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紫外可见分光光度法测定注射用山楂总黄酮中总黄酮的含量

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紫外可见分光光度法测定注射用山楂总黄酮中总黄酮的含量
【摘要】目的建立测定注射用山楂总黄酮中总黄酮的含量的方法。

方法采用紫外可见分光光度法，检测波长为500nm，无水芦丁为对照品。

结果芦丁在8.12～48.72μg/ml范围内呈良好的线性关系，r=0.9998（n=6），平均回收率为100.0%，RSD=0.13%（n=6）。

结论所用方法灵敏、准确、重现性好、结果可靠，可用于注射用山楂总黄酮中总黄酮的含量测定。

【关键词】注射用山楂总黄酮；总黄酮；紫外可见分光光度法；含量测定
山楂总黄酮即山楂叶总黄酮，是从山楂叶中提取的黄酮类化合物的总称，目前从山楂总黄酮中分离出的单体有三十多种，有牡荆素葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、牡荆素、金丝桃苷、槲皮素等。

山楂叶中的黄酮类化合物的药理作用有很多方面，例如对心、脑血管疾病有确切明显的疗效，山楂总黄酮对心绞痛、冠心病、心律失常、脑供血不足、脑动脉硬化症、脑血栓、老年性痴呆及各种脑损伤后遗症可产生积极的预防和治疗作用。

1.仪器与试药
TU-1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；AE240电子天平（瑞士梅特勒公司）；所用试剂均为色谱纯。

2.方法与结果
2.1线性关系考察
对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品约10.08mg，置50ml容量瓶中，加乙醇适量使溶解，用乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

（每1ml含无水芦丁0.2030mg）[1]。

标准曲线的制备精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置25ml容量瓶中，各加水至6ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，使摇匀放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置20分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（中国药典2010年版一部附录V A），在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、测试溶液中对照品浓度为横坐标绘制标准曲线。

回归方程为：y=0.0135x+0.0089 r=0.9998（n=6），表明对照品浓度在8.12～48.72μg/ml范围内呈良好的线性关系，符合含量分析测试要求。

图1 芦丁对照品标准曲线
2.2显色后测试溶液稳定性试验
取显色后的对照品测试溶液及供试品测试溶液，在60分钟内于500 nm波长处进行连续扫描，评价显色后测试溶液的稳定性。

对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品约10.26mg，置50ml容量瓶中，加乙醇适量使溶解，用乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

（每 1 ml含无水芦丁0.2052mg）。

供试品溶液的制备：取注射用山楂总黄酮0.1512g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇25ml，密塞，摇匀，超声处理5分钟，放置3小时以上，滤过，精密量取续滤液2ml，置25ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

试验方法：精密量取上述对照品溶液及供试品溶液各2ml，分别置25ml容量瓶中，各加水至6ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，使摇匀放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（中国药典2010年版一部附录V A），在500nm的波长处分别取显色后0、5、10、15、20、25、30、40、50、60分钟的测试溶液测定吸光度。

结论：对照品溶液及供试品溶液显色后的测试溶液在20分钟后达到较稳定状态，在显色后20～60分钟内稳定性良好，符合含量分析测试要求。

因此，确定本含量测定方法显色时间为20分钟。

2.3重复性试验
供试品溶液的制备：取注射用山楂总黄酮0.1522g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇25ml，密塞，摇匀，超声处理5分钟，放置3小时以上，滤过，精密量取续滤液2ml，置25ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

结论：该含量测定方法的重复性良好，符合含量分析测试要求。

2.4供试品溶液稳定性试验
供试品溶液的制备：取注射用山楂总黄酮0.1530g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇25ml，密塞，摇匀，超声处理5分钟，放置3小时以上，滤过，精密量取续滤液2ml，置25ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

试验方法：取供试品溶液，室温、密闭放置，于12小时内测定，评价供试品溶液的稳定性。

分别于0、3、6、9、12小时取供试品溶液2ml，置25ml容量瓶中，照总黄酮含量测定方法进行测定，计算RSD值。

结论：供试品溶液置室温、密闭条件下放置12小时，稳定性较好，符合含量分析测试要求。

2.5加样回收试验
对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品约10.15mg，置50ml容量瓶中，加乙醇适量使溶解，用乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

（每1ml含无水芦丁0.2030mg）。

供试品溶液的制备：取注射用山楂总黄酮0.1501g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇25ml，密塞，摇匀，超声处理5分钟，放置3小时以上，滤过，精密量取续滤液2ml，置25ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，取供试品溶液，照总黄酮含量测定方法进行测定，注射用山楂总黄酮成品总黄酮含量为90.7mg/支（显色后供试品溶液总黄酮含量为34.8μg/ml）。

