白质浓度1、试剂：（1）考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，用蒸馏水稀释至1000ml, 滤纸过滤。

最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250, 4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。

（2）标准蛋白质溶液：纯的牛血清血蛋白，根据其纯度同0.15mol/L NaCl配制成100ug/ml蛋白溶液。

2. 器材：（1）可见光分光光度计（2）旋涡混合器3、标准曲线的制作试管编号 0 1 2 3 4 5 6100ug/ml标准蛋白（ml） 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.60.15mol/L NaCl （ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4考马斯亮蓝试剂（ml） 5 5 5 5 5 5 5摇匀，1h内以0号管为空白对照,在595nm处比色A595nm以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标（六个点为10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug），在坐标轴上绘制标准曲线。

4、样品中蛋白质含量的测定另取两支干净的试管（做一重复），加入合适浓度的待测样品，使其测定值在标准曲线的范围内，测定方法同上，由样品液的吸光度查标准曲线即可求出含量。

使 用 说 明 书◆Bradford法蛋白定量试剂盒◆目录号1902◆使用手册◆实验室使用，仅用于体外Bradford法蛋白定量试剂盒目录号：1902目录编号包装单位190201 250次190202 1000次190203 2500次试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存250次1000次2500次蛋白标准（5mg/mlBSA）-20℃0.5ml 1ml 3mlBradford染色液4℃50ml 200ml 500ml本产品收到后按照上面指示温度存放各成份，至少九个月内有效。

蛋白标准长期保存-20℃放置，常温运输。

产品介绍：Bradford法蛋白定量试剂盒是在世界上常用的蛋白浓度检测方法之一Bradford法基础上（考马斯亮蓝结合显色法）改进而成。

当Bradford染色液（考马斯亮蓝）和蛋白在酸性条件下结合时，最大吸光值波长立刻由465 nm转移至595nm，同时颜色由褐色转为蓝色，通过测定吸光值大小并对照标准蛋白的吸光值，推算出蛋白浓度。

产品特点：1.灵敏度高，检测浓度下限达到25μg/ml，最小检测蛋白量达到0.5μg，待测样品体积为1-20μl。

2.检测速度极快，10-20个样品只需不足10分钟即可完成。

3.在50-1000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。

注意事项：1.Bradford染色液含有刺激性或者腐蚀性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。

若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

2.Bradford染色液中考马斯亮蓝易聚集成团，每次使用前请颠倒6-8次并且竖直抓住瓶口做水平划圈动作，旋转瓶中液体，帮助充分混匀，但不可以上下振荡混匀。

3.低温会降低Bradford染色液的敏感度，因此每次使用前应该使Bradford染色液回复到室温。

仅仅将需要的Bradford染色液复温，可以减少复温时间。

倒出每次需要的Bradford染色液回复到室温，将原瓶放回冰箱。

Bradford法测蛋⽩质浓度Bradford法测蛋⽩质浓度Bradford 蛋⽩检测就是考兰法。

特点1.快速：10分钟既可完成测定。

2.稳定：加样，混匀后 2分钟既可测定， 1 ⼩时内吸光度变化不超过10%。

3.⾼敏感度：可精确定量 1～1000 µg/ml 的蛋⽩样品。

4. 595 nm检测4.不受绝⼤部分样品中的化学物质的影响。

巯基⼄醇的浓度可⾼达1M，⼆硫苏糖醇的浓度可⾼达5 mM。

但受略⾼浓度的表⾯活性剂影响。

若SDS⾼于0.1%，TritonX-100⾼于0.1%，Tween20，60，80⾼于0.06%，可取少量样品加⽔稀释到适当浓度，再⾏测定。

考马斯亮蓝法（Bradford法）测定蛋⽩质浓度1、试剂：（1）考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%⼄醇，加⼊100ml 85% H3PO4，⽤蒸馏⽔稀释⾄1000ml, 滤纸过滤。

最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250, 4.7%（W/V）⼄醇，8.5%（W/V）H3PO4。

（2）标准蛋⽩质溶液：纯的⽜⾎清⾎蛋⽩，根据其纯度同0.15mol/L NaCl配制成100 ug/ml蛋⽩溶液。

2. 器材：（1）可见光分光光度计（2）旋涡混合器3、标准曲线的制作试管编号 0 1 2 3 4 5 6100ug/ml标准蛋⽩（ml） 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.60.15mol/L NaCl （ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4考马斯亮蓝试剂（ml） 5 5 5 5 5 5 5摇匀，1h内以0号管为空⽩对照,在595nm处⽐⾊A595nm以A595nm为纵坐标，标准蛋⽩含量为横坐标（六个点为10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug），在坐标轴上绘制标准曲线。

