高效液相色谱内标法测定香精香料中的水杨酸

实验六阿司匹林原料药中水杨酸的液相色谱分析测定一、实验目的1. 掌握高效液相色谱定性、定量的原理及方法。

2. 了解高效液相色谱仪的结构和操作。

3. 了解高效液相色谱一般实验条件。

二、实验原理1.高效液相色谱分离的基本原理分析试样中各组分在流动相推动下，通过装有固定相的色谱柱到达检测器。

由于不同化合物分子结构和物理化学性质不同，与固定相及流动相的作用力不同，在两相中具有不同的分配系数，各组分在两相中进行反复分配而被分离。

在同一色谱条件下，标准物质与待测样品中同一化合物保留时间一致是色谱法定性的基本依据。

定量分析首先要选择合适的色谱柱和洗脱液系统及对被分析物反应较为灵敏的检测器。

被测组分要与其他成分有足够的分离度。

一般要求被定量的物质与相邻组分的分辨率要大于1.5，分辨率R s用下式计算：2（t R2-t R1）R s= ——————ω1+ω2式中：t R2-t R1为两个组分的保留时间之差；ω1、ω2为两个谱带基线宽度。

当R s≥1时，峰面积重叠小于2%，定量结果比较准确。

2.外标校正曲线法定量校正曲线是通过测定一系列已知浓度的标准样品，经曲线拟合而得到的含量-响应值（峰面积或峰高）的曲线。

测定待分析样品的响应值后，用校正曲线进行含量计算的方法为外标法。

3.水杨酸含量分析阿司匹林（乙酰水杨酸）为常用的解热镇痛药，并被用于防治心脑血管病。

由于其很容易降解为水杨酸，药物中水杨酸含量测定被用于阿司匹林的质量监测。

用液相色谱法可以很好地分离阿司匹林和水杨酸，水杨酸的含量可用外标法进行定量测定。

三、仪器与试剂1.高效液相色谱仪（包括高压输液泵、进样阀及紫外检测器）固定相：C18键合多孔硅胶小球，5μm。

柱尺寸：150mm×4.6mm I.D.。

20μL定量环。

2.试剂双蒸水；甲醇（色谱纯）；冰醋酸（分析纯）；水杨酸（标准品）；乙酰水杨酸（阿司匹林）（原料药品）。

四、实验步骤1.标准溶液及样品溶液的配制（1）水杨酸标准溶液的配制称取水杨酸标准品8.1mg，溶解后，转移至1000mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为水杨酸储备液。

化学分析计量CHEMICAL ANALYSIS AND METERAGE第30卷，第1期2021年1月V ol. 30，No. 1Jan. 202145doi ：10.3969／j.issn.1008–6145.2021.01.009高效液相色谱法测定洗手液中水杨酸和对氯间二甲苯酚杜文龙，傅力行，何健，叶益峰（纳爱斯集团有限公司，浙江丽水　323000）摘要　建立高效液相色谱仪同时测定洗手液中水杨酸和对氯间二甲苯酚含量的方法。

采用Shim-pack Scepter C 18柱(250 mm ×4.6 mm ，5 μm)，流动相为甲醇–0.1%磷酸水溶液(体积比为70∶30)，流量为1.0 mL ／min ，柱温为室温，检测器为岛津SPD–M20A 二极管阵列检测器，检测波长为280 nm 。

水杨酸和对氯间二甲苯酚与色谱峰面积呈良好的线性关系，线性范围分别为40～400 μg ／mL ，20～200 μg ／mL ，相关系数均为r 2=0.999 9。

方法的检出限为0.1 μg ／mL ，水杨酸和对氯间二甲苯酚测定结果的相对标准偏差分别为0.79%，1.39%(n =5)，加标回收率为96.9%～99.8%。

该方法方法简便、快速、灵敏度高、重现性好，能同时准确检测洗手液中水杨酸和对氯间二甲苯酚的含量。

关键词　洗手液；水杨酸；对氯间二甲苯酚；高效液相色谱法中图分类号：O657.7 文献标识码：A 文章编号：1008–6145(2021)01–0045–04Determination of salicylic acid and 4-chloro-3, 5-dimethylphenol in hand sanitizer by HPLCDu Wenlong ， Fu Lixing ， He Jian ， Ye Yifeng(Nice Group limited company ， Lishui 323000， China)Abstract A method for simultaneous determination of salicylic acid and 4-chloro-3，5-dimethylphenol in hand sanitizer by HPLC was established. The column was Shim-pack Scepter C 18 column(250 mm ×4.6 mm ，5 μm). The mobile phase was formed by methanol–0.1% phosphoric acid aqueous solution (volume ratio was 70∶30) with a flow rate of 1.0 mL ／min. The column temperature was room temperature ，and the detector was the Shimadu SPD–M20A diode array detector with a detection wavelength of 280 nm. The concentration of salicylic acid and 4-chloro-3，5-dimethylphenol had good linear relationship with the chromatographic peak area in the range of 40–400 μg ／mL ，20–200 μg ／mL ，respectively. The correlation coefficients were all r 2=0.999 9. The detection limit was 0.1 μg ／mL ，the RSD was 0.79%，1.39%(n =5)，the recovery was 96.9%–99.8%. The method is simple ，rapid ，sensitive and reproducible ，and can accurately determine the contents of salicylic acid and 4-chloro-3，5-dimethylphenol in hand sanitizer at the same time without separate determination.Keywords hand sanitizer; salicylic acid; 4-chloro-3，5-dimethylphenol; high performance liquid chromatography水杨酸为植物柳树皮提取物，是一种天然的消炎药，具有杀菌功效；对氯间二甲苯酚是一种低毒性抗菌剂，对多数革兰氏阳性、阴性菌、真菌、霉菌都有杀灭功效，两种成分均可用于生产洗手液中［1］。