试验方法：精密量取6份供试品溶液各6ml，分别加入对照品溶液0.8ml、0.8ml、1.0ml、1.0ml、1.2ml、1.2ml，照总黄酮含量测定方法进行测定，计算RSD 值。

2.7样品测定
供试品溶液的制备分别取10批注射用山楂总黄酮0.15g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇25ml，密塞，摇匀，超声处理5分钟，放置3小时以上，滤过，精密量取续滤液2ml，置25ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

试验方法：取供试品溶液，照总黄酮含量测定方法进行测定。

3.讨论
采用紫外可见分光光度法建立了总黄酮含量测定的方法，经方法学研究证实，该方法灵敏、准确、重现性好、结果可靠，可用于注射用山楂总黄酮中总黄酮的含量测定。

[科]
【参考文献】
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（一部）[M].中国医药科技出版社，2010：30.。

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紫外分光光度法测定植物黄酮含量的方法 (2)

紫外分光光度法测定植物黄酮含量的方法 (2)


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光 度 法 具 有 重 复 性 好 、准 确 、简 便 、易 掌 握 、不 需 要 复 杂 的仪器设备， 加之所需试剂便宜易得， 因此该方法应用
以 淫 羊 藿 苷 对 照 品 ， 用 ＡｌＣｌ３－ 甲 醇 体 系 ， 于 ４１３ ｎｍ 测 定淫羊藿中总黄酮含量， 该方法明显优于直接法在
于测定植物中黄酮含量最为广泛［５］。近年来， 紫外分光 ２７０ ｎｍ 处［１０］测定的结果。
［２２］ Ｇｒｉｇｅｌｍｏ－ Ｍｉｇｕｅｌ Ｎ， Ｇｏｒｉｎｓｔｅｉｎ Ｓ， Ｍａｒｔｉｎ － Ｂｅｌｌｏｓｏ Ｏ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａ－
山楂叶总黄酮分光光度法测定—科标检测

山楂叶总黄酮分光光度法测定—科标检测

山楂叶总黄酮的测定—分光光度法—科标检测方法名称： 山楂叶—总黄酮的测定—分光光度法应用范围：本方法采用分光光度法测定山楂叶中总黄酮（以无水芦丁计算)的含量。

本方法适用于蔷薇科植物山里红Crataegus pinnatifidaBge.var.major N.E.Br.或山楂Crataegus pinnatifida Bge.的干燥叶。

方法原理： 本品细粉置于索氏提取器中，依次加入三氯甲烷和甲醇提取，蒸干，加稀乙醇溶解，滤过，续滤液中依次加入水、5%亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液、氢氧化钠试液一定量，摇匀，放置，立即置紫外可见分光光度计, 于波长500nm 处测定吸光度，以无水芦丁（C27H30O16)计算总黄酮含量。

试剂：1. 三氯甲烷2 .5%亚硝酸钠溶液3 .10%硝酸铝溶液4.氢氧化钠试液仪器设备：1. 紫外-可见分光光度计2. 索氏提取器试样制备： 对照品溶液的制备精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品25mg ，置50mL 量瓶中，加乙醇适量，超声处理使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀。

精密量取20mL ，置50mL 量瓶中，加水至刻度，摇匀，制成每1 mL 中含无水芦丁0.2mg 的溶液。

操作步骤： 1. 标准曲线的绘制精密量取对照品溶液1 mL 、2 mL 、3 mL 、4 mL 、5 mL 、6 mL ，分别置25 mL 量瓶中，各加水至6 mL ，加5%亚硝酸钠溶液1 mL ，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1 mL ，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10 mL ，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白，立即照分光光度法，在500nm 波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

2. 供试品的测定取本品细粉1g ，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流提取至提取液无色，弃去三氯甲烷液，药渣挥去三氯甲烷，加甲醇继续提取至无色（约4小时)，提取液蒸干，残渣加稀乙醇溶解，转移至50 mL 量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，作为供试品储备液。

