培养基配制安排
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培养基的配制:由粉针车间按大豆胰蛋白胨每30g加1L纯化水的比例配制培养基(每批分装应>3000瓶,每瓶灌装5ml,每批至少配制18L-19L培养基)。
培养基:乳糖=5ml:1g 在百级下用规格为50ml的无菌针管分装8.2.1调整分装机步数,使分装装量为1.0g,分装于灭菌后的管制瓶中。
8.2.2在无菌分装室百级层流罩下,把准备好的无菌培养基用无菌注射器(规格为5ml)分装到各管制瓶中,每瓶分装5ml,然后加塞,轧盖。
8.2.3阴性对照:在模拟分装过程的前、中、后段,随机抽取10支装有培养基的管制瓶与试验样品同条件培养一起培养,作为阴性对照。
8.2.4阳性对照:在模拟分装过程的前、中、后段,随机抽取10支分装有培养基的管制瓶,其中5支接种浓度<100cfu/ml的枯草芽孢杆菌液,另5支接种浓度<100cfu/ml 的白色念珠菌液,作为阳性对照。
培养基的配制:由粉针车间按大豆胰蛋白胨每30g加1L纯化水的比例配制培养基(每批分装应>3000瓶,每瓶灌装5ml,每批至少配制18L-19L培养基)。
培养基:乳糖=5ml:1g 在百级下用规格为50ml的无菌针管分装8.2.1调整分装机步数,使分装装量为1.0g,分装于灭菌后的管制瓶中。
8.2.2在无菌分装室百级层流罩下,把准备好的无菌培养基用无菌注射器(规格为5ml)分装到各管制瓶中,每瓶分装5ml,然后加塞,轧盖。
8.2.3阴性对照:在模拟分装过程的前、中、后段,随机抽取10支装有培养基的管制瓶与试验样品同条件培养一起培养,作为阴性对照。
8.2.4阳性对照:在模拟分装过程的前、中、后段,随机抽取10支分装有培养基的管制瓶,其中5支接种浓度<100cfu/ml的枯草芽孢杆菌液,另5支接种浓度<100cfu/ml 的白色念珠菌液,作为阳性对照。
培养基的配制:由粉针车间按大豆胰蛋白胨每30g加1L纯化水的比例配制培养基(每批分装应>3000瓶,每瓶灌装5ml,每批至少配制18L-19L培养基)。
培养基配制的过程和注意事项一、培养基配制的基本步骤1. 材料准备:首先,需要准备培养基所需的各种原料和试剂。
常用的培养基原料包括蛋白胨、葡萄糖、琼脂等。
此外,还需要准备适量的水和试剂的称量工具。
2. 称量试剂:按照配方中的比例,准确地称取所需的试剂。
在称量过程中,应注意保持实验环境的清洁,并使用洁净的称量工具,以避免试剂受到污染。
3. 溶解试剂:将称取好的试剂溶解于适量的水中。
在溶解过程中,可以通过搅拌或加热的方式促进试剂的溶解。
溶解完毕后,应检查溶液的透明度和均匀性,确保试剂充分溶解。
4. 调整pH值:根据具体的培养基配方,使用酸碱溶液调整培养基的pH值。
通过逐滴加入酸碱溶液,并经过搅拌均匀,逐步调整pH 值至所需范围。
在调整pH值的过程中,应注意避免过度调节,以免对培养细胞产生不良影响。
5. 加热消毒:将配制好的培养基加热至沸腾,保持沸腾状态持续5-10分钟,以达到消毒的目的。
在加热过程中,应注意避免溢出和烧焦,同时要保持试剂的充分混合。
6. 灭菌冷却:将消毒完毕的培养基冷却至适宜的温度,通常为45-50摄氏度。
在冷却过程中,应避免引入环境中的微生物污染,可使用无菌工作台或灭菌过滤器进行操作。
7. 分装保存:将冷却好的培养基分装到无菌培养皿或试管中,并密封保存。
在分装过程中,要注意避免试剂接触到外界空气,以防止污染。
二、培养基配制的注意事项1. 实验环境要保持清洁,操作过程要注意无菌操作,以避免试剂受到污染。
2. 在配制过程中,应准确称取试剂的质量,并按照配方中的比例进行配比,以保证培养基的质量和配方的准确性。
3. 在试剂溶解和调整pH值时,应充分搅拌均匀,确保试剂充分溶解和均匀混合。
4. 加热消毒时,应注意控制加热时间和温度,以避免试剂烧焦或溢出。
5. 冷却过程中,要避免污染和细菌的侵入,可使用无菌工作台或灭菌过滤器进行操作。
6. 培养基的分装要在无菌条件下进行,并尽快密封保存,避免试剂受到外界空气和微生物的污染。
培养基的配制培养基是指供给微生物、植物或动物(或组织)生长繁殖的,由不同营养物质组合配制而成的营养基质。
一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)、维生素和水等几大类物质。
培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质,也是细胞生长和繁殖的生存环境。
1. 成分配方转换—在容器中加入少量水(蒸馏水、天然水)—按配方称各种药物(依次添加)—加入足够的水(一药一勺,服完药后立即盖上瓶子)。
2. 解散淀粉溶解:少量的冷水进粘贴琼脂融化温度为95-97℃,加热时需搅拌以防烧焦。