4、样品中蛋⽩质含量的测定另取两⽀⼲净的试管（做⼀重复），加⼊合适浓度的待测样品，使其测定值在标准曲线的范围内，测定⽅法同上，由样品液的吸光度查标准曲线即可求出含量。

Bradford蛋白浓度测定试剂盒使用说明货号：PC0010规格：2500T保存：开封使用后请密封保存，本试剂盒自订购之日起九个月内有效。

产品内容：组成包装（2500微孔)保存5×G250染色液100ml2-8℃PBS稀释液30ml2-8℃蛋白标准(5mg/ml BSA)1ml-20℃产品简介：考马斯亮蓝G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（Imax），由465nm变为595nm，在一定的浓度范围内，测定的吸光度值A595与蛋白质浓度成正比。

Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，样品中巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM，但受略高浓度的去垢剂影响，需确保SDS的浓度低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween20,60,80低于0.06%。

操作说明：一．微孔酶标仪法1.完全溶解蛋白标准品，取10ul，稀释至250ul，使终浓度为0.2mg/ml。

待测蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。

但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl 或PBS稀释标准品。

2.5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀，取1ml5×G250染色液，加入4ml双蒸水，混匀成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。

3.将标准品按0,2,4,6,8,12,16,20微升分别加到96孔板中，加PBS稀释液补足到20微升。

4.将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释），加20微升到96孔板的样品孔中。

由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。

5.各孔加入200微升稀释后的1×G250染色液，室温放置3-5分钟。

6.用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。

Bradford蛋白质浓度定量试剂盒产品说明书（中文版）主要用途Bradford蛋白质浓度定量试剂是一种旨在使用考马斯亮蓝染色剂G－250与可溶性蛋白质特异性结合产生色彩差异变化，通过比色测定其最大吸收转换来定量蛋白质浓度的权威而经典的技术方法。

