细胞培养各种培养基简介

微生物培养基选择指南•介绍•微生物培养基的类型•FAQ•微生物培养基选择指南微生物培养基简介微生物学研究需要能在实验室提供各种不同种类的细菌、酵母或病毒。

诸如发酵、蛋白质和疫苗生产的大规模过程需要大量处于生理活性状态的细菌。

因此，针对各种应用需要有能提供适当的生化环境并保持微生物所有特征的合适的营养培养基。

任何微生物培养基都应包括营养素、能量、必需矿物质、缓冲剂和pH指示剂。

有时它们还包括选择剂和固化剂。

专性寄生虫，如噬菌体，也可在含有宿主细菌的营养培养基中进行培养。

以下是默克典型微生物培养基的基本成分：•营养来源–蛋白质、维生素、矿物质和碳水化合物的来源；主要是蛋白胨和肉提取物的混合物•能量源–碳水化合物的来源；主要是葡萄糖•基本矿物质–微量和大量矿物质的来源；主要存在于蛋白胨和肉提取物中•缓冲剂–保持最佳pH值的试剂；主要是特定的氨基酸、磷酸盐、柠檬酸盐和两性离子•pH指示剂–通过颜色变化指示培养基pH值变化的试剂；主要是酚红•选择剂–仅允许特定细菌生长的试剂；例如抗生素、亚碲酸盐、叠氮化物和胆汁盐•固化剂–在需要时可将培养基保持在固态或半固态的试剂；广泛使用的是琼脂，尽管有时使用的是明胶•特定的物质，如生长因子、酶，也可被掺入至特定的细菌培养基中微生物培养基的类型•简单或基础培养基：包括营养肉汤和蛋白胨水；在分子生物学研究实验室通常用于分离和培养各种细菌•复杂培养基：含有多种营养成分的混合物；氨基酸来源的确切组成并不明确。

例如巧克力琼脂、MacConkey琼脂、Lowenstein-Jensen培养基•明确培养基：含有某些细菌所需的已知和明确的碳和氮源•特定培养基：含有会刺激难养菌繁殖、阻止有害细菌繁殖的特定物质，或能区分不同类型细菌的指示剂•细菌培养基LB培养基溶菌肉汤或LB是培养大肠杆菌最为常用的培养基。

它最初是由BertaniG创建以用于培养志贺氏菌指示菌。

LB是一种富含蛋白胨、酵母提取物、NaCl和琼脂（用于固体培养基）的丰富培养基。

北京雷根生物技术有限公司
White 培养基
简介：
植物组织培养技术即植物无菌培养技术，又称离体培养技术，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、花、茎尖、果实等)、组织(如形成层、表皮、表层、髓部细胞、胚乳等)或细胞(大孢子、小孢子、体细胞等)以及原生质体，在细菌和适宜的人工培养基及环境条件下，能够诱导出愈伤组织、不定芽、不定根、最后形成完整菌株的技术。

Leagene White 培养基主要由硝酸钾、氯化钙、硫酸镁、磷酸盐等组成，其中硝酸钾工作浓度为80mg/L 、硫酸镁工作浓度为720mg/L 。

该试剂特点是无机盐浓度较低，主要用于培养植物生根、胚胎以及一般组织，经高压灭菌，为无菌溶液。

该试剂仅用于科研领域，不用于临床诊断或治疗。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 根据实验需求操作。

注意事项：
1、 要根据不同的材料、不同的物种，选择合适的培养基，最好通过实验获得。

2、 如需严格无菌，可再次于121℃高压灭菌15-20min 。

有效期： 6个月有效。

相关：
编号 名称 CM0601 Storage White 培养基 500ml 4℃ 使用说明书 1份
编号 名称 DC0032 Masson 三色染色液 PW0040 Western blot 一抗稀释液 TC0699 植物总糖和还原糖检测试剂盒(硝基水杨酸法)。

DMEM、RIPA1640、F12、L15等细胞培养基的基本知识培养细胞的完全培养基由基础培养基（如MEM）和添加剂（如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子）组成，培养基的配方一直在改进，其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等。

一、基础培养基绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。

最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。

而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂（例如核苷酸）。

MEM/F12 这两种培养基各取1/2，形成神经生物学最通用的培养基。

Dulbecco`s改良培养基——DMEM，现应用于快速生长的细胞，同MEM 含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。

