生化实验二 皂化价的测定

皂化价测定
皂化价测定
(GB/T553--1995)
试剂：KOH乙醇溶液0.5mol/L.
HCI标准溶液0.5mol/L.
酚酞乙醇溶液1g/1oomL或2g/1oomL碱性蓝6B乙醇溶液。

仪器和用量：
锥形瓶250mL耐碱玻璃制成带有磨口回流冷凝管带有连接锥形瓶的耐磨玻璃接头加热装置水浴锅或电热板（不能用明火加热）。

滴定管（酸式150mL（最小刻度为0.1mL）。

移液管 250mL.
1/1000 链条天平。

操作方法：
称取混匀样品2g(m)准确至（0.0005g）注入锥形瓶中用移液管加入0.5mol/LKOH溶液25mL(并加入一些助沸物)连接回流冷凝管与锥形瓶，将锥形瓶放在价加热装置上慢慢煮沸不时摇动维持沸腾状态1h(2h)难于
皂化的需煮沸2h皂化完毕后，加入0.5—1.0mL酚酞指示剂趁热用0.5mol/L盐酸标准溶液滴定至红色消失，如果皂化液是深色的则用0.5—1.0mL的碱性蓝6B溶液做指示剂。

同时做空白试验。

结果计算：
皂化价= （V2xV1）xCx56.1/M
式中；
V1—滴定用的盐酸溶液mL。

V2—滴定空白用的盐酸溶液mL。

C---HCI标准溶液的浓度mol/L。

56.－KOH的摩尔质量g/moL。

M—式样的重量 g
双实验结果允许差不超过1.0mgKOH/g油，求其平均数即为测定结果，取小数后一位。

实验九皂化价的测定
一、目的：
1.掌握油脂皂化价的测定原理和方法。

二、原理：
脂肪的碱水解称皂化作用。

皂化1g脂肪所需的KOH的毫克数,称为皂化价。

脂肪的皂化价与相对分子质量成反比，由皂化价的数值可知混合脂肪的平均相对分子质量。

三、仪器、试剂和材料
1、豆油
2、蒸馏装置
3、酸碱滴定管
4、烧杯、玻棒、分析天平
5、0.100mol/L 氢氧化钠乙醇溶液
6、0.100mol/L标准盐酸溶液，取浓盐酸8.5ml，加蒸馏水稀释至1000ml,然后对此溶液进行标定。

7、70%乙醇：取95%乙醇70 ml，加蒸馏水稀释至95ml。

8、1%酚酞指示剂：称取酚酞1g，溶于100ml 95%乙醇。

四、操作步骤
1.在分析天平上称取脂肪0.5g左右，置于250ml烧瓶中，加入0.1mol/LNaOH 乙醇液50ml。

2.烧瓶上装冷凝管于沸水浴内回溜30-60min，至瓶内的脂肪完全皂化止（此时瓶内液体澄清并无油珠出现，若乙醇被蒸发，可酌情补充适量70%乙醇）。

3.皂化完毕，冷至室温，加1%酚酞指示剂2滴，以0.1mol/LHCl液滴定剩余的碱（HCl用量少可用微量滴定管），记录盐酸用量。

4.另作一空白实验，除不加脂肪外，其余操作均同上，记录空白实验盐酸的用量。

五、结果计算
皂化价={（a-b）×c×56}/W
a :空白实验所消耗的HCL的毫升数。

b:脂肪实验所消耗的HCL的毫升数。

c:HCL的浓度。

W:脂肪的重量。

六、思考题：
1. 什么是皂化价？它有何意义？。

油脂皂化价测定法（GB5534—85）】（一）仪器和用具锥形瓶：250ml; 滴定管；回流冷凝管；恒温水浴锅；电炉；吸管：25ml; 天平：感量0.001g; 烧备、试剂瓶等。

（二）试剂精馏乙醇：称取硝酸银2g，加水3ml；注入乙醇中，竭力震荡。

另取氢氧化钠3g,溶于15ml热乙醇中，冷却后注入主液；充分摇动，静置1～2周，待澄清后吸取清液蒸馏；中性乙醇； 0.5N氢氧化钾乙醇溶液；0.5N盐酸标准溶液；1%酚酞乙醇溶液。

