临床生化实验方法的选择和评价

临床生物化学检验质量控制流程临床生化检验室全面质量控制（TQC）是利用现代科学管理的方法和技术检测分析过程中的误差，控制与分析有关的各个环节，确保实验结果的准确可靠。

一、分析前质量保证(一) 人员的素质和稳定性凡进入生化专业的工作人员上岗前应培训，了解本专业的实验室工作流程，掌握各种设备的操作、维护、保养，熟练应用实验室LIS系统，掌握各项目检测原理及影响因素，熟练应用比对方法。

(二) 实验室的设置和工作环境实验室布局合理，环境整洁，仪器间应进行防尘处理，温度15~30°C，相对湿度<65%。

(三) 实验仪器的质量保证1. 分析仪器的性能检查1.1 波长校正在更换光源灯、重新安装、搬运或检修后，以及仪器工作不正常时，都要进行波长校正。

就是正常工作的仪器，每隔一个月也要检查一次，这样才能保证读数与通过样品的波长符合，保证仪器的最大灵敏度。

1.2 线性检查包括仪器线性及测定方法线性两个方面的检查。

线性误差表现为溶液的浓度与吸光度不成线性关系，出现正偏离或负偏离的现象。

这种偏离，一是溶液本身不符合比耳定律，此现象叫做化学偏离；二是仪器本身各种因素的影响，使吸光度测定值与浓度之间不成线性关系，这种现象叫做仪器偏离。

仪器偏离的因素很多，如杂光、有限宽带、检测器噪声、环境条件的变化、波长的变动、比色杯的误差、辐射光的非平行性、检测器本身的非线性等。

1.3 稳定性检查当电源电压在220~230V围变化时，仪器读数漂移不应超过透光度标尺上限值的±1.5%。

在电源电压不变的条件下，在3分钟其读数漂移不应超过标尺上限值的±0.5%。

1.4 重复性检查在波长、工作状态、电源电压、比色杯等合格的前提下，可进行重复性检查。

用重铬酸钾溶液（30、60、90、190mg/L）在波长440nm，将各浓度管连续测3~5次，各浓度管中最大差值误差小于1%T为合格。

1.5 灵敏度检查将重铬酸钾液配制成30和32.5mg/L及120和122.5mg/L的4种应用液（浓度差两组各为2.5mg/L）。

临床生化检验分析质量指标临床生化检验是一种重要的医学检验方法，通过对患者的体液样本进行分析，可以获得关于患者体内生物化学代谢状态的信息，为临床诊断和治疗提供了重要的参考依据。