高效液相色谱法测定水杨酸及其羟基化产物高效液相色谱法测定水杨酸及其羟基化产物【实验目的】掌握高效液相色谱法测定水杨酸及其羟基化产物。

熟悉高效液相色谱仪的工作原理及操作方法。

【实验原理】本实验采用高效液相色谱法测定水杨酸及其羟基化产物，以pH 4.75 27.7 mmol/L醋酸盐缓冲液为流动相，C18色谱柱分离，电化学检测器Range=500nA,Ec= +0.85V下检测水杨酸和2,3-DHBA，根据保留时间定性，外标法定量。

【仪器和试剂】1．仪器：高效液相色谱仪；电化学检测器；自动进样器超纯水机等。

2．试剂：醋酸钠；冰醋酸；超纯水；水杨酸（SA）和2,3-二羟基苯甲酸（2,3-DHBA）的标准品。

【实验步骤】一、对仪器的原理及使用进行介绍（30min）二、样品的前处理（10min）模拟SA与H2O2紫外汞灯光解产生的?OH发生反应：配制含2.5μmol/L SA、2.5μmol/L 2,3-DHBA待测混合混合溶液，然后用高效液相色谱测定SA的浓度变化以及2,3-DHBA的浓度。

三、样品测定1.仪器工作条件设置（5min）电化学检测器Range=500nA,Ec= +0.85V；流动相为pH4.75 27.7 mmol/L醋酸盐缓冲液；流速：1ml/min；温度：30℃；进样体积50μl；读数方式为峰面积。

2.工作曲线的绘制（80min）配制标准系列：分别配制一系列浓度在0.1μmol/L～10μmol/L范围内的SA标准溶液和0.1μmol/L～10μmol/L范围内的2,3-DHBA标准溶液。

按照仪器条件进行检测，记录峰面积，以标准系列浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

3.样品测定（30min）按仪器测定条件测定处理好的样品中SA和2,3-DHBA的含量，以峰面积值带入绘制好的标准曲线中计算相应待测样品中SA和2,3-DHBA的浓度。

【实验结果】1.绘制标准曲线待测样品中水杨酸峰面积A1=2073310待测样品中2,3-二羟基苯甲酸峰面积A2=24465022. 结果计算【注意事项】1. 检测器基线噪音增加，灵敏度低可能是由于流动相中溶解的气体使得压力降低而产生气泡，增加了基线噪音，造成灵敏度下降，甚至无法分析；规范操作：流动相使用前必须进行脱气处理（超声脱气10~20min），以除去流动相中溶解的气体。

高效液相色谱法测定食品添加剂中水杨酸段沅杏;王璐;贺兵;李干鹏;张承明【摘要】HPLC was applied to the determination of salicylic acid in food additives. The sample was dissolved with mixed solvent of methanol-H2O （9 ＋ 1）（containing 0. 1% formic acid by vol. ） and extracted ultrasonically. After filtering on 0. 22 μm filtering membrane, the solution was used for HPLC analysis. The ZORBAX SB-C18 chromatographic column （4.6 mm× 250 ram, 3.5 μm） was used for separation and a mixture of （A） formic acid-acetonitrile （0. 1＋99. 9） and （B） formic acid （0. 1＋ 99. 9）solution mixed in different ratio were used as the mobile phasein gradient elution. Fluorimetric detection at the wavelengths of （λen）280 nm and （λm） 450 nm was adopted. Linear relationship between values of peak area and mass concentration of salicylic acid was obtainedin the range of 41.60-1 664μg L ^-1, with detection limit （3S/N） of1.55μg · L ^-1. Values of recovery of the method found were in the rangeof 90. 4%-101.7%.%提出了高效液相色谱法测定食品添加剂中水杨酸含量的方法。

高效液相色谱法测定水杨酸及其羟基化产物【实验目的】掌握高效液相色谱法测定水杨酸及其羟基化产物。

熟悉高效液相色谱仪的工作原理及操作方法。

【实验原理】本实验采用高效液相色谱法测定水杨酸及其羟基化产物，以pH 4.75 27.7 mmol/L醋酸盐缓冲液为流动相，C18色谱柱分离，电化学检测器Range=500nA,Ec= +0.85V下检测水杨酸和2,3-DHBA，根据保留时间定性，外标法定量。

【仪器和试剂】1．仪器：高效液相色谱仪；电化学检测器；自动进样器超纯水机等。

2．试剂：醋酸钠；冰醋酸；超纯水；水杨酸（SA）和2,3-二羟基苯甲酸（2,3-DHBA）的标准品。

【实验步骤】一、对仪器的原理及使用进行介绍（30min）二、样品的前处理（10min）模拟SA与H2O2紫外汞灯光解产生的•OH发生反应：配制含2.5µmol/L SA、2.5µmol/L 2,3-DHBA待测混合混合溶液，然后用高效液相色谱测定SA的浓度变化以及2,3-DHBA的浓度。

三、样品测定1.仪器工作条件设置（5min）电化学检测器Range=500nA,Ec= +0.85V；流动相为pH4.75 27.7 mmol/L醋酸盐缓冲液；流速：1ml/min；温度：30℃；进样体积50μl；读数方式为峰面积。

2.工作曲线的绘制（80min）配制标准系列：分别配制一系列浓度在0.1µmol/L～10µmol/L范围内的SA标准溶液和0.1µmol/L～10µmol/L范围内的2,3-DHBA标准溶液。

按照仪器条件进行检测，记录峰面积，以标准系列浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

3.样品测定（30min）按仪器测定条件测定处理好的样品中SA和2,3-DHBA的含量，以峰面积值带入绘制好的标准曲线中计算相应待测样品中SA和2,3-DHBA的浓度。

【实验结果】1.绘制标准曲线待测样品中水杨酸峰面积A1=2073310待测样品中2,3-二羟基苯甲酸峰面积A2=24465022. 结果计算【注意事项】1. 检测器基线噪音增加，灵敏度低可能是由于流动相中溶解的气体使得压力降低而产生气泡，增加了基线噪音，造成灵敏度下降，甚至无法分析；规范操作：流动相使用前必须进行脱气处理（超声脱气10~20min），以除去流动相中溶解的气体。

