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紫外分光光度法测定水杨酸软膏中水杨酸含量
吴渝陵;范虹;罗凤琴;赵春景
【期刊名称】《中国药业》
【年(卷),期】2006(15)16
【摘要】目的建立水杨酸软膏的含量测定方法.方法采用紫外分光光度法,测定波长为296 nm.结果水杨酸浓度在4～28μg/mL范围内与吸收度有良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率为101.2%,RSD=1.22%(n=6).结论紫外分光光度法能简便、快速、准确地测定水杨酸软膏中水杨酸含量.
【总页数】1页(P19-19)
【作者】吴渝陵;范虹;罗凤琴;赵春景
【作者单位】重庆医科大学附属第二医院,重庆,400010;重庆医科大学附属第二医院,重庆,400010;重庆医科大学附属第二医院,重庆,400010;重庆医科大学附属第二医院,重庆,400010
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2;R986
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紫外吸收光谱法测定APC片剂中乙酰水杨酸的含量一、实验目的1、了解7500型紫外－可见分光光度计的性能、结构及其使用方法。
2、掌握紫外－可见分光光度法定量分析的基本原理和实验技术。
二、方法原理APC药片，研磨成粉末，用稀NaOH水溶液溶解提取，乙酰水杨酸水解成水杨酸钠进入水溶液，该提取液在295nm左右有一个吸收峰，测出稀释成一定浓度的提取液的吸光度值，并用已知浓度的水杨酸的NaOH水溶液做出一条标准曲线，则可从标准曲线上求出相当于乙酰水杨酸的含量。
根据两者的分子量，即可求得APC中乙酰水杨酸的含量。
溶剂和其他成分不干扰测定。
乙酰水杨酸浓度=[水杨酸浓度]×三、仪器和试剂仪器天美7500或岛津240紫外—可见分光光度计；3G玻璃砂芯漏斗1个；抽滤瓶250mL 1个；容量瓶250mL 1支；50mL 7支；胖肚吸量管20mL 1只；刻度吸量管5mL 2只。
试剂 0.5000mg·mL-1水杨酸贮备液：称取0.5000g水杨酸先溶于少量0.10moL·L-1NaOH溶液中，然后用蒸馏水定容于1000mL容量瓶中；0.10moL·L-1 NaOH 溶液。
四、实验内容1、将七个50mL容量瓶按0-6依次编号。
分别移取水杨酸储备液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL于相应编号容量瓶中，各加入 1.0mL 0.10moL·L-1 NaOH溶液，先用蒸馏水稀释至30mL左右，80℃水浴加热10分钟，冷却至室温，稀释至刻度，摇匀。
2、放一片APC药片在清洁的50mL烧杯中，加2.0mL0.10moL·L-1 NaOH先溶胀,再用玻棒搅拌溶解。
在玻璃砂芯漏斗中先放入一张滤纸，用玻璃砂芯漏斗定量地转移烧杯中的内含物，用10mL的0.1MNaOH淋洗烧杯和玻璃砂芯漏斗2次(共20mL)，20mL蒸馏水淋洗漏斗4次(共80mL)，并将滤液收集于同一个250mL容量瓶中，最后用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
实验七紫外分光光度法测定水扬酸含量一、实验目标1．进一步熟练吸收曲线的测绘方法。
2．掌握利用紫外吸收光谱曲线定性方法。
3．掌握紫外分光光度法测定水杨酸的方法。
二、实验原理水杨酸即邻羟基苯甲酸，分子中含有生色团（苯环和羰基）和助色团（羟基），并且共轭，在近紫外光区有较强的特征吸收，吸收稳定，重现性好，可用紫外分光光度法进行定性分析和定量分析。