而临床生化检验分析质量指标则是评价检验结果的准确性和可靠性的重要标准。

首先，作为临床生化检验的重要指标，精确度是评价分析质量的关键因素之一。

精确度是指检验结果与真值之间的接近程度，包括系统误差和随机误差两个方面。

系统误差是由于实验条件、试剂、仪器等因素引起的固定的偏差，而随机误差则是由于实验操作过程中的不确定性引起的波动。

为了提高精确度，需要严格控制实验条件，确保试剂的质量和稳定性，采用准确的仪器和方法，同时加强人员培训，从而减小误差对结果的影响。

其次，在临床生化检验中，灵敏度和特异度也是评价分析质量的重要指标。

灵敏度是指检验方法能够对阳性样本准确地识别出来的能力，特异度是指检验方法能够对阴性样本准确地识别出来的能力。

提高灵敏度可以减少假阴性结果的发生，提高特异度可以减少假阳性结果的发生。

为了提高灵敏度和特异度，需要选择合适的检验方法和标准，确保方法的准确性和稳定性，在临床应用中根据实际需要进行合理调整，从而提高检验结果的可靠性。

此外，稳定性也是评价临床生化检验分析质量的重要指标之一。

稳定性是指检验结果在不同存储条件和时间的变化情况。

对于生化指标来说，可能受到温度、光照、PH值等因素的影响，因此需要在适当的条件下进行样本的采集、保存和运输，以保证结果的准确性和可靠性。

同时，还需要建立合理的质控体系，定期进行内部和外部质量控制，及时发现和纠正可能存在的问题，确保检验结果的稳定性和可靠性。

最后，参考范围的确定和标准化也是评价临床生化检验分析质量的重要内容。

参考范围是指正常人群中某一指标的变异范围，通常以百分位数表示。

在临床应用中，参考范围的确定对于判断患者是否健康或是否存在某种疾病非常重要。

因此，需要根据不同人群的特点和检验方法的特性，进行科学、准确的参考范围确定，同时加强标准化管理，确保不同实验室之间的结果可以相互比较和参考。

自动生化分析仪实际K值测定实际K值：理论K值受样品和试剂的加量准确度、比色杯光径准确度，尤其是ε的影响。

ε在波长和温度等不同时有所不同，故有必要获得用户所用分析仪的实际ε，再计算K值，此为~。

一、340nm波长实际K值测定【实验原理】：通过有NAD+（NADP+）参与的反应途径，用NADH或NADPH标准液来校正仪器。

用己糖激酶（HK）方法测定葡萄糖时，葡萄糖的消耗与NADH的生成呈等摩尔关系。

葡萄糖有标准纯品，当反应达到终点时，NADH的摩尔数等于标准的葡萄糖摩尔数。

在需要校正的仪器上测其A即可求得实际摩尔吸光系数，计算出实际K值。

【注意事项】1．减少偶然误差重复测定10次，当CV>5％时，则重新测定10次。

2．减少系统误差使用实际K值计算酶活性。

3．如果实际ε值与理论ε值偏差过大，需对仪器检修和校正。

二、405nm波长实际K值测定【实验原理】：许多酶活性测定时，以人工“色素原”为底物，经酶作用后可释放出在405nm 波长具有吸收峰有色的反应产物，如对硝基苯酚(4-NP)、对硝基苯胺(4-NA)、对硝基-5-氨基苯甲酸(ANBA)。

他们在405nm波长时的理论ε分别为18 700、9 870、9 490。

可使用其相应的纯标准品在需要校正的仪器上测其A即可求得实际ε，计算出实际K值。

以ALP实验(产物为4-NP) 为例测定实际K值。

【注意事项】1．4-NP标准品纯度要求较高，必要时需纯化。

2．其他注意事项参见340nm K值校正。

三、如何校正K值在理论K值或实际K值得情况下，测定某标准品的含量，若测得的结果偏低，则需要把测得的结果调整至原标准品的含量，此时调整的数值称为校正因子，则校正K值=理论（实际）K值×校正因子=理论（实际）K值×校准值÷实测值NADH正负向反应测定酶活性一、血清乳酸脱氢酶测定LD催化反应式为：L-乳酸+ NAD+（LD）→丙酮酸+ NADH + H+在反应过程中，乳酸被氧化生成丙酮酸，同时NAD+还原为NADH。

临床化学分析方法选择与评价本文将就临床生化检测中的试剂选择，试验方法的选择，以及实验结果的评价方法进行简单的阐述。

使大家对试验方法的各种评价指标和评价方法有充分的了解，同时能让大家充分认识到实验室的检测方法评价的重要性。

一、对试剂及试剂盒的选择（一）对试剂的要求为了保证一定质量，对生化试剂的要求，首先实验室使用的检验试剂应通过国家食品药品监督管理局 SFDA 的批准，拿到批准文号；第二，产品的名称，应参照 SFDA 颁布的“体外诊断试剂分类目录”确定产品的名称；三，规格型号，应规定可进行测试的次数，也可用包装规格表示。

（二）对试剂盒的要求对试剂盒的要求都有哪些？第一，检测原理，即方法学原理，简单扼要说明测定原理及名称；第二，试剂组份，要明确说明试剂中组份，组成成份的数量、比例及浓度，应采用国际标准或法定单位；第三，所用校准品应该符合国家食品药品监管管理局（ SFDA ）的标准和要求；第四，试剂的稳定性，应该标明试剂盒的贮存条件与有效期，同时还要注意开瓶后试剂的贮存条件与有效期。

有特殊要求时应该明确说明；第五，检测程序，包括校准和质控的程序；第六，参考区间及其参考人群的说明，实验室给临床发报告时候，必须要给出参考区间，结果的参考区间切忌不要直接使用国外人群的参考值，不能代表中国人群的实际情况。

第七，诊断性试剂的性能评估，它的准确性对临床诊治疾病非常重要。

评估包括试剂的敏感性、特异性、精密度、线性范围或可报告范围、抗干扰能力、准确性、溯源性、方法对比结果等；第八，注意事项，应该注明是体外诊断用，以及化学品危害的说明等。

二、实验方法和标准品的选择实验方法根据准确度与精密度的不同，可以分为三级，即：决定性方法（一级参考方法）、参考方法（二级参考方法）和常规方法（厂家选定方法和终用户实验室常规方法）。

