黑龙江宝庆隆生物技术有限责任公司
1 目的
建立甘草酸二铵注射液检验标准操作规程。
2 范围
适用于甘草酸二铵注射液的检验。
3 责任者
中心化验室、质量管理部
4 职责
4.1中心化验室QC组长负责本标准操作规程的起草。
4.2中心化验室主任负责本标准操作规程的审核。
4.3 质量管理部部长负责本标准操作规程的审核。
4.4 质量受权人负责本标准操作规程的批准。
5 依据
《甘草酸二铵注射液质量标准》
6 内容
6.1 性状
本品为无色的澄明液体。
6.2 鉴别
6.2.1
6.2.1.1 检验仪器：电子天平、烘箱、电热恒温水浴锅
6.2.1.2 试剂及试液：盐酸、乙醇、10%2,6-二叔丁基对甲苯酚乙醇溶液、20%氢氧化钠溶液、稀盐酸
6.2.1.3 试液配制：照《试剂配制标准操作规程》配制。
6.2.1.4 检验方法：取本品60ml，加盐酸6ml，煮沸10分钟，放冷，滤过，取沉淀及滤液备用。
沉淀用水洗涤至中性，105℃干燥1小时，加乙醇10ml，使溶解，取乙醇溶液1ml，加10%的2，6-二叔丁对甲苯酚乙醇溶液0.5ml和20%氢氧化钠溶液1ml，置水浴加热30分钟，液面出现紫红色悬浮物。
6.2.2 鉴别（2）
6.2.2.1 检验仪器：紫外-可见分光光度计
6.2.2.2 检验方法：取含量测定项下溶液，照《紫外-可见分光光度法标准操作规程》，在200nm～400nm范围内测定紫外吸收图谱，本品在252nm波长处有最大吸收。
6.3 检查
6.3.1 pH值
6.3.1.1 检验仪器：酸度计
6.3.1.2 检验方法：取本品，照《pH值测定法标准操作规程》测定。
6.3.1.3 限度：pH值应为6.3~
7.8。
6.3.2 有关物质
6.3.2.1 检验仪器：高效液相色谱仪
6.3.2.2 试剂及试液：色谱乙腈、0.01mol/L磷酸溶液、流动相
6.3.2.3 试液配制
0.01mol/L磷酸溶液：取磷酸0.64ml，加水溶解稀释至1000ml，即得。
流动相：取乙腈430ml与0.01mol/L磷酸溶液570ml混合均匀，即得。
6.3.2.4 系统适用性：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.01mol/L磷酸溶液（43：57）为流动相，波长252nm；理论板数按甘草酸二铵峰计算应不低于2000。
6.3.2.5 检验方法
照《高效液相色谱法标准操作过程》测定。
系统适用性：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.01mol/L磷酸溶液=43:57为
测定法：精密量取本品5ml于25ml量瓶，加流动相稀释定容刻度，制成每1ml中含甘草酸二铵1.0mg的溶液，作为供试品溶液；精密取供试品溶液5ml，置100ml量瓶中，加流动相至刻度，作为对照溶液。
取对照品溶液10ul注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为记录满量程的10%～20%，再取供试品溶液10ul注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分保留时间的2.5倍。
限度：供试品溶液如显杂质峰，各杂质峰面积之和不得大于对照溶液主峰面积的1.8倍（9.0%），其中，最大杂质峰峰面积不得过对照溶液主峰面积的1.0倍（5.0%），次大杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积（3.0%），其余杂质峰面积之和不得大于对照溶液主峰面积（3.0%）。
6.3.3 装量
取本品3支，照《装量差异及装量检查法标准操作规程》检查。
应符合规定。
6.3.4 不溶性微粒
6.3.4.1 检测仪器：微粒分析仪
6.3.4.2 检验方法：取本品3支，单支规格为10ml(规格10ml：50mg)，照《不溶性微粒检查法标准操作规程》检查。