3.调整pH值用1n盐酸或1n氢氧化钠将培养基调至所需值。
4. 过滤滤纸或棉。
(有时可以省略)5. 分装一般在烧瓶或试管中灭菌。
(1)三角瓶静态培养时,100ml培养基/ 250ml烧瓶的最大值不应超过150ml 培养基/ 250ml否则,在灭菌过程中,培养基的煮沸极易污染棉塞,造成细菌污染;如果进行瓶培养,15-20ml培养基/ 250ml三角瓶应通风良好。
(2)试管包装液体培养基通常填充4-5ml,约为试管高度的1 / 4;一般固体斜培养基为3-4ml,约为试管高度的1 / 5。
6. 用绷带包扎包装完毕后,塞好棉塞,用牛皮纸包好棉塞,防止灭菌时湿气进入,弄湿棉塞。
7. 灭菌高压蒸汽灭菌按照配方中要求的温度和压力进行。
如果灭菌温度过高,营养成分就会被破坏培养基中的糖和氨基酸会使培养基的颜色变深。
8. 斜灭菌后,需要倾斜的试管应在加热过程中倾斜放置,使其固化成一个斜坡,约占试管长度的1 / 2。
9. 存储中可以使用不污染被放置在30℃后一天。
通常用牛皮纸包好,置于2-8℃冰箱中保存。
146种培养基配方1、牛肉膏蛋白胨培养基(培养细菌用)牛肉膏3g蛋白胨5g氯化钠10g琼脂15~20gpH 7.0~7.2水1000mL2、2、高氏(Gause)1号培养基(培养放线菌用)可溶性淀粉20g硝酸钾1g氯化钠0.5g磷酸氢二钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g琼脂20g水1000mLpH 7.2~7.4配制时,先用少量冷水将淀粉调成糊状,倒入煮沸的水中,在火上加热,边搅拌边加入其他成分,溶化后,补足水分至1000mL。
121℃灭菌20min。
查氏(Czapek)培养基(培养霉菌用)硝酸钠2g磷酸氢二钾1g氯化钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g蔗糖30g琼脂15~20g水1000mLpH 自然121℃灭菌20min。
4、马丁氏(Martin)琼脂培养基(分离真菌用)葡萄糖10g蛋白胨5g磷酸二氢钾1g七水合硫酸镁0.5g1/3000孟加拉红(rose100mLbengal,玫瑰红水溶液)琼脂15—20gpH 自然蒸馏水800mL112℃灭菌30min。
临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL,使每毫升培养基中含链霉素30μg。
5、马铃薯培养基(简称PDA)(培养真菌用)马铃薯200g蔗糖(或葡萄糖)20g琼脂15—20gpH 自然培养基的配制:马铃薯去皮,切成块煮沸30min,然后用纱布过滤,再加糖及琼脂,熔化后补足水至1000mL。
121℃灭菌30min。
6、麦芽汁琼脂培养基培养基的配制:(1)、取大麦或小麦若干,用水洗净,浸水6—12小时,至15℃阴暗处发芽,上面盖纱布一块,每日早、中、晚淋水一次,麦根伸长至麦粒的两倍时,即停止发芽,摊开晒干或烘干,贮存备用。
(2)、将干麦芽磨碎,一份麦芽加四份水,在65℃水浴中糖化3—4小时,糖化程度可用碘滴定之。
加水约20mL,调匀至生泡沫时为止,然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
(3)、将糖化液用4—6层纱布过滤,滤液如混浊不清,可用鸡蛋白澄清,方法是将一个鸡蛋白加水约20mL,调匀至生泡沫时为止,然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
实验室常用培养基的配制方法Ampicillin(氨卡青霉素)(100 mg/ml)组份浓度100 mg/ml Ampicillin配制量50 ml配制方法 1.称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。
2.加入40 ml灭菌水,充分混合溶解后,定容至50 ml。
3.用0.22 µm过滤膜过滤除菌。
4.小份分装(1 ml/份)后,-20℃保存。
IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)(24 mg/ml)组份浓度24 mg/mL IPTG配制量50 mL配制方法 1.称1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。
2.加入40 ml灭菌水,充分混合溶解后,定容至50 ml。
3.用0 22 µm过滤膜过滤除菌。
4小份分装(1 ml,份)后,-20℃保存。
X-Gal (20 mg/ml)组份浓度20 mg/ml X-Gal配制量50 ml配制方法 1.称量l g X-Gal置于50 ml离心管中。
2.加入40 ml DMF(二甲基甲酰胺),充分混合溶解后,定容至50 ml。