药物中的水杨酸甲酯化学分析方法水杨酸甲酯是一种常用于药物和化妆品中的活性成分，具有抗炎、镇痛、抗菌和角质溶解等多种作用。

为了确保药物的质量和安全性，需要对其中的水杨酸甲酯进行化学分析。

本文将介绍几种常用的水杨酸甲酯分析方法，包括高效液相色谱法、气相色谱法和红外光谱法。

1.高效液相色谱法（HPLC）：高效液相色谱法是一种常用的分离和定量分析方法，可以对复杂混合物进行分离和定量。

它可以通过选择合适的色谱柱、流动相和检测器等条件，实现对水杨酸甲酯的分离和定量。

在HPLC分析中，一般使用C18反相色谱柱，甲醇和水的混合溶液作为流动相，并通过紫外检测器测定水杨酸甲酯的峰面积。

2.气相色谱法（GC）：气相色谱法是一种基于样品挥发性的分析方法，适用于水杨酸甲酯等易挥发的物质。

在GC分析中，样品通常通过蒸发、萃取等方法进行前处理，然后通过气相色谱柱分离，最后通过火焰离子化检测器等进行检测和定量。

3.红外光谱法（IR）：红外光谱法是一种分析化学方法，通过检测样品在红外光区域内吸收的特征谱线来确定样品中的成分。

水杨酸甲酯具有特征的红外光谱峰，可以通过红外光谱仪进行定性和定量分析。

红外光谱法具有操作简便、快速、无需特殊前处理等优点，但对于复杂的样品有一定的限制。

4.其他分析方法：除了上述的主要方法外，还可以使用质谱法、核磁共振谱法、假单胞菌荧光试剂法等进行水杨酸甲酯的分析。

质谱法主要用于对化合物的分子结构和特性进行分析，核磁共振谱法可以提供物质的结构信息，假单胞菌荧光试剂法可以定性鉴别水杨酸甲酯。

需要注意的是，在进行水杨酸甲酯化学分析之前，必须进行样品前处理以去除干扰物质。

常用的方法包括溶解、萃取、稀释、洗脱等，以确保分析结果的准确性和可靠性。

总的来说，高效液相色谱法、气相色谱法和红外光谱法是常用的水杨酸甲酯化学分析方法。

选用合适的方法取决于样品的特性、分析的目的和仪器设备的可用性。

此外，还可以根据需要结合其他分析方法进行综合分析，以提高分析的准确性和可靠性。

化学分析计量CHEMICAL ANALYSIS AND METERAGE第29卷，第4期2020年7月V ol. 29，No. 4Jul. 2020120doi ：10.3969／j.issn.1008–6145.2020.04.027高效液相色谱法测定化妆品中水杨酸含量的不确定度评定李静静，范菲，朱清（西安市食品药品检验所，西安　710054）摘要　对《化妆品安全技术规范》（2015年版）中高效液相色谱法测定水杨酸含量的方法进行不确定度评定。

根据JJF 1059.1–2012 《测量不确定度评定与表示》，建立数学模型，考察不确定度的来源，包括标准物质、被测样品和高效液相色谱仪等引入的不确定度，并给出了量化结果，计算出合成标准不确定度和扩展不确定度。

结果表明，当置信概率为95%，包含因子k =2，被测化妆品中水杨酸的含量为0.178%时，其标准扩展不确定度为0.004%。

测量不确定度主要来源于标准曲线拟合、样品重复测定、玻璃量器的使用，以及样品和标准品称重，并对不确定度评定提出了改进方法。

关键词　高效液相色谱法；化妆品；水杨酸；不确定度中图分类号：O657.7 文献标识码：A 文章编号：1008–6145(2020)04–0120–05Evaluation of uncertainty for determination of salicylic acid in cosmetics by high performance liquidchromatographyLI Jingjing ，FAN Fei ，ZHU Qing（Xi ’an Institute for Food and Drug Control, Xi ’an 710054, China ）Abstract Uncertainty from the determination procedure of salicylic acid in Safety and Technical Standards for Cosmetics (2015 Edition) by high performance liquid chromatography was assessed. The mathematical model was established, and three sources of uncertainty were investigated and quantified, including standard substance, samples and the HPLC. The combined standard uncertainty and expanded uncertainty were calculated. The result show that the expanded uncertainties was 0.004% (95% confidence level, k =2) when the mass fraction of salicylic acid in cosmetics was 0.178%. The sources of the uncertainty mainly comes from calibration curve, repeated measurement, glass container, and the weighing of samples and standard substance. Finally, the improved method was of evaluation for uncertainty introduced.Keywords high performance liquid chromatography; cosmetics; salicylic acid; uncertainty通讯作者　李静静，硕士，主管药师，从事药品化妆品检验与分析，E-mail:****************收稿日期　2020–05–18引用格式　李静静，范菲，朱清.高效液相色谱法测定化妆品中水杨酸含量的不确定度评定［J ］.化学分析计量，2020，29(4): 120–124.LI J J ，FAN F ，ZHU Q. Evaluation of uncertainty for determination of salicylic acid in cosmetics by high performance liquid chromatography ［J ］. Chemical analysis and meterage ，2020，29(4): 120–124.水杨酸最早是从柳树皮中分离出的一种活性成分，后被证实是植物体内广泛存在的一种天然酚类化合物，对一些重要的代谢过程起调控作用，所以被看作为一种植物激素［1］。

医学基础与药学研究·104·高效液相色谱法测定赖氨匹林中水杨酸含量汪海宣【中图分类号】　R927.2 【文献标识码】　Ａ 【文章编号】　1671-8054（2017）03-0104-03【摘 要】 目的：寻求赖氨匹林在何种溶剂中稳定性较好，并建立测定赖氨匹林中水杨酸含量的高效液相色谱的分析方法。