（三）操作方法称取混匀试样2g(W,准确至0.001g)注入锥形瓶中，加入0.5NKOH乙醇溶液25ml,接上冷凝管，在水浴锅上煮沸约30min,煮至溶液清澈透明后，停止加热，取下锥形瓶，用10ml中性乙醇冲冷凝管下端，加5滴酚酞指示剂，趁热用0.5N盐酸溶液滴定至红色消失为止。

同时，进行空白试验。

（四）结果计算皂化价按公式3-31计算：皂化价（mgKOH/g油）=(V2-V1)×N×56.1 / W式中：V1—滴定试样用去的盐酸溶液体积，ml; V2 —滴定空白用去的盐酸溶液体积，ml;N —盐酸溶液的当量浓度； W—试样重量，g; 56.1—氢氧化钾的毫克当量。

双试验结果允许差不超过1.0mgKOH/g油，求其平均数，即为测定结果。

测定结果去小数点后第一位。

油脂含皂量测定法（GB5533—85）油脂中的含皂量，即油脂经过碱炼后，残留在油脂中的皂化物数量（以油酸钠计）。

（一）仪器和用具锥形瓶：250ml; 量筒；微量滴定筒；恒温水浴锅；电炉；烧杯、试剂瓶等；分析天平:感量0.0001g; 天平：感量0.01g。

（二）试剂石油醚：沸点60～90℃；95%中性乙醇； 0.2%甲基红乙醇溶液；0.02N硫酸溶液；无水碳酸纳。

（三）操作方法称取混匀试样约10g（W）,注入干燥的锥形瓶中，加入乙醇10ml和石油醚60ml，摇动，使试样溶解后，缓慢加入80℃的蒸馏水80ml，振摇使成乳状，滴入3滴甲基红指示剂，趁热逐滴加入0.02N硫酸溶液，每加一滴摇一次，滴至分层下的溶液显出微红色为止。

油脂皂化值的测定油脂皂化值的定义：皂化1g油脂内的可皂化物所需氢氧化钾的质量（mg），可皂化物一般含游离脂肪酸及脂肪酸甘油脂等。

皂化值的大小与油脂中所含甘油酯的化学成分有关，一般油脂的相对分子质量和皂化值的关系是：甘油酯相对分子质量愈小，皂化值愈高。

因此，可根据油脂的皂化值计算甘油酯及脂肪酸的平均相对分子质量。

平均Mr(甘油酯)=（56.1*3）*1000/皂化值平均Mr（脂肪酸）=[平均Mr(甘油酯)—38.01]/3两式中：平均Mr(甘油酯)--------甘油酯的平均相对分子质量；平均Mr（脂肪酸）------脂肪酸平均相对分子质量；56．1---------氢氧化钾的相对分子质量；38.01--------油脂分子中除去三个脂肪酸后剩下的“C3H2“基的相对分子质量；油脂中的皂化值还与不皂化物含量有关。

不皂化物存在，皂化值降低。

因此不皂化物含量高的油脂，不能按照油脂的皂化值换算油脂的组成，应按下式换算为纯油脂的皂化值。

油脂的皂化值=不纯油脂的皂化值*100/（100—w）式中：W--------不皂化物的质量分数，%与上相反，若游离脂肪酸含量愈大，皂化值随之增大。

油脂的皂化值是指导肥皂生产的重要数据，因为测出油脂的皂化值，在肥皂生产中便可以换算出一下三个重要数据。

（1）油脂皂化的需碱量m(碱)=（m*皂化值*40）/(1000*56.1*w(NaOH))（2）油脂内脂肪酸的含量W(脂肪酸)=100—(皂化值—酸值)*0.0226(3)油脂皂化后生成的理论甘油量W(甘油)=（皂化值—酸值）*0.0547式中：m——油脂的质量，gm（）——油脂皂化所需碱的质量，gW(氢氧化钠)——烧碱中氢氧化钠的质量分数，%W(脂肪酸)——油脂中脂肪酸质量分数，%W(甘油)——油脂中甘油的质量分数，%40和56.1——氢氧化钠和氢氧化钾的相对分子质量0.0226——油脂分子中除去三个脂肪酸后剩下的 1 moL“C3H2“基的质量（38.01g）和皂化1 moL油脂所需3 moL氢氧化钾的质量（168.3g）之比，再乘以100除以10000.0547——油脂皂化后产生1 moL甘油质量（92.08g）和皂化1 moL 油脂所需3 moL氢氧化钾的质量(168.3g)之比，再乘以100除以1000.。