3.小份分装(1 ml/份)后,-20℃避光保存。
LB培养基组份浓度1%(W/V)Tryptone(胰蛋白胨),0.5%(W/V)Y east Extract(酵母提取物),1%(W/V)NaCl配制量1 L配制方法3.滴加5 N NaOH(约0.2 m1),调节pH值至7.0。
4.加去离子水将培养基定容至1 L。
5高温高压灭菌后,4℃保存。
组份浓度配制量1L配制方法 1.配制磷酸盐缓;中液(0.17 M KH2PO4,0.72 M K2HPO4)100 ml。
溶解2.31 g KH2PO4和l2.54 g K2HPO4于90 ml的去离子水中,搅拌溶解后,加去离子水定容至100 ml,高温高压灭菌。
4.加去离子水将培养基定容至1 L后,高温高压灭菌。
5.待溶液冷却至60℃以下时,;加入100 ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液。
培养基配方及配置
一般来说,培养基的配方包含基础培养基、添加剂和调节剂。
基础培养基是指提供生物体基本生长必需的基本成分,包括能源物质、有机和无机原料、氮源、矿质元素和缓冲物质等。
常用的基础培养基有
LB培养基、MS培养基等。
添加剂是指用于满足特定实验需求的成分,如抗生素、抗菌剂、激素、维生素等。
添加剂的种类和浓度根据实验目的的不同而有所差异。
调节剂是指用于调节培养基pH值、渗透压、表面张力等物理化学性
质的成分,如缓冲液、pH调节剂等。
以下是一个常用的细菌培养基LB的配方及配置:
1.基础培养基成分:
- 水:900ml
-蛋白胨:10g
-酵母提取物:5g
-NaCl:5g
2.添加剂:(可根据实验需求进行必要的添加)
- 抗生素(如氨苄青霉素):100μg/ml
- 抗菌剂(如氯霉素):25μg/ml
3.配制方法:
-将蛋白胨、酵母提取物和NaCl加入水中,并搅拌混合均匀。
- 将培养基溶液倒入容量瓶中,加水至1000ml,并混合均匀。
-调节pH值至7.0-7.2(一般使用缓冲液进行调节)。
-用自制滤纸过滤器滤过,将溶液分装至培养皿或试管中。
-如需添加抗生素或抗菌剂,将相应的药物加入培养基中,并充分溶解。
-培养基装瓶后可以高温高压灭菌,或使用滤器过滤进行无菌处理。
以上是一个简单的LB培养基的配方和配置流程,不同实验需要可能
会有所调整和变化。
在设计培养基配方时,需要结合具体实验目的和生物
体的特性来确定合适的成分和浓度,并注意配制和保管过程中的无菌操作,以确保培养基的质量和有效性。
常用培养基配制方法:(1)基础盐培养基(MSM):(NH4)2SO42.0g,MgSO4·7H2O0.2g,CaCl2·2H2O 0.01g,FeSO4·7H2O0.001g,Na2HPO4·12H2O1.5g,KH2PO41.5g,蒸馏水1000 mL。
(2)LB培养基:蛋白胨10g,酵母提取物5g,氯化钠5g,蒸馏水1000 mL,pH7.5。
(3)高氏合成1号培养基:硝酸钾1g,磷酸氢二钾0.5g,硫酸镁0.5g,氯化钠0.5g,硫酸亚铁0.01g,可溶性淀粉20g,蒸馏水1000mL。
(4)查彼氏培养基:硝酸钠2g,氯化钾0.5g,硫酸镁0.5g,磷酸氢二钾1g,硫酸亚铁0.01g,蔗糖30g,蛋白胨0.5g,蒸馏水1000mL。
(5)马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA):马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂20 g,蒸馏水1000mL。
将无病马铃薯洗净去皮切碎,加蒸馏水1000mL,煮沸0.5 h,纱布过滤,滤液加蒸馏水补足1000mL,再加入葡萄糖,然后分装三角瓶灭菌备用。
(6)铵察氏琼脂培养基:氯化铵2g,氯化钾0.5g,硫酸镁0.5g,磷酸氢二钾1g,硫酸亚铁0.01g,蔗糖30g,蛋白胨0.5g,琼脂20g,蒸馏水1000 mL。
(7)克氏合成1号琼脂培养基:磷酸氢二钾1g,碳酸镁0.3g,氯化钠0.2 g,硝酸钾1g,硫酸亚铁0.01g,碳酸钙0.5g,葡萄糖20g,琼脂20g,蒸馏水1000mL。
(8)葡萄糖天门冬素琼脂培养基:葡萄糖10g,天门冬素0.5g,磷酸氢二钾0.5g,琼脂20g,蒸馏水1000mL。
(9)葡萄糖酵母膏琼脂培养基:葡萄糖10g,酵母膏10g,琼脂20g,蒸馏水1000mL。
(10)瓦氏肉汁琼脂培养基:蛋白胨5g,葡萄糖10g,牛肉膏10g,氯化钠5g,琼脂20g,蒸馏水1000mL。
(11)淀粉琼脂培养基:可溶性淀粉10g,碳酸镁1g,磷酸氢二钾0.3g,氯化钠0.5g,硝酸钠1g,琼脂20g,蒸馏水1000mL。
各种培养基配方范文培养基是一种用于微生物培养的基础物质,能够为微生物提供所需的营养和环境条件。
