第十二讲义章3液相色谱分析法4
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经典液相色谱知识点总结液相色谱(Liquid Chromatography, LC)是一种以液相为驱动相,将待测样品在静态相中进行分离的色谱分析方法。
液相色谱在分离生化样品、药物、天然产物等化合物时得到了广泛的应用。
本文将系统总结液相色谱的知识点,包括原理、分类、仪器设备、色谱柱、检测方法等方面的内容。
一、原理液相色谱的原理基于化合物在静态相(色谱柱填料)和流动相(溶剂)之间的分配与分离过程。
待分析的化合物在流动相与静态相之间的分配系数不同,因此当待测样品溶液通过色谱柱时,根据不同化合物在静态相中的分配行为,可以实现化合物的分离。
在液相色谱中,流动相主要由溶剂和缓冲液组成,可以根据需要进行调整。
而静态相则是色谱柱填料,填料的选择对色谱分离效果至关重要。
填料的种类、粒径、表面性质等都会影响到分离效果。
二、分类根据静态相的不同,液相色谱可以分为几种常见的类型:1、反相色谱:静态相是疏水性填料,流动相是亲水性溶剂,被分离物质的极性与填料相反。
反相色谱对极性化合物具有较好的分离效果,因此在分析生化样品、药物等方面得到了广泛的应用。
2、离子交换色谱:静态相是带电离子交换树脂填料,可进行阴离子或阳离子的分离。
离子交换色谱适用于分析离子化合物,如蛋白质、核酸等。
3、尺寸排除色谱:静态相是孔径大小均一的凝胶填料,根据分子大小进行排除分离。
尺寸排除色谱适用于分析大分子化合物,如蛋白质、多糖等。
4、亲和色谱:通过生物亲和分离剂与化合物间的特异性结合实现分离,主要应用于生化分析领域。
5、扩展液相色谱:液相色谱的一种改良方法,通过使用超高性能色谱柱和压力增加装置来提高分辨率。
三、仪器设备液相色谱仪器主要包括流动相输送系统、样品进样装置、色谱柱和检测器等部分。
1、流动相输送系统:用于输送流动相的高性能泵,包括梯度泵和等速泵两种,可实现不同流动相梯度的传送。
2、样品进样装置:通常采用自动进样系统,可实现自动进样、样品预处理等功能。