三、实验用品1．仪器（1）紫外-可见分光光度计（配有石英吸收池），1台；（2）容量瓶，100mL 1个，50mL 8个；（3）吸量管，10mL，2支。
2．试剂（1）水杨酸标准储备液（1mg/mL）。
（2）水杨酸标准溶液（100μg/mL）准确吸取1mg/mL的水杨酸标准储备液10mL，在100mL容量瓶中用水稀释定容。
（3）未知液（两种或以上，浓度约为10μg/mL）。
四、实验步骤及数据记录1．定性分析测绘吸收曲线以蒸馏水为参比，于波长200～330nm范围内，分别测定各未知液的吸光度，按下表记录测量数据，并分别制作吸收光谱曲线。
λ/nm200201202203204205206207210215220Aλ/nm225226227228229230231232234235240Aλ/nm245250255260265270275280285290295Aλ/nm296297298299300305310315320325330A（3）定性分析将未知液的吸收曲线与水杨酸标准溶液参考吸收曲线作比较，确定哪种未知液为水杨酸。
2．定量分析（1）在吸收光谱曲线上确定测量波长（2）测绘标准曲线①取7个按要求洗净的50mL容量瓶，编号为0、1、2、4、6、8、10；②分别准确移取100μg/mL水杨酸标准溶液0.00、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00 mL，依次放入各容量瓶中，用蒸馏水稀释至标线，浓度分别为0.00、2.00、4.00、8.00、12.00、16.00、20.00μg/mL。
紫外分光光度法测定水杨酸一、实验目的1、了解紫外可见光度法的应用。
2、进一步掌握紫外分光光度计的基本操作和数据处理。
二、实验原理分光光度法是根据物质的吸光光谱及光的吸收定律，对物质进行定性、定量分析的一种方法。
光照射溶液时，当光子的能量（hn）与被照射物质的基态和激发态能量之差相等时，就能被吸收，不同物质的基态和激发态的能量之差不相等，因此吸收光子的能量也不相同，即吸收光的波长不同，这就是物质对光的选择性吸收。
分光光度法测定物质含量的依据是朗伯-比尔定律，A = ebc ，C为物质的量浓度，e称为摩尔吸光系数，b 为吸收层厚度，吸光度与透光率T的关系是：A = —lgT。
定量测定时，常用的定量方法有标准曲线法、标准对照法、吸光系数比较法及差示分光光度法，它们各有其适用的范围，由于许多物质在可见光区无特征吸收，而在近紫外（200nm—400nm）却有特征吸收，故需用紫外光为光源进行测定，紫外光光度法除了定量测定外尚能做定性鉴别，纯物质检查，并可为结构分析提供信息。
三、仪器和试剂仪器：TU-1900双光束紫外分光光度计，计算机试剂：水杨酸标准品、5%的甲醇水溶液、水杨酸样品四：实验步骤1、样品溶液的配制：取水杨酸72.0000mg，置于1000ml容量瓶中加5%的甲醇水溶液使之溶解并稀释至刻度，用吸量管精密吸取5.0、10.0、15.0、20.0、25.0ml上述溶液分别置于100ml容量瓶中，各加5%甲酸水溶液稀释至刻度，编号得4个不同浓度水杨酸标准溶液。
2、绘制吸收曲线：取上述水杨酸标准溶液，以甲酸水溶液作参比。
用TU-1900双光束紫外分光光度计在200-700nm间进行波长扫描，得吸收光谱图，确定最大吸收波长λman。
3、绘制标准曲线：以λman为波长，测定标准系列的吸光度A。
以吸光度A为纵坐标，浓度C为横坐标绘制标准曲线。
4、样品的测定：在与标准曲线同样的测定条件下，测定待测水杨酸样品的浓度。