该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。

其适用于各种蛋白质（动物、人体、植物、微生物等）的含量检测。

产品即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感，定量精确。

技术背景考马斯亮蓝染料G－250（Coomassie Brilliant Blue G－250）是一种与蛋白质结合的化学染料。

它的三苯甲烷（triphenylmethane）基团，主要与蛋白质的非极性结构结合。

而它的阴离子磺酸盐（anion sulfonate）基团与蛋白质分子的阳离子和芳香类氨基酸，尤其是精氨酸和赖氨酸侧链的结合。

在酸性环境下，其最大吸收波长从465nm转换为595nm。

Bradford提出的方法的最大优点在于不受样品中各种化学成分的干扰。

较之Lowry，Hartree-Lowry和 BCA技术，更为敏感。

产品内容反应液（Reagent A）毫升标准液（Reagent B）毫升补充液（Reagent C）毫升产品说明书1份保存方式保存标准液（Reagent B）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，反应液（ReagentA），避免光照；有效保证6月用户自备48孔板：用于样品比色的容器比色杯：用于样品比色的容器分光光度仪或酶标仪：用于比色分析实验步骤一、48孔板微量测定A．建立标准样品曲线1．将－20℃冰箱里试剂盒中的标准液（Reagent B）置入冰槽里融化2．准备1个48孔板，做好相应的标记3．按下表配制标准样品反应液1）分别移取适量的标准液（Reagent B）到48孔板里指定序号的样品孔里2）分别移取适量的补充液（Reagent C）到48孔板里指定序号的样品孔里3）最后分别加入100微升反应液（Reagent A）序号标准液（Reagent B）补充液（Reagent C）反应液（Reagent A）标准样品蛋白质含量（微克）1 25微升 375微升 100微升252 12.5微升 387.5微升 100微升12.53 10微升 390微升 100微升104 5微升 395微升 100微升 55 2.5微升 397.5微升 100微升 2.56 1.25微升 398.75微升 100微升 1.257 0 400微升 100微升04．轻轻摇动48孔板，混匀反应物5．室温下暗室里孵育5分钟6．即刻放进分光光度酶标仪测定：波长为595nm7．绘制蛋白质浓度标准曲线：纵座标（Y）为吸光值OD595，横座标（X）为蛋白质含量（微克）B．样品测定1．将待测样品置入冰槽里融化2．分别移取100微升待测样品到48孔板里指定序号的样品孔里（注意：参见注意事项4）3．分别移取300微升补充液（Reagent C）到48孔板里指定序号的样品孔里4．最后分别加入100微升反应液（Reagent A）5．轻轻摇动48孔板，混匀反应物6．室温下暗室里孵育5分钟7．即刻放进分光光度酶标仪测定：波长为595nm8．根据上述标准曲线，测出待测样品的检测含量，再除以100微升（样品量），获得待测样品的实际浓度（微克/微升）（注意：参见注意事项5）二、比色杯标准测定A．建立标准样品曲线1．将－20℃冰箱里试剂盒中的标准液（Reagent B）置入冰槽里融化2．准备好1毫升比色杯3．按下表配制标准样品反应液1）分别移取适量的标准液（Reagent B）到1毫升比色杯2）分别加入适量的补充液（Reagent C）3）最后分别加入200微升GENMED反应液（Reagent A）序号标准液（Reagent B）补充液（Reagent C）反应液（Reagent A）标准样品蛋白质含量（微克）1 50微升 750微升 200微升502 25微升 775微升 200微升253 20微升 780微升 200微升204 10微升 790微升 200微升105 5微升 795微升 200微升 56 2.5微升 797.5微升 200微升 2.57 0 800微升 200微升04．轻轻上下倾倒比色杯，混匀反应物5．室温下暗室里孵育5分钟6．即刻放进分光光度酶标仪测定：波长为595nm7．绘制蛋白质浓度标准曲线：纵座标（Y）为吸光值OD595，横座标（X）为蛋白质含量（微克）B．样品测定1．将待测样品置入冰槽里融化2．移取200微升待测样品到1毫升比色杯里（注意：参见注意事项4）3．加入600微升补充液（Reagent C）4．加入200微升反应液（Reagent A）5．轻轻上下倾倒比色杯，混匀反应物6．室温下暗室里孵育5分钟7．即刻放进分光光度酶标仪测定：波长为595nm8．根据上述标准曲线，测出待测样品的检测含量，再除以200微升（样品量），获得待测样品的实际浓度（微克/微升）（注意：参见注意事项5）三、玻璃管大量测定（注意：参见注意事项2）A．建立标准样品曲线1．将－20℃冰箱里试剂盒中的标准液（Reagent B）置入冰槽里融化2．准备好5毫升玻璃管3．按下表配制标准样品反应液1）分别移取适量的标准液（Reagent B）到5毫升玻璃管2）分别加入适量的补充液（Reagent C）3）最后分别加入1毫升反应液（Reagent A）序号标准液（Reagent B）补充液（Reagent C）反应液（Reagent A）标准样品蛋白质含量（毫克）1 4毫升0 1毫升 42 2.5毫升 1.5毫升1毫升 2.53 2毫升2毫升1毫升 24 1毫升3毫升1毫升 15 0.5毫升 3.5毫升1毫升0.56 0.25毫升 3.75毫升1毫升0.257 0 4毫升1毫升0 4．涡旋震荡，混匀反应物5．室温下暗室里孵育30分钟6．即刻放进分光光度酶标仪测定：波长为595nm7．绘制蛋白质浓度标准曲线：纵座标（Y）为吸光值OD595，横座标（X）为蛋白质浓度（毫克）B．样品测定1．将待测样品置入冰槽里融化2．移取250微升待测样品到5毫升玻璃管里30030.23．加入3.75毫升补充液（Reagent C ） 4．加入1毫升反应液（Reagent A ）5．涡旋震荡，混匀反应物 6．室温下暗室里孵育30分钟7．即刻放进分光光度酶标仪测定：波长为595nm8．根据上述标准曲线，测出待测样品的检测含量，再除以0.25毫升（样品量），获得待测样品的实际浓度（毫克/毫升）注意事项1． 本产品为200次（96孔板测定），100次操作（48孔板测定），50次操作（比色杯测定）包括标准曲线 2． 玻璃管大量测定须另购 Bradford 大量蛋白质浓度定量试剂盒（）3． 操作时，须戴手套4． 建议用户使用48孔板微量测定时样品和试剂的用量，以及在最后浓度计算时的除数 序号待测样品补充液（Reagent C ）反应液（Reagent A ）蛋白浓度计算的除数 1 5微升 395微升 100微升 5 2 50微升 350微升 100微升 50 3 100微升 300微升 100微升 100 4250微升 150微升 100微升250如果是96孔板测定：待测样品、补充液（Reagent C ）和反应液（Reagent A ）的用量是48孔板测定的二分之一如果是比色杯测定：待测样品、补充液（Reagent C ）和反应液（Reagent A ）的用量是48孔板测定的2倍 5． 样品浓度计算公式：标准曲线求得蛋白含量（微克）÷样品量（微升）＝微克/微升6． 加样后即刻比色测定7． 比色测定后，比色杯须清洗彻底 8． 强碱性样品将会干扰比色检测9． 下列化学成分和浓度范围不会干扰比色检测：Acetate0.6 M KCI1.0 M AcetoneMalic acid0.2 MAdenosine 1 mM MgCl 2 1.0 M Amino Acids Mercaptoethanol 1.0 M Ammonium sulfate 1.0 M MES 0.7 M Ampholytes Methanol 0.5％ AcidMOPS 0.2 M ATP 1 mM NaCl 5 M Barbital NAD 1 mM BES2.5 M NaSCN3 MBoric acidPeptonesCacodylate-Tris 0.1 M Phenol 5% CDTA 0.05 M Phosphate 1.0 MCitrate 0.05MM PIPES 0.5acid 1mM Deoxycholate 0.1% Polyadenylic（MW<3000）PolypeptidesMDithiothreitol 1M0.2mg/ml PyrophosphateDNA 1mg/ml EDTA 0.1M rRNA 0.25mg/mlM tRNA 0.4 EGTA, 0.05mg/ml0.30RNAEthanol totalEagle’s MEM SDS 0.1%phosphatesolution SodiumsaltEarle’s20%sulfateacid 1.0M StreptomycinFormicX-100 0.1% FructoseTritonGlucose TricinemM Glutathione Tyrosine 1mMThymidine 1 Glycerol99%Glycine 0.1 M Tris 2.0 MGuanidine-HCI Urea 6 Msaltsolution VitaminsHank'sHEPES buffer 0.1 M10．建立微量测定的标准曲线，建议使用的蛋白质浓度范围为0至50微克11．本公司提供系列蛋白定量检测产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定检测敏感。