选择某种培养基，应仔细了解成分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。

例如，有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。

F12中含有硫酸亚铁，据报道也有神经毒效应。

在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。

对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸（若培养基中这两种物质缺乏时）。

MEM与F12均要用5%的CO2来平衡，DMEM含更高浓度的NaCO3，要用10%的CO2来平衡，当然也可以在较低CO2浓度下使用。

这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的，但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。

原则上，HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。

实际操作中并非如此简单。

显然，溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。

各种细胞培养基的区别及应用细胞培养基是用于体外培养细胞的一种重要介质，它可以为细胞提供生长所需的营养物质、生长因子、激素等。

根据不同的需求和应用领域，细胞培养基有很多种类和特点。

本文将对细胞培养基的区别及应用进行详细介绍，以帮助大家更好地了解和选择合适的细胞培养基。

一、细胞培养基的概述细胞培养基的发展历程可以追溯到上世纪50年代，随着生物科学研究的不断深入，细胞培养技术得到了广泛应用。

细胞培养基的研究和应用不仅为生物学基础研究提供了有力支持，还为医学、农业、工业等领域创造了巨大价值。

二、细胞培养基的区别1.基础培养基与专用培养基基础培养基：含有细胞生长所需的基本营养物质，如糖、氨基酸、维生素等，适用于大多数细胞的培养。

常见的基础培养基有DMEM、RPMI-1640、MEM等。

专用培养基：针对特定类型的细胞设计，具有较高的特定成分和较窄的营养成分范围，可以满足某些细胞对特定营养物质的需求。

如HEK293细胞培养基、MCF-7细胞培养基等。

2.天然培养基与合成培养基天然培养基：来源于动物血清、血浆等天然物质，含有丰富多样的生长因子、激素等，具有较高的生物活性。

常见的天然培养基有FBS（胎牛血清）、ABC（人血清）等。

合成培养基：通过化学合成或重组技术制备，成分明确、可定制。

可以根据细胞需求添加不同的生长因子、激素等，具有较高的可控性。

如MED64培养基、Synthemax培养基等。

3.液体培养基与固体培养基液体培养基：含水量较高，细胞在其中可以自由悬浮和生长。

常见的液体培养基有DMEM/F12、RPMI-1640等。

固体培养基：在液体培养基中添加固体成分，如琼脂、纤维素等，使细胞可以在固体表面附着生长。

常见的固体培养基有agarose、matrigel等。

4.不同种类的细胞对培养基的需求不同种类的细胞对培养基的需求不同，例如：- 淋巴细胞培养：需要较高浓度的氨基酸、维生素和血清；- 神经细胞培养：需要添加神经营养因子、生长因子等；- 肿瘤细胞培养：需要较高浓度的糖和血清。

精子细胞BWW 培养基简介：正常精液是一种混合物，在射精时由睾丸和附睾的分泌物及悬浮其中的精子与前列腺、精囊腺和尿道球腺的分泌物混合而成，最终射出的混合物是一种粘稠的液体。

精子分析的方法有很多，其中可通过培养进行检测。

Leagene 精子细胞BWW 培养基又称为获能培养液（capacitatingmedium ），主要由系列盐离子、酚红、葡萄糖、丙酮酸钠、BSA 等以及抗生素组成， BWW 培养基中含青霉素钠盐和链霉素，是一种旨在用于广谱动物和人体精子细胞获能处理的常用营养液。

其标准化成分配方依据Biggers-Whitten-Whittingham(BWW)研究小组在1971年发表的成果，适合于各种动物和人体精子细胞处理，该试剂经无菌处理。