紫外-可见分光光度法动态分析承德地区山楂叶总黄酮的含量

紫外-可见分光光度法动态分析承德地区山楂叶总黄酮的含量


【 关键词】 山楂叶 ； 紫外一可见分光光度法； 采收期 ； 总黄酮
【 中图分类号】 Ｒ ２ ８ ５ 【 文献标ｉ Ｐ ， ｔ ｉ ￣ － ｌ Ａ 【 文章编号］ １ ０ ０ ４ － ． ６ ８ ７ ９ （ ２ ０ １ ４ ） ０ １ － ０ ０ ７ ８ － ０ ２
山楂 叶 为蔷薇 科植 物 山里红（ Ｃ ｒ ａ ｔ ａ ｅ ｇ ｕ ｓ ｐ ｉ ｎ ｎ ａ ｔ ｉ ｉ ｆ ｄ ａ Ｂ ｇ ｅ ． Ｖ ａ ｒ ． Ｍａ ｊ ｏ ｒ Ｎ ． Ｅ ． Ｂ ｒ ． ） 或 山楂（ ｃ ￣ ｔ ａ ｅ ｇ ｕ ｓ ｐ ｉ ｎ ｎ ａ ｉ ｆ ｉ ｆ ｄ ａ Ｂ ｇ ｅ ． ） 的干 燥 叶， 夏、 秋二季采收 。 山楂 叶中所含的黄酮类 成分具 有降 压、 降糖 、 降脂 、 强心等多种药理 作用 ， 尤其对缺血性心肌损 伤有明显的保护作用 。 山楂叶早在东晋时代就有入药治病 的记载 ， 本草纲 目谓山楂叶煮汁治漆疮， 现在 已经被２ ０ １ ０ 版 中华人 民共和 国药典》 收载 。 山楂叶主产于河北承德、 兴 隆以及辽宁、 山东和山西等地 。 不 同产地、 不 同采收期的中 药材， 所含有的化学组 分以及含量可能会有所不同， 因此， 考察 山楂叶的最佳采集期对提高 山楂叶的利用具有重要的
１仪器与试剂
８ ４ ５ ３ 紫外一可见分光光度仪 ， 美 国惠普公司 ； Ａ Ｇ － ２ ４ ５ 电 子分析天平 ， 瑞士梅特勒公司 ； Ｋ Ｑ － ７ ０ ０ 型超声波清洗器 ， 昆
山市超声仪器有限公司。 芦丁对照品（ 批号： １ ｏ ｏ ｏ ８ ｏ － ２ ｏ ｏ ７ ｏ ７ ） ， 中国药品生物制 品检 定所 ； 供试 品山楂 叶采 自承德（ ５ － １ ｌ 月每月采集一次， 采摘后立即暴晒、 晾干） 由河北 民族师范
山楂中总黄酮的提取及含量测定

山楂中总黄酮的提取及含量测定

山楂中总黄酮的提取及含量测定（吕培银）一、实验目的1.掌握黄酮类物质的提取方法。

2.掌握分光光度法测定黄酮含量的原理。

二、实验原理山楂富含黄酮类化合物，具有重要的生理活性和药效。

黄酮化合物的母核由C6-C3-C6即A-C-B三个环组成，A环和B环具有芳香化合物的性质，C环具有黄酮化合物的独特性质。

母核中某些位置如C3和C5上含有羟基或具有邻二酚羟基时能与铝、铅等金属离子形成稳定的络合物，这些络合物在光谱上产生明显变化。

黄酮与金属离子的这种作用不仅可以用于鉴别这类成分中羟基的位置，还可以作为进行定量分析的基础。

本实验利用碱性条件下，在亚硝酸盐存在时，硝酸铝与黄酮进行络合反应，生成红色络合物，且在500 nm左右有最大吸收，可利用分光光度法进行测定。

因此，本实验采用索氏提取法提取山楂中的总黄酮，并采用分光光度法对其含量进行测定。

三、实验用品1、仪器：索氏提取器、平底烧瓶、电热套、量筒、试管、容量瓶、移液管、玻璃比色皿、可见分光光度计等。

2、药品：山楂粉末、无水乙醇、芦丁标准品、硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠等。

四、实验内容1、山楂总黄酮的提取精密称取山楂粉末6 g,滤纸包好后置于250 mL索氏提取器中，加60%乙醇150 mL，连续回流提取1-1.5h, 冷却，将提取液转移至250 mL的容量瓶中，将圆底烧瓶润洗3次，60%乙醇定容至刻度线，摇匀，过滤。

取1 mL滤液稀释至10mL,摇匀，即为样品待测溶液。

2、芦丁标准溶液的配制精密称取芦丁20 mg，加入60 mL无水乙醇超声使其溶解后，以蒸馏水定容至100mL，摇匀，即得0.2 mg/mL的芦丁标准液。

3、芦丁标准曲线的制定分别精密吸取芦丁标准液5mL、6mL、7mL、8mL、9mL至10mL容量瓶中，60%乙醇定容后得到浓度为0.10 mg/mL、0.12 mg/mL、0.14 mg/mL、0.16mg/mL 和0.18mg/mL的芦丁系列浓度梯度溶液。