不同的微生物在其生长过程中需要不同的养分和环境条件,因此培养基的配方需要根据微生物的需求来进行调整。
下面是几种常见的培养基配方。
1.大肠杆菌液体培养基配方:-蛋白胨或复合氮源:10g-酵母浸出物:5g-葡萄糖:1g-NaCl:5g-K2HPO4:2g-MgSO4:0.2g-pH调节至7.0后加水至1000mL2.牛心提取物琼脂糖培养基配方:-牛心提取物:3g-高级琼脂糖:15g-葡萄糖:10g-NaCl:5g-pH调节至7.0后加水至1000mL3.玉米浸出物琼脂糖培养基配方:-玉米浸出物:4g-高级琼脂糖:15g-酵母浸出物:1g-NaCl:5g-pH调节至7.0后加水至1000mL4.LB琼脂糖培养基配方:-液体LB培养基:10mL-高级琼脂糖:15g-NaCl:5g-pH调节至7.0后加水至1000mL 5.血寒养基配方:-羊血:50mL-肉浸出物:3g-酵母浸出物:3g-肉汤培养基:1L-红细胞素:5g-高级琼脂糖:3g-pH调节至7.0后加水至1000mL6.厌氧培养基配方:-肉浸出物:5g-酵母浸出物:5g-NaCl:5g-蒸馏水:900mL- 加入0.1%的L-cysteine:10mL-pH调节至7.0后用氮气替换空气注意事项:-培养基中的成分应严格按照配方比例加入,并保持无菌。
-配制好的培养基需要高温高压灭菌以保证无菌。
-不同的微生物可能对一些成分非常敏感,需要根据实际情况进行微调。
-培养基的pH值应根据微生物环境要求进行调整,一般在7.0左右。
-配好的培养基应存放在4℃的冰箱中,避免阳光直射以防止成分分解。
这只是一些常见的培养基配方,不同的微生物有不同的需求,可以根据具体的情况进行配方的调整。
在实际使用中,还需要根据微生物的特性和实验目的来选择合适的培养基。
培养基的配制方法培养基是微生物学、生物学等实验中将微生物培养的一种物质基质,它提供了微生物生长所必需的营养和环境条件。
培养基的配制方法主要包括选择基质、添加营养成分、调节pH值、灭菌和包装等步骤。
以下是一般的培养基配制方法及注意事项。
1.选择基质培养基的基质可以选择为水或含有必要营养成分的溶液。
一般情况下,使用蒸馏水或双蒸馏水作为基质是比较常见的选择。
2.添加营养成分培养基中必须添加适当的营养成分,以满足微生物的生长需求。
常用的营养成分有碳源、氮源、无机盐、维生素和生长因子等。
常用的碳源有葡萄糖、蔗糖、麦芽糖等,常用的氮源有氨基酸、酵母浸出物、肉浸出物等。
此外,还可以根据微生物的特殊要求增加一些其他的营养成分。
3.调节pH值pH值对于微生物的生长十分重要,大多数微生物的最适生长pH在6.5-7.5之间。
因此,培养基在配制过程中需要进行pH值的调节。
可以使用酸碱溶液(如HCl和NaOH)进行pH调节,并通过使用pH试纸或pH计监测pH值。
4.灭菌培养基的灭菌工作非常重要,它可以防止杂菌的污染。
常用的灭菌方法有高压灭菌、干热灭菌和滤过灭菌等。
高压灭菌是指将配制好的培养基放置在高压锅中,经过高温高压的处理。
干热灭菌是将配制好的培养基放置在烘箱中进行加热处理。
滤过灭菌是将培养基通过0.22um的无菌滤膜过滤,以去除微生物。
灭菌后,需要用无菌操作将培养基倒装入无菌培养器皿中。
5.包装灭菌后的培养基需要进行包装保存,以防止污染。
常用的包装方式有试管包装、琼脂平板包装和瓶装包装等。
试管包装是将培养基倒入试管中,用苏打棒打破试管口,并通过注封的方法密封试管。
琼脂平板包装是将培养基倒入无菌琼脂平板中,并使用无菌的平板封口膜密封。
瓶装包装是将培养基倒入无菌玻璃瓶中,用无菌胶塞封闭瓶口。
在配制培养基的过程中,还需要注意以下几点:1.保持操作环境无菌,使用无菌操作台、无菌器具和无菌操作方法。
2.注意各种添加物的浓度,不可过量或过少。
培养基配方及配制方法培养基是一种用于寄养和培养细胞、微生物、组织等生物体的基质。
其配方的选择和配制方法对于不同的生物体和研究目的有很大的差异。
以下是一般常用的培养基配方及简单的配制方法:1. LB培养基(Luria-Bertani)LB培养基是常见的用于大肠杆菌等细菌的培养基,其配方包括:- 1% 蛋白胨(tryptone): 添加营养源和能量- 0.5% 酵母粉(yeast extract): 提供维生素和生长因子-1%NaCl(氯化钠):调节渗透压-蒸馏水:使混合液体稀释至所需体积配制方法:将蛋白胨、酵母粉和NaCl加入蒸馏水中,调整pH至7.0,将混合液体加热至溶解,过滤杂质,如需固化则加入1.5%的琼脂。
2. YPD培养基(Yeast extract-Peptone-Dextrose)YPD培养基常用于酵母菌的培养,其配方包括:- 1% 酵母提取物(yeast extract): 提供维生素和生长因子- 2% 蛋白胨(peptone): 为细菌提供碳源和能量- 2% 葡萄糖(dextrose): 为细菌提供碳源和能量-蒸馏水:使混合液体稀释至所需体积配制方法:将酵母提取物、蛋白胨和葡萄糖加入蒸馏水中,调整pH至7.0,将混合液体加热至溶解,过滤杂质,如需固化则加入2%的琼脂。