6.3.4.3 限度：每支中含10µm以上的微粒不得过6000，含25µm以上的微粒不得过600粒。
6.3.5 可见异物
6.3.5.1 检测仪器：澄明度检测仪
6.3.5.2 检验方法：取本品20支，照《可见异物检查法标准操作规程》检查，应符合规定。
6.3.6 无菌检查
照《无菌检查法标准操作规程》检查，应符合规定。
6.3.6.1 检验仪器：超净工作台、集菌仪、生物安全柜
6.3.6.2 培养基：硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基、营养琼脂培养基、营养肉汤培养基、pH
7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液
6.3.6.3 培养基及试剂配制：照《培养基配制标准操作规程》配制。
6.3.6.4 操作过程
供试品：取本品40支，每支在酒精灯外焰过火2～3秒，在易折点处将供试品掰开，过火2～3秒后将供试品放在酒精灯火焰的附近，以转速不大于160转/min的速度将所有供试品1/2吸入一次性全封闭集菌器内，滤过，每筒使用300ml冲洗液进行冲洗，每次冲洗100ml，滤过，冲洗后分别吸入100ml的硫乙醇酸盐流体培养基和100ml改良马丁培养基。
取相应溶剂和稀释剂同法操作，作阴性对照。
将硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基分别置于培养温度为30℃～35℃和23℃～28℃的培养箱中培养14天，在此期间每天观察结果，供试品应无菌生长，阴性应无菌生长。
阳性对照：另取20支，在阳性对照室内，同法操作，取300ml冲洗液进行冲洗，每次冲洗100ml，在最后一次冲洗液中接种1ml含不大于100cfu的金黄色葡萄球菌，滤过，吸入100ml的硫乙醇酸盐流体培养基，作为阳性对照。
阳性对照置阳性对照生化培养箱中，30℃～35℃培养48～72h，供试品阳性应呈阳性。
6.4 含量测定
6.4.1 检验仪器：电子天平、紫外-可见分光光度计
6.4.2 对照品：烟酰铵对照品
6.4.3 检验方法
照《紫外-可见分光光度法标准操作规程》测定。
供试品溶液制备：精密量取本品0.8ml，加水稀释并定容至100ml，制成每1ml中约含40μg的溶液，作为供试品溶液，在252nm波长处测定吸光度。
对照品溶液配制：精密称定经105℃干燥至恒重的烟酰铵对照品约10mg，置于100ml 量瓶中，加水溶解并定量稀释至刻度，再精密量取上述溶液5ml于25ml量瓶中，制成每1ml中含20μg的溶液，作为对照品溶液。
在261nm的波长处测定吸收度。
计算结果乘以1.810即得甘草酸二铵含量。
6.4.4 计算公式
式中：
A对为对照品的吸光度
％
标示量
对
供
供100
810
.1
n
n
f
⨯
⨯
⨯
⨯
⨯
⨯
=
X
W
A
对照品吸光度
对照品纯度
对照品取样量
为校正因子
⨯
=
f
A供为供试品的吸光度
n对为对照品的稀释倍数
n供为供试品的稀释倍数
W为理论装量
6.4.5 限度：本品含甘草酸二铵（C42H68N2O16）应为标示量的93.0%～10
7.0%。
7 相关文件
SOP-11-FF-051《试剂配制标准操作规程》
SOP-11-FF-002《紫外-可见分光光度法标准操作规程》
SOP-11-FF-017《pH值测定法标准操作规程》
SOP-11-FF-008《高效液相色谱法标准操作过程》
SOP-11-FF-048《装量差异及装量检查法标准操作规程》
SOP-11-FF-040《不溶性微粒检查法标准操作规程》
SOP-11-FF-044《可见异物检查法标准操作规程》
SOP-11-FF-064《无菌检查法标准操作规程》
8 修订历史无
9 附件
附件 1 甘草酸二铵注射液检验记录编号：SOP-11-CP-001-R01-00。