（一）标准品的分级标准品可以分为一级标准品（一级参考物质）、二级标准品（二级参考物质）和校准品，前两级是国家认可的，它有标准物质证书。

临床生化诊断试验的诊断性能评价第一节概述临床诊断试验(diagnostic test)是指临床上用于某种疾病诊断的诊断方法。

广义上讲，临床诊断试验不仅包括各种实验室检查、影像诊断和仪器诊断，也包括一些病史及临床检查提供的资料。

随着科学技术的进步与发展，用于疾病诊断的临床诊断试验层出不穷，但是，并不是所有的新的临床诊断试验均比常规方法或旧的方法好。

新的临床诊断试验的性能如何，必须用合理的评价方法进行评价确定。

临床诊断试验的性能评价内容包括技术性能评价、诊断性能评价、临床效应评价和经济效益评价。

诊断性能评价的方法是基于有关流行病学调查为基础，对某种疾病的诊断方法进行评价的临床试验。

它侧重于对一种新的诊断方法，包括症状、体征、检查和检验等进行临床试验评价。

临床生化诊断试验是指临床生化实验室中用于某种疾病诊断、筛查和监测的检查方法或项目。

临床生化诊断试验的诊断性能评价，不同于技术性能的方法学评价，它以流行病学调查为基础，评价某种临床生化诊断项目在某种疾病诊断方面的诊断价值。

一、临床诊断试验的数据与患病情况的关系诊断试验分定性试验和定量试验。

定性试验的结果分为阳性和阴性结果，定量试验的结果为一系列连续的计量数据，这些数据可被分界值将其分为两个部分，也可判断为阳性和阴性结果。

一般情况下，由quot;正常人"与"病人"的诊断试验的结果的分布有部分重叠，因此，诊断试验的结果和患某病的情况之间可能出现四种关系：①真阳性（True positive，TP）指经试验而被正确分类的患者的数目。

②假阳性（False positive，FP）指经试验而被错误分类的非患者的数目。

③真阴性（True negative，TN）指经试验而被正确分类的非患者的数目。

④假阴性（False negative，FN）指经试验而被错误分类的患者的数目。

结果见图8-1。

二、临床诊断试验的诊断性能评价的层次（一）诊断试验对疾病诊断的准确性、有效性和可靠性诊断试验提供的数据有两个方面的作用：①对疾病的状态识别，即鉴别有无疾病。

实验方法的选择及评价临床生化实验方法的选择及评价教学目标和要求☐掌握：校准物与质控物的概念及其区别，重复性实验、回收试验、干扰试验、对比实验的方法及指标的计算☐熟悉：参考值的概念，实验方法的性能标准及其评价指标、医学决定水平、危急值☐了解：方法和标准品的分级一、方法的分级：决定性方法、参考方法、常规方法 1.1 决定性方法（definitive method）☐准确度最高☐系统误差最小☐经过详细的研究，没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法☐测定结果为―确定值‖，与―真值‖最接近☐技术要求太高，费用昂贵☐不直接用于鉴定常规方法的准确性☐只用于发展及评价参考方法和标准品1.2 参考方法（reference method）☐准确度与精密度已经充分证实的分析方法☐干扰因素少，系统误差很小，与重复测定的随机误差相比可以忽略不计☐有适当的灵敏度、特异性、较宽的分析范围(线性) ☐在条件优越的实验室中经常使用☐主要应用于鉴定常规方法，评价其误差大小，干扰因素，并决定其是否可以被接受☐也用于鉴定二级标准品，为质控血清定值，也可用于评价商品试剂盒等 1.3 常规方法（routine method）☐性能指标符合临床或其它目的需要☐有适当的分析范围☐经济实用☐偏差已知的方法（指准确度已经确定的方法，准确度不明者称为偏差未知的方法）☐常规方法在作出评价以后，经有关学术组织认可，可以作为推荐方法常见项目的方法分类二、标准物质的分级及质控物☐国际标准化委员会（International Standards Organization, ISO)对标准品（参考物）定义：它的一种或几种物理或化学性质已经充分确定，被用于校正仪器或用于评价一种测定方法的物质。