3. DMEM培养基(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)DMEM培养基是常用的哺乳动物细胞培养基,其配方包括:-10%胎牛血清(FBS):提供生长因子和营养物质- 1% 青霉素-链霉素溶液(Penicillin-Streptomycin Solution): 防止细菌污染- 1% L-谷氨酰胺(L-Glutamine): 提供细胞代谢所需的基础物质-DMEM基础培养液:包括氨基酸、维生素等成分-蒸馏水:使混合液体稀释至所需体积配制方法:将胎牛血清、青霉素-链霉素溶液、L-谷氨酰胺和DMEM基础培养液加入蒸馏水中,调整pH值至7.4,混合均匀即可。
微生物实验室常见20种培养基配方大全1.肉汤培养基成分:牛肉膏或牛肉汤500克,葡萄糖10克,胰蛋白胨10克,NaCl5克,蒸馏水1000毫升。
用途:适用于各种需有机氮源的细菌的培养。
2.十倍腌盐水成分:NaCl300克,蒸馏水1000毫升。
用途:适用于耐盐真菌和嗜盐细菌的培养。
3.果胶培养基成分:果胶5克,葡萄糖5克,NaNO32克,K2HPO40.2克,MgSO4·7H2O0.1克,CaCO30.02克,FeSO4·7H2O0.01克,蒸馏水1000毫升。
用途:适用于果胶酶产生菌的培养。
4.大肠杆菌选择性培养基成分:土豆提取物4克,蛋白胨2克,乳糖10克,NaCl10克,胆盐0.75克,碱性蓝2克,琼脂15克,蒸馏水1000毫升。
用途:适用于分离大肠杆菌的选择性培养。
5.卡波培养基成分:石蜡300克,肉浸膏100克,大豆酪蛋白胨20克,NaCl5克,琼脂15克,蒸馏水1000毫升。
用途:适用于致病真菌的培养。
6. Nutrient Broth培养基成分:肉膏1克,酵母提取物2克,葡萄糖2克,NaCl5克,琼脂15克,蒸馏水1000毫升。
用途:适用于细菌和真菌的常规培养。
7. Luria-Bertani(LB)培养基成分:酵母提取物5克,酪蛋白胨10克,NaCl10克,琼脂15克,蒸馏水1000毫升。
用途:适用于E. coli等细菌的培养。
8. Sabouraud葡萄糖琼脂培养基成分:葡萄糖40克,醇20克,琼脂15克,蒸馏水1000毫升。
用途:适用于真菌的培养。
9. MacConkey琼脂培养基成分:鱼精膏20克,胆盐胆红素15克,玛琪琼脂25克,NaCl5克,蒸馏水1000毫升。
用途:适用于肠道杆菌的培养、分离。
10.马加提琼脂培养基成分:马加提琼脂50克,蒸馏水1000毫升。
用途:适用于细菌、酵母和霉菌的常规培养。
11.酵母醇葡萄糖琼脂培养基成分:葡萄糖20克,醇30克,琼脂20克,蒸馏水1000毫升。
培养基配方一、LB培养基:Yeast extract 5 g/LTryptone 10g/LNacl 10g/LPH为7.0 若配制固体培养基加入1.5%的琼脂。
二、YEB培养基:Yeast extract1 g/LPeptone(或Tryptone) 5 g/LBeef extract 5 g/LSucrose 5 g/LMgSO4 2 mmol/LPH为7.0 若配制固体培养基加入1.5%的琼脂。
三、N6D2培养基(2,4D浓度2mg/L):① N6大量母液1:20×大量元素(1L)50ml KNO356.6g(NH4)2SO49.26gKH2PO48g②N6大量母液2:40×大量元素(500ml) 25ml2·2H2O 3.32g③N6大量母液3:40×大量元素(500ml) 25ml MgSO4?7H2O 3.7g④B5微量元素I:100×微量元素(1L) 10ml溶液A:MnSO4?H2O 781mgZnSO4?7H2O 200mg溶于400ml无菌水溶液B:H 3BO3300mgKI 75mg溶于400ml无菌水然后缓慢将溶液A和溶液B混合,定容至1L⑤B5微量元素II:1000×微量元素(500ml) 1ml Na2MoO42O 125mgCuSO4·5H2O 12.5mgCoCl2·6H2O 12.5mg⑥B5维生素I:100×维生素(500ml) 10ml盐酸硫胺素 500mg盐酸吡哆醇 50mg烟酸 50mg⑦B5维生素II:100×维生素(500ml)10ml甘氨酸 100mg⑧200×铁盐(500ml) 5mlNa2-EDTA 3730mgFeSO4·7H2O 2780mg⑨ 2,4 D:100×2,4 D10ml200mg 2,4 D,先溶于1ml 无水乙醇中,再定容到1L。
常用培养基的配制常用培养基的配制〔一〕营养琼脂培养基【用途】供细菌总数测定、保存菌种、细菌纯化、一般细菌培养、血琼脂培养基根底之用。