组成：自备材料：1、 无菌离心管2、 离心机3、 细胞培养箱操作步骤(仅供参考)：1、 取干净的精液样本室温放置，使之充分液化。

2、 制备精子细胞(仅供参考，不是必须步骤)：1)、上泳法：取一个无菌的锥底离心管，加入液化的精液，在其上方轻轻加入Earle 培养液,倾斜试管，孵育。

轻轻竖立试管，取出最上层的液体。

加入增补的Earle 培养液稀释,离心，弃上清。

加入Earle 培养液重新悬浮细胞，用于精子密度或功能的评估。

2)、非连续密度梯度法：取一个无菌的锥底离心管，加入 Percoll 。

轻轻加入Percoll 于Percoll 液面上，小心操作，不要打乱两种液体的界面。

轻轻加入精液于梯度溶液上，离心，弃上清。

将管底的精子团重新悬浮于Earle 培养液中，离心，弃上清。

加入1mlEarle 培养液，重新悬浮。

3、 将含有精子细胞的离心管置于含5%CO 2、95%空气的细胞培养箱中孵育。

如无上述培养箱，可将离心管密封加盖，置于普通培养箱内孵育。

在孵育过程中，大多数活动的精 编号 名称 CM0052 CM0052 Storage 精子细胞BWW 培养基 100ml 500ml -20℃使用说明书 1份子从精浆中游离到覆盖上面的培养液内。

DMEM、RIPA1640、F12、L15等细胞培养基的基本知识培养细胞的完全培养基由基础培养基（如MEM）和添加剂（如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子）组成，培养基的配方一直在改进，其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等。

一、基础培养基绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。

最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。

而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂（例如核苷酸）。

MEM/F12 这两种培养基各取1/2，形成神经生物学最通用的培养基。

Dulbecco`s改良培养基——DMEM，现应用于快速生长的细胞，同MEM 含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。

选择某种培养基，应仔细了解成分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。

例如，有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。

F12中含有硫酸亚铁，据报道也有神经毒效应。

在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。

对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸（若培养基中这两种物质缺乏时）。

MEM与F12均要用5%的CO2来平衡，DMEM含更高浓度的NaCO3，要用10%的CO2来平衡，当然也可以在较低CO2浓度下使用。

这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的，但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。

原则上，HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。

实际操作中并非如此简单。

显然，溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。

北京雷根生物技术有限公司
Miller 培养基
简介：
植物组织培养技术即植物无菌培养技术，又称离体培养技术，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、花、茎尖、果实等)、组织(如形成层、表皮、表层、髓部细胞、胚乳等)或细胞(大孢子、小孢子、体细胞等)以及原生质体，在细菌和适宜的人工培养基及环境条件下，能够诱导出愈伤组织、不定芽、不定根、最后形成完整菌株的技术。

Leagene Miller 培养基主要由硝酸钾、硝酸钙、硫酸镁、磷酸盐等组成，硝酸钾工作浓度为1000mg/L 、硝酸铵工作浓度为1000mg/L 。

该试剂特点是硝酸盐含量较高，经高压灭菌，为无菌溶液。

该试剂仅用于科研领域，不用于临床诊断或治疗。

产品组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 根据实验需求操作。

注意事项：
1、 要根据不同的材料、不同的物种，选择合适的培养基，最好通过实验获得。

2、 如需严格无菌，可再次于121℃高压灭菌15-20min 。

有效期： 6个月有效。

相关：
编号 名称 CM0641 Storage Miller 培养基 500ml 4℃ 使用说明书 1份
编号 名称 DM0007 瑞氏-姬姆萨复合染色液 PW0040 Western blot 一抗稀释液 TC0699
植物总糖和还原糖检测试剂盒(硝基水杨酸法) TC0731 乳酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶微板法)。