方法：临用新制，样品用7种不同的溶剂使溶解，在300nm波长下进行测量，DAD检测器进行检测。

结果：水杨酸的RSD为0.9%，其标准曲线为y=0.4143x+0.0086（r=0.9999），线性范围为0.2~4.0μg/mL，其检出限为25ng/mL，定量限为64ng/mL。

结论：该方法简单快捷，精密度好，可用于赖氨匹林中水杨酸含量的测定。

【关键词】　赖氨匹林　水杨酸　高效液相色谱法阿司匹林为医药史上三大经典药物之一，随着科学技术的发展，它的药用范围不断扩大，从解热镇痛抗炎作用逐步扩展到预防癌症、心血管和脑卒中等疾病[1]。

虽然它的用途广泛且不会产生药物依赖性，但长期低剂量阿司匹林对胃、十二指肠黏膜有一定的损伤作用。

在广泛应用中，它的许多不良反应也逐渐显现[2]。

因此降低阿司匹林的不良反应成为当今一个亟需解决的问题。

赖氨匹林是一种阿司匹林和赖氨酸的混合盐，是阿司匹林的一种前体药物。

注射到体内分解成为阿司匹林和赖氨酸，不在胃肠道析出，能迅速吸收, 发挥药效, 减少副作用的发生[3]，根据国外实验研究[4]，发现口服阿司匹林350mg/kg，大鼠大便红细胞数增加7.5倍，而口服相当剂量的赖氨匹林，红细胞仅增加2倍。

并且赖氨匹林中赖氨酸可推动组织修复，提升中枢神经组织活力，有效缓解组织缺氧状况，因此赖氨匹林被认为是一种有效的抗热消炎药物[5]。

然而赖氨匹林分解成阿司匹林后，其在溶剂内并不稳定，易分解成水杨酸，水杨酸将会影响胃及十二指肠黏膜上皮细胞前列腺素（PG）的合成，降低屏障作用，在胃酸作用下产生溃疡，我们需要对水杨酸的含量进行测定，在用药前考察水杨酸含量[6]。

水杨酸原料药含量计算公式
在药品分析化学中，我们通常采用药品含量计算公式进行药品类似水杨酸的含量计算。

针对水杨酸原料药，其含量的计算公式主要以高效液相色谱法为主。

水杨酸原料药含量的计算公式为：（吸光度测定值-空白试验吸光度）÷标准试
剂吸光度×标准试剂浓度(毫克/毫升)×稀释倍数÷样品取样量(克)×100%，得出为百
分含量。

在具体操作过程中，还需扣除空白试剂对吸光度的影响。

因此，空白试验的吸光度也是重要的一步。

计算公式中的取样量取决于样品的实际状态和含有的水杨酸量。

对于标准试剂的浓度，一般由实验前的配制决定。

稀释倍数则是根据实验需要设计的。

另外，需要注意的是，药品分析过程中，涉及到样品的取样、标准曲线的建立、操作条件的优化等多个环节，因此，实际操作中要严格按照规定的实验步骤进行，确保实验的准确性。

值得一提的是，水杨酸含量计算往往需要使用到色谱仪，这种设备能够有效地分析和测量药品的成分和纯度，也是药品检验中不可或缺的重要设备。

根据不同
的药品性质，还会有不同的实验技术和设备，以实现更高效、更准确的药品分类和分析。

通过此种方式，我们不仅可以准确掌握药品的含量，而且还能确保药品的质量和安全，为药品的生产和应用提供了重要的技术支撑。

高效液相色谱法测定氯霉素水杨酸酊中2组分含量祝文兵;彭芳玲;田静;张晶;刘红艳【摘要】Objective To establish an HPLC method for the determination of two components in lvmeisush-uiyangsuan tincture simultaneously. Methods The chromatographic conditions were as follows: Agilent ZorbaxE-clipse XDB column (4. 6 mm × 150 mm,5 μm),acetonitrile and 0. 01mol/L sodium 1-heptanesulfonate (23:77,in-cluded 0. 5% triethylamine,0. 68% KH2 PO4 and adjusted pH to 2. 5 with phosphoric acid) as mobile phase,the flow rate was 1. 0 mL/min,the detection wavelength was 277 nm. Results The linear range of chloramphenicol and salicyl-ic acid were respectively 0. 020 96~0. 419 2 mg/mL (r=0. 999 9),0. 096 8~1. 936 mg/mL (r=0. 999 9). The av-erage recovery rates were 100. 86% and 100. 46%,and the RSD were 0. 68% and 0. 69%. Conclusion The method is simple,rapid and accurate. It can be used for the quality control of lvmeisushuiyangsuan tincture.%目的建立高效液相色谱法同时测定氯霉素水杨酸酊中2 组分的含量. 方法色谱柱为Agi-lent Zorbax Eclipse XDB柱(4. 6 mm × 150 mm,5 μm),流动相:乙腈-0. 01 mol/L庚烷磺酸钠缓冲溶液(23:77,内含0. 5%三乙胺、0. 68%磷酸二氢钾,用磷酸调pH值为2. 5),流速1. 0 mL/min,检测波长为277 nm. 结果氯霉素、水杨酸分别在0. 020 96~0. 419 2 mg/mL (r=0. 999 9)、0. 096 8~1. 936mg/mL (r=0. 999 9)浓度范围内线性关系良好. 平均回收率分别为100. 86%、100. 46%,RSD分别为0. 68%、0. 69%. 结论本方法简便、快速、准确,可作为氯霉素水杨酸酊的质量控制方法.【期刊名称】《实用药物与临床》【年(卷),期】2015(018)010【总页数】3页(P1231-1233)【关键词】氯霉素水杨酸酊;氯霉素;水杨酸;高效液相色谱法;含量测定【作者】祝文兵;彭芳玲;田静;张晶;刘红艳【作者单位】湖南省儿童医院,长沙410007;湖南省儿童医院,长沙410007;湖南省儿童医院,长沙410007;湖南省儿童医院,长沙410007;湖南省儿童医院,长沙410007【正文语种】中文Key words：Chloramphenicol salicylic acid tincture;Chloramphenicol;Salicylic acid;HPLC; Content determination氯霉素水杨酸酊为我院自制制剂，主要由氯霉素和水杨酸组成，具有抗菌及软化角质作用，用于毛囊炎、头皮糠疹、脂溢性皮炎等症。