【成分】牛肉膏 3gNaCl 5g 蛋白胨 10g 琼脂 20g±0.2℃ 30min高压灭菌备用。
〔二〕蛋白胨水培养基【用途】供细菌培养、吲哚试验之用。
【成分】蛋白胨 10g氯化钠 5g℃ 20min高压灭菌备用。
〔三〕半固体培养基【用途】供观察细菌动力、菌种保存、H抗原位相变异试验等。
【成分】蛋白胨 10g氯化钠 5g 琼脂 2.5~3g【pH值】7.6℃ 20min高压灭菌备用。
〔四〕营养肉汤培养基【用途】供一般细菌培养、转种、复苏、增菌等,也可用于消毒效果的测定。
【成分】蛋白胨 10g氯化钠 5g牛肉粉〔牛肉浸汁〕 3g±℃ 20min 高压灭菌备用。
〔五〕葡萄糖蛋白胨水培养基【用途】供甲基红试验及V-P试验之用。
【成分】蛋白胨 5g葡萄糖 5g K2HPO4 (K2HPO4·3H2O) 5g (0.65g)【pH值】7.0~7.2【制法】将上述成分溶于1000ml蒸馏水中,过滤,分装试管,每管2~3ml,经112.6 ℃ 20min高压灭菌备用。
〔六〕伊红美蓝培养基〔EMB培养基〕【用途】弱选择性培养基,用于别离肠道致病菌,特别是大肠杆菌。
【成分】蛋白胨 10g乳糖 10g 伊红 0.4g美兰 0.065g 琼脂 14g K2HPO4 2g±0.4℃ 15min高压灭菌,待冷却至60℃左右倾注灭菌平皿备用。
〔七〕S-S琼脂培养基【用途】供沙门氏菌、志贺氏菌的选择性别离培养之用。
【成分】蛋白胨 5g 乳糖 10g 牛肉粉 5g三号胆盐 3.5g 琼脂 17g 柠檬酸钠 8.5g 柠檬酸铁 1g 硫代硫酸钠 8.5g 中性红 0.025g 煌绿 0.00033g±0.1【制法】上述成分称取60g加蒸馏水1000ml,加热煮沸至完全溶解,待冷却至60℃左右倾注灭菌平皿备用。
实验室36种微生物培养基配制方法实验室养菌基是为微生物的培养和研究提供合适营养和条件的培养基质。
不同微生物对培养基的要求各不相同,因此实验室通常需要配制多种不同的培养基。
下面是36种常用的微生物培养基的配制方法。
一、通用培养基1. 营养琼脂培养基(Nutrient Agar)营养琼脂培养基是一种通用的培养基,适用于大多数微生物的培养。
其配方为:蛋白胨10克、葡萄糖5克、琼脂20克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至7.0-7.2,加入琼脂,高压灭菌,倒入平皿中,待凝固后用。
2. 营养肉膏培养基(Nutrient Broth)营养肉膏培养基是一种通用的液体培养基,适用于大多数微生物的培养。
其配方为:蛋白胨10克、牛肉提取物5克、葡萄糖5克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至7.0-7.2,高压灭菌,分装,即可使用。
3. 大肠杆菌选择性培养基(MacConkey Agar)大肠杆菌选择性培养基是一种常用的培养基,用于选择和鉴定大肠杆菌。
其配方为:蛋白胨17克、葡萄糖1.5克、恶瓜胆汁5克、硼酸紫0.5克、亮矾0.09克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至7.0-7.2,加入琼脂,高压灭菌,倒入平皿中,待凝固后用。
4. Sabouraud脱氧胆汁蔗糖琼脂培养基(Sabouraud Dextrose Agar)Sabouraud脱氧胆汁蔗糖琼脂培养基是用于真菌的培养和鉴定。
其配方为:脱氧胆汁10克、蔗糖40克、琼脂20克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至5.6-6.4,高压灭菌,倒入平皿中,待凝固后用。
二、选择性培养基1. VC菌属选择性平皿培养基(Vogel-Johnson Agar)VC菌属选择性平皿培养基是用于选择和鉴定Voges-Proskauer菌属(如克雷伯菌)的培养基。
其配方为:葡萄糖1克、琼脂15克、盐酸75克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、加热煮沸,冷却至55-60°C,加入胆盐酯高压灭菌,倒入平皿中,待凝固后用。
培养基的配制方法培养基的配制方法是在实验室中作为微生物培养的基础,可以提供适当的营养物质和环境条件来促进微生物的生长和繁殖。
正确的配制培养基是进行微生物实验和研究的关键步骤之一。
下面将详细介绍培养基的配制方法。
1. 准备配制培养基所需的原料和仪器:- 食品级蛋白胨粉或胨蛋白水解物:提供微生物所需的氨基酸和营养物质。
- 食品级琼脂:用于凝固培养基。
- 蔗糖或葡萄糖:提供微生物的碳源。
- 盐:提供微生物生长所需的必需离子,如钠、钾、镁等。
- pH试纸或pH计:用于调节培养基的酸碱度。
- 常温和高温灭菌器:用于灭菌培养基。