培养基的种类范文培养基是在实验室中为细菌、真菌、植物组织或动物细胞提供生长环境的营养物质。

根据不同的需求，培养基可以分为多种类型。

下面我将详细介绍几种常见的培养基。

1.基础培养基：基础培养基是最基本的培养基类型，提供细菌或细胞生长所需的基本营养物质，如碳源、氮源、无机盐和水等。

常见的基础培养基包括液态LB培养基（用于细菌培养）、液态DMEM培养基（用于动物细胞培养）和固体MS培养基（用于植物细胞培养）。

2. 选择性培养基：选择性培养基是通过添加特定化合物或抑制剂来选择性地促进或抑制其中一种细菌或真菌的生长。

这种培养基可用于筛选特定菌种、分离纯菌或抵制有害微生物。

常见的选择性培养基包括MacConkey培养基（用于分离大肠杆菌）、Sabouraud培养基（用于真菌培养）和MTL培养基（用于胃溃疡杆菌的分离）。

3. 差异培养基：差异培养基是通过添加其中一种化合物来促进一些细菌的可见特征表现，如颜色、形态或结构等。

差异培养基常用于鉴定和鉴别微生物。

常见的差异培养基有MacConkey-Sorbitol培养基（用于分离致病性大肠杆菌），青绿培养基（用于鉴别青霉和念珠菌）和EMB培养基（用于分离发酵杆菌）。

4.增殖培养基：增殖培养基是为了促进细胞或组织的增殖而设计的。

这类培养基通常会添加植物生长素或动物细胞因子，以促进细胞分裂或组织再生。

常见的增殖培养基有MS培养基（用于植物离体培养）和DMEM/F12培养基（用于动物细胞培养）。

5.工业培养基：工业培养基用于工业生产中的微生物发酵过程。

这类培养基通常会优化营养物质的组成，以提高产物的产量和纯度。

常见的工业培养基有液态SGG培养基（用于啤酒发酵）和液态YPG培养基（用于酵母发酵）。

除了上述几种常见的培养基类型，还存在其他一些特殊用途的培养基，如鉴别培养基（用于鉴别微生物的特定代谢能力）、低营养培养基（用于维持微生物菌株的纯度）、分离培养基（用于从混合物中分离纯菌）等。

培养基：培养基，是指供给微生物、植物或动物（或组织）生长繁殖的，由不同营养物质组合配制而成的营养基质。

一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）、维生素和水等几大类物质。

培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质，也是细胞生长和繁殖的生存环境。

培养基种类很多，根据配制原料的来源可分为自然培养基、合成培养基、半合成培养基；根据物理状态可分为固体培养基、液体培养基、半固体培养基；根据培养功能可分为基础培养基、选择培养基、加富培养基、鉴别培养基等；根据使用范围可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基、真菌培养基等。

培养基配成后一般需测试并调节pH，还须进行灭菌，通常有高温灭菌和过滤灭菌。

培养基由于富含营养物质，易被污染或变质。

配好后不宜久置，最好现配现用。

简介：培养基（Medium）是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含有水、氮源、无机盐（包括微量元素）、碳源、生长因子（维生素、氨基酸、碱基、抗菌素、色素、激素和血清等）等。

培养基由于配制的原料不同，使用要求不同，而贮存保管方面也稍有不同。

一般培养基在受热、吸潮后，易被细菌污染或分解变质，因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。

对一些需严格灭菌的培养基（如组织培养基），较长时间的贮存，必须放在3-6℃的冰箱内。

由于液体培养基不易长期保管，均改制成粉末。

培养基的配制：1.配料配方换算→在容器中加入少量水（蒸馏水，自然水）→按照配方称取各种药品（依次加入）→加足所需水量（一药一勺，取药后立即盖上瓶盖）。

2.溶解淀粉溶解：少量冷水调成糊状加热溶解，特别是加有琼脂的培养基，一定要煮沸，琼脂的熔解温度95-97℃，且需要边加热边搅拌以防止烧焦。

3.调PH用1N的盐酸或1N的NaOH把培养基调节到所要求的值。

4.过滤滤纸或棉花进行过滤。

（有时可以省去）5.分装一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。

(1)三角瓶若作静置培养，则100ml培养基/250ml的三角瓶，最多不能超过150ml培养基/250ml的三角瓶，否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞，造成染菌；若作摇瓶培养，则15-20ml培养基/250ml的三角瓶，保证通气良好。

培养基：培养基，是指供给微生物、植物或动物生长繁殖的，由不同营养物质组合配制而成的营养基质。

一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐、维生素和水等几大类物质。

培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质，也是细胞生长和繁殖的生存环境。

培养基种类很多，根据配制原料的来源可分为自然培养基、合成培养基、半合成培养基；根据物理状态可分为固体培养基、液体培养基、半固体培养基；根据培养功能可分为基础培养基、选择培养基、加富培养基、鉴别培养基等；根据使用范围可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基、真菌培养基等。

简介：培养基（Medium）是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含有水、氮源、无机盐（包括微量元素）、碳源、生长因子（维生素、氨基酸、碱基、抗菌素、色素、激素和血清等）等。