☐标准品分级：⏹ 一级标准物质⏹ 二级标准物质⏹ 校准物☐质控物2.1 标准物质（standard material ）☐又称参考物质（ reference material ），是一类充分均匀，并具有一个（或多个）确定特性值的材料或物质☐用以校准仪器设备、评价测量方法，或给其它物质赋值☐标准物质的定值结果一般表示为：标准值±总不确定度☐ “标准物质证书”是介绍标准物质的技术文件，是研制单位向用户提出的质量保证书和使用说明 2.2 一级标准物质☐又称原级参考物( primary reference material )☐是已经确定的稳定而均一的物质，它的数值由决定性方法确定，或由高度准确的若干方法确定，所含杂质也已经定量☐用于校正决定性方法，评价及校正参考方法以及为―二级标准品‖定值☐一级标准品都有证书认可的参考物质☐认可的参考物质（Certified Reference Material, CRM ），其特性值由建立了溯源性的程序确定，且每个标准值都附有给定置信水平的不确定度☐ CRM 470由欧洲共同体参考局制备提供☐ CRM 470含14种血清蛋白的定值：白蛋白、Ig A、a1-抗胰蛋白酶、Ig G、C3、Ig M、C4 、巨球蛋白、铜蓝蛋白、前白蛋白、C反应蛋白、转铁蛋白、酸性糖化蛋白、触珠蛋白 2.3 二级标准物质☐又称二级参考物（secondary reference material）☐用一级标准物质校准，参考方法定值☐用于校准常规方法、为质控物定值☐国内的几种二级参考物：⏹ ⏹ ⏹ ⏹红细胞微粒标准物质— GBW E 090001 胆红素标准物质— GBW E 090002氰化高铁血红蛋白溶液标准物质— GBW E 090004 纯化血红蛋白标准物质— GBW E 0900112.4 校准物（ Calibrator ）及校准☐用二级标准物质和常规方法校准☐用于对常规方法和仪器进行校准的物质即为校准物☐典型产品：⏹ Roche公司的CFAS（ Calibrator for automation system）⏹ BECKMAN公司的multi Calibrator☐什么是校准（Calibration）：⏹ 用已知浓度的校准物（ calibrator ）在规定条件下进行测定以找出一个参考点（K值）的过程即为校准⏹ K=校准物浓度/(校准物吸光度－试剂空白吸光度)2.5 质控物（control material ）☐质量控制（Quality control）是保证产品（检验结果）满足要求的过程☐用于确定测量过程的系统误差，确定是否可以发出报告☐具有与检测过程相适应的特性，其成份与检测样本的基质相同或相似☐用于进行质量控制的物质即为质控物。

临床生化检查操作方法临床生化检查是临床医学中常用的一种检查手段，通过对患者的血液、尿液、体液等样本进行化学成分的检测，以及相关酶、蛋白质和代谢物的定量分析，从而获得临床诊断和治疗的重要信息。

操作方法的规范性和准确性对于检查结果的可靠性至关重要。

以下是临床生化检查的操作方法的详细介绍。

一、采集标本：1. 血液标本的采集：采用无菌操作技术，首先对患者进行适当的准备工作，观察采血部位的皮肤是否有感染或者受伤，选择最佳的采血部位，用75%酒精或碘伏消毒皮肤。

待消毒液干燥后，将采血针插入血管，并用一次性注射器采集适量的血液样本。

2. 尿液标本的采集：让患者进行体位改变，取晨尿或者全天的尿液作为标本。

在采集前，要让患者对尿液容器和个人卫生进行准备，然后清洁外生殖器，用无菌尿杯收集尿液。

3. 其他体液标本的采集：根据具体的实验要求进行操作，家居情况下由专业医务人员进行操作。

二、标本处理：1. 血液标本的处理：采集完成后，将血液标本转移到干净的试剂管中，并用适当的抗凝剂处理，如EDTA、肝素等。

对于需要血清的检查，应该在样本凝固后离心分离血清。

2. 尿液标本的处理：将采集的尿液标本转移到干净的试剂管中，进行适当的处理，如稀释、离心、沉淀等。

根据实验目的的不同，处理方法也会有所不同。

3. 其他体液标本的处理：根据具体的实验操作要求，进行相应的标本处理。

三、检测操作：1. 准备实验物品：准备所需的试剂、仪器和耗材等实验物品，并按照相关规范对其进行检验和校准。

2. 样本的加样：将处理好的标本加样到相应的检测仪器中，注意加样的数量和质量以及操作的规范性。

3. 实验操作：按照实验操作手册的要求，进行相应的实验操作，如温度、时间、反应物的加入顺序等方面的操作要求。

4. 数据记录：记录实验操作的过程和结果，包括样本的编号、操作的时间、试剂和仪器的规格、结果的数字和单位等。

四、结果分析和报告：1. 结果分析：对实验获得的数据进行分析，比对参考值，并结合患者的临床资料进行结果的解释。