技能训练1 紫外分光光度法测定水杨酸的含量一、实验目的1、掌握紫外可见分光光度计的使用及维护方法。
2、学会分光光度法测定水杨酸含量的原理和方法。
二、实验原理水杨酸水溶液无色，在紫外光区有吸收，吸收峰位于230nm，因此，可采用紫外分光光度法测定其含量。
三、仪器与试剂仪器：紫外-可见分光光度计、容量瓶(50mL)8个、容量瓶(100mL)3个、吸量管（10mL) 1支、移液管（10mL）2支、移液管（25mL）1支、石英吸收池试剂：水杨酸标准溶液(1mg/mL)、水杨酸试样<50μg/mL四、实验步骤1、标准溶液的配制:准确吸取10mL1mg/mL水杨酸标准溶液，于100mL容量瓶中，配制成100μg/mL水杨酸标准溶液；再分别取0、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL 100μg/mL水杨酸标准溶液于6个50mL容量瓶中，稀释成一系列不同浓度的标准溶液（0～20μg/mL）。
2、吸收曲线的绘制:用8μg/mL或12μg/mL标准溶液，以蒸馏水为参比，于波长210～350nm范围内测定吸光度，作吸收曲线，从曲线上查得最大吸收波长（230nm附近）。
注：波长间隔在210～350nm范围内每隔5nm测定一个数值，在最大吸收波长±5nm范围内每隔1nm测定一个数值。
3、标准曲线的绘制:以蒸馏水为参比，于最大吸收波长处分别测定标准溶液的吸光度，然后以浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制出标准曲线。
4、水杨酸试样的测定:取适量的水杨酸试样溶液用蒸馏水进行稀释（稀释倍数由参赛选手自行确定），以蒸馏水为参比，于最大吸收波长处测定试样的吸光度，从标准曲线查出试样的浓度，平行测定两次。
1、吸收曲线的绘制与测定波长的选择结论：λmax=________ nm2、标准曲线的绘制与样品溶液的测定利用上述数据绘制标准曲线，从标准曲线上查出试液浓度，并计算出原始试样的浓度。
技能训练2 邻二氮菲分光光度法测定水样中铁含量1、进一步学会使用分光光度计。
水杨酸的测定方法水杨酸，也称为2-羟基苯甲酸，是一种常见的有机化合物。
它具有消炎、退热和镇痛作用，被广泛应用于药物、化妆品和食品工业中。
因此，水杨酸的测定方法具有重要的理论和应用价值。
目前，水杨酸的测定方法主要包括光度法、荧光法、色谱法和电化学法。
下面详细介绍各种方法的原理和操作步骤：1. 光度法:光度法是最常用的水杨酸测定方法之一。
其原理是利用水杨酸在紫外光区域（最大吸收波长为297nm）具有较高的摩尔吸光系数，根据比尔-朗伯定律建立测定曲线。
操作步骤如下：(1) 准备标准溶液：称取适量的水杨酸，用甲醇溶解并稀释至适当浓度，制备一系列标准溶液。
(2) 选取合适的波长：通过紫外可见分光光度计测量不同波长下水杨酸的吸光度，选择最佳波长。
(3) 构建标准曲线：分别测量标准溶液的吸光度，并制作吸光度与浓度之间的标准曲线。
(4) 分析待测样品：将待测样品稀释至适当浓度，根据标准曲线计算出其水杨酸的含量。
2. 荧光法：荧光法是一种基于荧光现象实现水杨酸测定的方法。
其原理是水杨酸在紫外光激发下发出荧光，根据荧光强度与水杨酸浓度之间的关系进行定量。
操作步骤如下：(1) 准备标准溶液：称取适量的水杨酸，用某种荧光试剂与之反应生成荧光物质，制备一系列标准溶液。
(2) 选取合适的激发波长和发射波长：通过荧光光谱仪测量荧光强度，选择最佳激发波长和发射波长。
(3) 构建标准曲线：分别测量标准溶液的荧光强度，并制作荧光强度与浓度之间的标准曲线。
(4) 分析待测样品：将待测样品与荧光试剂反应后测量荧光强度，根据标准曲线计算出水杨酸的含量。