培养基由于配制的原料不同，使用要求不同，而贮存保管方面也稍有不同。

一般培养基在受热、吸潮后，易被细菌污染或分解变质，因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。

对一些需严格灭菌的培养基（如组织培养基），较长时间的贮存，必须放在3-6℃的冰箱内。

由于液体培养基不易长期保管，均改制成粉末。

培养基的配制：1.配料配方换算→在容器中加入少量水（蒸馏水，自然水）→按照配方称取各种药品（依次加入）→加足所需水量（一药一勺，取药后立即盖上瓶盖）。

2.溶解淀粉溶解：少量冷水调成糊状加热溶解，特别是加有琼脂的培养基，一定要煮沸，琼脂的熔解温度95-97℃，且需要边加热边搅拌以防止烧焦。

3.调PH用1N的盐酸或1N的NaOH把培养基调节到所要求的值。

4.过滤滤纸或棉花进行过滤。

（有时可以省去）5.分装一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。

(1)三角瓶若作静置培养，则100ml培养基/250ml的三角瓶，最多不能超过150ml培养基/250ml的三角瓶，否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞，造成染菌；若作摇瓶培养，则15-20ml培养基/250ml的三角瓶，保证通气良好。

Gibco层粘连蛋白赛默飞范本一：正文：1. 简介Gibco层粘连蛋白赛默飞是赛默飞世尔维公司推出的一种优质细胞培养基。

该培养基通过添加层粘连蛋白，提供细胞黏附的支持，促进细胞生长和繁殖。

本文将介绍Gibco层粘连蛋白赛默飞的详细信息和使用方法。

2. 成分Gibco层粘连蛋白赛默飞的主要成分包括：- 层粘连蛋白：提供支持细胞黏附和生长的基质。

- 营养物质：提供细胞所需的营养物质，包括氨基酸、糖类和维生素等。

- 生长因子：促进细胞生长和分化的蛋白质因子。

- 补充物质：调节培养基的pH值和渗透压等重要参数。

3. 使用方法3.1 储存条件Gibco层粘连蛋白赛默飞应储存在-20℃下，避免阳光直射和高温。

3.2 培养基配制将适量的Gibco层粘连蛋白赛默飞加入无菌的培养基瓶中，按比例添加适量的补充物质，如生长因子和抗生素等。

用无菌胶头塞密封瓶口。

3.3 细胞培养将待培养的细胞加入含有Gibco层粘连蛋白赛默飞的培养基中。

根据细胞类型和要求，可以进行不同的培养条件，如温度、CO2浓度和培养时间等。

4. 注意事项- 使用前请确认培养基是否过期，过期的培养基可能影响细胞生长。

- 在培养细胞时，请注意无菌操作，避免细菌和真菌污染。

- 在使用过程中，如出现异常现象，请立即停止使用并与供应商连系。

5. 附件本文档附带的附件包括：- Gibco层粘连蛋白赛默飞产品说明书- Gibco层粘连蛋白赛默飞储存条件标签6. 法律名词及注释本文档涉及的法律名词及其注释如下：- 无范本二：正文：1. 概述Gibco层粘连蛋白赛默飞是赛默飞世尔维公司推出的一种细胞培养基。

本文将详细介绍Gibco层粘连蛋白赛默飞的成分、使用方法和注意事项等内容。

2. 成分Gibco层粘连蛋白赛默飞的主要成分包括：- 层粘连蛋白：提供细胞黏附的支持和生长的基质。

- 营养因子：包括氨基酸、糖类和维生素等，为细胞提供所需的营养物质。

- 生长因子：促进细胞生长和分化的蛋白质因子。

常用25种培养基详细配方以下是常用的25种培养基的详细配方：1. LB培养基（Luria-Bertani medium）-天然培养基：10g蛋白胨，5g酵母粉，10gNaCl，添加适量蒸馏水，pH值调至7.0。

- 固体培养基：添加15g agar。

2. TSA培养基（Tryptic Soy Agar）-17g蛋白胨，3g酵母提取物，5gNaCl，添加适量蒸馏水，pH值调至7.3-7.5- 固体培养基：添加15g agar。

3. NB培养基（Nutrient Broth）-8g蛋白胨，2g胰蛋白胨，5gNaCl，添加适量蒸馏水，pH值调至7.4 - 固体培养基：不添加agar。

4. R2A培养基（Reasoner's 2A medium）- 0.5g peptone，0.5g casein hydrolysate，0.5g yeast extract，0.5g glucose，0.5g soluble starch，0.3g dipotassium phosphate，0.05g magnesium sulfate，0.3g sodium pyruvate，10μg m anganese sulfate，添加适量蒸馏水，pH值调至7.2-7.4- 固体培养基：添加15g agar。