中国药典皂化值的测定原理
皂化值含量测定试验
（一）试验原理：
在回流条件下将样品和氢氧化钾-乙醇溶液一起煮沸，随后用标定的盐酸溶液滴定过量的氢氧化钾。

（二）试剂和材料：
1.氢氧化钾-乙醇溶液:大约0.5mol/L氢氧化钾溶解在95%(体积分数)乙醇中,此溶液应为无色或淡黄色。

2.盐酸标准滴定溶液[c(HCl)=0.5mol/L]。

3.酚酞指示剂:10g溶于95%(体积分数)乙醇。

4.碱性蓝(6B)指示剂:碱性蓝(6B)20g/L溶于95%(体积分数)乙醇。

（三）试验步骤：
称取试样样品2g,准确到0.005g于锥形瓶中(以皂化值170-200为依据,被测样量为2g。

对于其他范围的皂化值,样量将以一半氢氧化钾-乙醇溶液被中和为依据而改变)。

用移液管将25.0mL氢氧化钾-乙醇溶液加到试样中,连接球形冷令凝管和磨口锥形瓶,并将锥形油脂维持沸腾状态60min。

难于皂化的需煮沸2h。

加2-3滴酚酞指示剂于热溶液中,并用盐酸标准滴定溶液滴定到指示剂的粉色刚好消失,且0.5min內不会出现粉色即为终点。

若皂化液是深色的。

则用0.5mL-1mL的碱性蓝(6B)指示剂。

（四）质量控制：
1.两次平行试验结果允许相差不超过0.2 mgkOH/ g;
2.如样品的皂化值值(以KOH计)(mg/g)测定结果不在理论值范围内,则应保存检测原始记录,并安排进行复测。

实验12 酸值、碘值、皂化值的测定一．实验目的1．了解“三值”的概念、应用及意义。

2．掌握“三值”的测定方法及原理。

二．实验原理酸值：指中和1g 物料中的游离酸所消耗的KOH 的mg 数。

皂化值：指中和1g 物料完全水解后得到的酸所消耗KOH 的毫克数。

碘值：是指100g 油与碘加成时所消耗的碘的克数。

测定碘值的方法为韦氏法，反应过程三．主要仪器和药品锥形瓶、滴定管、天平、冷凝管、水浴、碘量瓶、移液管氢氧化钾标准溶液、酚肽、乙醇－二甲苯混合液、硫代硫酸钠标准液、淀粉指示剂、碘化钾、一氯化碘、三氯乙烷、盐酸等。

四．实验内容1．测定酸值：取两份3～5g 样品分别加入两只锥形瓶中，每瓶中加50ml 乙醇－二甲苯混合液摇匀，每瓶中再加入3滴酚肽指示剂，用标准的KOH 溶液滴定至粉红色。

计算结果。

2．测定碘值：准确称取两份样品，分别加入两个碘量瓶中，每瓶中加入三氯甲烷，使样品溶解，并准确地用移液管量取20ml 氯化碘－冰醋酸溶液，立即盖上塞子。

摇匀后，静置1h 。

然后在碘量瓶中加入20ml 碘化钾溶液、100ml 蒸馏水溶液，用0.1mol.L -1硫代硫酸钠标准溶液滴定到红色临近消失时，加入3ml 淀粉，继续滴定到无色为终点。