3. 色谱法：色谱法是一种高效的分离和测定技术，可以用于水杨酸的定性和定量分析。
常用的色谱方法包括气相色谱法（GC）、液相色谱法（HPLC）和薄层色谱法（TLC）。
操作步骤如下：(1) 样品前处理：将待测样品用适当的溶剂进行提取或稀释。
(2) 色谱条件选择和分析：选择合适的色谱柱、固定相和移动相，并设置适当的流速和检测方式，完成样品的分离和检测。
紫外可见分光光度法测定水杨酸的含量
一、实验目的
1、了解紫外可见分光光度计的性能、结构及其使用方法。
2、掌握紫外－可见分光光度法定性、定量分析的基本原理和实验技术。
二、实验原理
紫外-可见光谱是用紫外-可见光测获的物质电子光谱，它研究产生于价电子在电子能级间的跃迁，研究物质在紫外-可见光区的分子吸收光谱。
当不同波长的单色光通过被分析的物质时能测得不同波长下的吸光度或透光率，以ABS为纵坐标对横坐标波长λ作图，可获得物质的吸收光谱曲线。
一般紫外光区为190-400nm，可见光区为400-800nm。
紫外吸收光谱的定性分析为化合物的定性分析提供了信息依据。
由于分子结构不同但只要具有相同的生色团，它们的最大吸收波长值就相同。
因此，通过对末知化合物的扫描光谱、最大吸收波长值与已知化合物的标准光谱图在相同溶剂和测量条件下进行比较，就可获得基础鉴定。
利用紫外吸收光谱进行定量分析时，必须选择合适的测定波长。
苯甲酸和水杨酸的紫外吸收光谱如图1所示。
图1 苯甲酸与水杨酸紫外吸收光谱图
1-苯甲酸；2-水杨酸
水杨酸在波长300 nm处有吸收峰，而苯甲酸此处无吸收，在波长230 nm两组吸收峰重叠，为了避开其干扰，选用300 nm波长作为测定水杨酸的工作波长。
由于乙醇在250～350nm无吸收干扰，因此可用60%乙醇为参比溶液。
三、仪器与试剂
1．仪器
紫外－可见分光光度计（UVWIN 5，北京普析通用仪器有限公司）；容量瓶
100mL 1个、50mL 5个；刻度吸量管1mL、2mL、5mL各1支。
2．试剂
水杨酸对照品（分析纯）；60%乙醇溶液（自制）。
四、实验步骤
1、标准溶液的制备：准确称取0.0500 g水杨酸置于100 mL烧杯中，用60%乙醇溶解后，转移到100 mL容量瓶中，以60%乙醇稀释至刻度，摇匀。
此溶液浓度为0.5mg·mL-1。
2、将五个50mL容量瓶按1-5依次编号。
分别移取水杨酸标准溶液0.50、1.00、2.00、3.00、4.00mL于相应编号容量瓶中，各加入60%乙醇溶液，稀释至刻度，摇匀。
3、用1 cm石英吸收池、，以60%乙醇作为参比溶液，在200～350 nm波长范围内测定一份水杨酸标准溶液的紫外吸收光谱，确定最大吸收波长。
4、在选定波长下，以60%乙醇为参比溶液，由低浓度到高浓度测定水杨酸标准溶液系列及未知液的吸光度。
以水杨酸标准溶液的吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，根据水杨酸试液的吸光度，通过标准曲线计算水杨酸试样中水杨酸的含量。
表1 标准曲线制定及未知试样浓度检测
五、数据处理
1、根据某一浓度下的全波长扫描图，确定最佳吸收波长。
2、绘制标准曲线，计算工作曲线方程及R2值。
3、计算未知样中水杨酸的浓度。
六、注意事项
1、配制样品前要将所使用的玻璃仪器清洗干净。
2、移取标准溶液之前要润洗移液管。
3、测量前用待测液润洗比色皿，测量由低浓度到高浓度依次进行。
思考题
1、综述紫外吸收光谱分析的基本原理。
2、归纳影响紫外光谱定性、定量检测时的各种误差影响因素。
3、为什么选用300 nm而不选用230 nm波长进行蒽醌的定量分析？
4、本实验为什么用60%乙醇作参比溶液?。