- 烧杯、容器、磁力搅拌器和称量仪器:用于容器和搅拌培养基。
2. 测量和称量:- 根据所需的培养基成分和浓度,测量所需的蛋白胨量、琼脂量、蔗糖或葡萄糖量以及盐的量。
- 将测量好的原料放入烧杯中。
3. 加入适量的水:- 加入适量的去离子水或纯净水,将配方溶解。
4. 调节酸碱度:- 使用pH试纸或pH计来检测培养基的酸碱度。
- 如果需要调节酸碱度,则可以使用盐酸或氢氧化钠等脆性酸碱溶液加入培养基中以达到目标pH值。
5. 搅拌混合:- 将培养基溶液放入磁力搅拌器中。
- 开启搅拌器并搅拌溶液直到完全混合。
6. 灭菌:- 将配制好的培养基倒入适当容器中,如烧杯或琼脂培养皿。
- 对于常见的液体培养基,使用常温灭菌器在121摄氏度下高压灭菌20-30分钟。
- 对于琼脂培养基,使用高温灭菌器在121摄氏度下高压灭菌15-20分钟。
7. 倒盖和保存:- 等待培养基凝固后,盖上并标记培养基的名称、配方和配制日期。
- 将培养基保存在冰箱中或冷藏库中,在4摄氏度下保存。
总结一下,培养基的配制方法包括准备原料和仪器,测量和称量原料,加入适量的水,调节酸碱度,搅拌混合,灭菌和保存。
注意对于不同的微生物,培养基的配方可能会有所不同,需要根据具体的实验目的和需求进行调整。
正确配制培养基对于获得准确的微生物培养结果至关重要。
培养基配方及配制方法一、培养基配方常用的培养基是复合培养基,包含有机成分和无机成分两部分。
其中,有机成分提供微生物所需的碳源、氮源和能源等,无机成分提供微生物所需的无机盐和微量元素等。
以下是一个典型的复合培养基配方:有机成分:1.蛋白胨:提供氮源和碳源;2.葡萄糖:提供碳源和能源;3.酵母提取物:提供维生素和微量元素。
无机成分:1.磷酸盐缓冲液:提供pH缓冲效果;2.硝酸盐:提供氮源和无机盐;3.氯化钠:提供无机盐;4.磷酸氢二钾:提供缓冲效果和无机盐;5.硫酸镁:提供镁离子。
二、培养基配制方法1.准备容器:使用无菌烧瓶、试管、培养皿等容器,并用高压蒸汽灭菌器进行灭菌处理。
2.称量成分:按照配方中的比例,准确称量有机成分和无机成分。
3.溶解有机成分:将蛋白胨、葡萄糖和酵母提取物分别加入适量的蒸馏水中,通过搅拌或加热溶解均匀。
4.准备无机成分溶液:将磷酸盐缓冲液、硝酸盐、氯化钠、磷酸氢二钾和硫酸镁按照配方中的比例加入适量的蒸馏水中,通过搅拌溶解均匀。
5.校正pH值:使用pH计测定培养基的pH值,如有需要,可以用盐酸或氢氧化钠调节pH值至合适的范围。
6.加入蛋白胨溶液:将溶解好的蛋白胨溶液加入无机成分溶液中,并通过搅拌均匀。
7.加入葡萄糖溶液:将溶解好的葡萄糖溶液加入已配制好的培养基中,并通过搅拌均匀。
8.加入酵母提取物:将酵母提取物溶液加入培养基中,并通过搅拌均匀。
9.调节体积:根据实验需要,可以添加蒸馏水或其他添加剂来调节培养基的体积和浓度。
10.灭菌处理:将配制好的培养基进行高压蒸汽灭菌处理,保证培养基的无菌状态。
以上就是一个典型的培养基配方及配制方法的示例,只是其中的一个例子,不同的微生物可能需要不同的培养基配方和配制方法。
在实验中,根据具体的需求调整培养基的配方,确保能满足微生物的生长需求,并通过灭菌处理保证培养基的无菌状态。
146种常见培养基的配方培养基是微生物学实验中常用的一种重要实验工具,通过调配合适的培养基,可以提供微生物生长所需的营养物质,从而促进微生物菌落的繁殖和生长。
下面将介绍一些常见的培养基配方,涵盖了常用的总结培养基、选择性培养基和不同微生物类群的专用培养基。
1.琼脂肉汤培养基(NB)-牛肉脱脂粉5g-酵母提取物2.5g-琼脂12g- 蒸馏水 1000ml2.大肠杆菌复合培养基(LB)-液体培养基-蛋白胨10g-酵母提取物5g-NaCl5g- 蒸馏水 1000ml-琼脂板-蛋白胨10g-酵母提取物5g-NaCl5g-琼脂15g- 蒸馏水 1000ml3. 肠杆菌选择性琼脂培养基(MacConkey琼脂培养基)-蛋白胨17g-紫胆汁盐1.5g-普鲁士蓝盐1.5g-琼脂12g- 蒸馏水 1000ml4. 脱氧胆盐琼脂培养基(Deoxycholate Agar)-脱氧胆酸钠20g-普鲁士蓝盐0.8g-蛋白胨7.5g-琼脂12g- 蒸馏水 1000ml5.阿米巴选择性琼脂培养基(KV培养基)- 鸡蛋清 20ml- 中性红溶液 12ml-NaCl0.5g-纤维素0.25g- 盐酸 1ml-琼脂15g- 蒸馏水 1000ml6. 革兰氏阳性菌选择性琼脂培养基(Mannitol Salt Agar)-蔗糖10g-氯化钠75g-酵母提取物5g-麦芽提取物1g-琼脂15g- 蒸馏水 1000ml7. 维生素富集琼脂培养基(Burkholder's Basal Salt Medium)-NaNO31g-KCl0.5g-MgSO4·7H2O0.2g-CaCl2·2H2O0.02g-FeSO4·7H2O0.01g-琼脂14g- 蒸馏水 1000ml8. 