5. BHIS培养基（Brain Heart Infusion with 20% Sucrose）- 37.5g BHIS培养基，10g sucrose，添加适量蒸馏水，pH值调至7.5- 固体培养基：添加15g agar。

6. PDA培养基（Potato Dextrose Agar）-200g马铃薯，20g葡萄糖，添加适量蒸馏水，pH值调至5.6- 固体培养基：添加20g agar。

7. MRS培养基（de Man Rogosa Sharpe medium）- 10g peptone，10g beef extract，4g yeast extract，20g glucose，5g sodium acetate，2g dipotassium phosphate，0.02g magnesium sulfate，添加适量蒸馏水，pH值调至6.2-6.6- 固体培养基：添加20g agar。

3T3-L1细胞培养一、复苏冻存的3T3-L1细胞1 从液氮罐中用镊子拿出冻存的细胞，迅速放入37 ℃浴中，溶解约1min 取出（要留小部分冰不融化）。

2 打开前用75%的酒精清洗冻存管外壁，打开后，移入小号培养瓶，立即加入4~5mL培养基，稀释DMSO，然后放入培养箱。

二、冻存的3T3-L1细胞1 当细胞长到70~80%时，消化细胞。

去除培养基，用5mL 1*PBS 洗去残留培养基，加入1mL 胰酶，轻晃培养瓶，使胰酶覆盖整个培养瓶底部，放入培养箱消化2~3min。

2 加入3~4mL DMEM(10%NBS) 终止消化，轻轻吹打使细胞均匀。

3 取1/5的量移入大培养瓶继续培养。

4取700uL加入冻存管中，，向冻存管中加入100uL DMSO，200uL FBS。

放入程序降温盒，再放入-80度冰箱过夜，第二天拿出放入液氮罐，记录存放位置。

5 每消化一次，细胞代数增加一次，要记录清楚。

三、3T3-L1细胞换液1 新复苏或消化的细胞，在种入新培养瓶5~6h或过夜后，观察细胞贴壁情况。

2 每两天换一次液；待细胞长到70~80%时，进行消化，消化步骤如上所述。

四、种入24孔板1 种入24孔板前，细胞要进行消化，步骤如上所述。

2 计算好传代和种入板中的量。

如：大号培养瓶中细胞长到70~80%进行消化，加入1.5mL胰酶消化，加入4mL 培养基终止消化。

其中0.5mL用于继续培养，剩余5mL, 每一24孔板需要1/5的量。

3 24孔板事先铺0.5%的明胶。

注意事项：1 从液氮中拿出冻存管时尽量不要用手碰，以免冻伤。

2 冻存管取出后迅速放入水浴中，培养基使用前可以先用37度预热。

3 冻存管打开前要用酒精消毒，防止污染。

4 尽快加入培养基稀释DMSO，防止DMSO对细胞毒性作用。

5 冻存复苏细胞遵循“慢冻快融”原则。

6 程序降温盒内是异丙醇，用5次更换一次异丙醇。

7 若没有程序降温盒，可将细胞放入4度冰箱1h，-20度冰箱1h，再放入-80度过夜。

细胞培养常用培养基及基本特性The Standardization Office was revised on the afternoon of December 13, 2020常用培养基及基本特性1、RPMI-1640 MediumRPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养，是目前应用十分广泛的培养基。

主要用于悬浮细胞培养。

其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。

2、Minimum Essential Medium（MEM）也称最低必需培养基，它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。

成分简单，可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。

MEM-Alpha一般用于培养一些难培养细胞类型，而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养。

3、DMEM-高糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养,更适合高密度悬浮细胞培养。

适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。

4、DMEM-低糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养。

低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。

5、DMEM/F12DMEM/F12培养基适于克隆密度的培养。

F12培养基成分复杂，含有多种微量元素，和DMEM以1：1结合，称为DMEM/F12培养基（DME/F12medium），作为开发无血清配方的基础，以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。