高效液相色谱法测定防晒化妆品中水杨酸酯类紫外线吸收剂的含量池琴;钱春苹;王魁【摘要】HPLC was applied to the simultaneous determination of 8 kinds of salicylic acid ester UV absorbers,including ethylhexylsalicylate,homosalate,octyl salicylate,phenyl salicylate,salicylic acid,salicylic acid hexyl ester with sixteen salicylic acid,ethylene glycol and benzyl salicylate,in sunscreen cosmetics.1.000 0 g of sample was extracted by ultrasonic with 5 mL of ethyl acetate at 20 ℃ for 10 min,and the extract was separated on an Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18 chromatographic column with a mixture of methanol,tetrahydrofuran,and 0.1％ (w) formic acid solution as mobile phase for gradient elution.UV detection was made at the wavelength of 340 nm.Linear relationships were found between peak areas and mass concentrations of the 8 kinds of salicylic acid ester UV absorbers in the range of 5.0-100.0 mg · L1,with detection limits (3S/N) in the range of 0.5-2.5 mg · kg-1.Recovery rates obtained by standard addition method were in the range of 90.6％-98.8％,and RSDs (n=6) were in the range of 1.4％-3.6％.%采用高效液相色谱法同时测定防晒化妆品中8种水杨酸酯类紫外线吸收剂(水杨酸乙基己酯、水杨酸三甲环己酯、水杨酸辛酯、水杨酸苯酯、水杨酸异十六酯、水杨酸己酯、水杨酸乙二醇酯和水杨酸苄酯)的含量.1.000 0 g样品经5 mL乙酸乙酯于20℃超声萃取10 min,萃取液在Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱上分离,以甲醇-四氢呋喃-0.1％(质量分数)甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱,紫外检测波长为340 nm.8种水杨酸酯类紫外线吸收剂质量浓度在5.0～100.0mg· L-1内与峰面积呈线性关系,检出限(3S/N)在0.5～2.5 mg·kg-1之间;加标回收率在90.6％～98.8％之间,测定值的相对标准偏差(n=6)在1.4％～3.6％之间.【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2017(053)003【总页数】6页(P289-294)【关键词】高效液相色谱法;紫外吸收剂;水杨酸酯类;防晒化妆品【作者】池琴;钱春苹;王魁【作者单位】鄂尔多斯职业学院,鄂尔多斯017000;鄂尔多斯职业学院,鄂尔多斯017000;鄂尔多斯职业学院,鄂尔多斯017000【正文语种】中文【中图分类】O657.7紫外线会导致皮肤晒黑、晒伤,甚至会诱发皮肤癌[1-2]。

超高效液相色谱-串联质谱法快速测定化妆品中水杨酸张瑞;陆舍铭;丁丽婷;招云芳;吴新华;孟昭宇【摘要】A rapid method of UPLC-MS/MS for the determination of salicylic acid in cosmetics was proposed.The sample was dissolved with methanol and extracted vortically for 20 min.After centrifugation,supernatant was taken for separation by using the column ACQUITYTM BET C18(2.1mm×100 mm, 1.7 μm) and using the mixed solution of acetonifrile and formic acid water solution (0.3+99.7), mixed in the ratio of 6 to 4, as mobile phase.The content of salicylic acid was determined by MS/MS.The positive electrospray ionization as well as multiple reactions monitoring mode was used in the detection.The isotope internal standard method was used for quantification of salicylic acid.Linearity range of salicylic acid was kept fr om 1.0 to 5.0× 103μg · L-1 , with limit of detection (3S/N) of 0.15μg · L-1 and limit of determination (10S/N) of 0.50 μg · L-1.The proposed method was applied to the analysis of 8 cosmetic samples, giving values of recovery in the range from 97.3％-107.0％ and RSD (n=5) in the range from 2.0％-3.8％.%提出了超高效液相色谱-串联质谱法测定化妆品中水杨酸含量的方法.化妆品试样用甲醇溶解,振荡提取20 min,离心分离取上清液过ACQUITY(TM)BET C18色谱柱(2.1mm×100mm,1.7μm)并用乙腈和甲酸-水(0.3+99.7)溶液(体积比6比4)的混合溶液作为流动相进行分离,串联质谱法进行测定.采用正离子模式多反应监测,同位素内标法定量.水杨酸的线性范围为1.0～5.0×103μg·L-1,方法的检出限(3S/N)为0.15μg·L-1,测定下限(10S/N)为0.50μg·L-1.方法用于分析8种化妆品试样,回收率在97.3%～107.0%之间,相对标准偏差(n=5)在2.0%～3.8%之间.【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2011(047)001【总页数】3页(P65-67)【关键词】超高效液相色谱-串联质谱法;化妆品;水杨酸【作者】张瑞;陆舍铭;丁丽婷;招云芳;吴新华;孟昭宇【作者单位】昆明理工大学,昆明,650224;红塔烟草(集团)有限责任公司技术中心,玉溪,653100;红塔烟草(集团)有限责任公司技术中心,玉溪,653100;昆明理工大学,昆明,650224;红塔烟草(集团)有限责任公司技术中心,玉溪,653100;红塔烟草(集团)有限责任公司技术中心,玉溪,653100;云南大学,昆明,650091;昆明理工大学,昆明,650224;红塔烟草(集团)有限责任公司技术中心,玉溪,653100;红塔烟草(集团)有限责任公司技术中心,玉溪,653100【正文语种】中文【中图分类】O657.63Abstract:A rapid method of UPLC2MS/MS for the determination of salicylic acid in cosmetics was proposed.The sample was dissolved with methanol and extracted vortically for 20 min.After centrifugation,supernatant was taken for separation by using the column ACQUITYTMBET C18(2.1mm×100 mm,1.7μm)and using the mixed solution of acetonifrile and formic acid water solution(0.3+99.7),mixed in the ratio of 6 to 4,as mobilephase.The content of salicylic acid was determined by MS/MS.The positive electrospray ionization as well as multiple reactions monitoring mode was used in the detection.The isotope internal standard method was used for quantification of salicylic acid.Linearity range of salicylic acid was kept from 1.0 to 5.0×103μg·L-1,with limit of detection(3S/N)of 0.15μg·L-1and limit of determi nation(10S/N)of 0.50μg·L-1.The proposed method was applied to the analysis of 8 cosmetic samples,giving values of recovery in the range from 97.3%-107.0%and RSD(n=5)in the range from 2.0%-3.8%. Keywords:UPLC2MS/MS;Cosmetics;Salicylic acid由于多数化妆品富含水和微生物生长所需的养分,一旦环境中的微生物侵入,将严重影响化妆品的质量,威胁消费者安全。