三氯化铁琼脂培养基(Cetrimide Agar)-硫酸镁0.8g-氯化钴0.05g-氯化锌0.01g-氯化亚铁0.03g-三氯化铁0.03g-比色琼脂糖15g- 过滤蒸馏水 1000ml9. 库氏四甲基铵琼脂培养基(Chapman Agar)-高氯酸钠5g-脲7.5g-酵母提取物2g-海藻酸钠20g-紫胆汁盐0.25g-琼脂12g- 蒸馏水 1000ml10. 还原格兰氏琼脂培养基(Reduced Gram-negative Broth)-蛋氨酸0.5g-异亮氨酸0.5g-半胱氨酸0.5g-菜碱0.5g-胀氨酸0.5g-琼脂7g- 蒸馏水 1000ml这些是其中的一部分常见的培养基配方,涵盖了常用的总结培养基、选择性培养基和不同微生物类群的专用培养基。
配置培养基流程
配置培养基流程主要包括以下步骤:
1. 配方准备:根据所需微生物或细胞种类,查阅资料确定培养基配方,列出所需成分(如蛋白胨、酵母浸膏、无机盐、生长因子等)及浓度。
2. 称量溶解:在无菌条件下,精确称取各成分,加入蒸馏水或去离子水中,充分搅拌直至完全溶解。
3. 调节pH值:使用精密试纸或pH计测量溶液pH,如有必要,加入适量酸碱进行调节,使pH达到适宜范围。
4. 过滤灭菌:将配置好的液体培养基通过0.22μm滤膜过滤除菌,或者采用高压蒸汽灭菌法灭菌,确保无菌环境。
5. 冷却凝固:对于固体培养基,灭菌后待冷却至约50℃左右时,倒入无菌平皿中,待其自然冷却凝固形成培养平板。
6. 储存备用:已配置好的培养基应在适宜条件下储存(如4℃冰箱保存),并在有效期内使用。
以上流程确保了培养基能够提供微生物或细胞生长繁殖所需的营养条件,并确保实验不受污染。
实验6-9所需材料
实验6 (6人一组),材料在上实验五时配制
每个组所需材料:
6个平板;
1瓶90ml无菌水,用三角瓶盛放,内放8-10个玻璃珠;
5支9ml的无菌水试管;
1包培养皿(6套)
1ml的移液管6支。
实验七所需材料在上实验五时配制
每个组所需材料
牛肉膏蛋白胨培养基斜面:6支(用于大肠杆菌和枯草杆菌,每个菌种为3支,1支直线、2支波浪线接种);
牛肉膏蛋白胨液体培养基:试管装,4支;
牛肉膏蛋白胨液体培养基:试管装,4支。
注:免去了马丁氏培养基和高氏1号培养基斜面。
实验八所需材料在上实验七时配制
每组所需材料
淀粉培养皿:3个;
明胶试管:6个;
菌种:枯草杆菌和大肠杆菌
实验九所需材料在上实验七时配制
每组所需材料
2个三角瓶:内放培养基
10个试管:内放培养基
6个平皿
实验五培养基的制备(40人以上)
1组:牛肉膏培养基300ml,固体,装20个试管,剩下的装入1个三角瓶;
2组:牛肉膏培养基300ml,固体,装20个试管,剩下的装入1个三角瓶;
3组:牛肉膏培养基400ml,固体,分装30个试管,剩下的状1个三角瓶;
4组:高氏1号固体培养基,300ml,分装到2个三角瓶中,每个150ml(4,6组备用)
5组:马丁氏固体培养基,300ml,分装到2个三角瓶中,每个150ml(5,7组备用)
6组:牛肉膏液体培养基,300ml,分装到30个试管中(整个班用);
7组:牛肉膏半固体培养基,300ml,分装到30个试管中(整个班用);
注:所配制的牛肉膏试管斜面中,包括老师接菌种所用斜面。
每个组还需要:
1瓶90ml无菌水,三角瓶盛放,玻璃珠8-10个;
5支9ml的无菌水,试管盛放;
1包培养皿(6套)
6支1.0ml的移液管
棉塞:2个大的,6个小的;
实验五培养基的制备(30人左右)
1组:牛肉膏培养基250ml,固体,装14个试管,剩下的装入1个三角瓶;2组:牛肉膏培养基250ml,固体,装14个试管,剩下的装入1个三角瓶;;3组:牛肉膏培养基250ml,固体,装14个试管,剩下的装入1个三角瓶;4组:高氏1号固体培养基,150ml,分装到1个三角瓶中(4,6组备用)5组:马丁氏固体培养基,150ml,分装到1个三角瓶中(5,7组备用)
6组:牛肉膏液体培养基,300ml,分装到30个试管中(整个班用);
7组:牛肉膏半固体培养基,300ml,分装到30个试管中(整个班用);
注:所配制的牛肉膏试管斜面中,包括老师接菌种所用斜面。
每个组还需要:
1瓶90ml无菌水,三角瓶盛放,玻璃珠8-10个;
5支9ml的无菌水,试管盛放;
1包培养皿(6套)
6支1.0ml的移液管
棉塞:2个大的,6个小的;
农学院(4个班,生科3个班)
实验五培养基的制备(40人左右)
1组:牛肉膏培养基150ml,固体,装20个试管
2组:牛肉膏培养基150ml,固体,装20个试管
3组:牛肉膏液体培养基,200ml,分装到14个试管中4组:牛肉膏液体培养基,200ml,分装到14个试管中5组:牛肉膏半固体培养基,200ml,分装到14个试管中6组:牛肉膏半固体培养基,200ml,分装到14个试管中。