该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。

为了增强该培养基的缓冲能力，改良之一是在DMEM/F12（1：1）中加入15mMHEPES缓冲液。

细胞培养基常用的添加成份及使用注意事项
酚红在细胞培养基中用作pH值的指示剂。

一般情况下，可以通过酚红的指示作用判断培养基的pH值，但低血清或是无血清细胞培养基中酚红的含量与普通细胞培养基中的酚红含量不同，不能通过肉眼观察或通过经验来判定pH值，建议使用pH计进行测定。

酚红通常对含血清的细胞培养基生产的生物制品质量并不会产生明显影响，也可通过纯化技术去除，但酚红在无血清细胞培养基中可能带来胞内钠/钾失衡，影响细胞生长。

碳酸氢钠在细胞培养基中主要是作为缓冲系统，此外还具有调节渗透压的作用。

通常产品使用说明中的碳酸氢钠推荐量是一个标准、安全量，是在科学的基础上根据实践经验所得。

但是由于不同的细胞系（株）不同，同一株细胞适应环境也可能不同（细胞耐受性不同等），且存在的地域性水质差异等，在实际生产过程中也可稍作改动，但使用者需做相应的检测（理化及细胞生产试验等）。

HEPES是一种非离子缓冲液，在pH 7.2 ～7.4范围内具有较好的缓冲能力，在高浓度时对一些细胞可能有毒。

HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠（0.34g /L）共用，以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加。

其安全浓度范围是10～25mmol/L。

丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是在没有葡萄糖的条件下，细胞也可以代谢丙酮酸钠。

谷氨酰胺在溶液中很不稳定，4 ℃下放置1周可分解50 %，使用中最好单独配制，置-20 ℃冰箱中保存，使用前加入细胞培养液中。

RPMI-1640粉末培养基使用说明书产品简介RPMI-1640是Moore等人于1967年在美国纽约州法罗市的罗斯韦尔公园纪念研究所（Roswell Park Memorial Institute, RPMI）开发出来的，RPMI是该研究所开发的一类细胞培养基，1640是培养基代号。

RPMI-1640是改进型的McCoy 's 5A培养基，使用碳酸氢盐缓冲系统，与大多数哺乳动物细胞培养基不同的是其典型的PH8的配方。

RPMI-1640培养基最初是为淋巴细胞培养专门设计的，现在已广泛应用于各种正常细胞和癌细胞的培养，尤其是悬浮细胞的培养，是使用最为广泛的培养基之一。

本产品含有多类细胞培养所需的氨基酸、维生素、无机盐等多种成分，但不含蛋白质、脂类或任何生长因子，故此产品需搭配血清或无血清添加物使用。

产品规格与保存产品名称货号产品规格保存条件保存期限5x1L1x10L RPMI-1640粉末培养基PM150110P1x50L 2~8℃密闭、避光36个月产品使用方法【1】于一容器中倒入约90%超纯水，将本品一袋或者称取1L用量，全部倒入该容器中，用少量超纯水将袋内残留粉末洗出。

【2】搅拌30min使所有成分完全溶解，待溶液澄清后，加入2.0g碳酸氢钠（分析纯），继续搅拌5-10min至溶解。

【3】加超纯水定容至1L。

【4】必要时用1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调整PH值至7.20-7.30，由于过滤会使培养基PH值稍微偏高，因此此处比目的PH值（7.20-7.40）要低一些。

【5】用孔径为0.2μm的滤膜正压过滤除菌（注意无菌操作）。

【6】过滤结束可以取少许液体培养基进行菌检，待合格后再使用。

此时液体培养基保质期为1年，储存条件为 2~8℃。

备注：该使用方法以1L规格为例，其他规格使用方法按照对应规格加入对应量的碳酸氢钠以及定容到对应规格的体积即可。

常规成分说明形态粉末L-谷氨酰胺2mMD-葡萄糖2000mg/LHEPES缓冲剂无酚红指示剂 5.0mg/L注意事项1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套及口罩操作；2、为保持本产品的最佳使用效果，请务必按照建议的储存条件进行保存；3、本产品仅供科学研究或进一步生产使用，不可用于临床诊断或治疗。