在相同条件下，作空白试验计算用。

计算结果。

3．皂化值测定：将25ml KOH －乙醇沸腾煮1小时。

加酚酞3滴，稍热用HCl 标准液滴定至无色。

在相同条件下，作空白试验计算用。

计算结果。

五．注意事项1．试剂按要求取用，标定时不造成浪费。

2．乙醚、乙醇易燃、易挥发。

R CH C H R +I 2R H H R C C I I C H 2C H 2C H 2O O O C C R R'R''O C O O +C H 2C H 2C H 2O O O +O O O C C R R'R''O C O O 3NaOH Na Na Na六．思考题1．影响皂化反应速度的因素有哪些？2．用皂化反应测定酯时，哪些化合物有干扰？实验17 洗发香波的制备一．实验目的1．掌握配制洗发香波的工艺2．了解各组分的作用二．实验原理洗发香波，是英文shampoo的谐音译名，是为了将附着在头发上和头皮上的污垢除去，保持头发清洁的产品，与香皂相比，既具有去污作用，又不会过分去除头发自然的皮脂，所以香波既是去污剂，又可赋予头发以光泽、美观及易梳理性。

皂化价的测定皂化价（皂化值）系指中和1g 油脂中所含全部游离脂肪酸和结合脂肪酸（甘油脂）所需氢氧化钾的毫克数。

1 原理油脂与氢氧化钾乙醇溶液共热时，发生皂化反应，剩余的碱可用标准酸液进行滴定，从而可计算出中和油脂所需的氢氧化钾毫克数。

反应式如下：RCOOH + KOH → RCOOK + H 2OC 3H 5(COOR)3 + 3KOH → 3RCOOK + C 3H 5(OH)3KOH （过剩的）+HCl → KCl + H 2O2 测定方法2.1 试剂和溶液2.1.1 0.5mol/L 的盐酸标准溶液；2.1.2 1%酚酞指示剂；2.1.3 无水乙醚；2.1.4 0.5mol/L 氢氧化钾乙醇溶液：称取化学纯氢氧化钾30g ，溶于95%乙醇中使成1L ，摇匀，静置24h ，倾出上层清液，贮于装有苏打石灰球管的玻璃瓶中。

2.2 操作步骤称取5g 样品（称准至0.0002g ），用索氏提取法提取出粗脂肪，蒸干乙醚溶剂，准确加入0.5mol/L 氢氧化钾乙醇溶液25ml ，在水浴上加热回流30min ，不时摇动。

取下冷凝管，冷却后加入数滴酚酞指示剂，用0.5mol/L 的盐酸标准溶液滴定至红色消失。

同时做空白试验。

2.3 结果计算皂化价按下式计算：式中：Ｃ ——0.5mol/L 的盐酸标准溶液的浓度，mol/L ；Ｖ ——试样耗用盐酸标准溶液之体积，ml ；Ｖ0——空白试验消耗盐酸标准溶液之总体积，ml ；m ——试样之质量，g ；56.1——1mol/L 盐酸标准液1ml 相当于氢氧化钾的克数；一般植物油的皂化价如下：棉子油189~198，花生油188~195，大豆油190~195，菜子油170~180，芝麻油188~195，葵子油188~194，茶子油188~196。

皂化率的计算： 脂肪皂化价-酸值 理论皂化值鱼油酸值一般为： 0.7mgKOH/g 理论皂化值一般为：200-210mgKOH/g豆油酸值一般为： 0.7mgKOH/g 理论皂化值一般为：190-195 mgKOH/g 花生油酸值一般为：3.5mgKOH/g 理论皂化值一般为：188~195mgKOH/g 56.1×Ｃ·(Ｖ0–Ｖ)m ×100 皂化率=。

油脂皂化价测定法（GB5534—85）】（一）仪器和用具锥形瓶：250ml; 滴定管；回流冷凝管；恒温水浴锅；电炉；吸管：25ml; 天平：感量0.001g; 烧备、试剂瓶等。

（二）试剂精馏乙醇：称取硝酸银2g，加水3ml；注入乙醇中，竭力震荡。

另取氢氧化钠3g,溶于15ml热乙醇中，冷却后注入主液；充分摇动，静置1～2周，待澄清后吸取清液蒸馏；中性乙醇； 0.5N氢氧化钾乙醇溶液；0.5N盐酸标准溶液；1%酚酞乙醇溶液。