审批页目录1目的 (4)2范围 (4)3定义 (4)4环境、健康和安全 (4)5培训 (4)6职责 (4)7程序（内容） (4)7.1原理 (4)7.2实验材料 (4)7.3操作步骤 (5)7.4结果计算 (5)7.5判定标准 (6)7.6注意事项 (6)8相关文件 (6)9参考文献 (6)10流程图 (6)11附录 (6)蛋白质含量（Bradford法）测定记录 (1)蛋白质含量（Bradford法）测定记录(适用于多个样品) (1)1目的规范蛋白质含量检测（Bradford法）的操作过程。

2范围本规程适用于样品中蛋白质含量的检测（Bradford法）。

3定义————4环境、健康和安全————5培训5.1培训部门：分析研究部。

5.2培训对象：分析研究部相关人员。

5.3培训方式和时数：自学，1小时。

5.4考核方式：问答。

6职责6.1质量保证部：负责监督本文件的执行。

6.2分析研究部：负责严格执行本规程规定。

7程序（内容）7.1原理本法系依据在酸性溶液中考马斯亮蓝G250与蛋白质分子中的碱性氨基酸(精氨酸)和芳香族氨基酸结合形成蓝色复合物，该蓝色复合物在595nm处有最大吸收值，在一定浓度范围内其颜色深浅与蛋白质浓度呈正比，以蛋白质对照品溶液作标准曲线，采用比色法测定供试品中蛋白质的含量。

7.2实验材料7.2.1试药与试液7.2.1.1超纯水：电阻率不低于18.2MΩ·cm，本方法所有试液均用超纯水配制。

7.2.1.2酸性染色液：（1）自配：称取0.l0g考马斯亮蓝G250，加乙醇50ml溶解后，加磷酸100ml，加水稀释至1000ml，混匀。

滤过，取滤液，即得。

本试剂置棕色瓶内避光保存，如有沉淀产生，使用前再滤过，2～8℃保存6个月。

（2）购买商品化试剂：如Quick Start TM Bradford 1X Dye Reagent，Cat#500-0205，厂家BIO-RAD。

商品化试剂均根据产品说明书使用。