超高效液相色谱法测定原料乳中的水杨酸邵瑞婷;丁学妍;张丽华;姜洁【摘要】建立了原料乳中水杨酸的检测方法.样品经乙腈提取,采用超高效液相色谱进行测定.在ZORBAX Eclipse Plus C18反相柱上分离,梯度洗脱,流动相为磷酸水和磷酸甲醇,DAD检测.水杨酸的线性范围为0.5～20μg/mL,相关系数平方(R2)大于0.995,检出限为0.5 mg/kg,定量限为1.25 mg/kg,3个不同水平的加标回收率为88.0％～118.9％,相对标准偏差不大于10％.方法具有操作简单、重现性好、灵敏度高、杂质干扰小等特点,可以用于原料乳中水杨酸的检测.【期刊名称】《分析测试技术与仪器》【年(卷),期】2019(025)002【总页数】5页(P114-118)【关键词】原料乳;水杨酸;超高效液相色谱法【作者】邵瑞婷;丁学妍;张丽华;姜洁【作者单位】北京市食品安全监控和风险评估中心,北京 100041;北京市食品安全监控和风险评估中心,北京 100041;北京市食品安全监控和风险评估中心,北京100041;北京市食品安全监控和风险评估中心,北京 100041【正文语种】中文【中图分类】O657.7+2水杨酸(Salicylic acid)又称2-羟基苯甲酸，为白色针状结晶或单斜棱晶，有辛辣味，微溶于水，溶于丙酮、松节油、乙醇、乙醚、苯和氯仿，具有防腐、消炎作用[1-2]，存在于自然界的柳树皮、白珠树叶、甜桦树中，是一种天然的“消炎药”.水杨酸主要作为医药工业的原料使用，也经常作为防腐剂被用于化妆品中，此外还被用于染料、橡胶、香精配制等.正是由于水杨酸具有防腐杀菌作用，被一些不法商贩利用[3]，他们为了延长原料乳的保存期限，在原料乳中加入水杨酸钠，这样的原料会影响最终的产品质量，对人体产生危害[4-7].目前，包括我国和欧盟在内的多个国家，对于水杨酸在食品中的使用都有限制规定[8-9].我国将其列为“允许使用的食品用合成香料”[9]，但未标明其可作为防腐剂在食品中使用.此外，即使作为香料，也明确标注出不得在巴氏杀菌乳、杀菌乳、发酵乳等以原料乳生产的产品中添加.国内外对于水杨酸的检测方法，主要集中在化妆品[10-12]、医药[13-15]及植物生长调节剂[16-23]方面，而对于原料乳中的水杨酸检测，没有明确的有针对性的定量检测方法[24-26].本方法具有操作简单、重现性好、灵敏度高、杂质干扰小等特点，可以用于原料乳中水杨酸的检测.1 试验部分1.1 仪器Agilent 1260超高效液相色谱仪(美国安捷伦科技有限公司)；超声波萃取仪(北京五洲东方)；多管涡旋振荡器(北京华威中仪)；冷冻离心机(美国Thermo Fisher公司).1.2 试剂与标准品乙腈(色谱纯，美国Thermo Fisher公司)；甲醇(色谱纯，美国Thermo Fisher公司)；磷酸(优级纯，默克，质量分数85%)；氨水(优级纯，国药，质量分数25.0%～28.0%).原料乳样品：采集于北京市大型乳企生产用原料乳.水杨酸标准品购自中国食品药品检定研究院.精确称取水杨酸标准品10 mg置于10 mL棕色容量瓶中，用乙腈溶解并定容，配制成1 mg/mL的标准储备溶液，避光、-18 ℃下保存.用70%乙腈水(体积分数)逐级稀释混合标准溶液，配制成0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 μg/mL的标准溶液系列.磷酸溶液：称取11.5 g磷酸，精确至0.01 g，加入950 mL水，用氨水调节pH至2.5，加入水至1 000 mL.流动相A液(磷酸水)：量取磷酸溶液200.0 mL，并用水稀释至1 000 mL[8].流动相B液(磷酸甲醇)：量取磷酸溶液250.0 mL，并用甲醇稀释至1 000 mL[8].1.3 样品前处理称取2 g混匀试样(精确到0.01 g)置于10 mL刻度离心管中，加入80%乙腈水(体积分数)溶液至5 mL刻度线，涡旋30 s，超声提取25 min，以10 000 r/min在0 ℃下离心5 min，吸取上层提取液1 mL，过0.22 μm微孔滤膜，供检测.1.4 色谱条件色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18(4.6×100 mm,3.5 μm)；柱温25 ℃；二极管阵列检测器(DAD)300 nm；进样体积10 μL；流速0.8 mL/min；流动相：A为磷酸水、B为磷酸甲醇，梯度洗脱程序：0～3 min，A由80%线性降到10%;3～8 min，A相保持100%;8～8.1 min，A由10%线性升到80%;8.1～10 min，A相保持80%.2 结果与讨论2.1 提取溶剂选择分别用甲醇、乙腈、丙酮、氯仿4种有机溶剂对原料乳样品进行提取条件试验(原料乳中水杨酸添加量为5 mg/kg)，结果如图1所示.试验结果表明：乙腈作为提取溶剂，蛋白沉淀效果最佳，其回收率为93%～105%；丙酮及氯仿虽有一定的提取效果，但回收率较低，均不足40%；甲醇作为提取试剂，蛋白沉淀效果不佳，个别出现乳化现象，无法达到良好提取兼净化效果.故选择乙腈作为提取试剂.图1 不同溶剂提取原料乳中水杨酸的回收率(n =6)Fig.1 Recoveries of salicylic acid in raw milk by different extration solvent (n =6)对于不同浓度的乙腈作为提取试剂对提取效率的影响也做了相应的研究.选取乙腈质量分数(乙腈∶水，V∶V)分别为10%、50%、60%、70%、80%、90%、100%的提取试剂，样品中添加水杨酸的质量分数为5 mg/kg,进行测试，结果表明乙腈的质量分数大于60%时，提取效率无明显差异.由于原料乳中本身含有一定量的水分，为保证提取效率，本着节约原则，最终选择质量分数为80%的乙腈(乙腈∶水，V∶V)作为提取试剂.2.2 样品净化方法的选择原料乳中含有大量的蛋白质和脂肪，净化的主要目的就是除去脂肪和沉淀蛋白.由于乙腈具备良好的沉淀蛋白的效果，对目标物进行提取的同时，可将原料乳中的蛋白质较为充分的沉淀.冷冻、高速离心又能有效的避免脂肪的干扰，故为降低检测成本，节约检测时间，没有再额外引入其余净化环节.2.3 提取时间的选择试验比较了超声提取时间对原料乳中水杨酸提取效率的影响.样品中添加水杨酸的质量分数为5 mg/kg，测试结果如图2所示.由图2可见，随超声时间的增长，目标物的提取效率显著提高，在25 min后达到动态平衡，故最终选择超声提取时间为25 min.2.4 检出限、定量限与线性范围分别配制质量浓度为0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 μg/mL的水杨酸标准溶液，自动进样10 μL，进行UPLC分析.将标准系列工作溶液分别注入液相色谱仪中，测定相应的峰面积.以标准系列工作溶液的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线.将试样溶液注入液相色谱仪中，得到峰面积，根据标准曲线得到待测液中水杨酸的质量浓度.