（三）操作方法称取混匀试样2g(W,准确至0.001g)注入锥形瓶中，加入0.5NKOH乙醇溶液25ml,接上冷凝管，在水浴锅上煮沸约30min,煮至溶液清澈透明后，停止加热，取下锥形瓶，用10ml中性乙醇冲冷凝管下端，加5滴酚酞指示剂，趁热用0.5N盐酸溶液滴定至红色消失为止。

同时，进行空白试验。

（四）结果计算皂化价按公式3-31计算：皂化价（mgKOH/g油）=(V2-V1)×N×56.1 / W式中：V1—滴定试样用去的盐酸溶液体积，ml; V2 —滴定空白用去的盐酸溶液体积，ml;N —盐酸溶液的当量浓度； W—试样重量，g; 56.1—氢氧化钾的毫克当量。

双试验结果允许差不超过1.0mgKOH/g油，求其平均数，即为测定结果。

测定结果去小数点后第一位。

油脂含皂量测定法（GB5533—85）油脂中的含皂量，即油脂经过碱炼后，残留在油脂中的皂化物数量（以油酸钠计）。

（一）仪器和用具锥形瓶：250ml; 量筒；微量滴定筒；恒温水浴锅；电炉；烧杯、试剂瓶等；分析天平:感量0.0001g; 天平：感量0.01g。

（二）试剂石油醚：沸点60～90℃；95%中性乙醇； 0.2%甲基红乙醇溶液；0.02N硫酸溶液；无水碳酸纳。

（三）操作方法称取混匀试样约10g（W）,注入干燥的锥形瓶中，加入乙醇10ml和石油醚60ml，摇动，使试样溶解后，缓慢加入80℃的蒸馏水80ml，振摇使成乳状，滴入3滴甲基红指示剂，趁热逐滴加入0.02N硫酸溶液，每加一滴摇一次，滴至分层下的溶液显出微红色为止。

动植物油脂皂化值的测定一、适用范围二、实验原理在回流条件下将样品和氢氧化钾—乙醇溶液一起煮沸，随后用标定的盐酸溶液滴定过量的氢氧化钾。

三、实验用品三、实验内容重复性：每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。

结果保留一位小数。

同一分析者使用相同仪器，相继或同时进行同一试样的两次测定值之差应不超过其算术均值的0.5%(相对)。

误差来源及分析附录2：0.5mol/L盐酸标准溶液的配制与标定参考标准：GB/T601-2002 1.盐酸标准溶液的配制按下表的规定量取盐酸，注人1000m L水中，摇匀。

2.盐酸标准溶液的标定按下表的规定称取于270-300℃高温炉中灼烧至恒重的工作基准试剂无水碳酸钠，溶于50ml.水中，加10滴溴甲酚绿-甲基红指示液，用配制好的盐酸溶液滴定至溶液由绿色变为暗红色，煮沸2 min，冷却后继续滴定至溶液再呈暗红色。

同时做空白试验。

3.计算盐酸标准滴定溶液的浓度[c(HCI)].数值以摩尔每升(mol/L 表示，按式(2)计算：MV V m HCl C ⨯-⨯=)21(1000)(m- 无水碳酸钠的质量的准确数值，单位为克(g); V1 -盐酸溶液的体积的数值，单位为毫升(ml); V: -空白试验盐酸溶液的体积的数值，单位为毫升(mL) M- 无水碳酸钠的摩尔质量的数值，单位为克每摩尔(g/mol) 注意事项：1.灼烧温度不能超过300度，当温度超过300度时无水碳酸钠分解，可将马福炉的温度调至250，等升温稳定后再调至280，或者将马福炉事先升温至280度，待稳定后再放入无水碳酸钠2.无水碳酸钠的称量质量小于0.2g 时要用十万分子之一天平称量。

3.混合指示剂为 0.1%甲基红，0.1%溴甲酚绿，1：1混合。

4.滴定一定要滴到暗红色再煮沸，可事先根据大体浓度计算大约的滴定体积。

5.滴定终点到达之后一定是再次去煮不会变回绿色。