方法检出限以加标样品检测色谱峰信噪比S/N≥3确定，方法定量限以加标样品检测色谱峰信噪比S/N≥10确定，具体结果如表1所列.由表1可见，水杨酸在0.5～20.0 μg/mL的线性范围内线性关系良好，线性系数R2大于0.995，能满足定量分析的要求.方法对于水杨酸的检出限均为0.5 mg/kg，定量限均为1.25 mg/kg.图2 水杨酸不同超声提取时间的提取效率Fig.2 Extraction efficiencies of salicylic acid with different ultrasonic extraction times表1 水杨酸的线性范围、回归方程及线性相关系数Table 1 Linear ranges,linear equations and correlation coefficients of salicylic acid线性范围/(μg/mL)校正曲线r2检出限 /(mg/kg )定量限/(mg/kg )0.5～20.0Y= 19.834 78X +0.260 800.9990. 51.252.5 样品的加标回收率分别在2.00 g原料乳样品中加入含有水杨酸的标准溶液，添加质量分数为1.25、2.5、25 mg/kg.使用优化好的方法进行提取净化，每个添加水平分别测定6份样品，得到水杨酸的回收率和相对标准偏差,结果如表2所列.表2 水杨酸在不同加标水平下的加标回收率及相对标准偏差(n=6)Table 2 Spiked recoveries and RSDs of salicylic acid spiked in three levels(n=6)目标化合物本底含量1.25 mg/kg测定质量分数/(mg/kg)回收率/%RSD/% 2.5 mg/kg测定质量分数/(mg/kg)回收率/%RSD/% 25 mg/kg测定质量分数/(mg/kg)回收率/%RSD/% 水杨酸未检出1.1591.81.362.3292.80.9225.54102.22.471.1289.62.2991.626.09104.41.1289.42.2891.525.61102.41.1088.02.3192.227.23108.91.1289.62.2690.326.65106.61.1289.62.3092.026.49106.0由表2可见，回收率范围为88.0%～118.9%，相对标准偏差均小于10%.结果表明，水杨酸在不同的添加水平均得到了满意的回收率和较好的方法重复性.3 结论建立了原料乳中水杨酸的超高效液相色谱检测方法.通过乙腈提取，可实现对原料乳样品中水杨酸的检测，具有较高的回收率.该方法灵敏度高、重现性好，已在日常风险监测试验中得到良好的应用.检测160余个采集于北京市及其周边大型乳品企业的原料乳样品，未检测出阳性样本.由于我国的原料乳有很多零散养殖户参与供应，其安全性依然是监管的难点和重点.水杨酸等防腐剂的添加作为重要的风险隐患，一直被监控部门关注.因此，将快速灵敏的原料乳中水杨酸的检测方法应用于日常监管，具有必要性.参考文献:【相关文献】[1] 赵联朝,刘秋霞.水杨酸选择性检测试纸的制备与应用[J].河南科技大学学报(自然科学版),2017,38(5):101-104.[ZHAO Lian-chao,LIU Qiu-xia.Preparation and application of selective detection paper for salicylic acid[J].Journal of Henan University of Science and Technology(Natural Science),2017,38(5):101-104.][2] 董增,丘付萍,曹稳根,等.水杨酸对鲜切苹果贮藏效果的影响[J].怀化学院学报,2017,36(11):62-67.[DONG Zeng,QIU Fu-ping,CAO Wen-gen,et al.Effects of salicylic acid of different concentrations on the storage effect of fresh-cut apple slices[J].Journal of Huaihua University,2017,36(11):62-67.][3] 金珠,申君伟,刘美荣,等.生乳中水杨酸、水杨酸钠掺假定性检测方法[J].硅谷,2013(9):144-144.[JIN Zhu,SHEN Jun-wei,LIU Mei-rong,et al.Method for qualitative detection of salicylic acid and sodium salicylate in raw milk[J].Silicon Valley,2013(9):144-144.][4] 张农山,张立 ,王培民.水杨酸在不同血浆中的蛋白结合率测定[J].中国药物与临床,2014(10):1329-1331.[ZHANG Nong-shan,ZHANG Li,WANG Pei-min.Determination of protein binding rate of salicylic acid in plasma derived from different species via high-performance liquid chromatography[J].Chinese Remedies &Clinics,2014 (10):1329-1331.] [5] T Hedner,B Everts.The early clinieal history of salicylates in rheanmatology andpain[J].Clinical Rheumatology,1998,17(1):17-25.[6] 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高效液相色谱法测定香精香料中的水杨酸
董风强;周国俊;蒋健;李祖光
【期刊名称】《广州化工》
【年(卷),期】2009(37)4
【摘要】采用高效液相色谱法,二极管阵列(DAD)检测器,通过DIAMONSIL C18柱分析香精香料中的水杨酸含量.试验方法中水杨酸质量浓度在0.2～50 mg/L范围内呈线性关系.线性相关系数为0.9997,回收率为96.50%～99.92%,相对标准偏差为0.16%.实验结果表明该法快速、简便,重现性好,适合于香精香料中水杨酸的检测.
【总页数】2页(P139-140)
【作者】董风强;周国俊;蒋健;李祖光
【作者单位】浙江工业大学化学工程与材料学院,浙江杭州310014;浙江中烟工业有限责任公司技术中心,浙江杭州310008;浙江中烟工业有限责任公司技术中心,浙江杭州310008;浙江工业大学化学工程与材料学院,浙江杭州310014
【正文语种】中文
【中图分类】O6
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化学方法鉴定水杨酸
水杨酸是一种常用的药物成分，具有消炎、抗菌、止痛等功效。

然而，市面上的水杨酸产品质量参差不齐，一些产品中可能会含有不良的杂质或假冒伪劣的成分。

为了确保消费者的安全和有效使用，化学方法鉴定水杨酸的纯度和成分是非常重要的。

化学方法鉴定水杨酸的主要方法之一是高效液相色谱法（HPLC）。

该方法利用高效液相色谱仪分离和检测水杨酸及其杂质。

具体来说，样品首先要进行前处理，如提取、浓缩和净化。

然后，将样品注入高效液相色谱仪中，利用不同的色谱柱、流动相和检测器，分别对水杨酸和其杂质进行分离和检测。

通过比较样品中水杨酸和标准品之间的保留时间和峰面积，可以确定水杨酸的纯度和质量。

此外，氢核磁共振（HNMR）和质谱（MS）等方法也常用于鉴定水杨酸的成分。

HNMR可以确定水杨酸分子内部的结构和化学键，而MS 则可以确定水杨酸分子的分子量和碎片离子。

这些方法可以确定水杨酸的纯度和成分，从而确保水杨酸产品的质量和安全性。

总之，化学方法鉴定水杨酸的纯度和成分对于保障消费者的安全和有效使用非常重要。

HPLC、HNMR和MS等方法可以在市场监管和药品研发等领域发挥重要作用。

- 1 -。

附件2：化妆品中水杨酸的检测方法1 适用范围本方法规定了采用液相色谱-紫外法测定化妆品水杨酸（CAS：69-72-7）含量的方法。

本方法适用于肤用产品和淋洗类发用产品中水杨酸含量的测定。

2 方法提要样品在经过提取后，经高效液相色谱仪分离，二极管阵列检测器检测，根据保留时间和紫外光谱图定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。

本方法对水杨酸的检出限为0.0007 μg，定量下限为0.002 μg；取样品0.25 g，则检出浓度为15 μg/g，最低定量浓度为40 μg/g。

3 试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为一级实验用水。

以下操作均在避光条件下进行。

3.1 水杨酸，纯度＞99.0%。

3.2 甲醇，色谱纯。

3.3 磷酸，优级纯。

3.4 氨水，优级纯，含量25.0%~28.0%。

3.5 甲醇水溶液：甲醇+ 水（75 + 25）。

3.6 流动相的配制：磷酸溶液：称取11.5 g磷酸（3.3），精确至0.01 g，加入950 mL水，用氨水（3.4）调节pH至2.3~2.5，加入水至1000 mL。

流动相A液：量取磷酸溶液200.0 mL，并用水稀释至1000 mL。

流动相B液：量取磷酸溶液250.0 mL，并用甲醇（3.2）稀释至1000 mL。

3.7 水杨酸标准储备液（ρ = 1.0 g/L）：称取水杨酸0.05 g，精确到0.0001 g，于50 mL棕色容量瓶中，加入甲醇水溶液（3.5）溶解并定容至50 mL，即得质量浓度为1 mg/mL的水杨酸标准储备溶液。

避光保存，5日内稳定。

3.8 系列浓度水杨酸标准溶液：配制质量浓度分别为5 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、150 μg/mL和200 μg/mL的系列水杨酸标准工作溶液。

4 仪器4.1 高效液相色谱仪：具有二极管阵列检测器。

4.2 分析天平：感量0.0001 g。

4.3 电子天平：感量0.01 g。

4.4 pH计：精度0.01。